雄黄诱导小鼠血细胞凋亡的形态学研究

自从雄黄用于治疗白血病以后,雄黄对造血系统的影响,逐渐引起医学界的重视,但雄黄诱发小鼠血细胞凋亡的资料文献报道尚少。我们通过对小鼠灌胃给雄黄,发现给药后两周,血中可出现凋亡细胞(apoptoticcells)及凋亡小体(apoptoticbody)。随后骨髓涂片中可找到形态各异的凋亡小体及新月帽(crescenticcap)状凋亡现象。现简要报道如下。材料和方法一、材料(1)雄黄(realgar,二硫化二砷As2S2)购于河北医科大学中医学院门诊部。试验时用0.5%羧甲苯纤维素钠配成混悬液。(2)昆明种小鼠　雄性,体重18～21g,由河北省实验动物中心提供。二、研究方法　将小…     

2-甲氧基雌二醇联合硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME2)联合硼替佐米的抗多发性骨髓瘤(MM)效应及与聚集小体(aggresome)形成之间的相关性.方法 以MM细胞系RPMI 8226、NCI-H929、U266、SKO-007细胞作为研究对象,采用硼替佐米单药或联合2-ME2处理,通过等效应线图法分析两者是否具有抗MM协同效应;通过免疫荧光技术在同一组细胞群中研究聚集小体阳性和阴性细胞的凋亡情况.结果 ①硼替佐米呈浓度和时间依赖性地显著提高聚集小体阳性细胞比例,且聚集小体几乎全部出现于非凋亡细胞中.②等效应线图法分析显示一定浓度范围的硼替佐米与2-ME2联合具有显著的协同作用.③硼替佐米与2-ME2联合应用后聚集小体阴性的凋亡细胞显著增多而聚集小体阳性的非凋亡细胞明显减少.在RPMI 8226及U266细胞中,硼替佐米单药与联合用药组相比,聚集小体阴性的凋亡细胞分别由(14.5±2.6)%及(20.1±2.9)%增加至(80.7±6.9)%及(71.6±6.2)%;聚集小体阳性的非凋亡细胞分别由(75.3±5.7)%及(69.1±8.6)%减少到(13.8±3.8)%及(19.5±4.2)%.结论 硼替佐米诱导生成的聚集小体对MM细胞具有保护作用;2-ME2通过抑制聚集小体途径可以显著增强硼替佐米的抗MM效应.     

曲美他嗪对心肌梗死后心力衰竭大鼠左心功能和心肌细胞自噬水平的影响

目的探讨曲美他嗪对心肌梗死后心力衰竭大鼠左心功能和心肌细胞自噬水平的影响。方法取24只雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组(不结扎左冠状动脉前降支近段)、模型组(结扎左冠状动脉前降支近段制备心肌梗死后心力衰竭大鼠模型)、给药组(心肌梗死后心力衰竭+曲美他嗪每日15 mg/kg),用药4周,三组各8只。通过小动物超声仪测定三组小鼠左心室功能指标,分别采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察小鼠心肌组织病理学改变和纤维化情况,根据原位缺口末端标记法(TUNEL法)荧光染色测定小鼠心肌细胞凋亡情况,分别采用免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应测定小鼠心肌组织中自噬相关蛋白和基因的表达情况。结果模型组和给药组左心室收缩末期内径(LVESD)和左心室舒张末期末径(LVEDD)较假手术组均明显增厚,左心室射血分数(LVEF)较假手术组均明显降低(P 0. 05);给药组LVESD和LVEDD较模型组下降,LVEF较模型组明显升高(P 0. 05)。相比假手术组,模型组梗死区心肌细胞水肿和坏死明显,可见诸多炎性细胞浸润,心肌细胞损伤明显,出现明显蓝色胶原沉积,可见大量凋亡小体;相比模型组,给药组心肌组织病理学改变的情况得以明显改善,少见蓝色胶原沉积和凋亡小体。模型组和给药组P62蛋白的表达水平较假手术组均显著上调,LC3B蛋白的表达水平较假手术组均显著下调(P 0. 05);给药组P62蛋白的表达水平较模型组显著下调,LC3B蛋白的表达水平较模型组显著上调(P 0. 05)。模型组和给药组Atg7 mRNA和Beclin-1 mRNA相对表达量均明显低于假手术组,给药组Atg7 mRNA和Beclin-1 mRNA相对表达量均明显高于模型组(P 0. 05)。结论自噬具有保护心肌细胞的功能,应用曲美他嗪给药可提高心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌细胞自噬水平,从而减轻心功能障碍,抑制心肌细胞凋亡。     

