AlCoCrCuFeTix高熵合金细胞毒性评价及对L929细胞凋亡与Ⅰ型胶原合成的影响

目的　评价AlCoCrCuFeTix(x=0,0.25,0.5,1)系列高熵合金细胞毒性。方法　对AlCoCrCuFeTix(x=0,0.25,0.5,1)系列高熵合金进行MTT毒性实验评价其细胞毒性;流式细胞术AnnexinⅤ-FITC/PI双染法评价其对L929细胞凋亡影响;免疫荧光染色检测各组L929细胞Ⅰ型胶原的合成水平来评价该系列材料对细胞增殖的影响。结果　随着Ti元素的递增,AlCoCrCuFeTix(x=0,0.25,0.5,1)系列高熵合金细胞毒性增大,凋亡率呈上升趋势,而L929细胞的Ⅰ型胶原蛋白表达水平下降。实验表明AlCoCrCuFe此种金属具有良好的细胞相容性,细胞毒性各时间点评级均为1级,且凋亡率与Ⅰ型胶原蛋白表达水平与空白对照组无明显差异。结论　AlCoCrCuFeTix系列高熵合金中的AlCoCrCuFe具有良好的细胞相容性,可初步满足医疗器械使用的基本要求。     

天然生物膜的细胞毒性的实验研究

目的:研究多糖及胶原蛋白天然生物膜的细胞毒性.方法:采用MTT比色法,检测生物膜对小鼠成纤维细胞L929细胞相对增殖率的影响,评价其细胞毒性.结果:该生物膜表现出较高的细胞相对增殖率,2 d时为99.10%±0.052%,4 d时为92.20%±0.027%,7 d时为86.26%±0.026%,其细胞毒性为1级,结论:生物膜无明显细胞毒性,可作为一种安全的生物盖髓剂应用于临床.     

六种充填材料的细胞毒性研究

采用细胞形态观察法、紫外分光光度法和Ｌ９２９细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，检测了６种牙科充填材料的细胞毒性。实验结果表明，普通银汞合金和高铜银合金粉与镓形成的镓银合金的细胞毒性大于光固化复合树脂和球形银合金粉与镓所形成的镓银合金。本研究结果提示，合金类充填材料成分中的汞和铜的含量会影响其细胞毒性作用     

无机抗菌剂对自酸蚀处理剂全身毒性和细胞毒性影响的研究

目的测试无机抗菌剂的添加对新型实验自酸蚀处理剂（ESP）全身毒性和细胞毒性的影响。方法将6种无机抗菌剂分别加入ESP中，进行经口途径大鼠短期全身毒性实验。并采用受试材料与NIH3T3细胞直接接触培养的方法，观测其对细胞增殖、活力和形态的影响。结果抗菌剂添加比为5.0%时，为期2周的大鼠全身毒性实验中未发现临床毒性体征，各组间大鼠体重相对增长率无显著差异。经含质量浓度为0.5%不同抗菌剂的处理剂处理固化后的各实验组细胞活力比率和细胞增殖率与ESP空白对照组相比无显著差异。仅样本覆盖区及样本边缘邻近区域细胞可观察到毒性表现，远离样本覆盖区的细胞密度未受明显影响。结论以适当的质量浓度添加受试的无机抗菌剂对受试ESP的全身毒性和细胞毒性无显著影响。     

牙本质粘结剂对人牙髓细胞毒性的体外研究

目的：评价全酸蚀牙本质粘结剂和自酸蚀牙本质粘结剂对人牙髓细胞的毒性作用.方法：用人牙髓细胞为实验细胞,采用MTT比色分析法,对4 种牙本质粘结剂（Prime ＆ Bond NT,Single Bond,Xeno Ⅲ,iBond）进行体外细胞毒性研究.结果：不同浓度的粘结剂稀释液均可使人牙髓细胞的形态有所改变.4 种牙本质粘结剂的细胞毒性有显著性差异,且作用时间和浓度的改变对其细胞毒性有影响.全酸蚀粘结剂比自酸蚀粘结剂的细胞毒性强.结论：4 种牙本质粘结剂在体外对人牙髓细胞均有一定程度的细胞毒性,其中Single Bond的毒性较强,临床使用粘结剂时应合理选择粘结剂和掌握固化时间.     

