K562/AS2细胞株对三氧化二砷耐药机制的初步研究

目的：研究K562/AS2细胞株对三氧化二砷（ATO）耐药的机制。方法:采用MTT法检测细胞毒性。细胞表面P－糖蛋白（P-gp）、细胞内柔红霉素（DNR）浓度采用流式细胞术检测。DNA聚合酶、拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)、多药耐药基因1(〖STBX〗mdr1〖STBZ〗)、多药耐药相关蛋白1（〖STBX〗MRP1〖STBZ〗）以及肺耐药相关蛋白基因(lrp)表达水平的检测采用RT－PCR法。结果:K562和K562/AS2细胞表面P-gp任意荧光强度、K562/AS2细胞内DNR浓度均无显著差异（P>0.05）。K562/AS2细胞株〖STBX〗MRP1〖STBZ〗和Topo Ⅱ表达明显高于K562细胞（P<0.05），DNA 多聚酶，〖STBX〗mdr1〖STBZ〗和lrp表达与敏感细胞株K562细胞相同（P>0.05）。结论:ATO耐药细胞K562/AS2高表达〖STBX〗MRP1〖STBZ〗，并产生低倍数的多药耐药。K562/AS2细胞TopoⅡ基因表达增高，其意义有待进一步阐明。     

苦参碱逆转白血病多药耐药细胞系K562/A02对柔红霉素耐药性的研究

目的：以白血病多药耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２为对象，验证苦参碱能否逆转其对柔红霉素的耐药性。方法和结果：经ＭＴＴ法发现苦参碱５０ｍｇ／Ｌ能增加Ｋ５６２／Ａ０２对柔红霉素的敏感性，使柔红霉素半数抑制浓度（ＩＣ５０）由１４９２ｍｇ／Ｌ降至８２９ｍｇ／Ｌ，部分逆转了Ｋ５６２／Ａ０２对柔红霉素耐药性，逆转倍数为１８０倍。经流式细胞仪，免疫组化、逆转录—多酶链式反应证明苦参碱逆转Ｋ５６２／Ａ０２耐药性机制主要为：苦参碱降低多药耐药基因ｍｄｒ－１的ｍＲＮＡ表达，使细胞膜上Ｐ－１７０糖蛋白量减少，从而降低经Ｐ－１７０糖蛋白介导的细胞内柔红霉素外排能力，细胞内柔红霉素浓度升高，增强了Ｋ５６２／Ａ０２对柔红霉素敏感性。而苦参碱对Ｋ５６２／ｓ敏感细胞系无上述作用     

g562／AS2细胞株对三氧化二砷耐药机制的初步研究

目的：研究K562／AS2细胞株对三氧化二砷（ATO）耐药的机制。方法：采用MTT法检测细胞毒性。细胞表面P-糖蛋白（P—gP）、细胞内柔红霉素（DNR）浓度采用流式细胞术检测。DNA聚合酶、拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）、多药耐药基因1（mdr1）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）以及肺耐药相关蛋白基因（lrp）表达水平的检测采用RT—PCR法。结果：K562和K562／AS2细胞表面P—gP任意荧光强度、K562／AS2细胞内DNR浓度均无显著差异（P〉0．05）。K562／AS2细胞株MRPⅠ和TopoⅡ表达明显高于K562细胞（P〈0．05），DNA多聚酶，mdr1和lrp表达与敏感细胞株K562细胞相同（P〉0．05）。结论：ATO耐药细胞K562／AS2高表达MRP1，并产生低倍数的多药耐药。K562／AS2细胞TopoⅡ基因表达增高，其意义有待进一步阐明。     

