Ad-ING4-IL-24双基因共表达腺病毒对前列腺癌细胞株PC3体内外抑癌增效作用

目的 观察肿瘤生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素-24(IL-24)双基因共表达腺病毒载体对PC3人前列腺癌细胞体内外抑癌增效作用.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测ING4和IL-24在PC3细胞中的表达;噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(FCM)检测双基因对PC3细胞的生长抑制和凋亡效应;半定量RT-PCR法和Western blot法检测双基因的表达对PC3细胞中的bcl-2、bax、p53和Caspase-3凋亡相关基因表达的影响.在前列腺癌的裸鼠移植瘤动物模型上,检测Ad-ING4-IL-24对移植瘤生长的抑制作用,并通过免疫组织化学法检测bcl-2、bax、Caspase-3、CD34等相关因子的表达.结果腺病毒介导的ING4和IL-24双基因在PC3细胞中成功表达,对PC3细胞增殖具有抑癌增效功能,可引起p53、bax、Caspase-3基因表达上调和bcl-2基因表达下凋,诱导细胞凋亡.Ad-ING4-IL-24能显著抑制PC3裸鼠前列腺癌移植瘤生长,瘤重的抑制率可达74%,免疫组织化学结果显示Ad-ING4-IL-24能明显上调bax和Caspase-3的表达和下调bcl-2和CD34基因表达.结论 Ad-ING4-IL-24在体内外均可明显抑制PC3细胞的生长,诱导其凋亡,具有抑癌增效功能.其机制可能是通过上凋p53、bax、Caspase-3基因和下凋bcl-2和CD34基因表达水平.     

外源性Apoptin蛋白过表达对裸鼠乳腺癌MCF-7移植瘤凋亡活性的影响及机制

目的 构建表达重组凋亡素(VP3)基因的重组逆转录病毒,探讨其对人乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤模型的凋亡诱导活性及机制.方法 克隆VP3基因,重组法构成逆转录病毒载体pLP-LNCX-VP3(pLLVP3),转染PT67细胞进行病毒包装;雌激素皮贴刺激法建立去卵巢裸鼠乳腺癌皮下移植瘤模型,观察pLLVP3对肿瘤的生长抑制情况,TUNEL法检测肿瘤凋亡,Western blot印迹法检测VP3、Caspase-3和bcl-2蛋白表达.结果 重组载体pLLVP3鉴定正确,滴度为1×10~7 pfu/ml;裸鼠实验pLLVP3组抑瘤率分别为65.52%和68.23%,显著高于对照组(t=4.06,P<0.01),48 h可见VP3蛋白高表达.TUNEL见各组凋亡指数无差异(t_1=1.05,t_2=0.84,均为P>0.05).VP3蛋白高表达组Caspase-3表达亦升高,但bcl-2未见差异.结论 VP3基因能够诱导人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡,可能是激活Caspase-3而发生作用.     

5-LOXsiRNA抑制人肝癌HepG-2细胞裸鼠移植瘤的生长并诱导细胞凋亡

目的探讨5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染的人肝癌HepG-2细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的影响及可能的作用机制。方法选取裸鼠18只,将其随机进行分三组:1、对照组(接种正常人肝癌HepG-2细胞株)。2、转染组(接种转染5-LOX-siRNA的人肝癌HepG-2细胞株)。3、空载体组(接种转染空质粒的人肝癌HepG-2细胞株)。观察载瘤小鼠皮下移植瘤生长及小鼠的生存情况,并于接种移植瘤3周后处死载瘤小鼠,记录各组移植瘤体积V及计算肿瘤衰退率,经Western和RTPCR检测通路信号蛋白ERK1/2、MEK1/2及caspase3、bcl-2等凋亡调节因子等表达情况。结果转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、正常对照组比较明显减小(P0.01),Western及RT-PCR检测发现转染组caspase3表达量明显增强,ERK1/2、MEK1/2及bcl-2等表达量明显下降(P0.01)。结论抑制5-脂氧合酶的表达可显著抑制肝癌移植瘤的生长,其机制可能与5-LOX通过MEK/ERK途径调节凋亡基因bcl-2 caspase3的表达有关。     

