hsa＿circ＿0140180通过调控miR-1287-5p影响食管鳞状细胞癌细胞的迁移及侵袭能力

目的：探讨hsa＿circ＿0140180在食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞中的表达水平及对其细胞恶性生物学行为的影响与分子机制。方法：收集2018年11月至2019年3月间在南充市中心医院胸心外科手术切除的6对ESCC组织和对应癌旁组织并进行全转录组测序,筛选出在ESCC组织中低表达的hsa＿circ＿0140180;建立过表达hsa＿circ＿0140180的TE-1和KYSE30细胞,qPCR法检测hsa＿circ＿0140180在人正常食管上皮细胞、ESCC细胞中的表达,以及过表达hsa＿circ＿0140180后TE-1和KYSE30细胞中miR-1287-5p的表达;CCK-8法和FCM检测过表达hsa＿circ＿0140180对TE-1和KYSE30细胞增殖和周期的影响;划痕实验和Transwell实验检测过表达hsa＿circ＿0140180对TE-1和KYSE30细胞迁移和侵袭能力的影响,双荧光素酶报告实验验证hsa＿circ＿0140180与miR-1287-5p的靶向关系。WB法检测过表达hsa＿circ＿0140180对TE-1和KYSE30细胞中EMT相关蛋白的...     

血清外泌体hsa＿circ＿0004390预测上皮性卵巢癌铂类耐药及预后的临床研究

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清外泌体hsa＿circ＿0004390与化疗耐药和预后的关系。方法 收集2017年1月至12月启东市人民医院(南通大学附属启东医院)肿瘤一科收治的87例原发性EOC患者癌组织及血清样本，另外招募85例健康女性志愿者，获取对照血清样本。将辅助化疗无效或6个月内疾病发生进展的患者纳入耐药组(n=30),其余患者设为敏感组(n=57)。10例接受根治性手术患者的组织样本进行下一代测序(NGS)以筛选circRNA基因谱。实时荧光定量PCR(qPCR)法验证候选circRNAs基因的表达水平。结果 在NGS鉴定出的circRNA基因中，共285个circRNA在耐药组和敏感组EOC组织中存在表达差异(P<0.05)。验证后发现5例耐药组EOC组织中只有hsa＿circ＿0004390(P=0.004)和hsa＿circ＿0006276(P=0.045)相对表达量高于敏感组，因此选择这两种基因进行分析。qPCR检测结果显示，与对照组比较，EOC组患者血清外泌体hsa＿circ＿0004390[2.57(1.47,2.99)vs. 0.94(0.61,...     

环状RNA hsa＿circ＿0001922对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在分子机制

目的 探讨环状RNA hsa＿circ＿0001922对前列腺癌细胞PC-3增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在分子机制。方法 qRT-PCR、RNA FISH分别检测hsa＿circ＿0001922在前列腺癌细胞PC-3中的表达水平及定位。靶向抑制hsa＿circ＿0001922后,使用克隆形成、Transwell实验及划痕实验检测PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的能力;qRT-PCR、Western blot检测抑制hsa＿circ＿0001922后EMT通路相关分子表达水平。结果 环状RNA hsa＿circ＿0001922在前列腺癌细胞PC-3中表达上升(P<0.01)且存在于细胞质和细胞核中。靶向抑制hsa＿circ＿0001922后,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显减弱(P<0.05),E-cadherin mRNA表达水平上升(P<0.05),而Vimentin mRNA水平下降(P<0.05)。Western blot检测结果与上述一致(均P<0.05)。结论 环状RNA hsa＿circ＿0001922可能通过EMT途径促进PC-3细胞的增殖、迁移及侵...     

hsa＿circ＿0006404、miR-151-3p在胰腺癌组织中表达及其临床诊断价值

目的 探讨胰腺癌组织中hsa＿circ＿0006404(circFOXO3)、微小RNA(mir)-151-3p表达水平及其与临床病理特征的关系,以及血清circFOXO3、miR-151-3p诊断胰腺癌的效能。方法 以行手术治疗的100例胰腺癌患者为PC组,对照组为90例体检健康者。采用qRT-PCR技术检测癌组织及血清中circFOXO3、miR-151-3p表达变化,并分析与其临床病理特征的关系;比较血清miR-151-3p、circFOXO3诊断胰腺癌的效能。Pearson法分析circFOXO3与miR-151-3p的相关性。结果 癌组织中circFOXO3表达水平(0.72±0.14)显著低于癌旁组织(1.01±0.17),miR-151-3p表达水平(1.89±0.36)显著高于癌旁组织(1.03±0.15)(P<0.05);低分化、Ⅲ期、淋巴结转移的胰腺癌癌组织circFOXO3表达水平低于中高分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移者,而miR-151-3p表达水平高于中高分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移者(P<0.05)。PC组血清circFOXO3表达水平(0.76±...     