苦参碱对K562及其多药耐药细胞K562/Vin的细胞生物学影响

目的:探讨中药苦参碱对K562及其多药耐药细胞K562/Vin的细胞生物学作用及其抗肿瘤作用机制。方法:MTT法检测苦参碱对两细胞的半数抑制浓度(IC₅₀值)及其逆转K562/Vin细胞对长春新碱的耐药作用,并绘制细胞生长曲线变化。免疫组化方法测定细胞表面P-糖蛋白表达。光镜下观察细胞形态学改变,透射电镜下观察细胞结构变化。RT-PCR检测端粒酶基因hTERT-mRNA表达。结果:苦参碱对K562、K562/Vin细胞的IC₅₀值分别为3.4、4.6mmol·L ^-1。4.0mmol·L ^-1苦参碱可抑制两细胞的生长;2.0mmol·L ^-1苦参碱可降低K562/Vin细胞表面P-糖蛋白表达,增强长春新碱对K562/Vin的细胞毒性,其逆转耐药倍数为492.4倍。苦参碱作用后K562、K562/Vin细胞在光镜、电镜下均可见凋亡的形态学变化。苦参碱作用后K562细胞hTERT-mRNA表达受抑,并与药物作用浓度相关。结论:苦参碱可增强长春新碱对K562/Vin细胞的毒性,并诱导K562、K562/Vin细胞凋亡,同时可抑制K562细胞hTERT-mRNA表达,提示苦参碱可为一有效抗肿瘤药物。     

索拉非尼联合柔红霉素对白血病K562细胞的抑制作用

目的:探讨小分子Raf激酶抑制剂索拉非尼(sorafenib)联合柔红霉素(DNR)对白血病细胞K562及U937的抑制作用及可能的分子机制。方法:MTT法测定索拉非尼和柔红霉素单独作用于K562和U937细胞的抑制率及DNR IC10联合不同浓度索拉非尼作用于K562及U937的联合抑制率;流式细胞AnnexinⅤ/PI法测定单药及联合用药后K562细胞的凋亡率以及Hoechst33258染色法观察单药及联合作用后细胞凋亡形态的改变;West-ern blotting法测定索拉非尼、DNR及U0126对K562及U937p-ERK1/2的影响;根据金氏方程证明2种药物联合抑制率及凋亡是否有协同作用。结果:MTT法测定索拉非尼联合DNR对K562及U937均有协同抑制作用(q1.15,P0.01);流式细胞AnnexinⅤ/PI和Hoechst33258染色法,均证明索拉非尼联合柔红霉素能联合诱导K562细胞凋亡(q1.15,P0.05),两者有明显的一致性;K562细胞的基础pERK1/2蛋白水平明显高于U937细胞(P0.01),索拉非尼和U0126都能够显著抑制K562细胞p-ERK1/2水平;U0126联合DNR存在协同抑制K562细胞的作用。结论:索拉非尼联合DNR作用于白血病细胞K562、U937存在协同抑制及凋亡诱导作用;DNR对U937的抑制作用明显高于K562;索拉非尼对K562的敏感性高于U937细胞;索拉非尼可能通过下调p-ERK1/2水平增加柔红霉素抗白血病细胞的效应。     

姜黄素对耐药细胞株K562/ADM的耐药逆转作用研究

目的:研究姜黄素对慢性粒细胞白血病多药耐药细胞株K562/ADM中多药耐药基因mdrl表达的下调作用.方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测各处理组K562/ADM细胞株中mdrl基因表达;利用MTT试验检测姜黄素处理后K562/ADM细胞株对阿霉素敏感性的改变.结果:姜黄素抑制了K562/ADM细胞株中多药耐药基因mdrl的表达,姜黄素明显增加K562/ADM细胞株对阿霉素的敏感性.结论:姜黄素通过抑制P-gP的药物外排作用有效逆转K562/ADM细胞株的多药耐药性.     

ASON对急性早幼粒白血病细胞株HL60/VCR多药耐药的逆转作用

目的:探讨反义寡核苷酸(ASON)对耐长春新碱的急性早幼粒白血病细胞(HL60/VCR)多药耐药(mdr1)的逆转效果。方法:以HL60/VCR细胞为模型,合成正、反义寡核苷酸作用于HL60/VCR细胞,采用RT-PCR方法、流式细胞术及药敏试验等观察细胞mdr-1mRNA表达、mdr-1基因产物P-糖蛋白(P-gp)的表达和对药物长春新碱(VCR)的敏感性。结果:反义寡核苷酸处理的细胞mdr-1mRNA表达、P-gp表达较正义组及HL60/VCR细胞显著降低,且可明显提高HL60/VCR细胞株对长春新碱的敏感性。结论:反义寡核苷酸具有逆转HL60/VCR细胞多药耐药的作用。其作用机制可能是抑制mdr1mRNA的转录,使P-gp的表达受到明显抑制,提高对长春新碱的敏感性。     

胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU的建立及其耐药机制的研究

目的：建立5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导的胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU，探讨凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3与其耐药性产生的关系。 方法:采用反复短期暴露并逐渐增加5-FU浓度的方法建立胃癌耐药细胞株BGC823/5-FU，MTT法检测此耐药细胞株对5-FU的耐药倍数及其对临床常用化疗药物阿霉素、丝裂霉素和顺铂的交叉耐药性，流式细胞术检测细胞P-糖蛋白的表达和柔红霉素积累量；Western blotting法检测耐药胃癌细胞株BGC823/5-FU与其亲代药物敏感胃癌细胞株BGC823凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3的表达。 结果:成功诱导出胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU，较其亲代细胞BGC823对5-FU、阿霉素、丝裂霉素和顺铂的耐药性分别提高10.82、2.50、22.23和2.00倍。其P-糖蛋白表达较BGC823细胞增高（P<0.01），柔红霉素积累量较BGC823细胞减低（P<0.01）。与亲代药物敏感BGC823细胞相比，耐药细胞株BGC823/5-FU细胞Survivin表达上升（P<0.05），Bcl-2表达升高（P<0.05），Bax表达下降（P<0.05），caspase-3表达减低（P<0.05）。结论:胃癌细胞株BGC823在5-FU的诱导下可形成多药耐药细胞株BGC823/5-FU，P-糖蛋白、凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3可能参与其耐药性的形成。     

高三尖杉酯碱白血病多药耐药细胞系K562/HHT的诱导及米非司酮逆转耐药的研究

目的: 研究高三尖杉酯碱（HHT）诱导的白血病多药耐药细胞株耐药机制以及米非司酮(RU486)逆转其耐药效应。方法：采用反复短期暴露并逐渐增加HHT浓度的方法建立白血病多药耐药细胞系K562/HHT，MTT法检测K562/HHT细胞对化疗药物的敏感性及RU486对该细胞的细胞毒效应，RT-PCR法检测细胞MDR1基因、葡萄糖神经酰胺合成酶（GCS）基因的表达，流式细胞术检测细胞P-糖蛋白的表达和柔红霉素积累量，免疫组化法检测细胞Bcl-2、Bax、caspase-3的表达状况。结果： 成功诱导出多药耐药细胞系K562/HHT，K562/HHT较其亲代细胞K562对HHT、阿霉素、长春新碱、依托泊苷的耐药性分别提高462.6、2.8、1 183.4、2.6倍，K562/HHT细胞MDR1基因、GCS基因、P-糖蛋白和Bcl-2/Bax比值明显高于K562细胞（P<0.05），caspase-3表达、柔红霉素积累量明显低于K562细胞（P<0.05）。10 μmol/L的RU486对K562/HHT细胞无明显杀伤（存活率94.67%±2.48%），该浓度RU486可不同程度地逆转K562/HHT细胞对上述化疗药物的耐药性，RU486作用后K562/HHT细胞caspase-3表达、柔红霉素积累量明显高于作用前（P<0.05），Bcl-2/Bax比值明显低于作用前（P<0.05）。结论： 白血病细胞系K562在HHT的作用下可形成多药耐药细胞系K562/HHT，其耐药性的形成与P-糖蛋白、GCS、Bcl-2/Bax比值及caspase-3等机制有关，RU486可通过提高细胞内药物积累、调节Bcl-2/Bax比值和caspase-3的表达逆转此细胞的耐药性。     

