Akt/PKB信号通路与胃癌的相关研究进展

最初自AKR小鼠胸腺瘤细胞株中分离出一株具有转化能力的逆转录病毒AKT8,并将病毒基因组中非病毒序列定义为病毒癌基因v-akt。而后病毒癌基因akt及人类同源物     

PI3K/Akt信号传导通路在替莫唑胺诱导脑胶质瘤细胞耐药中的作用研究

目的观察替莫唑胺耐药脑胶质瘤细胞中激活磷脂酰肌醇3激酶/PKB蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号传导通路活化情况,并对PI3K/Akt信号传导通路在替莫唑胺诱导脑胶质瘤细胞耐药中的作用机制进行探讨。方法采用Western blot方法检测耐药脑胶质瘤细胞(U251/TMZ)和非耐药脑胶质瘤细胞中PI3K/Ak信号传导通路的活化情况。采用PI3K/Akt信号传导通路特异性阻断剂LY294002阻断U251/TMZ中PI3K/Akt信号传导通路,检测替莫唑胺对U251/TMZ细胞活性的影响。采用Western blot方法检测LY294002作用后,U251/TMZ细胞中Bcl-2、MDR1、Topo Ⅱ、ARF和p53等蛋白表达变化情况。结果耐药脑胶质瘤细胞中PI3K/Akt信号传导通路活化情况显著增强(P0.01)。阻断PI3K/Akt信号传导通路后,替莫唑胺对U251/TMZ耐药脑胶质瘤细胞的抑制率明显高于对照组(P0.05)。阻断PI3K/Akt信号传导通路后,耐药相关基因Bcl-2和MDR1的表达显著降低(P0.01),Topo Ⅱ的表达显著升高(P0.01),同时抑癌基因ARF和p53的表达显著升高(P0.01)。结论 PI3K/Akt信号传导通路参与替莫唑胺耐药脑胶质瘤细胞的形成,其机制可能与PI3K/Akt信号传导通路对耐药相关基因Bcl-2、MDR1和Topo Ⅱ及抑癌基因ARF和p53的表达调控有关。     

磷酸酶与张力蛋白同源物在多种疾病中的研究进展

磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)基因,又称MMAC1或TEP1,为1997年发现的抑癌基因,属于PTP(proteintyrosinephosphatases)基因家族成员。PTEN具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶活性,其底物是磷脂酰肌醇(3,4,5)-三磷酸(PIP3)。研究发现:PTEN可以通过去磷酸化PIP3调节下游效应分子及信号通路,如AKT/PKB激酶、PI3K/AKT/MTOR信号通路等。PTEN具有广泛的生物学特性,参与肿瘤、心血管疾病、肾脏疾病、纤维化和神经系统疾病、自身免疫病的发生及发展,在多种疾病中起重要作用。     

EGFR/PI3K/Akt细胞信号传导通路与肿瘤

表皮生长因子受体(EGFR)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB,也称Akt)信号通路是生物体内一条非常重要的生存信号通路。EGFR通过二聚化后刺激Ras蛋白,导致磷酸化级联反应的发生来激活PI3K/Akt信号通路,从而引起肿瘤的发生发展。本文从EGFR/PI3K/Akt信号传导通路对肿瘤的调节机制等多个方面综述了EGFR/PI3K/Akt信号通路与肿瘤的关系。     

PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展

肺癌是目前全世界范围内发病率和死亡率均最高的恶性肿瘤.磷酸酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路是所有人类癌症中最重要的致癌途径之一,该通路在肿瘤的发生、增殖以及诱导上皮-间质转化(EMT)等方面扮演者重要角色,并且对于肿瘤的获得性耐药也有影响.目前针对PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌(NSCL...     