5-LOX抑制剂NDGA对人肝癌HepG-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制的探讨

目的观察5-lox抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对裸鼠人肝癌HepG-2细胞移植瘤的作用,并探讨其抗肿瘤的可能机制。方法以人肝癌细胞HepG-2制备裸鼠人肝癌移植瘤模型共18只,将18只荷瘤裸鼠随机分为三组:1、正常对照组(接种正常肝癌HepG2细胞)。2、药物组(接种正常肝癌HepG2细胞同时皮下注入5-lox抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA),剂量:10μml/L NDGA 0.1ml/10g一天一次,连续5天)。3、溶媒组(接种正常HepG-2细胞后皮下注射溶质二甲亚酚)。密切观察移植瘤生长及裸鼠生存情况21天,记录各组移植瘤肿瘤体积V(V=长径×短径2×0.5),计算衰退率:肿瘤衰退率=1-干预组平均肿瘤体积比/空白对照组平均肿瘤体积比(V/Vo)。通过RT-PCR及Western-blot法检测裸鼠移植瘤组织中bcl-2、caspase3凋亡调节因子以及通路信号蛋白MEK1/2、ERK1/2等的表达。结果实验期间各组荷瘤鼠活动较好,成瘤率100%,且实验过程中无不良繁衍及裸鼠死亡;试验后分别测得各组荷瘤鼠皮下移植瘤体积及肿瘤衰退率,利用单因素方差分析及t检验可以发现:药物组荷瘤鼠较对照组及溶媒组移植瘤体积明显缩小,肿瘤衰退率明显较高,且存在统计学差异(P0.01);利用RT-PCR及Western-blot法检测发现药物组caspase3表达量较对照组及溶媒组明显增强,差异存在统计学意义(P0.01),bcl-2、ERK1/2、MEK1/2等表达量较对照组及溶媒组明显下降,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 NDGA对于裸鼠人肝癌移植瘤具有明显的抑制效果。NDGA可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制肿瘤生长,其作用机制与抑制MEK/ERK信号通路有关。     

姜黄素对肝癌HepG2细胞和肝脏正常细胞L-02细胞的生长抑制作用及其机制

目的 观察姜黄素对肝癌HepG2细胞和肝脏正常L-02细胞的生长抑制作用,探讨其抗肿瘤的作用和机制.方法 贴壁法培养HepG2细胞和L-02细胞,噻唑蓝(MTT)比色法分析姜黄素对细胞生长的抑制率,流式细胞仪(FACS)检测细胞周期及凋亡,免疫细胞化学及Western blot技术检测半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9、死亡受体5(DR5)、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)和bax蛋白的表达.结果 姜黄素在100 mg/L浓度下,对HepG2细胞生长抑制率可达84％,凋亡率为25.89％,而诱导正常L-02细胞的凋亡率为10.10％,阻滞HepG2细胞周期于G1期,此过程中Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8被激活,DR5蛋白表达上升,bcl-2/bax蛋白表达比率下降.结论 姜黄素能够选择性杀伤HepG2细胞,并通过内源性和外源性两条通路促其凋亡.     

Ad-ING4对乳腺癌的生长抑制作用研究

目的 研究腺病毒(adenovirus,Ad)介导的ING4基因(Ad-ING4)表达对人乳腺癌的生长抑制作用.方法 采用Ad-ING4腺病毒感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,RT-PCR、Western blot 法检测ING4基因在肿瘤细胞中的转录和表达;四唑盐(MTT)法、Hochest33258染色法和流式细胞仪(FCM)检测ING4基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制、周期变化和凋亡效应;半定量RT-PCR检测凋亡相关基因的转录;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测人血管生成素1(Ang-1)的分泌水平;在乳腺癌的裸鼠移植瘤动物模型上检测Ad-INCA对移植瘤生长的抑制作用,并检测Bc1-2,Bax,Caspase-3等细胞凋亡相关因子的表达.结果 ING4基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达,并对乳腺癌细胞有明显增殖抑制及促凋亡作用,G_2/M期阻滞达(24.86±1.24)%;Ad-ING4显著抑制移植瘤生长,瘤重抑制率达49%;免疫组化结果显示Ad-ING4上调Bax和Caspase-3的表达,下调Bc1-2、Survivin和CD34的表达.结论 ING4基因在体内外均可明显抑制MDA-MB-231细胞的生长,诱导其凋亡.     

