缺氧诱导因子-1α在紫绀型先心病患儿心肌中的表达

目的 探讨紫绀型先心病患儿心肌细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白和mRNA的表达和意义.方法 入选进行手术矫治的先心病患儿28例,其中紫绀型先心病患儿16例,非紫绀型先心病患儿12例.取手术中切除的右室流出道心肌组织作为标本,采用Western blot和RT-PCR分别检测HIF-1α蛋白及mRNA在心肌组织中的表达情况,并用免疫组化染色检测HIF-1α在心肌细胞中的分布.结果 紫绀组患儿术前血氧饱和度明显低于非紫绀组(P＜0.01);与非紫绀组相比,紫绀组患儿HIF-1α蛋白表达明显增高(P＜0.001),而mRNA表达无统计学意义(P＞0.05).免疫组化结果表明,HIF-1α主要分布在心肌细胞细胞质中,在细胞核内也有分布.结论 在紫绀型先心病患儿心肌细胞中,HIF-1α表达增加,HIF-1α可能参与慢性缺氧状态下心肌代谢的适应性调节.     

Sirt1在缺氧条件下对心肌细胞线粒体融合与分裂中的作用

目的 探讨缺氧条件下线粒体动态学变化及Sirt1在其中的作用.方法 ①收集2014年于新桥医院心血管外科行手术治疗的先心病患儿29例,其中非紫绀型先心病14例,紫绀型先心病15例,取术中所切除的右室流出道心肌组织为心肌标本,Western blot检测促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达情况.②将H9c2心肌细胞置入缺氧培养箱(94％N2,5％ CO2,1％ O2)中进行培养,检测缺氧0、2、4、8、12 h后促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1的表达水平.③将线粒体靶向质粒分别同空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒共转染H9c2细胞,常氧或缺氧培养箱中培养12 h后,激光共聚焦显微镜下观察线粒体融合、分裂情况;④运用腺病毒Ad-Sirt1和慢病毒Lv-Sh-Sirt1分别在H9c2细胞中过表达或干扰Sirt1后,将细胞置于缺氧培养箱中培养12 h,检测Drp1与Fis1表达水平;⑤分别转染空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒至H9c2细胞后,缺氧培养12 h,LDH试剂盒检测细胞毒性.结果 ①同非紫绀组相比,紫绀组心肌中Drp1与Fis1表达显著增高,Drp1相对灰度值:[(0.47±0.11)vs(0.76±0.12)、Fis1相对灰度值(0.53 ±0.02)vs (0.83 ±0.03),P＜0.05];②细胞水平研究结果显示Drp1与Fis1的蛋白表达随缺氧的时间的延长呈递增趋势;③激光共聚焦结果表明,Sirt1过表达后能够一定程度地缓解缺氧诱导的线粒体分裂(P＜0.05),而当Sirt1受到干扰后,缺氧所诱导的线粒体分裂水平明显提高(P＜0.05);④在缺氧条件下,过表达Sirt1能够抑制Drp1与Fis1蛋白表达水平(P＜0.05),而Sirt1被抑制后,Drp1与Fis1蛋白表达水平增加(对照组,过表达组,低表达组Drp1相对灰度值依次为[(0.47 ±0.02)vs(0.36±0.02) vs (0.78 ±0.04);Fis1相对灰度值依次为(0.64±0.02) vs (0.42±0.02) vs (0.80±0.04),P＜0.05];⑤Sirt1过表达能够降低缺氧刺激后H9c2心肌细胞的死亡率.结论 Sirt1可能通过调控促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达水平促进心肌细胞在缺氧条件下的适应.     

EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF HIF-1α AND VEGF IN OVARIAN CANCER

目的:探讨卵巢癌缺氧诱导因子-1α(HIF-1 α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学S-P法检测不同卵巢组织HIF-1 α和VEGF的表达情况.结果:交界性卵巢肿瘤和卵巢癌HIF-1 α、VEGF的表达明显高于正常卵巢和良性卵巢肿瘤,差异有统计学意义(P ＜0.01,P＜0.05).卵巢癌HIF-1 α表达与肿瘤病理分级有关(P＜0.01),卵巢癌HIF-1 α表达与VEGF表达呈明显正相关(rs=0.439,P ＜0.01).HIF-1 α和VEGF表达共同阳性卵巢癌患者的3年存活率明显低于二者均阴性表达患者(P＜0.01).结论:HIF-1 α可通过调节VEGF促进卵巢癌新生血管形成,促使卵巢癌的生长及转移,导致患者预后不良.     