LncRNA FTH1P3通过调控PI3K/AKT信号通路促进胃癌细胞增殖和迁移能力

目的 研究长链非编码RNA铁蛋白重链1伪基因3(LncRNA FTH1P3)在胃癌组织中的表达及临床意义,并探讨LncRNA FTH1P3通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路促进胃癌细胞增殖和迁移的作用机制。方法 收集胃癌和癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测LncRNA FTH1P3在胃癌组织中的表达,分析LncRNA FTH1P3的表达与胃癌患者病理参数和预后的关系。常规培养胃癌细胞,分为si-NC组和si-LncRNA FTH1P3-1组、si-LncRNA FTH1P3-2组,采用LncRNA FTH1P3 siRNA转染胃癌细胞,qRT-PCR检测各组细胞中LncRNA FTH1P3的表达;CCK8实验检测各组细胞增殖能力;Transwell实验检测各组细胞迁移能力;体内成瘤实验检测各组细胞体内成瘤能力;Western blot检测各组细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、AKT、磷酸化PI3K(pPI3K)、磷酸化AKT(pAKT)的表达。结果 LncRNA FTH1P3在胃癌组织中表达上调(P<0.05)。LncRNA F...     

Akt和Bad信号分子在人膝骨性关节炎中的变化

背景:已知磷脂酰肌醇三磷酸激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,P13K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)信号途径具有促进细胞增殖、抑制凋亡的功能,有关P13K/Akt信号途径在骨性关节炎发病中的意义也引起关注,但缺乏对P13K/Akt信号途径在人膝骨性关节炎软骨组织中表达及意义的研究.目的:观察Akt、Bad信号分子在人膝骨性关节炎中的变化情况.方法:苏木精-伊红染色观察软骨组织形态学改变,免疫组织化学技术检测31例膝骨性关节炎患者关节软骨(实验组)与10例正常人膝关节软骨(对照组)Akt及Bad的分布和表达.结果与结论:①骨性关节炎关节软骨厚度变薄,浅层破溃;中层和深层软骨细胞排列紊乱、分布不均.②膝骨性关节炎患者中、深层软骨组织中Akt的表达均明显低于正常人关节软骨组织(P＜0.01);Bad在骨性关节炎患者及正常人关节软骨组织内均有表达,但无显著性差异(P＞0.01).提示软骨细胞内P13K/Akt信号途径与骨性关节炎的发生发展密切相关,P13K/Akt途径的变化可能是导致关节软骨破坏的主要因素之一.而Bad并没有参与骨性关节炎关节软骨细胞的生命活动,P13K/Akt途径调节另有其他底物存在.     

PI3K/Akt信号传导通路与肿瘤多药耐药研究进展

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B[phosphatidylinositol-3-kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt),PI3K/Akt]信号传导通路作为细胞生存重要通路之一,在促进细胞生长、增殖,促进细胞运动、侵袭,抑制细胞凋亡,促进血管生成,抵抗化疗和放疗等方面起重要作用.近年来,关于PI3K/Akt 信号通路与药物耐药性关系的研究越来越多,并被认为是化疗耐药治疗的新靶点.Akt是PI3K/Akt 通路中的关键性效应分子,多种肿瘤组织中都有Akt 的过度表达和活化.多项实验表明,化疗药物可增加Akt 磷酸化水平,使肿瘤细胞产生化疗耐受,深入研究其作用机制,可能为肿瘤的基因治疗、抗肿瘤药物开发提供新靶点.     

PI3K/PKB信号转导通路活性在重症急性胰腺炎急性肺损伤中的变化

目的 探讨重症急性胰腺炎急性肺损伤中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(P13K/PKB)信号转导通路的活性变化规律.方法 健康成年雄SD大鼠40只,随机分为SO组(n=10)、SAP组(n=30),BD针胰胆管逆行注入牛磺胆酸法建立重症急性胰腺炎急性肺损伤大鼠模型.SAP组3、6、12h检测血淀粉酶、血气分析、肺含水量,肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,光镜下进行胰腺和肺组织病变程度评分.免疫组化法检测肺组织ICAM-1和P-PKB的表达,蛋白印迹(Western blot)法检测PI3K/PKB信号通路的活性变化.SO组在术后12h检测上述相关指标.结果 肺损伤程度逐渐加重,组织含水量及MPO活性逐渐升高(P<0.05),PaO_2明显降低(P<0.05).制模后3h随p-PKB的活性逐步增强,ICAM-1表达逐渐增多,两者呈正相关(r=0.910,P<0.05);PI3K/PKB信号通路逐步被激活,至12h达到峰值,与肺损伤程度呈正相关(r=0.871,P<0.05).结论 P13K/PKB信号传导通路被激活是重症急性胰腺炎急性肺损伤的重要发病机制之一.     