不同含锶量的掺锶羟磷灰石陶瓷细胞毒性评价

目的　研究不同含锶量的掺锶羟磷灰石陶瓷的细胞毒性。方法　通过溶液反应方法制备含不同浓度锶元素的羟磷灰石陶瓷 ,采用细胞相对增殖率法和细胞形态直接观察法测定细胞与材料作用后的生长情况。结果　不同含锶量的陶瓷材料其细胞相对增殖率均在 94 %～ 10 2 %之间 ,细胞毒性级为 0级或 1级 ;随着材料中掺锶量的增加其细胞毒性存在略微增大的趋势。结论　锶元素的掺入对羟磷灰石材料的细胞毒性没有明显的影响     

活性钙离子液对离体牙超微形态的影响与细胞毒性评价

目的:研究活性钙离子液对离体牙牙釉质和牙骨质超微形态的影响以及对小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3的细胞毒性,从而为其临床应用提供依据。方法:应用Quanta200FEG场发射扫描电镜检测钙离子液成分及含量;观察钙离子液作用于离体牙前后,牙釉质和牙骨质的超微形态;MTT比色法观察不同浓度钙离子液对小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3细胞生长的影响,计算细胞相对增殖率并进行细胞毒性分级。结果:钙离子液主要成分为钙、碳、氧、氯。通过扫描电镜观察,钙离子液浸泡离体牙后,牙釉质和牙骨质无变化。细胞毒性分级合格的钙离子液的最大浓度为0.344 mg/mL。结论:活性钙离子液能应用于口腔,但需选择适合的浓度。     

钯银合金细胞毒性的研究

目的:检测2种钯银合金的细胞毒性。方法:制作合金标准铸件,提取浸渍液后采用MTT法进行活细胞形态观察和吸光度值测定并转化为毒性级别,进行评价。结果:钯银合金浸渍液吸光度值显著高于镍铬合金,细胞毒性级别低于镍铬合金,细胞生长形态良好。结论:钯银合金细胞毒性低于镍铬合金。     

三种牙本质黏结剂对人牙髓细胞的细胞毒性

目的：比较不同固化时间下3种牙本质黏结剂（Dentin bonding agents，DBA）对牙髓细胞的细胞毒性，指导临床上合理选择黏结剂和掌握固化时间。方法：组织块培养法进行人牙髓细胞原代培养，并以免疫组织化学染色法鉴定。采用MTT比色分析法来评价3种DBA（Prime＆BondNT，Pb；XenoⅢ，Xe；AdheSE，Ad）的细胞毒性。结果：经ANOVA和Dunnett—t检验，与对照组相比，固化10s和40s的3种牙本质黏结剂对牙髓细胞均有毒性（P〈0．001），与浸渍液作用24h后一些牙髓细胞变圆、皱缩、失去细胞突起。固化10s的3种DBA中Ad对细胞毒性最大，Pb毒性最小；固化40s的3种DBA中Xe毒性最大，Pb毒性最小。与固化10相比，Xe和Ad固化40s可以减轻对牙髓细胞的毒性，经student—t检验，P〈0．01。结论：3种牙本质黏结剂对体外培养牙髓细胞均有一定毒性，延长固化时间可以减轻对牙髓细胞的毒性。     

人颊癌细胞在胶原凝胶中生长和浸润特性初步研究

目的 探讨胶原蛋白凝胶作为颊癌细胞在体外培养环境下生长和浸润模型的价值。方法 从鼠尾肌腱中提取出较纯的Ⅰ型胶原蛋白,制成胶原蛋白凝胶体,将建株人颊癌细胞置于其中培养生长,从形态学特征上初步探讨胶原蛋白凝胶模型的价值。结果 从鼠尾肌腱提取的Ⅰ型胶原蛋白,能形成胶原蛋白纤维束网状结构一胶原蛋白凝胶;其内生长的颊癌细胞所处的生长环境,类似于机体内的生长环境,颊癌细胞有很高的生长率。结论 鼠尾肌腱胶原蛋白凝胶,能制成理想的肿瘤细胞的生长及浸润模型;建株颊癌细胞能在立体胶原凝胶中生长,保持着细胞原有的形态特征及生物学特性。     

生长因子对人髁突软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原基因表达的调控研究

目的：研究低血清培养条件下转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）,胰岛素生长因子－Ⅰ（ＩＧＦ－Ⅰ）,碱性成纤维生长因子（ｂＦＧＦ）对人髁突软骨细胞Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ型前胶原基因表达的调控作用。方法：采用体外细胞培养及ｍＲＮＡ狭缝杂交的方法。结果：ＩＧＦ－Ⅰ对３种前胶原的ｍＲＮＡ水平无显著影响。ｂＧＦＧ,ＴＧＦ－β均呈不同程度地抑制Ⅱ型胶原的基因表达,分别为对照组的０．３５２及０．６５８倍同时ＴＧＦ－β显著增加了Ⅰ     