小鼠髓系树突状细胞的体外扩增和超微结构

背景:树突状细胞可激发初始型T细胞,是目前所知机体功能最强的专职抗原递呈细胞,但对其超微结构的研究鲜见报道.目的:观察小鼠髓系树突状细胞不同发育阶段以及CD40配基化和肿瘤坏死因子α刺激后树突状细胞的超微结构特征.方法:无菌取小鼠骨髓前体细胞,采用粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4联合方案体外诱导获得未成熟树突状细胞,负载早期凋亡的肿瘤细胞后采用小鼠CD40L转基因CHO细胞和肿瘤坏死因子α刺激48 h,按常规方法制备超薄切片,透射电镜观察树突状细胞的超微结构特征.结果与结论:前体细胞及未成熟树突状细胞内有清晰可见的吞饮泡,未成熟树突状细胞的胞质内可见"C"形和环形溶酶体;凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞可见凋亡小体被吞噬或包裹的现象,小鼠CD40L转基因CHO细胞和肿瘤坏死因子α均可促进树突状细胞成熟,但肿瘤坏死因子α作用后,部分树突状细胞有自噬和凋亡改变.结果提示,小鼠骨髓来源树突状细胞在不同分化发育阶段有其特殊的超微结构表现,肿瘤坏死因子α可介导树突状细胞发生自噬和凋亡.     

复方柏子仁与化疗交替对急性早幼粒细胞白血病缓解后治疗疗效分析

临床观察结果证明,砷剂在治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)过程中显示出卓越的疗效[1].复方柏子仁中的雄黄(As4S4)可诱导NB4、HL-60、K 562白血病细胞株凋亡[2～4],柏子仁与雄黄伍用可显著增强其诱导白血病细胞的凋亡,在治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)诱导缓解阶段获得很高的完全缓解率(CR).在以上基础上,我们以复方柏子仁与化疗交替作为急性早幼粒细胞白血病缓解后巩固强化治疗方案,观察31例APL患者的治疗疗效.现报告如下.     

烟酰胺对帕金森病小鼠黑质细胞凋亡的影响

目的:探讨黑质细胞凋亡在帕金森病发病机制中的作用及烟酰胺对帕金森病小鼠黑质细胞凋亡和Bax蛋白表达的影响。方法:给C57BL小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备帕金森病小鼠模型。利用原位缺口末端标记法(TUNEL)及Bax免疫组化方法观察黑质细胞凋亡情况及烟酰胺干预的影响。结果:帕金森病小鼠黑质致密带可见大量凋亡细胞犤(19.43±3.33)个/视野犦Bax蛋白表达(Bax阳性细胞平均灰度值80.59±3.73)。预先应用烟酰胺能使凋亡细胞减少犤(6.33±2.35)个/视野犦,烟酰胺 MPTP组与MPTP组间比较差异有显著性意义(q=9.23,P<0.05)。预先应用烟酰胺也能使Bax蛋白表达降低(Bax阳性细胞平均灰度值107.59±2.50),烟酰胺 MPTP组与MPTP组间比较差异有显著性意义(q=7.44,P<0.05)。结论:烟酰胺可降低MPTP诱导的C57BL小鼠黑质细胞Bax蛋白表达,减少黑质细胞凋亡。     