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路与肿瘤治疗

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路是细胞内重要信号转导通路之一,参与了细胞增殖、凋亡及分化等功能的调控作用.近年研究表明,在许多肿瘤中发现PI3K/Akt通路活性异常,而其通路的活性紊乱不仅能导致细胞恶性转化,并与肿瘤细胞的迁移、黏附及肿瘤血管生成等密切相关.因此,对于该通路的深入研究有助于推动肿瘤治疗领域的进一步发展.本文将PI3K/Akt信号通路的组成、功能及其目前与PI3K/Akt信号通路相关的各类肿瘤治疗的机制研究进展作一综述.     

shRNA干扰AKT基因对Jeko-1细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默AKT基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响。方法:设计针对AKT基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建AKT shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白信号及通路相关蛋白p-AKT、Notch1、HES1的变化。结果:AKT shRNA转染Jeko-1细胞后,AKT的mRNA和蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P0.05);转染组细胞增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P0.05),AKT shRNA传染48 h后,凋亡率为(37.72±4.39)%,而NegshRNA组和空白对照组分别为(2.62±1.53)%、(1.57±0.42)%,差异有统计学意义(P0.01);凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、caspase-3、caspase-9表达上升;PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT磷酸化水平下降、Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下调。结论:干扰沉默AKT基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是特异性抑制PI3K/AKT信号通路也能下调Notch1信号通路的活性。     

蛋白激酶B通路、乙酰肝素酶、NADPH氧化酶在心肌缺血再灌注损伤中的作用及相互关系的研究进展

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路影响多种细胞因子,在心血管系统中起重要作用。近年来,蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)及NADPH氧化酶(NADPH oxidase,Nox)在缺血再灌注损伤中的作用引发越来越多的关注。已有研究表明,HPSE、Akt、Nox均参与了心肌细胞缺血再灌注损伤过程,并且相互作用。HPSE调控PI3K/Akt通路,而PI3K/Akt通路导致Nox产生增加,Nox又可以通过改变Akt信号传导激活Akt通路。本文通过综述HPSE、Akt、Nox在心肌缺血再灌注损伤中的作用及相互关系,旨在为临床心肌缺血再灌注的诊治提供理论依据。     

LY294002对Jeko-1细胞的增殖抑制及作用机制研究

本研究旨在探讨磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶（PI3K/Akt）特异性抑制剂LY294002对人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞生长、细胞凋亡的影响及其作用机制.四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、procaspase-3及PI3 K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的变化.结果表明,LY294002能抑制Jeko-1细胞的增殖.Jeko-1细胞经LY294002 0、5、10和20 μmol/L作用24 h后,凋亡率分别为（3.25±1.27）％、（11.34±2.35）％、（22.81±2.74）％和（43.61±3.48）％,差异有统计学意义（P＜0.01）;Westem blot检测发现,凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、procaspase-3表达下降,PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平降低.结论：LY294002可明显抑制Jeko-1细胞增殖,其机制可能通过下调PI3K/Akt信号通路中的p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平,抑制PI3K/Akt信号通路,促进细胞凋亡.     

