粒细胞集落刺激因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织VEGF及bax的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑组织血管内皮生长因子(VEGF)及bax的影响。方法7d龄Wistar大鼠168只随机分为3组:假手术对照组(A组),HIBD组(B组),HIBD+G-CSF治疗组(C组)。各组根据处死时间不同又分为7个亚组:6,12,24,48,72h组,5d组,7d组。建立HIBD模型,C组在缺氧缺血后即刻给予G-CSF(100μg/kg)。各组分别于HIBD后不同时间点取脑组织,A组也在相应时间点取脑组织,用免疫组织化学法检测各组脑组织中VEGF及bax的表达。结果A组脑组织各时间点均无明显VEGF和bax阳性表达;B组各时间点脑组织均可见VEGF和bax阳性表达,24～48h为表达高峰期,以后逐渐下降;C组各时间点脑组织VEGF阳性表达较A组和B组均明显增高,bax阳性表达较A组增高,但较B组均明显降低。同一时间点3组VEGF阳性表达相比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论①新生大鼠HIBD后各时间点脑组织VEGF表达增加,可能与HIBD后神经组织自身修复能力有关;bax表达亦增加,与神经细胞凋亡有关。②G-CSF治疗后可明显增加新生大鼠HIBD后脑组织VEGF表达,降低bax表达,从而促进脑组织缺氧缺血损伤后结构和功能上的恢复。     

EPO对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织TERT及BCL-2表达的影响

目的:本研究旨在在观察促红细胞生成素(EPO)对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织TERT及Bcl-2表达的影响,探讨EPO对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用及可能机制.方法:采用单侧颈总动脉结扎后给予低浓度氧制备缺氧缺血性脑损伤动物模型.Wistar新生大鼠90只,随机选取对30只仔鼠作为对照组,剩余60只制作HIBD模型,随机分为HIBD组和EPO组.其中EPO组大鼠在缺氧缺血后立即腹腔内注射EPO5000u/kg,HIBD组给予等容积生理盐水.对造模后即刻、6h、12h、24h、72h各组大鼠每组选6只取脑组织检测TERT及Bcl-2表达情况.结果:对照组可见各时间点脑组织中Bcl-2有极少量的表达;HI BD组在脑组织中TERT于造模后6h开始增加,12h升高明显,24高峰,72h开始下降,各个时间点均高于对照组(P＜0.05).EPO组中TERT蛋白的表达规律与HIBD组相似,在12h和24h时表达量高于HIBD组(P＜0.05).HIBD组大鼠缺氧缺血后6h Bcl-2表达开始增多,12h达高峰,以后逐渐减少,各个时间点均高于对照组(P＜0.05); EPO组Bcl-2表达规律与HIBD组相似,在24h时表达量高于HIBD组(P＜0.05).结论:EPO对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织有保护性作用,此作用可能与其调节TERT及Bcl-2表达水平有关.     

高压氧抑制缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑细胞凋亡的分子机制

目的通过检测Caspase-3,Caspase-9的表达情况,探讨高压氧（HBO）对缺氧缺血新生大鼠神经细胞凋亡的影响。方法建立缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大鼠模型,将其分为HIBD组及HBO处理组,观察HBO对脑损伤的改善情况,并设立假手术（Sham）组,用免疫组化的方法检测Caspase-3及Caspase-9的蛋白表达。结果HIBD组18、24、48和96 h时间点大脑皮层区Caspase-3,Caspase-9蛋白的表达均明显高于Sham组（P〈0.05）;HBO处理组则显著缓解,Caspase-3,Caspase-9表达的升高程度均低于HIBD组（P〈0.05）。结论HBO能减轻新生大鼠HIBD模型大脑皮层区神经细胞的凋亡。     

