探讨ELISA一步法检测HBsAg的HD-Hook效应

目的 初步探讨ELISA一步法检测标本中高浓度HBsAg的钩状效应。方法 采用ELISA一步法检测427份乙肝患者的5项指标，共检出HBsAg阳性标本411例，其中有16份检测结果为乙肝病毒标志物少见模式（HBsAg阴性而HBeAg呈阳性）。将16份标本作适当稀释后再次测定，同时采用RPHA法作对照检测。结果 同步稀释法以及RPHA法测定结果均为阳性。结论 ELISA一步法检测HBsAg存在着不同程度的HD-Hook效应。     

乙型肝炎表面抗原检测中假阴性问题探讨

目前国内临床检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)多采用ELISA双抗体夹心一步法，该方法检测HBsAg时，当标本中的HBsAg浓度过高，可造成假阴性。针对此现象，笔者从常规844例乙肝五项指标检测血清中，收集其中10例HBeAg、HBcAb两项阳性，而HBsAg阴性的血清标本，对其稀释后分别进行ELISA一步法和两步法检测，解决因HBsAg浓度过高而产生的假阴性问题。     

溶血标本导致HBsAg假阳性结果的探讨

目的：探讨溶血标本对HBsAg结果的影响。方法：将ELISA法检测HBsAg的溶血血清标本，用高铁氰化钾测定血红蛋白含量，用反向间接血凝法（RPHA）复查检测HBsAg的溶血血清标本。结果：溶血标本导致ELISA法检测HBsAg可产生假阳性结果，与溶血程度有关，溶血后细胞内的过氧化物酶释放到血清中是产生ELISA法检测HBsAg产生假阳性结果的直接原因。     

ELISA法检测HBsAg假阳性原因分析

我们在应用酶免(ELISA)法检测乙型肝炎病毒的血清标志物时,发现有时出现测单项HBsAg时阳性,而同一病人再抽血做乙肝五项检查时全部为阴性(测HBsAg和乙肝五项的试剂盒全部由上海荣盛生物技术有限公司提供).为慎重起见再给病人重抽血化验,结果HBsAg和乙肝五项检测还是全部为阴性.为此,我们做如下实验.     

几种不常见乙型肝炎病毒血清学表现模式分析

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）血清学指标检测中不常见模式出现原因及传染性。方法：ELISA法检测乙肝五项：①表面抗原（HBsAg）；②表面抗体（HBsAb）；③e抗原（HBeAg）；④e抗体（HBeAb）；⑤核心抗体（HBcAb），以阳性项目出现的序号作为该模式的代码。HBsAg初检临界状态的标本[吸光度（A）值0．070～0．200]，采用倍比稀释双孔复测确认结果。所有标本均用两种试剂检测，取两次结果一致的特殊模式分析；以荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测所取标本DNA含量。结果：78例两次检测结果一致的特殊模式标本按HBsAg结果分为两类：A类结果为HBsAg阳性，有三种模式：1235，1245，125。HBVDNA阳性率（≥1×10×3拷贝／m1）为82．5％。B类结果为HBsAg阴性，有三种模式：235，35，345，HBVDNA阳性率71．7％。结论：HBsAg结果阴性并不代表没有传染性或传染性很低，临床工作中出现特殊的乙肝五项模式时，应及时进行复检，或用其它试剂进行确认，并建议临床医生加作HBV-DNA检测，以判断患者体内是否有病毒复制。     

ELISA一步夹心法检测HBsAg假阴性原因分析

目的:探讨ELISA一步夹心法检测HBsAg假阴性的原因.方法:对ELISA一步夹心法检测HBeAg阳性、HBcAb阳性和HBsAg阴性的血清样品,用ELISA两步夹心法和将样品倍比系列稀释用ELISA一步夹心法检测HBsAg,并用化学发光免疫分析定量检测HBsAg.结果:在112 166份血样中,ELISA一步夹心法检测HBeAg阳性、HBcAb阳性、HBsAg阴性的标本9份,占0.008%;9份HBsAg阴性样品中,ELISA两步夹心法检测有1份阳性;同时经倍比系列稀释后用ELISA一步夹心法检测,在1∶327 68稀释后检出阳性1份,与ELISA两步夹心法检测HBsAg阳性为同一份血样,该标本经定量检测为HBsAg＞250 IU/mL,属钩状效应;其余8份样品经ELISA两步夹心法和一步夹心法检测均为阴性,而定量检测HBsAg其中1份样品为144.41 IU/mL,其余7份均在0.05～5 IU/mL之间.结论:ELISA一步夹心法检测高浓度HBsAg确有漏检现象,而低浓度HBsAg的漏检情况更为严重,建议使用灵敏度更高的试剂和方法来检测;中等浓度的HBsAg漏检应引起检测者及试剂厂家的关注.     