结核分枝杆菌介导TWIK2-NLRP3通路参与小鼠肺泡巨噬细胞损伤的研究

目的分析结核分枝杆菌(MTB)介导TWIK2-NLRP3通路参与小鼠肺泡巨噬细胞损伤。方法将40只昆明小鼠按照随机数字表法分为卡介苗组和H37Rv组,每组20只。2组分别经尾静脉给予一次性注射MTB活菌卡介苗和H37Rv菌悬液制备小鼠感染模型,剂量均0.3 mL。2组小鼠于感染后1、3、7、14 d脱颈处死,采用磷酸盐缓冲液对气管、肺泡进行灌洗,收集的感染小鼠肺泡巨噬细胞以激光共聚焦显微镜技术、MTT、流式细胞术、酶联免疫吸附实验(ELISA)、实时聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白质印迹(Western blotting)等技术对2组小鼠不同时间点巨噬细胞的吞噬能力、凋亡率、乳酸脱氢酶(LDH)表达量、炎性因子含量、K+浓度、钾离子通道蛋白(TWIK2)、炎症小体(NLRP3)及凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的mRNA和蛋白表达量进行检测、对比。结果感染后1、3、7、14 d,2组小鼠肺泡巨噬细胞吞噬菌种的量、凋亡率以及LDH表达量均随时间显著增加,K+浓度则随时间显著降低,且均在在感染后7 d达到最高或最低。感染7 d后,与卡介苗组相比,H37Rv组小鼠中TWIK2、NLRP3及ASC mRNA和蛋白的相对表达量以及炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MTB和卡介苗菌株均介导TWIK2-NLRP3通路参与小鼠肺泡巨噬细胞损伤。小鼠体内注入适量MTB可被肺泡巨噬细胞吞噬,MTB可促进肺泡巨噬细胞的凋亡与损伤,其作用机制可能与TWIK2的激活密切相关。     

载药纳米炭的淋巴化疗对小鼠结肠癌转移模型肿瘤细胞凋亡的影响

目的应用载药纳米炭对小鼠结肠癌转移模型进行淋巴化疗,探讨其对肿瘤细胞凋亡的影响.方法采用小鼠爪垫接种小鼠结肠低分化腺癌Colon26细胞悬液的方法,建立小鼠结肠癌淋巴结转移模型.将成功制备的40只荷瘤小鼠随机分为4组,每组10只,爪垫肿瘤处皮下分别注射5%葡萄糖溶液(A组)、纳米炭-氟尿嘧啶混合液(B组)、纳米炭-奥沙利铂混合液(C组),纳米炭-氟尿嘧啶混和液及纳米炭-奥沙利铂混合液联合用药(D组).观察小鼠爪垫注射部位局部一般情况,给药48小时后处死小鼠,取爪垫肿瘤组织制成单细胞悬液,采用流式细胞分析法检测癌细胞凋亡率;同时取腘窝淋巴结,应用原位末端脱氧核苷转移酶标记法(TUNEL法)检测淋巴结转移癌细胞凋亡指数.结果注射药物后各组小鼠无死亡,爪垫注药部位无溃疡及坏死;B、C组和D组小鼠腘窝淋巴结黑染.B、C组和D组爪垫癌细胞凋亡率和腘窝淋巴结转移癌细胞凋亡指数与A组比较有显著性差异(P<0.05),D组与B、C组比较差异显著(P<0.05),B组与C组比较差异不显著(p"0.05).结论载药纳米炭能够靶向性进入淋巴结内,并在局部滞留,能诱导种植肿瘤及淋巴结转移癌细胞凋亡,纳米炭载氟尿嘧啶与纳米炭载奥沙利铂联合用药有协同增效诱导肿瘤细胞凋亡的作用.     

小强度跑台运动对APP/PS1转基因小鼠海马齿状回神经元凋亡的影响

摘要 目的：观察小强度跑台运动对APP/PS1转基因小鼠海马齿状回神经元凋亡的影响。 方法：3月龄C57野生型小鼠及APP/PS1转基因小鼠随机分为四组：野生型小鼠对照组（WtC组,6只）、野生型小鼠运动组（WtE组,6只）、转基因小鼠对照组（TgC组,6只）、转基因小鼠运动组（TgE组,6只）,运动组小鼠进行5个月小强度跑台运动。训练结束后,各组小鼠在麻醉状态下在体灌注固定,取脑,石蜡包埋,取石蜡切片进行Nissl染色与TUNEL染色,观察神经元形态和数量及神经细胞凋亡。 结果：与野生型小鼠比较,TgC组小鼠海马齿状回神经元数量明显减少,排列稀疏,胞体塌陷或皱缩,神经元细胞核固缩多见,尼氏小体数量明显减少。相较于TgC组,TgE组小鼠齿状回神经元数量较多,排列较规整,偶见神经元细胞核固缩,仍可见到较多的尼氏小体,形态大致正常。转基因小鼠齿状回可见较多的凋亡细胞,凋亡指数高于野生型小鼠,差异具有显著性（P<0.05）;TgE组齿状回神经细胞凋亡指数低于TgC组,差异具有显著性（P<0.05）。 结论：小强度跑台运动对阿尔茨海默病所致的海马齿状回神经元数目的减少具有保护作用;抑制神经元凋亡是小强度跑台运动减少海马结构齿状回神经元丢失的可能原因。     