法舒地尔对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中Nogo-A的影响

目的:探讨法舒地尔对缺氧缺血性脑损伤大鼠Nogo-A表达的影响.方法:将105只新生7日龄Wistar大鼠随机分为6h、12h、24h、72h和7d时段的假手术组(Sham组,35只)、缺氧缺血性脑损伤模型组(HIBD组,35只)、法舒地尔治疗组(35只),分别腹腔注射生理盐水和法舒地尔(10mg/kg).HE染色镜下观察脑组织病理变化.免疫组化法检测Nogo-A表达.结果:①肉眼观察:Sham组两侧大脑半球对称;HIBD组随时间延长脑组织水肿加重,可见大脑半球坏死灶;法舒地尔治疗组脑组织水肿减轻.②HE染色:Sham组脑组织结构形态正常.HIBD组可见细胞肿胀,核固缩、裂解,炎性细胞增多;法舒地尔治疗组神经细胞水肿及核固缩数量减少.③免疫组化:Sham组Nogo-A可见少量表达;HIBD组Nogo-A阳性细胞12h开始升高,24h达峰值,随后表达逐渐降低;法舒地尔治疗组除6h时间点外,各时间点的表达均低于HIBD组(P＜0.01);HIBD组和法舒地尔组阳性细胞数多于Sham组(P＜0.01).结论:法舒地尔通过抑制Nogo-A的激活,促进了轴突再生和修复,保护神经细胞,为临床防治HIBD提供了实验性的理论基础.     

缺氧对大鼠脑生长相关蛋白表达的影响

目的探讨缺氧对大鼠脑生长相关蛋白(GAP-43)表达的影响。方法将成年雄性SD大鼠20只随机均分为对照组和缺氧组。缺氧组大鼠在自制缺氧舱内每天缺氧8 h,连续缺氧1周。利用免疫组化法检测大鼠大脑皮层和海马神经元GAP-43的表达。结果与对照组比较,缺氧组大鼠大脑皮层和海马神经元GAP-43阳性表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧后大鼠大脑皮层和海马神经元GAP-43表达增高,可能与缺氧性脑损伤后的修复有关。     

缺氧缺血性新生大鼠脑皮质氧化还原因子-1蛋白的表达

目的：探讨新生大鼠脑组织缺氧缺血后，氧化还原因子-1(APE／Ref-1)蛋白在脑皮质不同时相的表达及其意义。方法：将新生7日龄SD大鼠制成缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型，采用免疫组织化学方法及原位缺口末端标记(1UNEL)法分别观察正常对照组、假手术组及缺氧缺血1、3、6、12、24、48小时APE／Ref-1蛋白及神经细胞凋亡变化，分析两者关系。结果：氧化还原因子-1蛋白在正常对照组、假手术组及右侧大脑半球神经细胞核广泛表达；而缺氧缺血组脑皮质区该蛋白表达随缺血时间的延长而下降，且各时间点间差异显著。脑皮质区凋亡阳性细胞表达脑皮质区与APE／Ref-1相反，其随缺血时间的延长逐渐增多，并在24小时达到高峰。结论：新生大鼠脑组织缺氧缺血后，脑皮质区神经元APE／Ref-1蛋白表达减少，凋亡细胞表达增加，提示APE／Ref-1蛋白减少和．DNA修复功能失败可能与脑缺氧缺血后神经细胞凋亡的发生有关。     

基于NOD2/RIP2/NF-κB信号通路研究柚皮素对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的保护作用

目的探讨柚皮素对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的保护作用及其机制。方法 96只7日龄新生SD大鼠,随机分为4组,假手术组(Sham)、缺血缺氧性脑损伤组(HIBD)、柚皮素低剂量组(50 mg·kg^-1)、柚皮素高剂量组(100 mg·kg^-1)。术后48 h对各组新生大鼠进行神经功能缺陷评分,HE染色观察各组新生大鼠脑组织病理学改变,干湿重法检测各组新生大鼠脑含水量,免疫印迹法测定缺血缺氧侧脑组织NOD2、RIP2、NF-κB蛋白的表达,酶联免疫吸附法检测TNF-α、IL^-1β的水平。结果与模型组比较,柚皮素低、高剂量组神经行为学指标评分下降,病理学损伤减轻,新生大鼠脑含水量明显减少(P<0.05);Western blot检测显示,与模型组比较,柚皮素低、高剂量组新生大鼠脑组织NOD2、RIP2、NF-κB蛋白表达下调(P<0.05);ELISA检测显示,柚皮素低、高剂量组TNF-α和IL^-1β在脑组织中含量低于模型组(P<0.05)。结论柚皮素对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤有保护作用,其机制可能与柚皮素下调NOD2、RIP2、NF-κB蛋白的表达,并减少TNF-α、IL^-1β的分泌有关。     