Necrostain-1对缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元caspase非依赖性死亡的保护作用

目的 研究低氧诱导因子(HIF)-1α是否介导缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元caspase非依赖性细胞死亡,Necrostain-1( Nec-1)能否抑制其表达起到保护作用.方法 (1)原代皮质神经元培养14d,予caspase抑制剂z-VAD.fmk(z-VAD)预保护30 min,同时分别予Nec-1 0.1,1,5,10,25,50 μmol/L,缺糖缺氧(OGD)2h、再灌注12h,通过LDH测细胞死亡情况;(2)予z-VAD作用后30 min后,缺糖缺氧(OGD)2h再灌注0,2,6,12,24,48 h,Westernblot检测HIF-1α蛋白表达情况,RT-PCR测HIF-1αRNA表达;(3)予z-VAD和Nec-125 μmol/L作用30min,OGD2h、再灌注12h后检测HIF-1α蛋白及RNA表达情况.结果 (1)予Nec-1 5μmol/L(6.97±0.06)后与未加Nec-1组(14.23 ±0.08)比较LDH水平明显下降(P＜0.05),Nec-1 25 μmol/L(2.21 ±0.05)时LDH降至正常水平与正常组(1.03±0.03)比较,P＞0.05);(2)缺糖缺氧2h再灌注后HIF-1α蛋白表达增加,再灌注2h后(0.57±0.09)与正常组(0.24±0.01)相比差异有统计学意义(P＜0.05),再灌注12h(0.91 ±0.08)达高峰,HIF-1 αRNA表达无变化(P＞0.05);(3)与未予Nec-1组(0.83±0.03)相比,Nec-1组(0.32±0.04) HIF-1 α蛋白表达明显降低(P＜0.05),HIF-1αRNA表达无变化(P＞0.05).结论 HIF-1α介导了缺氧缺氧诱导的原代皮质神经元caspase非依赖性死亡,Nec-1能够抑制HIF-1α的表达起到保护作用.     

不同HIF-1α基因诱导人骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的效能差异

目的 研究腺病毒介导的野生型及突变型低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1 α)基因诱导人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)向心肌细胞(cardiomyocyte)分化过程中的效能差异.方法 重组腺病毒Ad-LacZ、Ad-HIF-1αnative、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402及Ad-HIF-1 α564/803分别以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导的hMSCs,于诱导培养后第6周提取细胞浆蛋白,应用酶联免疫分析检测法或Western blot检测法分别测定其中的心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)、HIF-1α、VEGF及Nkx2.5蛋白表达水平.结果 经5-aza诱导hMSCs第6周cTnI值为:对照组(0.700±0.013)、Ad-LacZ组(0.702±0.006)、Ad-HIF-1αnative组(0.729±0.004)、Ad-HIF-1 α564组(0.741±0.008)、Ad-HIF-1 α564/402组(0.764±0.009)及Ad-HIF-1α564/803组(0.804±0.021),各实验组cTnI表达差异有统计学意义(P＜0.05),其中尤以Ad-HIF-1 α564/803组cTnI表达水平最高,与前述其它各组相比差异有统计学意义(P值均＜ 0.05).Western blot结果显示:与Ad-LacZ组相比,Ad-HIF-1αnative组、Ad-HIF-1 α564组、Ad-HIF-1 α564/402组、Ad-HIF-1 α564/803组HIF-1α、VEGF及Nkx2.5蛋白均升高(P＜0.05),其中以Ad-HIF-1 α564/402组HIF-1α蛋白表达水平最高(P值均＜0.05),以Ad-HIF-1 α564/803组VEGF及Nkx2.5蛋白表达水平最高(P＜0.05).结论 野生型及不同突变型HIF-1α基因均可促进hMSCs向心肌细胞分化,尤以Pro564Asn803双突变型HIF-1α基因(HIF-1α564/803)作用最强.     