柴胡皂苷在体外对人白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用

目的: 研究柴胡皂苷(SS)对白血病细胞株K562/ADM 多药耐药性(MDR)的逆转作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法: 分别以不同浓度(1~100 mg/L)的SS作用于体外培养的K562和K562/ADM 细胞48 h,采用MTT 法检测细胞增殖抑制率,确定SS的非毒性剂量;采用非毒性剂量SS 1.25、2.5和5.0 mg/L,分别与不同浓度(0.05~100 mg/L)阿霉素(ADM)联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度(IC₅₀),计算逆转指数和两药相互作用系数(CDI),观察SS协同ADM作用后的细胞形态;利用流式细胞术检测SS联合ADM作用后K562/ ADM细胞内ADM的蓄积程度、细胞凋亡和细胞周期变化。结果: 随着SS浓度的增加,细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量-效应关系;SS的非细胞毒性剂量为5.0 mg/L,逆转倍数为21.5倍;SS协同ADM作用后形态学方法显示肿瘤细胞数量减少,并出现了大量凋亡细胞,呈剂量-效应关系;SS可明显提高ADM在K562/ADM细胞内的蓄积,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);SS可增强ADM对K562/ADM细胞的凋亡诱导作用,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);K562/ADM细胞被阻滞在G₀/G₁期,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05)。结论: SS对白血病耐药细胞株K562/ADM有增殖抑制和逆转多药耐药性的作用,其部分逆转机制可能是通过增加细胞内化疗药物蓄积,诱导细胞凋亡和使细胞阻滞在G₀/G₁期而实现的。     

HER2介导乳腺癌细胞多药耐药的作用及机制

目的筛选HER2高表达乳腺癌细胞化疗耐受的药物种类,探讨HER2介导的乳腺癌多药耐药的机制。方法构建HER2稳定高表达的乳腺癌细胞MCF-7/HER2模型;MTT法检测该细胞对多种临床常用的抗乳腺癌药物的敏感性;Hochest33258染色观察药物诱导的MCF-7/HER2的凋亡率,并采用聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中bcl-2和survivin基因的mRNA表达。结果MCF-7/HER2细胞对Taxol,MMC,5-FU,VP-16及TSPA的耐药指数分别为对照细胞的74,22,2.5,3.5和2.8倍,出现了明显的药物抗性(P<0.05);而对CDDP,ADM,VBL,VCR,NBV和MTX等的耐药指数与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);由Taxol,MMC,5-FU,VP-16诱导的MCF-7/HER2细胞凋亡率明显低于对照细胞;MCF-7/HER2细胞survivin基因表达明显高于对照组,而bcl-2基因表达与对照组比较,差异无统计学意义。结论HER2可介导乳腺癌细胞对Taxol,MMC,5-FU,VP-16和TSPA等的多药抗性,这种多药抗性的产生可能与HER2上调survivin表达所致的凋亡抗性有关。     

人质膜型唾液酸酶与人红白血病细胞多药耐药相关

目的探讨人质膜型唾液酸酶(Neu3)与人红白血病细胞多药耐药的关系。方法分别或联合柔红霉素(DNR)与唾液酸酶特异性抑制剂(NeuAC2en)处理K562和K562/ADM细胞,MTT法检测细胞生存率;RT-PCR检测多药耐药基因(MDR)、多药耐药相关蛋白(MRP)、06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、BCL-xl、BAX和BCL-2mRNA表达;Western blot法检测MDR基因蛋白产物P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达;TBA法检测唾液酸酶活性。结果与K562细胞相比,K562/ADM细胞对DNR具有一定的抵抗性,NeuAC2en与DNR有协同作用(P<0.01);应用NeuAC2en或DNR后K562和K562/ADM细胞Neu3活性均明显下降,两种药物联合应用Neu3活性下降最明显(P<0.01);相同处理条件下,与K562细胞相比,K562/ADM细胞中Neu3、MDR1、BCL-xl和BCL-2表达增加,BAX无明显变化;应用DNR后,MDR1、Neu3、BCL-xl、BCL-2表达均下降,而DNR与NeuAC2en联合应用,以上基因表达水平下调最明显。...     

本芴醇衍生物LY980503对人乳腺癌多药耐药细胞株MCF/DOX基因表达谱的影响

目的:应用基因表达谱芯片探讨本芴醇衍生物LY980503对肿瘤多药耐药逆转机制。方法:提取多药耐药细胞株MCF/DOX总RNA, 与含有320人基因的cDNA芯片杂交。结果:有9条基因表达下调, 1条基因表达上调。结论:LY980503在体外能通过调节多种基因的表达而逆转MCF/DOX的耐药性。