促红细胞生成素对新生HIBD大鼠凋亡相关蛋白Bax表达的影响

目的观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后凋亡相关蛋白Bax表达的影响,探讨rhEPO发挥神经保护作用的可能机制。方法将新生7日龄SD大鼠120只随机分为3组,假手术组、对照组、rhEPO治疗组。其中rhEPO治疗组,在建立新生大鼠HIBD模型后,即刻一次性给予rhEPO 3000U/kg颈部皮下注射,用HE及免疫组化方法观察给药后不同时间点凋亡相关蛋白Bax表达的变化。结果新生7日龄大鼠HIBD后神经细胞凋亡增加,凋亡蛋白Bax的表达在各时间点较rhEPO治疗组和假手术增加(P<0.01),rhEPO干预后凋亡相关蛋白Bax表达较对照组明显减少(P<0.01),差异有统计学意义。结论 rhEPO可以通过下调凋亡相关蛋白Bax的表达,抑制细胞凋亡而发挥其神经保护作用,为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)提供有意义的理论依据。     

银杏叶提取物抗鼠脑缺血缺氧的药理学机制研究

目的研究新生鼠缺血缺氧性脑损伤后(HIBD)脑组织神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100蛋白(S-100)mRNA表达以及银杏叶提取物(GbE)对NES、S-100mRNA表达的影响,以探讨GbE抗脑缺血缺氧的药理作用机制。方法90只7日龄SD大鼠随机分成3组,建立HBID模型后,用RT-PCR技术观察脑组织NES、S-100mRNA的动态变化及GbE对其表达的影响。结果脑组织NESmRNA的表达在HIBD后24h达高峰,脑组织S-100mRNA的表达在HIBD后48h达高峰,高于假手术对照组(P<0.01)。以后逐渐下降,至96h仍未降至正常。腹腔注射GbE24、48、72h能增加脑组织NES、S-100mRNA表达的量(P<0.01)。结论GbE通过增加脑组织NES、S-100mRNA的表达改变能量代谢及细胞内Ca2+浓度从而抗脑缺血缺氧。     

CpG-ODN对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤的保护作用研究

目的探讨Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)激动剂——含Cp G基序的寡核苷酸(Cp G-ODN)对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤的保护作用机制。方法 50只健康7日龄新生Wistar大鼠,♀♂不限,随机分为5组,假手术组、缺血/缺氧性脑损伤(HIBD)组、Cp G-ODN低剂量组(0.35m L·kg-1)、Cp G-ODN中剂量组(1.40 m L·kg-1)、Cp GODN高剂量组(5.60 m L·kg-1)。术后48 h对大鼠神经功能进行评分,光学显微镜下观察脑组织病理学改变。免疫印迹法检测缺血/缺氧侧脑组织中磷酸化p38 MAPK、TLR9表达,酶联免疫吸附法检测TNF-α的表达。结果 Cp G-ODN低、中剂量组较模型组神经行为学评分降低,病理学损伤减轻,而高剂量组较模型组神经行为学评分升高(P<0.05),病理学损伤加重;Western blot分析结果表明,缺血/缺氧侧脑组织中磷酸p38 MAPK、TLR9蛋白表达逐渐上调,TNF-α在脑组织中含量逐渐升高(P<0.05)。结论 TLR9激动剂Cp G-ODN低、中剂量可改善新生大鼠脑缺血/缺氧损伤神经行为学评分及神经系统功能,减轻新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤,其机制可能是通过适度激活p38 MAPK信号通路,并分泌适量TNF-α发挥作用。     

缺氧缺血新生鼠脑损伤后银杏叶对Nogo-A蛋白表达的影响

目的 探讨银杏叶对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后Nogo-A表达的影响.方法 72只7d龄SD大鼠随机分为银杏叶治疗组、对照组和假手术组,应用免疫组化的方法观察银杏叶对脑组织Nogo-A表达的影响.结果 脑组织Nogo-A的表达在对照组和银杏叶治疗组3d开始增高,21 d达到最高峰,对照组增高幅度最大,其平均光密度值与假手...     