ELISA 振动式孵育在乳汁 HBV-M 检测中的应用

目的：比较振动式孵育与静置式孵育酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清、乳汁乙型肝炎标志物（HBV‐M ）的差异。方法采集乙肝产妇乳汁,4℃放置过夜后吸取中间层乳汁;采集乙肝产妇血清标本,用乙肝表面抗原（HBsAg ）、乙型肝炎表面抗体均为阴性的产妇中间层乳汁作倍比稀释。倍比稀释后的血清标本与中间层乳汁标本均使用振动式孵育与静置式孵育ELISA检测HBV‐M。结果振动式孵育ELISA检测血清HBsAg的OD值高于静置式孵育;振动式孵育ELISA对乳汁HBsAg的阳性检出率高于静置式孵育（P＜0．05）。结论振动式孵育孵育ELISA检测乳汁HBV‐M较静置式孵育更适用于乙肝产妇母乳喂养安全性评价。     

吸样交叉污染对乙型肝炎病毒表面抗原检测结果的影响

在用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清标本乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的过程中,偶然发现已知的阴性HBsAg标本,当其前面连续有2个HBsAg阳性标本时,可使阴性HBsAg标本出现假阳性。排除操作中的干扰因素后,笔者怀疑是电解质检测过程中仪器吸样时造成的标本之间交叉污染所致。为了进一步明确原因,笔者进行了验证实验,现报道如下。     

溶血和带血细胞标本对HBsAg结果的影响

目的通过实验来观察不同程度溶血和带血细胞标本对酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）结果的影响。方法用90例健康献血者的HBsAg为阴性的血液标本，人为造成不同程度的溶血和加入不等量的红细胞，再用ELISA一步法检测HBsAg，通过对结果的观察来分析溶血和带血细胞标本对ELISA一步法检测HBsAg的干扰程度。结果当血红蛋白大于或等于10g／L或红细胞浓度大于或等于0．125×10^12／L时，42％以上的标本吸光度值均大于临界值（P〈0．01）。结论当血红蛋白大于或等于10g／L或红细胞浓度大于或等于0．125×10^12／L时，标本对ELISA一步法检测HBsAg有影响，可造成标本假阳性。     

32例两对半中单一HBeAg阳性的结果分析

我们在对病人血清标本进行乙型肝炎五项指标检测时,发现有32例单一HBeAg阳性的乙型肝炎病例。我们对其病人的血清进行稀释,测定其HBSAg,发现有10例是阳性。现报告如下：1材料与方法1．1标本来源本院门诊及住院患者的血清。1．2试剂与方法乙型肝炎五项指标检测均为＊u＊A法,试剂由深圳华元生物制品有限公司提供,严格按说明书操作。我们对单一HBeAg阳性血清,用0．9％生理盐水5倍稀释后,用ELISA法测定其HThSAg。2结果与讨论32例单一HBeAg阳性中,将血清5倍稀释,重新测定其HBsAg,结果发现有10例是阳性。乙型肝炎e抗原的检出…     

避免HBsAg检测假阴性的简易法

酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法检测HBsAg的弊端是高浓度nssAg标本出现假阴性结果[1~4]．笔者将一步法稍加改进，即可避免假阴性，报告如下．1材料与方法1．1标本来源取自144倒在我院肝炎诊室和住院病人的血液。1．2HBsAg试剂盒ELISA一步法，亚利生物制品公司产品。1．3方法ELISA一步法（原法）：按说明书操作；改进ELISA一步法（改进法）：加完血清标本即快速转动固相板30s，室温放置5min（若批量检测可免计时），反扣弃掉固相板里的血清（原法不弃去血清），其余操作步骤同原法。2结果与讨论2．1144例血清用改进法和原法检测…     

Cobas E602电化学发光免疫分析仪检测HBcAb结果分析

目的 通过Cobas E602电化学发光免疫分析法（ECLIA）与酶联免疫吸附法（ELISA）对临床标本对比检测分析,探讨ECLIA检测HBcAb的结果意义模式,为临床提供科学的指导意义,同时确保同一实验室内同一项目结果的一致性.方法 收集60例患者标本,用ECLIA法分别同时测定原倍血清和1∶30稀释后血清,与临床常用的ELISA法测定1∶30稀释后血清的结果进行对比统计分析.结果 ECLIA法测得原倍血清的HBcAb阳性率（48.3%）明显高于ECLIA法和ELISA法测定1∶30稀释后血清阳性率（35.0%和38.3%）,两者差异有统计学意义（χ2=8.53,P〈0.01）,两种方法同时测定原倍血清和1∶30稀释后血清中的HBcAb阳性符合率分别为93.4%和91.4%,差异无统计学意义（χ2=1.29,P〉0.05）.结论 ECLIA法定量测定乙肝时,HBcAb测定标本必须用1∶30稀释后的血清,确保同一实验室内ECLIA法与ELISA法检测结果的一致性.     