缺氧诱导因子-1α与上皮型钙黏蛋白在膀胱癌中的表达及相关性研究

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、上皮型钙黏蛋白(CDH1)与膀胱移行细胞癌的发生、病理分级和临床分期之间的关系及两者在膀胱移行细胞癌表达的相关性.方法应用免疫组织化学(SP)的方法测定50例膀胱移行细胞癌和12例正常膀胱组织中的HIF-1α与CDH1的表达.结果HIF-1 α与膀胱移行细胞癌的发生、病理分化程度和临床分期之间之间明显相关(分别P＜0.05、P＜0.05、P＜0.05),CDH1与膀胱移行细胞癌的发生、病理分化程度和浸润性之间明显相关(分别P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01),HIF-1 α与CDH1在膀胱移行细胞癌中的表达呈负相关(r=-0.600,P＜0.01).结论HIF-1α与CDH1联合检测可能有助于判断预后,HIF-1α与膀胱移行细胞癌中CDH1的表达下降有关.     

NEDD4调控AMPK活性参与心肌细胞慢性缺氧适应的研究

目的 探讨NEDD4在心肌细胞慢性缺氧适应过程中的作用及其可能的机制.方法 ①收集手术矫正的先心病患儿32例,其中紫绀型先心病18例,非紫绀型先心病14例.取术中切除的右室流出道心肌组织作为标本,用免疫组化染色检测NEDD4在心肌细胞中表达的分布,Western blot检测NEDD4在心肌组织中的表达情况;②将H9c2心肌细胞分为常氧组、慢性缺氧组和阳性对照组,其中慢性缺氧组又分为对照组、空白转染组和干扰转染组,设计合成以心肌细胞NEDD4基因为靶标的siRNA,通过阳离子脂质体将合成的siRNA转染至H9c2心肌细胞中,常氧培养(74％ N2,5％ CO2,21％O2)48 h后开始对慢性缺氧组心肌细胞进行缺氧刺激(94％ N2,5％ CO2,1％ O2),缺氧刺激72 h后Western blot检测NEDD4、p-AMPK表达水平变化,流式细胞术检测缺氧刺激所致心肌细胞损伤情况.结果 ①紫绀组患儿术前血氧饱和度明显低于非紫绀组(P＜0.05);免疫组化染色结果显示NEDD4主要分布于心肌细胞质中;与非紫绀组相比,紫绀组患儿心肌组织中NEDD4表达水平显著下降[NEDD4/β3-actin条带灰度比值:非紫绀组(0.72±0.07);紫绀组(0.42±0.06),P＜0.05];②与常氧组相比,对照组心肌细胞死亡比例显著增加(P＜0.05);但干扰NEDD4表达后,缺氧所致心肌细胞损伤比例降低(P＜0.05).Western blot检测结果显示,与空白转染组相比,干扰转染组AMPK磷酸化水平显著增加[p-AMPK/AMPK条带灰度比值:空白转染组(0.21±0.01),干扰转染组(0.88±0.04),P＜0.05].结论 NEDD4可能通过调控AMPK活性参与慢性缺氧情况下心肌细胞代谢的适应调节.     

巨噬细胞移动抑制因子在肾癌中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响.方法 以内蒙古自治区人民医院和包头市肿瘤医院2013年3月至2015年3月病理室确诊的49例肾癌患者为研究对象,采用蛋白质印迹法(West-ern blot)及反转录(RT)-PCR法检测肾癌组织及癌旁正常组织、肾癌细胞株及正常肾小管上皮细胞HK 2中MIF蛋白及mRNA表达;利用脂质体将siRNA MIF及siRNA NC转染到肾癌细胞中,Western blot及RT-PCR检测转染效果,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达.结果 肾癌组织中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(0.89±0.09 vs.0.18±0.02,1.19±0.04 vs.0.19±0.01,P＜0.05),肾癌细胞株ACHN、769-p、786-O、Caki-1中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于肾小管上皮细胞HK-2(P＜0.05).与siRNA NC组比较,siRNA MIF组中MIF蛋白及mRNA表达水平明显下调(P＜0.05),细胞活力及侵袭能力降低(P＜0.05),HIF-1α及MMP9表达水平下调(P＜0.05).结论 MIF在肾癌中高表达,下调MIF表达能明显抑制肾癌细胞的侵袭能力,可能与抑制HIF-1α/MMP9信号通路有关.     