SH2B1沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的研究沉默SH2B1基因表达对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及3-磷酸肌醇激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路的影响。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,采用SH2B1 siRNA转染SGC-7901细胞作为研究组,采用国际通用的与所有基因均无同源序列的non-target siRNA转染作为阴性对照组(NC组),以未经处理的胃癌SGC-7901细胞作为空白对照组(BC组),48h后收集各组转染成功细胞,采用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SH2B1 mRNA表达情况,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测SH2B1蛋白表达情况;采用细胞计数试剂盒(CKK-8)检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,同时检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Caspase-9、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达情况。结果研究组SGC-7901细胞SH2B1蛋白及mRNA表达量较BC组和NC组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染后,siRNA组SGC-7901细胞增殖明显受到抑制、平板克隆形成率较BC组和NC组明显降低,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与BC和NC组比较,研究组SGC-7901细胞PI3K、p-AKT蛋白、Ki67及PCNA蛋白呈低表达,差异有统计学意义(P<0.05),Caspase-9蛋白呈高表达,AKT蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默SH2B1基因表达可能通过抑制PI3K/ATK信号通路激活,抑制SGC-7901细胞增殖,促进凋亡。     

胰岛素-PI3K/Akt通路在高游离脂肪酸所致的胰岛β细胞分泌功能紊乱中的作用

目的探讨胰岛素-PI3K/Akt通路在高游离脂肪酸(FFA)所致的β细胞功能紊乱中的作用。方法 INS-1细胞分为对照组(NC组)、棕榈酸组(P组)及棕榈酸+NAC组(P+NAC组),分别用0.2mmol/L棕榈酸和(或)0.2mg/mlNAC进行干预,48h后分别检测以下指标:(1)行胰岛素释放试验,检测INS-1细胞胰岛素分泌功能。(2)测定细胞内硝基酪氨酸含量:评价氧化应激水平。(3)Westernblot检测胰岛素信号通路分子Akt磷酸化水平:评价胰岛素信号通路的功能状态。结果 (1)棕榈酸及NAC对INS-1细胞胰岛素分泌功能的影响:P组胰岛素释放指数(ISI)明显降低,P+NAC组ISI较P组增高(NCvs.P:2.12±0.17vs.0.84±0.12;P<0.05;Pvs.P+NAC:0.84±0.12vs.1.16±0.11,P<0.05)。(2)棕榈酸及NAC对INS-1细胞胰岛素合成的影响:棕榈酸降低INS-1细胞胰岛素mRNA及PDX-1mRNA表达(P<0.05),P+NAC组与P组无统计学差异(P>0.05)。(3)棕榈酸及NAC对INS-1细胞氧化应激水平的影响:棕榈酸干预增加细胞内硝基酪氨酸水平,P组与NC组比较,有统计学差异(P<0.05),NAC干预组细胞内硝基酪氨酸水平显著降低,P+NAC组与P组比较,有统计学差异(P<0.05)。(4)棕榈酸及NAC干预对INS-1细胞Akt磷酸化的影响:棕榈酸组较对照组Akt磷酸化表达水平明显降低(P<0.05);而加入0.2mg/mlNAC干预后,Akt磷酸化水平较单纯棕榈酸组升高(P<0.05)。结论 FFA可以引发β细胞胰岛素分泌功能障碍,机制可能与FFA诱导的β细胞氧化应激增加,进而导致胰岛素介导的PI3K/AKT通路受阻有关。     

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶在恶性肿瘤中的作用

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(serum and glucocorticoid-induced protein kinase,SGK)是一种丝氨酸/苏氨酸双特异性蛋白激酶,由3种亚型(SGK1、SGK2及SGK3)组成,3个亚型具有高度同源性,但是功能各不相同。SGK的3种亚型与肿瘤生长、转移、自噬及上皮离子转运的调节有关。SGK与蛋白激酶B(PKB/AKT)有相似的结构、功能和底物特异性,与AKT一样,也是在磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通路的下游被激活,该途径由3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(3-phosphate inositol dependent protein kinase 1,PDK1)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体2(mammalian target of rapamycin complex 2,mTORC2)介导。PI3K可以通过依赖SGK,但不依赖蛋白激酶B(PKB/AKT)的机制在肿瘤的发生中起作用,在许多癌症中SGK表达水平显著增加已得到证实。因此,SGK可能是一个潜在的抗癌治疗靶点。     