lncRNA DGCR5 在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨长链非编码RNA DiGeorge 综合征临界区基因5（digeorge syndrome critical region gene 5,DGCR5）在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell cancinoma,ESCC）组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的相关性。方法：利用生物信息学方法对TCGA数据库中ESCC数据集的DGCR5 表达进行分析。收集2016 年8 月至2017 年3 月河北医科大学第四医院手术切除60 例ESCC患者的癌及癌旁组织标本,用qPCR检测ESCC组织中DGCR5 的表达水平,分析DGCR5 表达与ESCC患者临床病理特征和预后的相关性。结果：TCGA数据库分析结果显示,DGCR5 在ESCC组织中的表达水平显著高于正常食管组织（P<0.01）。ESCC组织中DGCR5 表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）。DGCR5 表达水平与ESCC患者TNM分期和淋巴结转移呈显著性相关（均P<0.05）。Kaplan-Meier 单因素分析显示,高表达DGCR5 的ESCC 患者2 年生存率显著低于低表达DGCR5 患者（P<0.05）。结论：DGCR5 在ESCC组织中呈高表达状态,共表达与TNM分期、淋巴结转移及预后不良密切相关,可能成为ESCC早期诊断及预后判断的分子标志物。     

环状RNA hsa＿circ＿0012779在鼻咽癌中的表达及其对细胞生物学行为影响的机制研究

背景与目的：环状RNA(circular RNA,circRNA)在多种肿瘤的发展过程中发挥重要的调节作用。然而，circRNA在鼻咽癌中的异常表达和生物学功能仍不清楚。本研究旨在探讨hsa＿circ＿0012779对鼻咽癌细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQPCR）检测正常人鼻咽上皮细胞NP69及鼻咽癌细胞系CNE2、5-8F、HNE1、SUNE1中hsa＿circ＿0012779的表达。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验和transwell侵袭实验检测hsa＿circ＿0012779对鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力的影响。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测hsa＿circ＿0012779对ELAV样蛋白1(ELAV like protein 1,ELAVL1)表达的影响，通过RNA下拉实验验证hsa＿circ＿0012779与ELAVL1的直接结合。结果：hsa＿c...     

环状RNA＿000926通过靶向miR-411-5p调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的：探讨环状RNA＿000926(circ＿000926)对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:收集2019年5月至2020年9月河北医科大学第一医院手术切除的30例宫颈癌患者的癌及癌旁组织标本,以及人宫颈癌细胞HeLa、SiHa和正常宫颈细胞Ect1/E6E7,用qPCR法检测组织和细胞中circ＿000926和miR-411-5p的表达水平。将circ＿000926过表达质粒及空白质粒、circ＿000926小干扰RNA及阴性对照寡核苷酸、miR-411-5p mimic和阴性对照质粒分别转染HeLa和SiHa细胞,分为pc-circ＿000926组、pc-NC组、si-circ＿000926组、si-NC组、miR-411-5p mimic组和miR-NC组。通过CCK-8法检测转染细胞的增殖活力,TUNEL法检测细胞的凋亡水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证circ＿000926与miR-411-5p之间的靶向关系,WB法检测细胞中Ki67、BAX、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达。结果:与癌旁组织和Ect1/E6E7细胞相比,宫颈癌组织和He La...     

环状RNA circ＿104939在肺腺癌组织中的作用研究

目的:探讨环状RNA circ＿104939在肺腺癌组织中的临床意义。方法:采集10例肺腺癌病人的肿瘤组织和癌旁组织进行环状RNA测序分析，以肿瘤组织表达明显增高的环状RNA circ＿104939作为研究对象。利用qRT-PCR检测30对肺腺癌组织与癌旁组织中circ＿104939的表达量，验证测序结果。用qRT-PCR检测和分析circ＿104939在肺腺癌细胞系(HCC-78、A549、KTA-7以及PC-9)和正常人支气管上皮细胞BEAS-2B中的表达差异。siRNA敲减circ＿104939后，用MTT、平板划痕实验、Transwell实验、流式细胞术检测细胞周期实验分别检测肺腺癌细胞(KTA-7和PC-9)增殖、迁移、侵袭以及细胞周期的变化。利用RNA pulldown和荧光素酶报告实验验证circ＿104939的可能靶标miR-191-5p。siRNA敲减circ＿104939后，将肺腺癌细胞(KTA-7和PC-9)分别皮下注射到裸鼠体内构建荷瘤小鼠模型，检测移植瘤体积以及质量。结果:相比癌旁组织，肺腺癌组织中的circ＿104939表达显著增高(P<0.01);c...     