缺氧诱导因子-1α及嗜酸粒细胞趋化因子在鼻息肉组织中的表达及意义

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和嗜酸粒细胞趋化因子(eotaxin)在鼻息肉组织中的表达及其与发病的关系.方法 选取45例经鼻内镜手术治疗的鼻息肉患者的鼻息肉组织为实验组,12例行下鼻甲部分切除术治疗的慢性肥厚性鼻炎患者的下鼻甲黏膜为对照组.分别采用免疫组化法和苏木素-伊红染色法检测两组标本中HIF-1α、eotaxin阳性染色细胞数和嗜酸粒细胞数,采用反转录-聚合酶链反应结合半定量分析方法检测HIF-1α、eotaxin mRNA表达水平.结果 实验组HIF-1α、eotaxin阳性染色细胞数及嗜酸粒细胞数较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组HIF-1α阳性染色细胞数及eotaxin阳性染色细胞数与嗜酸粒细胞数均呈正相关(r值分别为0.545和0.608,P＜0.05);实验组HIF-1α阳性染色细胞数与eotaxin阳性染色细胞数呈正相关(r=0.643,P＜0.05).实验组HIF-1α、eotaxin mRNA表达水平较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 HIF-1α、eotaxin均可引起鼻息肉中嗜酸粒细胞的浸润,且二者相互促进,对鼻息肉的发病起非常重要的作用.     

早年慢性应激对青春期大鼠攻击行为及下丘脑腹内侧核和前额皮质脑源性神经营养因子表达的影响

目的 探讨早年慢性应激对青春期大鼠攻击行为以及大脑下丘脑腹内侧核和前额皮质脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的影响.方法 将20只SD大鼠分为实验组和对照组.实验组大鼠出生后21 d开始进行社会孤养、日夜颠倒、社会刺激性实验和居住-入侵实验等多种早年应激3周.免疫组化检测下丘脑腹内侧核和前额皮质BDNF的表达.结果 实验组在居住-入侵实验和中性环境实验中攻击/威胁比[分别为(12.45±9.27)、(10.84±4.93)]和攻击持续时间[分别为(333.10±76.34)、(322.20±57.67)s]均显著高于对照组(P＜0.01),而攻击潜伏期[分别为(15.20±11.07)、(18.30±11.32)s]显著低于对照组(P＜0.01),并且表现出暴力攻击行为.免疫组化检测结果显示,实验组下丘脑腹内侧核BDNF表达(0.20±0.09)高于对照组(P＜0.05),前额皮质BDNF(0.19±0.08)表达水平低于对照组(P＜0.05).结论 早年慢性应激引起青春期大鼠暴力攻击行为以及下丘脑腹内侧核和前额皮质BDNF表达改变,提示青春期暴力攻击行为可能与早年慢性应激所致BDNF表达改变有关.     

氯化锂通过抑制糖原合酶激酶3β维持缺氧心肌的缝隙连接

目的 在心肌慢性缺氧环境下,研究氯化锂对心肌间缝隙连接的影响.方法 将25只C57BL/6J小鼠分为常氧组、缺氧组、常氧对照组、缺氧+生理盐水组和缺氧+氯化锂组.缺氧组采用10％氧浓度缺氧4周.缺氧+生理盐水组和缺氧+氯化锂组分别腹腔注射生理盐水和氯化锂.用电生理和心导管检查,评价心律失常情况、心率和射血分数.用免疫荧光观察连接蛋白43(Cx43)的分布情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Cx43、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)和糖原合酶激酶3β(GSK-3β)的水平.结果 与常氧组比,缺氧组小鼠心率较快[(448±18)次/min vs.(401±13)次/min,P＜0.05],左心室射血分数降低[(56±5)％ vs.(73±4)％,P＜0.05],心律失常评分增加[(3.4±0.5)分vs.(0.6±0.5)分,P＜0.05],Cx43表达减少.与缺氧+生理盐水组比,缺氧+氯化锂组的小鼠心率降低[(412±11)次/min vs.(454±18)次/min,P＜0.05],射血分数增加[(69±3)％vs.(55±4)％,P＜0.05],心律失常评分减少[(1.8±0.4)％vs.(3.0±0.7)％,P＜0.05],Cx43增加,p-GSK-3β与总GSK-3β的比值增加.结论 在心肌慢性缺氧中,氯化锂能通过抑制GSK-3β信号,维持缝隙连接,降低心律失常发生率.     