炎性细胞因子在大鼠缺氧缺血性脑损伤中含量变化及其意义

目的:检测SD大鼠脑缺氧缺血后脑组织中IL-1、IL-6和IL-8 mRNA的表达,探讨IL-1、IL-6和IL-8在大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中变化规律及其作用。方法:通过结扎左颈总动脉致大鼠脑急性缺血,后给8%氧气 92%氮气的混合气体致脑急性缺氧,建立大鼠脑急性缺血缺氧模型,在3个时相点采用rt-PCR方法测定假手术组、HIBD组脑组织中IL-1、IL-6和IL-8 mRNA含量变化。结果:HIBD组大脑皮质内IL-1和IL-8含量3d达到峰值,随后逐渐降低;大脑皮质内IL-6含量1d达到峰值,随后逐渐降低。缺血脑半球IL-1、IL-6和IL-8 mRNA含量较假手术组明显增高(P<0.05),且随着时间延长其表达量增加。结论:在大鼠急性缺氧缺血性脑损伤中,脑皮质内IL-1、IL-6和IL-8表达增强,IL-1、IL-6和IL-8参与了脑缺血缺氧后炎症反应的启动、发展过程。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤AQP-4表达及依达拉奉治疗效果的研究

目的：探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）后脑组织水通道蛋白-4（AQP-4）的表达变化及依达拉奉（edaravone）对其治疗效果的影响。方法：将7日龄Wistar大鼠120只随机分为3组：假手术组、缺氧缺血模型组（HIBD组）及依达拉奉治疗组,每组各40只。每组根据处死的时间不同又分5个亚组：6、24h、3、5、7d组,每亚组各8只,各组分别于不同时间点处死动物,测脑组织含水量,并采用免疫组化方法检测AQP-4的表达。结果：AQP-4在缺氧缺血6h即增强,3d达高峰,5～7d逐渐降低（P〈0.01）;治疗组各时间点AQP-4表达水平较HIBD组明显降低（P〈0.01）。结论：AQP-4参与了HIBD脑水肿的发生发展过程,依达拉奉可降低AQP-4的表达,从而减轻脑水肿,这可能是其脑保护作用机制之一。     

Memantine对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的影响

目的：研究美金胺(Memantine)对新生大鼠缺氧、缺血性脑损伤(HIBD)脑保护作用及机制。方法：应用新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组、Memantine治疗组,采用结扎左侧颈总动脉并吸入8％O2 92％N2混合气体制成新生大鼠HIBD动物模型。于HIBD后即刻腹腔注射Memantine 20mg/kg或等量生理盐水,48h后处死,用放射免疫法测血清NSE水平,用硝酸还原酶法测血清NO水平．用H-E染色观察脑组织病理变化。结果：Memantine可使脑组织病理改变明显减轻,可降低血清中NSE浓度．可降低血清中NO浓度。结论：Memantine对脑缺氧缺血损伤具有脑保护作用;Memantine通过阻断NMDA受体减少毒性NO的生成,是其脑保护作用可能机制之一。     

孕酮对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠血脑屏障通透性及脑水肿的影响

目的研究孕酮(PROG)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠血脑屏障(BBB)通透性和脑水肿的作用,并进一步探讨其潜在的机制。方法 7 d龄SD大鼠96只,随机分成4组:正常组、假手术组、缺氧缺血(HI)组和PROG组。建立HIBD动物模型,HI后24 h,伊文思蓝示踪剂检测BBB;干/湿法测定脑含水量;免疫组织化学法观察大脑皮质水孔通道蛋白4(AQP4)表达。结果正常组和假手术组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达差异无显著性(P>0.05);HI组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达明显高于假手术组(P<0.01);PROG组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达明显低于HI组(P<0.05)。结论 PROG通过减轻BBB破坏和脑水肿对HIBD新生大鼠起脑保护作用,PROG的脑保护作用可能与下调新生大鼠脑皮质AQP4的表达有关。     

选择性COX-2抑制剂NS398干预后对HIBD新生大鼠海马CA1区存活锥体细胞计数的变化

目的研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时应用选择性COX-2抑制剂NS398干预后海马CA1区存活锥体细胞计数的变化。方法于制备新生大鼠左脑的HIBD模型前30min,应用腹部注射NS39820mg/kg,同时建立未注射HIBD组及对照组,于HIBD后7d,测试左侧海马CA1区存活锥体细胞数。结果统计学比较,HIBD组CA1区存活锥体细胞计数显著低于对照组;NS398干预组存活锥体细胞数显著高于HIBD组。结论应用选择性COX-2抑制剂NS398可以减少新生鼠HIBD时锥体细胞缺失。     