piRNA hsa＿piR＿016187调控椎管内神经鞘瘤细胞增殖的实验研究

目的:探究PIWI相互作用RNA(PIWI-interacting RNA,piRNA)hsa＿piR＿016187对椎管内神经鞘瘤细胞增殖的调控作用及作用机制。方法:利用piRNA测序分析神经鞘瘤组织和对应的肿瘤旁正常组织中piRNA的表达情况,利用实时荧光定量PCR检测piRNA的表达,利用CCK-8检测和克隆增殖实验检测piRNA hsa＿piR＿016187对神经鞘瘤增殖的影响,利用双荧光素酶报告基因和Western blot检测piRNA hsa＿piR＿016187对胰岛素样生长因子2表达的调控作用。结果:piRNA hsa＿piR＿016187在神经鞘瘤组织中表达降低,piRNA hsa＿piR＿016187可以抑制神经鞘瘤细胞的增殖,双荧光素酶报告基因结果表明piRNA hsa＿piR＿016187可以和IGF2 3’-UTR区结合,Western blot检测显示过表达piRNA hsa＿piR＿016187抑制IGF2的表达,抑制piRNA hsa＿piR＿016187的表达促进IGF2的表达。结论:piRNA hsa＿piR＿016187通过调控IGF2的表达抑制...     

miR-627-3p在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其对癌细胞恶性生物学 行为的影响

目的：探讨 miR-627-3p 在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组织中的表达及其对 ESCC细胞生物学行为的影响。方法：收集2015年1月至2015年10月河北医科大学第四医院胸外科手术切除的ESCC组织86例及对应的癌旁组织标本20例。通过qPCR法检测miR-627-3p在86例ESCC组织及癌旁组织中的表达,分析其表达与ESCC患者临床病理学指标及预后的关系;利用Kaplan-Meier Plotter在线数据库进一步分析数据库中hsa-miR-627的表达与ESCC患者预后的关系;通过qPCR法检测miR-627-3p在4株ESCC细胞系中的表达,选取表达水平最低的食管癌细胞转染miR-627-3p mimic,选取表达水平最高的ESCC细胞转染miR-627-3p inhibitor,采用CCK-8法检测细胞的增殖,采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;采用 KEGG分析探讨 miR-627-3p可能介导的信号转导通路,并采用 qPCR法验证 miR-627-3p对信号通路中关键基因表达的影响。结果：miR-627-3p在 ESCC组织中的表达明显低于在癌旁组织中的表达,miR-627-3p的表达与 ESCC患者淋巴结转移和临床分期相关（均 P<0.05）;miR-627-3p高表达的 ESCC 患者的 5年生存率明显高于 miR-627-3p低表达的食管癌患者（P<0.05）。ESCC细胞系 KYSE170中 miR-627-3p表达最低,KYSE30中 miR-627-3p表达最高;在 KYSE170细胞中转染 miR-627-3p mimic后,细胞的增殖能力无明显变化（P>0.05）,但细胞的迁移（P<0.05）和侵袭能力（P<0.05）显著降低;在 KYSE30 细胞中转染 miR-627-3p inhibitor 后,细胞的增殖能力无明显变化（P>0.05）,但细胞的迁移（P<0.05）和侵袭能力（P<0.05）显著增高。KEGG 分析结果显示,miR-627-3p介导了多条与肿瘤相关的信号转导通路。结论：miR-627-3p在ESCC组织中的表达明显低于在癌旁组织中的表达,其低表达与ESCC患者的不良预后相关,miR-627-3p抑制ESCC细胞的迁移和侵袭,可能是通过干扰多条与肿瘤相关的信号通路发挥生物学功能。     