Cripto-1蛋白在急性白血病中的表达

Cripto-1是表皮生长因子-Cripto-FRL-Criptic(EGF-CFC)家族成员之一,其基因定位在人染色体3P21.3[1].已经发现Cripto-1在人类的多种肿瘤如结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等中高表达[2-5],它可以激活P13K/Akt/GSK-3βc-Src和ras/raf/MAPK信号通路,介导细胞增殖和抑制细胞凋亡[6-8].目前有关Cripto-1在急性白血病中的表达情况及其与PI3K/Akt信号通路之间的关系尚未见报道,我们观察了Cripto-1和p-Akt在白血病中的表达,并分析其与临床疗效之间的关系,旨在探讨Cripto-1在白血病发生、发展及其与临床耐药的关系.     

盐酸青藤碱对Jeko-1细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨盐酸青藤碱对人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株增殖、凋亡及AKT信号通路的影响。方法:应用四甲基偶氮唑盐方法(MTT)绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,Western blot检测细胞周期蛋白CyclinD1、凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Caspase-3及Akt信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的变化。结果:盐酸青藤碱能明显抑制Jeko-1细胞株的增殖,Jeko-1细胞经终浓度为0、1、2和4 mmol/L盐酸青藤碱作用24 h后,凋亡率分别为(2.21±1.05)%、(11.29±2.42)%、(18.79±2.84)%和(31.05±3.52)%,其差异有统计学意义(P0.01);Western blot检测发现,细胞周期蛋白CyclinD1、凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、Caspase-3蛋白表达上调,Akt信号通路相关蛋白中Akt表达无变化,而p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K蛋白磷酸化水平降低。结论:盐酸青藤碱可明显抑制Jeko-1细胞增殖,其机制有可能通过下调Akt信号通路中的p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平,从而抑制Akt信号通路,促进细胞凋亡。     

脑源性神经营养因子对缺氧胚脑皮质神经元发挥保护作用的细胞内信号传导机制

目的:通过胚脑皮质神经元的体外培养,探讨遭受缺氧刺激时,脑源性神经营养因子(Brain derivedneurotrophic factor,BDNF)对神经元发挥保护作用时所启动的细胞内信号传导通路。方法:对胚鼠皮质神经元进行体外培养,提取不同缺氧时间点单纯缺氧的对照组及BDNF干预组的细胞蛋白,采用免疫印记(western blotting)方法检测两组神经元在细胞外信号调节激酶(extracellular signal-related kinase,ERK1/2)/磷酸化ERK1/2、蛋白激酶Akt/磷酸化Akt、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 Mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)/磷酸化P38MAPK表达上的差别。结果:与单纯缺氧组比较,加入BDNF可引起磷酸化ERK1/2和磷酸化AKT表达的增强,而磷酸化的P38MAPK在两组均没有表达。结论:BDNF引起磷酸化ERK1/2及磷酸化AKT表达的上调可能为BDNF发挥对缺氧神经元保护作用的机理之一。     

艾塞那肽对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的:研究艾塞那肽对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及涉及的信号通路。方法:艾塞那肽以不同浓度、时间作用于人乳腺癌MCF-7细胞,MTT法测细胞数目,流式细胞仪测定细胞周期,Western blot测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,Erk1/2)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)磷酸化程度。结果:艾塞那肽1、10 nmol/L作用24、48 h或100、1 000 nmol/L作用24、48、72、96 h,MCF-7细胞数目减少,但差异无统计学意义,艾塞那肽1、10 nmol/L作用72、96 h,MCF-7细胞数目较对照组明显减少(P<0.05)。艾塞那肽10 nmol/L作用96 h,S+G2/M期细胞数目减少(P<0.05),同时出现Erk1/2磷酸化程度下降、Akt磷酸化程度升高,但差异无统计学意义。结论:艾塞那肽1、10 nmol/L作用MCF-7细胞72、96 h,抑制细胞增殖,该作用未涉及Erk和PI3K/Akt信号通路。