表皮生长因子对多器官功能障碍小鼠的作用

目的 研究重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)对多脏器功能障碍综合征小鼠预后的影响.方法 江西省人民医院动物实验室清洁级雄性昆明种小鼠120只,SPF级,随机(随机数字法)分为生理盐水(normal saline,NS)空白对照组15只、MODS模型对照组15只,采用ME Caballero方法用硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA) 2000 mg/kg单次腹腔注射建立单相速发小鼠多脏器功能障碍综合征模型.rhEGF MODS治疗组90只,其中随机(随机数字法)分为两种给药方式:腹腔注射组45只,皮下注射组45只;每组随机分为3个剂量组:10 μg/kg,30 μg/kg和50 μg/kg,每个剂量组15只.观察各组小鼠24 h内呼吸、体质量、饮食等一般情况的变化.24h后,计算各组病死率;颈椎脱臼处死动物后立即收集肝脏、肾脏、心脏、脑、肺、脾脏、胰腺、肠、胃,行苏木素-伊红染色光镜下观察组织学变化.实验数据以均数±标准差((x-)±s)表示,体质量自身变化比较采用t检验,不同给药方式及不同剂量的rhECF给药对MODS小鼠体质量变化影响采用Dunnett法分析;不同给药方式对MODS小鼠病死率的比较采用Fisher精确概率法,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 rhEGF皮下给药组与MODS模型对照组的病死率比较差异无统计学意义(P＞0.05),但hrEGF MODS腹腔给药组病死率明显低于MODS模型对照组病死率73.3％(P＜0.01),其中腹腔给药50 μg/kg和30 μg/kg剂量组的病死率(6.7％、20.0％)较MODS模型对照组降低(P =0.000,0.009);而且腹腔给药50 μg/kg的病死率(6.7％)比10 μg/kg更低(P=0.014).同时,rhEGF MODS (50 μg/kg)腹腔给药组的病死率(6.7％)较皮下给药组的病死率(40.0％)降低更明显(P=0.031).在组织病理学上rhEGFMODS治疗组能改善MODS小鼠肝肺组织的损伤,随rhEGF腹腔给药剂量增加,肝淤血程度减轻,肝细胞凋亡减少,肝细胞浊肿和空泡变减少.同时随rhEGF MODS治疗组给药剂量增加肺间质充血减轻,炎细胞减少,偶见凋亡小体,支气管柱状纤毛上皮较少脱落.结论 rhEGF对TAA诱导的MODS小鼠模型的肝肺等脏器的组织损伤有修复作用,且腹腔注射较皮下注射能更有效地降低MODS小鼠的24 h病死率.     

高压氧治疗对细胞凋亡过程中线粒体途径的影响

细胞凋亡是在病理或生理因素的诱导下,激活膜信号系统,启动相关程序基因,最终导致细胞按一定程序控制的自我破坏和死亡,即出现细胞内核酸内切酶被激活,染色质DNA被核酸内切酶在核小体单位间降解,产生若干小分子寡聚核苷酸片段这一高度同一性的特征性生化反应.高压氧医学是一门边缘学科,近年研究发现高压氧对细胞凋亡有明显的抑制作用,John等对缺血缺氧组小鼠及HBO治疗组小鼠的大脑的海马区及皮层用TUNEL标记法进行比较研究.     