低氧对胆管癌细胞增殖的影响及与HIF-1α表达的关系

目的 建立缺氧模型,观察缺氧对QBC939胆管癌细胞生长和HIF-1 α表达的影响.方法 利用氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)模拟缺氧诱导,MTT观察缺氧诱导对胆管癌细胞增殖的影响,用流式细胞术观察缺氧对细胞周期的影响,利用Western Blot观察缺氧诱导对胆管癌细胞HIF-1 α表达的影响.结果 CoCl2(0μmol/L,50μmol/L,100μ mol/L,200μ mol/L,400μmol/L)浓度依赖性诱导胆管癌细胞增殖;CoCl2(200μmol/L)处理48 h组QBC939胆管癌细胞G1期显著减少,处理72 h组G1期显著减少的同时S期和G2显著增加;CoCl2(50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L)处理72 h,HIF-1 α表达显著增加,并随CoCl2浓度增加显著增强.结论 缺氧可诱导胆管癌细胞增殖与增加HIF-1α表达相关.     

基因干扰Sirtuin3后对缺氧预处理的影响

【目的】 探讨基因干扰Sirtuin3（SIRT3）后对缺氧预处理的影响。【方法】 使用空白载体pGCSIL-GFP进行预实验,筛选适合的感染复数（MOI）。正式实验使用pGCSIL-PUR-SIRT3转染PC12细胞。成功构建空白载体（empty vector）及SIRT3-/-稳定细胞株后,将两种细胞分别分为对照组（control）;缺氧预处理+缺氧组(Hyp+OGD);单纯缺氧组(OGD);MTT测定细胞活性。ATP荧光检测试剂盒测定胞内的ATP水平。Western Blot法测定各组细胞内SIRT3、过氧化物酶体增生激活受体-γ的共刺激因子-1α(PGC-1α),锰超氧化物歧化酶（MnSOD）的蛋白表达水平。【结果】OGD后SIRT3-/-组(0.430±0.009)与Vector组(0.562±0.140)相比,细胞活性下降更明显（P<0.05）,经预处理后SIRT3-/-组细胞活性增加,且与Vector组间差异无统计学意义（P=0.311>0.05）。OGD后SIRT3-/-组（0.334±0.006）与Vector组（0.453±0.015）相比,ATP下降更明显（P<0.05）。经预处理后SIRT3-/-组ATP水平增加,且与Vector组间差异无统计学意义（P=0.866 >0.05）。SIRT3-/- 3组细胞间PGC-1α及MnSOD 蛋白的表达与Vector组对应的3组比较明显下降（P＜0.05）,Hyp+OGD及OGD相对于各自control组均上调（P＜0.05）,且预处理组的上调更明显（与OGD组比较,P＜0.05） 【结论】 干扰SIRT3基因后PGC-1α及MnSOD的表达下降,SIRT3为预处理或缺氧处理上调PGC-1α及MnSOD的其中一条途径,干扰SIRT3后其他的途径仍然在预处理中发挥重要的细胞保护作用。     

阿托伐他汀对PCI冠心病CHF患者NT-proBNP、hs-CRP和左室重构的影响

目的 观察阿托伐他汀对经皮冠状动脉介入术(PCI)后慢性心力衰竭(CHF)患者氨基末端脑钠肽前体( NT-proBNP)、超敏C反应蛋白(bs-CRP)和左室重构的影响及相关性.方法 122例PCI术后CHF患者(NYHA分级Ⅱ/Ⅲ)随机分为阿托伐他汀20 mg组(阿托代他汀20 mg/d治疗,n=62)和阿托伐他汀他汀10mg组(阿托伐他汀10 mg/d治疗,n=60),比较两组治疗前一般资料、两组治疗前和治疗12个月后血浆NT-proBNP和hs-CRP水平以及左室重构相关指标的变化,并分析其相关性.结果 两组治疗后血浆NT-proBNP和hs-CRP水平均较治疗前显著降低(P＜0.05),治疗后阿托伐他汀20 mg组血浆NT-proBNP和hs-CRP水平显著低于阿托伐他汀10mg组(P＜0.05).阿托伐他汀治疗后,两组左室舒张末期内径( LVEDD)较治疗前均显著降低(P＜0.05),两组左室射血分数(LVEF)较治疗前均显著升高(P＜0.05),阿托伐他汀20 mg组左室舒张末期内径(LVEDD)显著小于阿托伐他汀10 mg组(P＜0.05);阿托伐他汀20 mg组LVEF显著大于阿托伐他汀10 mg组(P＜0.05).两组治疗前后血浆NT-proBNP和hs-CRP的下降水平均与LVEDD减少呈正相关,与LVEF增加呈负相关;NT-proBNP、hs-CRP下降水平两者呈正相关(均P＜0.05).结论 阿托伐他汀对PCI冠心病CHF患者心功能改善有益,且与药物剂量有关.     