羧甲基壳聚糖锌多肽复合材料对人牙周膜成纤维细胞的毒性

目的:研究羧甲基壳聚糖锌多肽复合材料(carboxymethyl chitosan zinc and peptide,CMC-Zn+-P)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)的细胞毒性,为材料的安全使用提供依据.方法:体外培养人牙周膜成纤维细胞,并进行形态学及免疫组织化学鉴定.使用含不同浓度材料浸提液的细胞培养液培养细胞,并进行分组,1～4组为实验组,材料浸提液浓度分别为100％、75％、50％和25％,第5组为对照组,不含材料浸提液.采用CCK-8法测定复合材料不同浓度浸提液对细胞增殖活性的影响,通过细胞相对增殖率进行细胞毒性评级.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:原代培养的细胞呈成纤维细胞形态,免疫组织化学染色结果显示细胞波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,属中胚层组织来源.不同浓度材料浸提液对细胞均有促进增殖的作用,相对增殖率均大于100％,细胞毒性分级为0级.结论:CMC-Zn+-P复合材料对体外培养的HPDLCs无细胞毒性,符合国家标准的要求.     

小牛皮胶原对新骨形成影响的定量组织学研究

将小牛皮胶原植入10只成年狗颌骨内，在不同时段取标本进行组织学光镜检测和定量分析。结果显示，此材料组织相容性良好，不影响新骨形成，材料与骨组织间无纤维被囊形成，与新骨直接结合，材料最后在机体内大部分降解，为宿主新生骨组织替代，表明小牛皮胶原是一种良好的组织修复材料。     

生长因子对人髁突软骨细胞DNA及胶原合成的影响

目的:研究胰岛素样生长因子(IGF-)、碱性成纤维样生长因子(bFGF)及转化生长因子-β1(TGF-β1)对人髁突软骨细胞增殖及代谢的调节作用。方法:采用体外细胞培养技术及同位素掺入法。结果:在0.4%新生小牛血清(NCS)条件下,bFGF对人髁突软骨细胞DNA合成有显著的促进作用,浓度在1ng/ml以上具显著性(P<0.05)。IGF-在10～100ng/ml呈剂量效应地促进3H-TdR的掺入,而TGF-β1无显著作用。bFGF在0.1～100ng/ml可显著促进人髁突软骨细胞3H-Proline掺入,最大效应剂量为10ng/ml(增加60%)。IGF-在10～100ng/ml能够明显促进细胞胶原合成,最大值在100ng/ml(增加98%)。TGF-β1在1～10ng/ml明显抑制3H-Proline掺入,最大抑制浓度为1ng/ml,抑制率约为24%。结论:生长因子可有效促进软骨细胞增殖及基质合成,为关节软骨损伤性疾患的治疗提供一种有效的途径     

Usefulness of collagen gel matrix culture for biological evaluation of dental materials (in vitro)

Cytotoxicity of zinc oxide-eugenol cement was investigated using collagen gel matrix culture. Diffusibility of the main components into the collagen gel was measured by either atomic absorption or ultraviolet spectroscopy. The agar overlay culture method was also carried out for comparison. Results from solution cultures containing diluted collagen were similar to those with diluted agar. Longer culture with either cement liquid, eugenol, or zinc chloride solution, resulted in more depressed cell growth. The lower the powder/liquid ratio for mixing, the higher the cytotoxicity for all the materials tested in gelled collagen. Also, cytotoxicity levels were always lower in cultures with collagen than in those with agar. Diffusibility of the materials into collagen gel was similar to that into agar, but the of diffused components in collagen gel was less. Thus, the usefulness of collagen gel matrix culture for biological evaluation of dental materials was equivalent to that of agar overlay culture. However, it is suggested that collagen as a tissue matrix might provide a favorable environment for cell culture, and hence allow biocompatibility testing of biomaterials under simulated conditions.     