瘤内注射复方中药"99-克星"的活性组分抗肝癌作用及机制

目的 探讨超声引导瘤内注射复方中药"99-克星"的活性组分AG-05体内外抗肝癌作用及机制.方法 观察AG-05瘤内注射对小鼠肝癌H22肿瘤生长抑制率的影响;应用磺酰罗丹明(SRB)法检测AG-05对体外培养肝癌HepG2细胞生长的抑制作用,透射电镜观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞凋亡率.结果 AG-05具有较强的抑制小鼠肝癌H22生长的作用,2 mg/kg、1 mg/kg肿瘤生长抑制率分别达62.8%、37.4%;AG-05对HepG2细胞的生长具有明显的抑制作用,且呈一定的量效、时效关系;AG-05作用48 h后癌细胞出现明显的形态学变化,大部分细胞肿胀坏死,部分细胞出现染色质边集、凋亡小体形成等典型的凋亡形态学改变;流式细胞术检测癌细胞凋亡率实验组20 μg/ml、10 μg/ml两剂量组细胞凋亡率明显升高,分别为 (20.1±4.3)%和(13.5±2.1)%.结论 复方中药 "99-克星"活性组分AG-05具有明显的抗肝癌作用,其作用机理与直接破坏肿瘤细胞及诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

雄黄对急性白血病细胞株存活蛋白(survivin) 基因表达的影响及其意义

为了研究雄黄对白血病细胞抗凋亡基因存活蛋白(survivin)表达的影响，以白血病细胞系HL-60和Jurkat为模型．同时应用Western blot法和免疫荧光法检测survivin的表达；应用免疫组织化学SABC法检测白血病细胞系凋亡前后Fas、caspase-3的表达。结果表明：雄黄作用前两种细胞系survivin表达均呈阳性；Jurkat细胞Fas阳性，但无caspase-3表达；HL-60细胞株均无。Fas和caspase-3的表达。经雄黄作用后，两株细胞系survivin表达水平均降低．以HL-60细胞株降低显著，呈时间-浓度依赖关系。雄黄作用后HL-60细胞caspase-3表达转为阳性，Jurkat细胞caspase-3表达仍为阴性；Fas表达在Jurkat细胞稍减低，HL-60细胞仍为阴性。结论：雄黄可降低白血病细胞survivin的表达；survivin表达下调在雄黄通过线粒体途径促进细胞凋亡中发挥重要作用。     

烟酰胺对帕金森病小鼠黑质细胞凋亡的影响

目的：探讨黑质细胞凋亡在帕金森病发病机制中的作用及烟酰胺对帕金森病小鼠黑质细胞凋亡和Bax蛋白表达的影响。方法：给C57BL小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)制备帕金森病小鼠模型。利用原位缺口末端标记法(TUNEL)及Bax免疫组化方法观察黑质细胞凋亡情况及烟酰胺干预的影响。结果：帕金森病小鼠黑质致密带可见大量凋亡细胞[(19.43&;#177;3．33)个／视野]Bax蛋白表达(Bax阳性细胞平均灰度值80.59&;#177;3.73)。预先应用烟酰胺能使凋亡细胞减少[(6.33&;#177;2．35)个／视野]，烟酰胺+MPTP甲组与MPTP组间比较差异有显著性意义(q=9．23，P&;lt;0.05)。预先应用烟酰胺也能使Bax蛋白表达降低(Bax阳性细胞平均灰度值107．59&;#177;2.50)，烟酰胺+MPTP组与MPTP组间比较差异有显著性意义(q=7.44，P&;lt;0．05)结论：烟酰胺可降低MPTP诱导的C57BL小鼠黑质细胞Bax蛋白表达，减少黑质细胞凋亡。     

郁金对CCl4急性肝损伤小鼠肝细胞bcl-2及bax表达的影响

目的探讨郁金抗四氯化碳所致急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡机制。方法 ICR小鼠48只,雌雄各半,随机均分6组:空白对照组(生理盐水),模型组(生理盐水),阳性药组(甘利欣22.5 mg.kg-1),郁金高、中、低剂量组(12 g.kg-1、6 g.kg-1、3 g.kg-1)。灌胃给药(除阳性药组腹腔注射外),1次/d,连续给药7 d,第7日给药后1 h;再以0.2%CCl4橄榄油溶液10 ml.kg-1剂量,腹腔注射(空白对照组除外)诱导急性肝损伤模型。造模后24 h取血处死,利用试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;TUNUL染色法观察细胞凋亡情况;RT-PCR法检测Bcl-2及bax的基因表达;免疫组化观察肝组织bcl-2及bax的蛋白表达。结果与模型组相比,郁金各剂量组小鼠血清ALT、AST含量明显降低,TUNUL染色阳性细胞数明显减少。RT-PCR和免疫组化染色结果显示,与模型组比较郁金中、低剂量组小鼠肝组织bcl-2表达上调,bax表达下调。结论单味郁金水煎剂可抑制CCL4急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡,其机制可能与调节肝细胞凋亡因子bcl-2/bax有关。     