精索静脉曲张大鼠附睾低氧诱导因子的表达与附睾功能变化

目的 探讨精索静脉曲张(VC)对大鼠附睾功能的影响及其机制.方法 45只大鼠,随机分为3组.建立VC模型49 d后,取其左侧附睾,检测肉毒碱、唾液酸含量和低氧诱导因子(HIF)1α的表达.结果 蛋白质印迹和免疫组织化学法检测的实验组附睾HIF-1α的表达(0.96±0.65,91.67%)显著高于对照组(0.11±0.08,16.67%)和假手术组(0.07±0.05,21.43%)(均P＜0.05);实验组附睾唾液酸(6.3±2.3)、肉毒碱(1.1±0.3)含量显著低于对照组(24.7±4.4,2.8±0.6)和假手术组(26.1±4.4,3.2±0.6)(均P＜O.05);实验组附睾唾液酸、肉毒碱含量与其HIF-1α的表达呈显著负相关(r=-0.649,P=0.017;r=-0.666,P=0.013).结论 VC可引起附睾功能降低和附睾组织的低氧,且附睾功能降低的程度与附睾低氧程度有关.     

心房钠尿肽对力竭小鼠心脏抗氧化作用及其分泌机制的研究

目的 观察游泳力竭小鼠心肌组织中乳酸(lactic acid,LD)含量及血浆心房钠尿肽(atria1 natriuretic peptide,ANP)的分泌,以探讨力竭心脏的ANP分泌作用及抗氧化作用机制.方法 ①对小鼠进行分组及负重游泳,力竭即测试心肌LD和血浆ANP含量;②采用家兔离体心房灌流模型,利用不同浓度的乳酸缓冲液(4、8和12 mmo1/L)及其氮气模拟力竭心脏,探讨力竭心脏分泌ANP的机制；③利用氮气复制缺氧家兔离体心房灌流模型模拟力竭心脏,观察力竭心肌MDA含量的变化及其机制探讨.结果 ①游泳力竭小鼠心肌组织LD(P＜0.01)和血浆ANP含量(P＜0.01)与对照组相比均明显增高；②灌流浓度分别为4mmol/L(P ＜0.05)、8 mmo1/L (P＜0 05)和12rmmol/L(P ＜0.001)的乳酸缓冲液与对照组相比并不增加离体心房灌流模型中ANP的分泌,反而抑制ANP的分泌；但缺氧能明显增加心房ANP的释放(与对照组相比,P＜0.001)；③缺氧的离体心房灌流模型显示,缺氧组心肌组织中MDA含量比对照组显著降低(P＜00S),而预处理KT5823(1mmol/L)再给予缺氧组心肌组织中MDA含量明显增高(与缺氧组相比,P＜0.01).结论 ①力竭心脏的缺氧分泌大量ANP,而不是乳酸.②力竭时分泌的ANP对心脏具有抗氧化作用,其作用是通过ANP→cGMP→PKG信号传导途径.     

子痫前期患者胎盘中核因子κB和缺氧诱导因子1α的表达及其关系

目的研究子痫前期患者胎盘中核因子κB(NF-κB)及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达及其关系。方法采用免疫组化和反转录聚合酶链反应检测子痫前期和正常对照组胎盘中NF-κBp65及HIF-1α的表达水平。结果①反转录聚合酶链反应:子痫前期各组及对照组胎盘中NF-κBp65mRNA表达水平间差异无统计学意义(P>0.05);子痫前期组HIF-1αmRNA表达水平较对照组显著增强(P<0.05),且重度组显著高于轻度组(P<0.05)。②免疫组化:子痫前期组胎盘NF-κBp65及HIF-1α蛋白表达均较对照组显著增强,差异有统计学意义(P<0.05),且重度组显著高于轻度组(P<0.05)。③子痫前期各组HIF-1α表达与NF-κB活性呈正相关(P<0.05)。结论NF-κB与HIF-1α参与了子痫前期发病过程。子痫前期患者胎盘NF-κB活性增强,导致HIF-1α表达增多,引起机体进一步的病理生理改变。     