特异性阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞凋亡的影响及分子机制

目的 观察特异性阻断Hedgehog信号通路对人胰腺癌Mia PaCa-2细胞凋亡的影响,探讨其可能的分子机制.方法 应用特异性Hedgehog通路阻断剂KAAD-eyelopamine阻断Mia PaCa-2细胞的Hedgehog信号通路,噻唑蓝(MTT)法检测阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞生长情况的影响;流式细胞技术观察细胞凋亡的变化;Western blot方法检测bax和bcl-2表达的变化.结果 KAAD-cyclopamine明显抑制胰腺癌Mia PaCa-2细胞生长,其作用呈剂量依赖性;阻断Hedgehog信号通路后,胰腺癌细胞凋亡显著增加,细胞中bax表达水平上调,bcl-2表达水平明显下调.结论 特异性阻断Hedgehog信号通路使胰腺癌细胞生长抑制,凋亡明显增加,其机制可能为通过上调bax及下调bcl-2的表达水平实现.     

腺病毒介导反义c-myc基因抑制人肝癌细胞生长的研究

目的观察重组腺病毒介导反义c-myc基因(Ad-ASmyc)对体外培养人肝癌细胞的生长抑制作用和裸鼠体内移植肝肿瘤的治疗效果.方法Ad-ASmyc感染人肝癌细胞系后,观察细胞生长形态变化,通过细胞生长曲线、流式细胞仪分析、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)分析Ad-ASmyc对人肝癌细胞系SMMC-7721和HCC-9204细胞生长、c-myc和bcl-2基因表达的影响;裸鼠皮下移植瘤内注射3种不同剂量Ad-ASmyc(1×109pfu-A组,1×108pfu-B组,1×107pfu-C组)抑制裸鼠肿瘤生长的差异.结果Ad-ASmyc可高效转导人肝癌细胞系SMMC-7721和HCC-9204,抑制细胞生长(抑制率分别为48.72%和56.88%),诱导肝癌细胞G1期阻滞和凋亡,c-myc、bcl-2 RNA及c-myc蛋白水平下降;瘤内注射3种不同剂量Ad-ASmyc均可明显抑制裸鼠皮下移植肿瘤生长,抑制率分别为47.1%、77.3%和82.6%(与对照组比较,P＜0.01).结论重组腺病毒介导的反义c-myc基因能够引起人肝癌细胞c-myc、bcl-2 RNA及c-myc蛋白表达下调和细胞生长抑制,瘤内注射Ad-ASmyc治疗裸鼠皮下移植肝癌有效.     

急性胰腺炎大鼠肾上腺损伤中bax与bcl-2表达的研究

目的 观察急性胰腺炎(AP)大鼠肾上腺损伤时细胞凋亡及调控基因bcl-2和bax蛋白的表达及作用.方法 采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射法建立AP模型.术后3、6、12 h检测血皮质酮水平,观察肾上腺病理,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组织化学检测bcl-2和bax蛋白表达.结果 与SO组比较,AP3 h组血清皮质酮显著增高,随后逐渐降低(P＜0.05).随病程延长,肾上腺细胞凋亡指数增高,bax蛋白表达增强,bax/bcl-2比值亦逐渐升高(P值均＜0.05),并与凋亡指数(AI)呈正相关(r =0.759,P＜0.05).结论 bax和bcl-2可能参与了AP肾上腺损伤的发病过程.通过激活bcl-2和抑制bax的蛋白表达,减少细胞凋亡发生从而保护肾上腺结构和功能,可能为今后AP及相关肾上腺损伤的药物及基因治疗提供依据和新思路.     