雄黄对NB4和HL—60细胞的形态，PML mRNA及蛋白的表达影响

本研究以NB4,HL-60细胞为研究对象,采用Wright‘s染色法及荧光染色法、免疫荧光技术及RT-PCR法,探讨雄黄对NB4,HL-60细胞的形态、PML mRNA及蛋白的表达影响。结果发现：（1）经雄黄处理后,各组均出现细胞凋亡的形态学上改变。（2）雄黄处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML蛋白聚积于POD结构,随后降解;在HL-60细胞中PML蛋白发生相似改变。（3）雄黄处理后各组细胞PML mRNA表达均无显著影响。结论指出,在雄黄诱导下PML在蛋白水平参与诱导白血病细胞凋亡机制,雄黄能诱导NB4,HL-60细胞凋亡,抑制白血病细胞生长。     

异烟肼对耐药性结核小鼠肺和脾组织的影响分析

目的探讨与分析异烟肼对耐药性结核小鼠肺、脾组织的影响。方法研究时间为2017年8月到2018年5月,20只SPF级昆明种小鼠采用静脉注射结核分枝杆菌菌株20153311建立耐药性结核小鼠模型,随机分组两组,观察组给予50 mg/kg异烟肼,对照组根据体重给予空白溶剂,连续给药2周。记录小鼠体重变化,检测血清生化指标[碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)]与肺、脾组织病理情况。结果造模后小鼠进食量减少,细菌培养结果均为阳性,两组小鼠给药前的体重比较差异无统计学意义。给药后体重呈现总体增长趋势(P 0. 05),观察组体重高于对照组(P 0. 05)。观察组的血清ALP、TBA、ALT、AST值高于对照组,差异有统计学意义(P 0. 05)。对照组小鼠肺脏多数可见满布的粟粒样结节,脾脏可见1～2个灰白色结节或肿大,伴有大量的淋巴细胞浸润,脾脏水肿明显。观察组鼠肺脏多散分布在3～8个灰白色结节偶,肝、脾偶可见轻度水肿,可见类上皮细胞及淋巴浸润。对照组中肺、脾组织细胞中出现显著性的凋亡情况,观察组中细胞凋亡比率明显低于对照组(P 0. 05)。结论异烟肼在耐药性结核小鼠中的应用存在药物性肝损伤作用,但是可发挥对肺、脾组织的保护作用。     

miR-27b基因对病毒性心肌炎细胞凋亡的影响研究

目的探讨抑制miR-27b基因表达对病毒性心肌炎心肌细胞凋亡的影响及机制。方法将40只健康BALB/c小鼠随机分为对照组:小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的柯萨奇病毒B3(CVB3); miR-27b抑制剂组(抑制组):小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的CVB3,次日,通过尾静脉注射miR-27b抑制剂(10μg/10 g); miR-27b NC组(NC组):小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的CVB3,次日,通过尾静脉注射miR-27b NC(10μg/10 g)每组10只。于接种CVB3病毒后第7天,采集血清及心脏组织。肌酸激酶(CK)试剂盒检测血清CK含量; qRT-PCR检测心肌组织miR-27b表达;TUNEL试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、髓过氧化物酶(MPO)试剂盒及细胞内活性氧(ROS)试剂盒分别检测心肌细胞凋亡率、心肌组织SOD活力、MPO活性及ROS含量。Western blotting检测NF-κBp65、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果小鼠感染CVB3后第7天体重减轻率及血清CK活性明显高于对照组小鼠(P 0. 05)。与对照组比较,模型组SOD活力、Bcl-2蛋白表达明显降低,miR-27b mRNA表达、细胞凋亡率、MPO活性、ROS含量及NF-κBp65和Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),与模型组比较,抑制组SOD活力、Bcl-2蛋白表达明显升高,miR-27b mRNA表达、细胞凋亡率、MPO活性、ROS含量及NF-κBp65和Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05)。结论抑制miR-27b基因表达可降低病毒性心肌炎心肌细胞凋亡率及氧化应激反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