hsa_circ_0064369在食管鳞癌组织和细胞中的表达及临床意义

目的:分析hsa_circ_0064369在食管鳞癌中的表达及其临床意义。方法:采用高通量芯片技术检测6例食管鳞癌患者癌组织和对应癌旁组织中差异表达circRNA,依据差异倍数≥5、P＜0.01、样本间一致性高、原始信号值相对高等这几个特征挑选出下调8.4倍的hsa_circ_0064369为研究对象。运用实时荧光定量PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测并比较43对食管鳞癌组织和对应癌旁组织及正常食管上皮细胞（NE6）和两种食管鳞癌细胞（NE3、KYSE9706）中hsa_circ_0064369的表达水平。分析hsa_circ_0064369表达水平与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法分析hsa_circ_0064369表达水平与生存期的关系;构建受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线评估hsa_circ_0064369对食管鳞癌诊断的灵敏度和特异性。结果:食管鳞癌组织中hsa_circ_0064369相对表达量（0.35±0.41）低于癌旁正常组织（1.88±1.22）（P＜0.01）;两种食管癌细胞中hsa_circ_0064369的表达水平（0.46±0.18,0.53±0.09）均低于正常食管上皮细胞（1.00±0.37）（P＜0.05）。hsa_circ_0064369表达下调与TNM分期显著相关（P=0.022）,与性别、年龄、分化程度、肿瘤最大径、肿瘤位置、淋巴结转移无统计学相关（P＞0.05）。hsa_circ_0064369低表达食管鳞癌患者无进展生存期较高表达患者短;ROC曲线下面积为0.928,当截断值为0.699 5时其诊断灵敏度和特异性为88.4%和90.7%。结论:hsa_circ_0064369在食管鳞癌中表达量下降,其低表达提示预后不良,是潜在的食管癌诊断和治疗的新型分子标志物。     

LINC00997在胃贲门腺癌中表达的临床意义及其对SGC7901细胞迁移、侵袭和EMT的影响

目的：检测LINC00997在胃贲门腺癌（GCA）组织及胃癌细胞中的表达,分析其表达与患者临床病理特征和预后的关系,探讨敲减LINC00997对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响。方法：基于TCGA和GTEx数据库分析LINC00997在胃癌组织中的表达及其与患者预后的关系。应用qPCR法检测68例GCA组织和相应癌旁组织以及胃癌细胞中LINC00997的表达水平,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。通过划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测敲减LINC00997对SGC7901细胞迁移和侵袭的影响,qPCR法和WB法检测敲减LINC00997对EMT相关标志物E-cadherin、N-cadherin及vimentin表达的影响。结果：LINC00997在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）,且LINC00997高表达组患者的OS及DFS显著低于LINC00997低表达组患者（P<0.01或P<0.05）。在68例在GCA组织中,LINC00997的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）,其表达与患者淋...     

食管鳞癌中LncRNA DLEU1的表达及对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达,及其对肿瘤细胞增殖和迁移的影响.方法 收集58例手术切除的ESCC及其相应癌旁组织,RT-qPCR检测ESCC组织和细胞中DLEU1的表达水平.Log rank Test法分析ESCC组织中DLEU1的表达与患者临...     

整合素连接激酶在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其对KYSE-150细胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤生长的影响

目的:分析整合素连接激酶(ILK)基因在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达水平及其与患者临床病理特征之间的关系,探讨其对KYSE-150细胞增殖、凋亡和裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:选取2012年1月至2014年12月手术切除并经病理证实的75例ESCC患者的癌组织和其配对的癌旁组织标本,用组织芯片技术及免疫组织化学染色法检测ESCC组织和癌旁组织中ILK的表达情况;qPCR法检测ESCC细胞ECA109、TE-1、EC9706、KYSE-150中ILK mRNA的表达,选用ILK表达最高的KYSE-150细胞进行后续细胞功能学研究。使用ILK干扰慢病毒感染KYSE-150细胞下调ILK的表达,qPCR和WB法检测ILK基因敲降效率;MTT实验、克隆形成实验和FACS检测干扰ILK表达对KYSE-150细胞增殖能力和凋亡水平的影响;裸鼠皮下成瘤实验检测干扰ILK对KYSE-150细胞移植瘤生长的影响。结果:ESCC组织中ILK蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),且ILK高表达与淋巴结转移有关联(P<0.05)。ILK干扰慢病毒感染的KYSE-150细胞中ILK...     