生长激素和生长抑素对人结肠癌裸鼠移植瘤模型的影响

目的观察外源性生长激素（GH）和生长抑素（SS）对人结肠癌细胞株HT-29裸鼠移植瘤模型肿瘤生长和裸鼠血清蛋白水平的影响。方法接种结肠癌细胞株HT-29建立裸鼠移植瘤模型。比较移植肿瘤体积、细胞周期分布、增殖指数（PI）、凋亡率、bcl-2和bax mRNA水平．以及裸鼠血清蛋白水平。结果生长抑素能够明显抑制移植瘤的生长（P〈0．05）、降低移植瘤PI（P〈0．05）、促进移植瘤细胞凋亡（P〈0．01）、降低移植瘤bcl-2mRNA表达（P〈0．05）、提高移植瘤baxmRNA表达（P〈0．05），生长激素则表现出相反的作用。生长激素能够改善移植瘤导致的低蛋白血症（P〈0．05）。结论外源性生长抑素能够显著抑制人结肠癌裸鼠移植瘤生长，外源性生长激素单独或联合生长抑素应用能够改善荷人结肠癌移植瘤裸鼠低蛋白血症，但具有潜在的促进肿瘤生长的作用。     

紫杉醇联合大蒜素对胃癌细胞的增殖抑制及促凋亡作用

目的：探讨紫杉醇联合大蒜素对胃癌细胞MGC-803的增殖抑制和促凋亡作用及其分子机制。方法：分别及联合应用两药后以MTT法测定MGC-803细胞的增殖，用流式细胞仪检测细胞凋亡，用RT-PCR法观察基因bax和bcl-2 mRNA的表达，用Western blot观察其蛋白表达。 结果：15～60μg/mL大蒜素和4～32μg /mL紫杉醇单用24h对MGC-803细胞均有明显抑制作用，呈剂量依赖性。低剂量大蒜素（9μg /mL）联合紫杉醇（1～16μg/mL）比单用紫杉醇作用更强（P<0.05）。15μg/mL大蒜素,12μg /mL紫杉醇和两药联用24h凋亡率分别为10.7%，30.4%和84.7%（P<0.01 ）。单用大蒜素和紫杉醇对胃癌细胞bax和bcl-2表达无明显影响，两药联用bax基因mRNA和蛋白表达增加，而bcl-2mRNA和蛋白的表达减少。结论：大蒜素可增强紫杉醇对胃癌细胞的增殖抑制作用，两药联用可减少紫杉醇的剂量;其机制可能是通过增强MGC-803细胞的凋亡，后者与bax和bcl-2基因表达有关。     

胸苷激酶基因系统对膀胱癌细胞及凋亡基因的影响

目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷(HSV-TK／GCV)系统对膀胱癌细胞BIU87的杀伤作用及对凋亡基因的影响。方法 脂质体将TK基因成功转入BIU87。噻唑蓝(MTT)法、TUNEL法、流式细胞仪(FCM)分别检测GCV对其生长影响及凋亡率和细胞周期变化；逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2、bax、bak、Caspase-3 mRNA表达变化．比色法测定Caspase．3活性变化。结果 作用5dlmg,／LGCV能杀死67％的细胞，100mg／，LGCV达到最大杀伤率杀死97％的细胞；GCV诱导细胞凋亡，细胞周期阻滞在S和G2期；bcl-2表达降低，bax表达升高，Caspase-3表达及活性升高。结论 HSV-TK／GCV系统可有效杀伤膀胱癌细胞并引起细胞凋亡，细胞周期阻滞、bcl-2和bax表达变化、Caspase-3活化是引起凋亡发生的重要因素。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体联合丁酸纳诱导肝癌HepG-2细胞凋亡研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)与丁酸纳(NaB)联合应用对肝癌细胞HepG-2的抑制作用.方法 将HepG-2细胞悬液接种于96孔培养板后,分别或联合加入不同浓度的NaB(1.0、2.5、5.0 mmol/L)和TRAIL(10、100、500、1000μg/L),应用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对HepG-2细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内DR4和DR5 mRNA的表达水平.结果经不同浓度的TRAIL处理后,HepG-2细胞生长抑制率和凋亡率分别为(4.5±1.3)%和3.2±0.7)%,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).NaB对HepG-2细胞生长有明显抑制作用,且随着NaB浓度从1.0mmol/L升高到5.0mmol/L时,抑制率从(37.6±2.6)%升高到(58.4±3.0)%,各浓度组间差异有统计学意义(P<0.05),NaB浓度为2.5 mmol/L时的凋亡率为(26.7 5.2)%.联合应用NaB和TRAIL能够明显的提高HepG-2细胞的生长抑制率和凋亡率,与同等浓度的NaB或TRAIL单独应用比较,差异有统计学意义(P<0.05).HepG-2细胞经过NaB作用后,其DR5 mRNA的表达水平明显的高于对照组.结论 HepG-2细胞对单独应用TRAIL诱导的凋亡不敏感,NaB可通过上调HepG-2细胞内DR5 mRNA的表达而增强HepG-2对TRAIL的敏感性.     