铁调素在小鼠急性肝损伤过程中的保护作用研究

目的明确铁调素(hepcidin)在小鼠急性肝损伤过程中对于肝细胞的保护作用。方法首先在野生型C57BL/6小鼠(WT小鼠)与hepcidin敲除小鼠(HAMP~(-/-)小鼠)分别建立四氯化碳(CCl_4)诱导的急性肝损伤模型,分别以橄榄油处理组作为对照组。然后检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的差异;通过苏木精-伊红染色法检测2种小鼠肝组织形态的变化;采用免疫组化的方法检测2种小鼠肝组织内肿瘤抑制基因P53与凋亡抑制基因Bcl-xl表达的差异;采用Real-time PCR(qPCR)检测2种小鼠肝组织内Fasl及Bcl-xl基因的表达情况;最后,采用流式细胞术检测hepcidin蛋白对于肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与放线菌素D(Act D)诱导的肝细胞系NCTC 1469凋亡的抑制作用。结果 CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠血清中AST和ALT含量较CCl_4暴露的WT小鼠更高(升高倍数分别为2. 7倍和3. 7倍),并且两组差异具有统计学意义(分别为P 0. 05和P 0. 01);苏木精-伊红染色结果显示,在CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠中炎症细胞浸润较WT小鼠严重;免疫组化显示,肿瘤抑制基因P53含量在CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠较WT小鼠升高,而凋亡抑制基因Bcl-xl含量在CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠较WT小鼠降低; q PCR结果显示,Fasl在WT小鼠和HAMP~(-/-)小鼠的CCl_4组较其对照组(Olive组)升高,但HAMP~(-/-)小鼠经CCl_4刺激后,Fasl表达量较WT小鼠CCl_4组升高了1. 2倍,而凋亡抑制基因Bcl-xl的表达量在HAMP~(-/-)小鼠的CCl_4组为WT小鼠的CCl_4组的0. 9倍;体外实验中流式细胞术结果显示,hepcidin蛋白可以有效抑制TNF-α与Act D诱导的肝细胞凋亡。结论Hepcidin可以通过调控凋亡相关基因的表达,抑制肝细胞凋亡,进而发挥对急性肝损伤的保护作用。     

重组人生长激素对糖尿病小鼠胰岛β细胞功能的保护作用机制分析

目的探讨重组人生长激素(rh GH)对糖尿病小鼠胰岛β细胞功能的影响,并对其可能存在的保护机制进行研究。方法选择30只小鼠采取高糖高脂饲养以及链脲佐菌素(35 mg/kg)建模2型糖尿病模型,采用随机数字表法均分为对照组、模型组、实验组。实验组小鼠采取皮下注射rh GH(0. 3 IU/kg),模型组及对照组小鼠注射等体积生理盐水,给药周期7 d。检测干预0 d、1 d、4 d、7 d时间点时各组小鼠血糖含量,酶联免疫法检测各组小鼠血清胰岛素、胰高血糖素、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平以及胰岛组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、丙二醛(MDA)水平以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6 (IL-6)水平。HE染色观察胰岛组织病理学变化,采用TUNEL法及RT-PCR分别检测胰岛β细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达水平。结果在0 d、1 d、4 d、7 d时,模型组小鼠血糖含量均低于对照组(P 0. 05),且在1 d、4 d、7 d时实验组小鼠血糖水平均低于模型组(P 0. 05);模型组小鼠TG、TC、胰岛素及胰高血糖素均明显高于对照组(P 0. 05),且实验组小鼠血清胰岛素、胰高血糖素、TG与TC含量均低于模型组(P 0. 05);实验组小鼠胰岛组织中TNF-α、IL-6及MDA水平低于模型组(P 0. 05),而SOD、GSH-Px含量明显高于模型组(P 0. 05); HE染色结果显示模型组小鼠胰岛组织排列紊乱、细胞大小不均匀且炎性细胞浸润,实验组小鼠胰岛组织受损程度较模型组轻;实验组小鼠胰岛β细胞凋亡率低于模型组,RT-PCR结果显示实验组小鼠胰岛β细胞中的Bcl-2表达量高于模型组(P 0. 05)、Bax达量低于于模型组(P 0. 05)。结论 rh GH可以降低糖尿病小鼠血糖、血脂、胰岛素水平,降低胰岛β细胞凋亡率,可能与促进Bcl-2表达、抑制Bax表达量、减少氧化应激及炎性因子水平有关。