过表达lncRNA LINC00886 抑制食管鳞状细胞癌Eca109 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的: 检测lncRNA LINC00886 在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织及细胞系中的表达及其对Eca109 细胞体外增殖、迁移及侵袭的影响。方法: 收集2014 年6 月至2016 年12 月河北医科大学第四医院生物标本库69 例ESCC手术患者的癌及对应的癌旁组织标本,以及ESCC细胞系Eca109、TE13、TE1、Kyse150、Yes-2 和Kyse170,用qPCR 法检测LINC00886 在ESCC组织及细胞系中的表达情况。分别用pIRES2-LINC00886、pIRES2-NC转染Eca109 细胞,用qPCR法检测pIRES2-LINC00886 转染Eca109细胞后LINC00886 的过表达效率;用MTS、克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell 侵袭实验分别检测过表达LINC00886 对Eca109 细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果: 在ESCC组织中LINC00886 表达水平明显低于癌旁组织（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）。LINC00886 在ESCC 细胞中的表达水平也低于对照组（均P<0.01）。转染pIRES2-LINC00886 后,Eca109 细胞中LINC00886 的表达水平显著高于对照组（均P<0.05）。与对照组相比,过表达LINC00886 明显抑制Eca109 细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。结论: lncRNA LINC00886 低表达可能与ESCC的发生发展相关,过表达LINC00886可抑制ESCC细胞的增殖、迁移与侵袭能力。     

转录因子c-Jun在食道癌中的表达及其与临床病理的关系

目的:研究转录因子c-Jun(cellular Jun)在食道鳞癌和正常癌旁组织的表达及其与临床病理之间的关系。方法:采用Western blot和免疫组织化学方法检测食道癌组织和癌旁正常组织的冻存标本与组织芯片中的c-Jun表达情况,结合临床病理资料,分析其在食道癌和正常组织表达的差异,并分析其与临床病理之间的关系。结果:Western blot和免疫组织化学检测方法结果一致,c-Jun在食道癌中的表达明显低于正常食道组织(P<0.01),在食道癌中的表达与肿瘤的区域淋巴结转移(P<0.05)密切相关,而与其他因素没有相关性。结论:本研究发现转录因子c-Jun在食道癌中低表达,并且与食道癌淋巴结转移密切相关,为进一步研究其在肿瘤发生发展中的作用提供了基础。     

miR-126在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测miR-126在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系,探讨其过表达对Tca8113细胞恶性生物学行为的影响.方法:选取2016年6月至2018年6月在郑州大学第一附属医院手术治疗的62例OSCC患者的癌及癌旁组织...     

IL-22/IL-22RA1通路在口腔鳞状细胞癌恶性进展中的作用及其机制

目的：探讨IL-22/IL-22受体A1（IL-22RA1）通路在口腔鳞状细胞癌（OSCC）恶性进展中的作用及其机制。方法：利用GEO数据库和免疫组化法分析IL-22RA1在OSCC组织及配对癌旁组织中的表达水平，采用组织芯片免疫组化法检测并分析IL-22RA1表达水平与OSCC患者临床病理特征的关系，通过EBI ArrayExpress数据库分析IL-22RA1表达水平与患者预后的关系。采用免疫荧光法检测IL-22和IL-22RA1在OSCC组织中表达水平并分析两者间的相关性。用RNA干扰技术敲减OSCC细胞WSU-HN4和CAL27的IL-22RA1表达，用qPCR法验证敲减效率。采用克隆形成实验、Transwell小室法分别检测IL-22对阴性对照（siNC）组和IL-22RA1敲减（siIL-22RA1）组OSCC 细胞克隆形成及迁移能力的影响，WB法检测IL-22 对OSCC细胞IL-22RA1表达水平及STAT1、STAT3和ERK1/2磷酸化水平的影响。结果：OSCC组织中IL-22RA1 mRNA的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）。IL-22RA1表达水平与OSCC患者的肿瘤大小（P<0.05）、淋巴结转移（P<0.01）及预后不良（P<0.05）有关联。OSCC组织中的IL-22和IL-22RA1表达水平无明显关联，IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达无影响（均P>0.05）。IL-22可显著增强OSCC细胞的克隆形成和迁移能力（均P<0.01），并可激活OSCC细胞的STAT1、STAT3及ERK1/2 信号分子；敲减OSCC 细胞的IL-22RA1后，IL-22则无法发挥上述作用。结论：IL-22/IL-22RA1可通过调控细胞增殖和迁移促进OSCC的生长和转移，其下游机制可能是激活ERK1/2-STAT1/3信号通路。