冬凌草甲素对膀胱癌EJ细胞的生长抑制作用及机制

目的研究冬凌草甲素（ORI）对膀胱癌EJ细胞株的抑制作用及机制。方法 MTT法检测ORI对EJ细胞的生长抑制作用;电子显微镜和Hoechst 33258染色法观察细胞的形态学变化;Western blot检测Bcl-2和Bax表达的变化。TRAP-PCR-银染法检测端粒酶活性的变化。结果 ORI对EJ细胞有明显的生长抑制作用,呈明显的时间-效应关系和浓度-效应关系。随着ORI作用时间延长,Bcl-2的表达逐渐减弱,Bax的表达逐渐增强。EJ细胞的端粒酶活性随着ORI作用时间的延长而逐渐降低。结论 ORI对膀胱癌EJ细胞有明显的生长抑制作用;机制可能是通过下调Bcl-2/Bax和通过抑制端粒酶活性诱发EJ细胞凋亡的。     

靶向中期因子反义寡核苷酸的体内抗肿瘤双应

目的 观察靶向中期因子反义寡核苷酸的体内抗肿瘤效应.方法 构建人肝癌裸鼠原位移植瘤模型48只,随机分6组,生理盐水对照组,MK-AS(每日25、50、100mg/kg)组,MK-Sen(每日50mg/kg)组和5-Fu(每日10 mg/kg)组,放免法检测血清AFP浓度,Western blot检测组织MK、p53、bax、bcl-2和Caspase-3蛋白水平.结果 (1)与生理盐水对照组比较,MK-AS治疗组的肿瘤体积明显减小,[(807.75±195.19)mm3比(552.75±84.38)、(532.00±121.57)、(294.50±70.66)mm3],差异有统计学意义(P<0.01);(2)MK.AS治疗组的肿瘤瘤重与生理盐水对照组比较显著降低,[(1.29±0.13)g比(0.70±0.14)、(0.64±0.18)和(0.44±0.18)g],差异有统计学意义(P<0.01);(3)MK-AS明显下调肿瘤组织MK和bcl-2蛋白的表达,而p53、bax、Caspase-3表达上调.结论 MK-AS具有明显的体内抗肿瘤效应;MK-AS的抗肿瘤效应可能与凋亡相关蛋白p53、bax、Caspase-3表达水平的上调和bcl-2的下调有关.     

内源性大麻素诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡中Caspase-3的作用

目的 检测内源性大麻素(AEA)是否诱导人肝癌高转移细胞株MHCC97H细胞凋亡、以及Caspase-3在细胞凋亡过程中的作用.方法 分别于AEA(100 μmol/L)作用细胞前后,应用Annexin V Binding方法 、流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3活性;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,检测Caspase-3、bcl-2及bax的mRNA表达.结果 AEA作用细胞3、6、12、24 h,细胞凋亡率分别为(14.13±2.17)%、(27.04±3.21)%、(34.98±7.74)%及(81.35±9.71)%,其中24 h的细胞凋亡率与对照组(12.72±0.44)%比较,差异有统计学意义(P<0.01).AEA作用细胞24 h,细胞的Caspase-3活性由142.0±5.8增加至226.0±6.4(P<0.01);Caspase-3 mRNA的表达由0.24±0.13升高至0.54±0.32(P<0.05);如预先加入Caspase-3抑制剂(Z-VAD-FMK)后再加入AEA,则细胞的Caspase-3活性不再升高90.0±4.3.RT-PCR方法 未检测到bcl-2 mRNA及bax mRNA的表达.结论 AEA对人肝癌高转移细胞MHCC97H具有凋亡诱导作用,Caspase-3参与了凋亡的调控.