大鼠牙囊细胞体外培养技术的建立及其鉴定

目的　建立体外培养大鼠牙囊细胞的方法,观察牙囊细胞体外生长的生物学特性。方法　分离乳鼠下颌第一、第二磨牙牙胚的牙囊组织,应用组织培养的方法进行牙囊细胞原代和传代培养。显微镜观察培养细胞的形态,电镜观察体内牙囊组织和体外培养的牙囊细胞的超微结构。免疫组化法检测细胞波形蛋白、Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白的表达。结果　分离组织培养24 h后,梭形细胞和多角形细胞从组织块中游出,经消化排除法获得纯化的牙囊细胞。显微镜下牙囊细胞为成纤维细胞样,电镜下牙囊细胞无桥粒,胞浆中含有高密度电子颗粒和大量粗面内质网(RER)。免疫组化染色显示牙囊细胞表达波形蛋白、Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白。结论　运用组织培养和细胞生物学技术可以成功获得原代和传代培养的大鼠牙囊细胞,体外培养的细胞具有与正常大鼠牙囊细胞相一致的生物学特性。     

生长期兔髁突软骨细胞体外培养方法及其生物学特性研究

目的 建立髁突软骨细胞体外培养模型,研究其生物学特性。 方法 分离4周龄健康新西兰大白兔双侧髁突软骨,采用胰酶和胶原酶联合消化方法收集4 h和12 h 2个时间点的髁突软骨细胞,连续体外培养并传代至P10。使用倒置显微镜观察细胞形态;采用甲苯胺蓝、阿利新蓝和免疫细胞化学染色对髁突软骨细胞进行鉴定;利用细胞计数绘制细胞生长曲线;通过Western 免疫印迹分析细胞Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原和SOX9在蛋白水平的表达情况。采用SPSS13.0软件包对Western 印迹条带灰度值进行统计学分析。 结果 兔髁突软骨细胞体积较大,呈纺锤形或多角形,铺路石样排列,细胞爬片染色结果为阳性。随着细胞传代“成纤维样”细胞比例逐渐加重,P2代之前的细胞形态差异较小。细胞生长曲线显示,兔髁突软骨细胞的体外培养符合经典的S形生长曲线。Western 印迹结果表明,4h和12 h所收髁突软骨细胞Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原和SOX9表达无显著差异。 结论 使用本方法培养兔髁突软骨细胞简单有效。髁突软骨细胞体外培养存在去分化现象,但P2代以内的髁突软骨细胞生物学特性相对稳定,适合用于后期实验研究,P3代以后的髁突软骨细胞逐渐丧失原有细胞的特性。     

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目的探讨丝素胶原支架用作牙周组织工程支架材料的可行性。方法本研究于2008年9月在辽宁医学院实验中心进行。通过冻干法制备丝素胶原支架,用扫描电镜(SEM)观察、噻唑蓝(MTT)法及碱性磷酸酶(ALP)活性检测,了解人牙周膜成纤维细胞(PDLF)附着于丝素胶原支架的生长情况,评价其生物相容性。结果制备的复合膜孔隙率为80.7%;PDLF在材料浸提液中的生长、增殖状况与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);ALP活性与对照组相比差异亦无统计学意义(P>0.05)。SEM观察可见复合材料具有良好的多孔网状结构,细胞在各复合膜上生长旺盛,伸展充分,形成良好。结论通过冻干法自制的丝素胶原复合物的孔隙率符合牙周组织工程的要求。其良好的三维空间结构和细胞相容性促进了PDLF的生长、黏附及增殖,且无细胞毒性,有望成为牙周组织工程的支架材料。     

细胞增殖与凋亡在牙齿发育中的作用

目的 阐明细胞增殖与凋亡在牙齿发生,发育过程中的机制,探讨牙齿发生,发育过程中的机制,探讨牙齿发育的机理,方法 选用纯系ＳＤ大鼠建立牙齿发育模型,采用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ法）及免疫组织化学增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）染色技术,观察分析纯系ＳＤ大鼠牙胚发育不同阶段细胞增殖及凋亡情况,结果 在牙齿发育的蕾状期,帽状期,钟状期增殖及凋亡的阳性细胞均出现在细胞增殖生长中心处,钟状晚期及牙体组织形成后,     

bFGF及KGF的mRNA的表达与口腔粘膜上皮癌变的关系

采用原位杂交方法观察了角质细胞生长因子（KGF）与成纤维细胞生长因子（bFGF)在颊粘膜异常增生（DYS）及鳞状细胞癌（SCC）中的表达，并进行了分析。结果表明，在DYS及SCC间质中均检测到KGF和bGFG阳性反应，SCC组的阳性表达率和程度均比DYS增强，此结果提示：bFGF和KGF不仅可以通过自分泌和旁分泌的方式促进间质中新生血管及间质的形成，而且可能参与促进肿瘤细胞生长。