二烯丙基二硫对人胃癌细胞RORα蛋白表达的影响

目的研究二烯丙基二硫(DADS)处理前后人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体α(R ORα)蛋白表达变化情况。方法实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养及细胞形态学观察,采用免疫细胞化学、Western blot分析RORα蛋白水平的表达;半定量RT-PCR检测RORα核酸水平的表达。结果DADS处理24 h后,细胞形态学发生明显改变;R ORα蛋白在人胃癌MKN28、MGC803细胞核中呈强阳性表达,与对照组相比表达明显上调;半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24 h后,RORα蛋白表达在MGC803、MKN28细胞中的(0.97±0.01)、(0.91±0.01)较对照组的(0.44±0.02)、(0.72±0.01)显著上调(P<0.01或P<0.05);Western blot分析及灰度扫描显示,DADS处理人胃癌MGC803、MKN28细胞8、12和24 h后,RORα蛋白表达分别为(0.71±0.03)和(0.79±0.01)、(0.87±0.01)和(0.88±0.02)以及(1.31±0.01)和(0.96±0.02)较未处理组的(0.32±0.01)和(0.68±0.02)明显上调,差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。结论DADS可诱导人胃癌细胞分化,其诱导分化作用可能与上调R ORα蛋白表达有关。     

HIF-1α、VEGF-C及D2-40在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）HIF-1α、VEGF-C、D2-40表达及其相关性与临床病理意义。方法应用免疫组化SP法检测62例PTC组织中HIF-1α、VEGF-C、D2-40的表达,计数淋巴管密度（lymphatic vessel density,LVD）,结合临床资料进行分析。结果 PTC组织内存在HIF-1α、VEGF-C的表达,与癌旁组织及腺瘤比较有显著性差异（P〈0.05）,淋巴结转移组表达率高于无淋巴结转移组,高分期组（Ⅲ期/Ⅳ期）瘤内HIF-1α、VEGF-C较低分期组（Ⅰ期/Ⅱ期）为高,两组比较有统计学差异（P〈0.05）。HIF-1α表达与VEGF-C表达呈正相关（r=0.555,P〈0.05）。PTC瘤周LVD较瘤内为高;瘤周LVD与临床病理特征有关,高分期组（Ⅲ期/Ⅳ期）的瘤周LVD较低分期组（Ⅰ期/Ⅱ期）为高,淋巴结转移组较无转移组为高,两组比较有统计学差异（P〈0.05）。HIF-1α、VEGF-C表达与LVD成正相关（P〈0.05）。结论 HIF-1α、VEGF-C在PTC癌组织中表达上调,二者表达呈正相关,与LVD也呈正相关,其异常表达参与了PTC的发生、发展,联合检测上述指标可能为甲状腺癌诊断、治疗、预后判断提供有力的临床指导。     

HIF-1α对间充质干细胞SDF-1/CXCR4的调控作用研究

[目的]探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）对间充质干细胞基质细胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1,SDF-1）/CXC趋化因子受体4（chemokine receptor 4,CXCR4）的调控作用。[方法]贴壁法培养ICR小鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）;采用RNA干扰技术用SuperFectinTMⅡ转染HIF-1αsiRNA于MSCs;实验分为五组：常氧组、缺氧组、转染Control siRNA组、转染HIF-1αsiRNA常氧培养组、转染HIF-1αsiRNA缺氧培养组;RT-PCR检测HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA表达水平;Western blotting检测HIF-1α、SDF-1α、CXCR4蛋白表达水平。[结果]同常氧组比较,缺氧组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平提高（P〈0.05）;同转染Control siRNA组比较,转染HIF-1αsiRNA常氧培养组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平降低（P〈0.05）;同缺氧组比较,转染HIF-1αsiRNA缺氧培养组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平降低（P〈0.05）。[结论]缺氧可使MSCs的HIF-1α、SDF-1α、CXCR4的表达提高,常氧与缺氧条件下抑制HIF-1α的表达可使SDF-1α、CXCR4的表达降低,HIF-1α在间充质干细胞中对SDF-1/CXCR4有调控作用。