氯胺酮对SD幼鼠海马GAP-43蛋白的影响分析

目的:分析氯胺酮对SD幼鼠海马GAP-43蛋白表达的影响。方法:取7~10日龄的SD幼鼠36只,随机分为A、B、C三组各12只。A组注射生理盐水50 mg/kg,B组注射氯胺酮25 mg/kg,C组注射氯胺酮50 mg/kg。24 h后处死小鼠取海马组织,分别采用免疫组化与Western Blotting检测海马GAP-43蛋白的表达情况。结果:经图像分析软件处理后得知,A组、B组、C组条带灰度值分别为187.43±7.98、164.87±8.35、154.31±6.98,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。A组、B组、C组GAP-43阳性细胞计数分别为(87.45±14.98)个/mm2、(66.48±12.36)个/mm2、(35.32±9.93)个/mm2,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:氯胺酮可明显降低SD幼鼠海马GAP-43蛋白的表达水平,这可能与其影响幼鼠神经系统发育有关。     

灯盏乙素对缺氧缺血性新生大鼠脑缺氧诱导因子-1α和水通道蛋白9表达水平的影响

目的：研究灯盏乙素对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和水通道蛋白9（APQ9）表达水平的影响。方法：建立HIBD新生大鼠模型，将新生7日龄SD大鼠随机分为假手术组（sham组）、缺氧缺血组（HIBD组）、灯盏乙素高、中和低剂量组、地塞米松阳性对照组。于缺氧缺血7 d后，观察大鼠体质量增长率，脑组织HE染色观察脑组织病理改变，测定脑含水量，免疫荧光法检测脑HIF-1α蛋白表达，逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法检测脑HIF-1α、APQ9mRNA表达，ELISA法检测脑caspase-3活性。结果：灯盏乙素能显著升高HIBD大鼠体质量增长率，降低脑组织含水量，抑制脑组织HIF-1α和AQP9mRNA表达，降低脑caspase-3活性。结论：灯盏乙素可减轻HIBD大鼠脑组织水肿，降低HIF-1α和AQP9表达，抑制神经细胞凋亡，发挥脑保护作用。     

褪黑素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤表达NF-κB的影响

目的：探讨褪黑素（melatonin,MT）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用及作用机制。方法：新生健康7日龄Wistar大鼠120只,随机分为3组：假手术组（40只）、缺氧缺血模型组（40只）、MT治疗组（40只）,参照经典方法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,MT治疗组于模型制作完成后立刻注射MT10mg/kg1次于腹腔内,脑损伤组则于腹腔内注射等量的0.9%氯化钠注射液。各组分别于手术后6、24、48、72 h取脑组织切片,免疫组织化学方法检测核因子-κB（NF-κB）的表达.结果：与假手术组相比,缺氧缺血组NF-κB表达随时间的变化增加显著（P〈0.01）。与缺氧缺血组相比较,MT治疗组NF-κB表达在12,24,48h三个时间点中下降显著（P〈0.01）。结论：MT对HIBD后海马区神经细胞具有保护作用,其作用机制可能与抑制NF-κB在海马区的持续活化有关。     

APP17肽对缺氧缺血性脑病新生鼠皮质区GAP-43表达的影响

目的：观察APP（β—amyloid precursop protein,APP）17肽（APP695—319—335）肽段对缺氧缺血性脑病新生鼠皮质区GAP-43表达的影响。方法：将生后7d的新生大鼠随机分为假手术组、脑病组和APP17肽治疗组。采用一侧颈动脉结扎,然后放在缺氧仓内2h的方法制备缺氧缺血性脑病模型。应用免疫组化方法观察各组大鼠不同时期脑皮质GAP-43表达的变化。结果：免疫组化结果显示,脑病组较假手术组小鼠皮质区GAP-43免疫阳性细胞增加（P〈0．01）．治疗组较脑病组GAP-43免疫阳性细胞明显增多（P〈0．01）。结论：缺氧缺血性脑损伤后,皮质区GAP-43表达和合成增加,GAP-43的表达增加可能与神经元再生和轴突重塑有关,是脑缺氧缺血后神经细胞内源性代偿机制之一。APP17肽可能通过调节GAP-43的表达来增加神经细胞之间的突触联系,促进神经的生长起到营养神经的作用,从而改善缺氧缺血性脑病小鼠的预后。