HBV血清标志物特殊模式的实验研究

目的：探讨乙型肝炎血清标志物(HBVM)特殊模式的类型及其特点。方法：应用ELISA法对3318例乙型肝炎血清标本进行乙肝5项血清标志物检测，并对其中60例血清标本进行HBV-DNA(PCR法)检测。结果：从3318例乙型肝炎血清中共检出特殊模式158例．阳性率为4．8％。特殊模式可分HBsAg阳性和HBsAg阴性两大类型．HBsAg阳性类型98例，占HBVM特殊模式62％．共7个模式；HBsAg阴性类型60例．占HBVM特殊模式38％．共3个特殊模式。60例HBsAg阴性特殊模式中，HBV-DNA均为阳性。结论：乙型肝炎血清标志物(HBVM)特殊模式可分HBsAg阳性和HBsAg阴性两大类型，共10个特殊模式。HBsAg阳性的特殊模式主要表现为HBsAg与HBsAb同时阳性或HBeAg与HBeAb同时为阳性；HBsAg阴性的特殊模式主要表现为HBsAg阴性与HBeAg阳性。了解HBVM特殊模式的类型及其特点对乙肝的诊断、治疗及流行病学调查，乙肝疫苗的研究及效果评价提供了一个新的研究思路。     

检测乙型肝炎表面抗原的一步法试剂的钩状效应分析

目前,我国检测HBsAg绝大多数采用ELISA中的双抗体夹心双位点一步法。用该方法检测HBsAg,当标本中的HBsAg浓度过高时,会因钩状效应(HOOK)现象出现假阴性而造成漏检,严重威胁着人民的健康。HBeAg和HB-cAb两项阳性时,大多数HBsAg都为阳性,HBsAg阴性者也可能存在漏检问题。所以笔者将HBeAg和HBcAb两项阳性的血清标本进行不同比例稀释后,再用一步法和二步法分别进行检测和比较,以探讨一步法试剂的HOOK在HBsAg检测的漏检情况和二步法的临床实用价值。     

梅毒螺旋体感染不同血清学诊断方法的临床评价

目的：使用酶联免疫吸附测试验（ELISA）方法替代快速血浆反应素试验（RPR）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）方法确定诊断梅毒螺旋体感染的必要性。方法：使用目前国内最为常用的梅毒螺旋体感染诊断RPR和TRUST试剂及ELISA试剂检测阴阳性献血员标本，同时与梅毒螺旋体明胶凝剂试验（TPPA）的检测结果进行比较，从而得到各种试剂的检测假阴性和假阳性率。结果：在对30份阳性和20份阴性标本的检测中，所用一种RPR试剂和两种TRUST试剂的假阳性率，分别为15．0％（3／20）、10．0％（2／20）和10．0％（2／20），假阴性率分别为30．0％（9／30）、23．3％（7／30）和43．3％（13／30）；而两种ELISA试剂均无假阳性，有一家试剂出现1例假阴性。ELISA试剂的假阳性和假阴性率均明显低于RPR和TRUST试剂（P＜0．01）。结论：在梅毒螺旋体抗体的临床检测中，有必要使用ELISA方法替代RPR和TRUST方法。     

低气温下金标法检测HBsAg效果的评价

目的：了解在低气温(低于10℃)下金标法检测HBsAg的灵敏度和准确率，探讨检测环境温度对其结果的影响。方法：用金标法和ELISA法两种方法检测963名高中毕业生的HBsAg，并进行结果对比。结果：ELISA法检出71份HBsAg阳性标本，用金标法只检出50份阳性标本，当时检测环境的气温约为8℃。金标法检出阳性的标本经ELISA法检测，其结果均为阳性。ELISA法检出的阳性标本用金标法检测却有21份为阴性，漏检率为29．6％，再把阴性的21份标本用金标试纸重做，并做人37℃温箱，15分钟后看结果。结果又检出16份为阳性，还有5份标本为阴性。结论：用金标法检测HBsAg存在假阴性，灵敏度比ELISA法低。特别是在气温较低(低于10℃)的情况下准确率会降低，出现假阴性结果。在西藏高原雪域的大部分地区目前尚未建立血站，输血前只用快速的金标法做HPsAg检测，应特别注意检测环境的温度和操作，以免漏检，造成HBV输血感染，不是十分紧急的输血，应该用ELISA法作HBV的检测．     

单采血小板乙型肝炎病毒表面抗原快速检测的漏检分析

目的：通过比较胶体金法和酶联免疫法检测前端漏检单采血小板献血员标本结果,分析快速检测筛查漏检原因。方法采用金标法和酶联免疫法再次检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg ）前端筛查阴性、采集后酶联免疫吸附试验（ELISA）检测呈反应性的31例单采血小板献血员标本,对结果进行对比分析。结果31例前端漏检标本ELISA检测结果均为阳性,再次用胶体金法检测有16例阴性,15例阳性,总的一致性为48．4％。ELISA阳性标本中S/CO值小于10前端筛查漏检再次用胶体金法检测为阳性结果的有3例,阴性14例,一致性为9．7％;S/CO值在10～30时用胶体金法检测为阳性的标本总共有14例,阴性为2例,一致性为45．2％;S/CO值大于30的9例标本再次用胶体金法检测全部检出,一致性为100．0％。结论试剂检测方法不同所致的分析灵敏度差异和检测过程中操作不当是 HBsAg漏检的主要原因,胶体金试剂与ELISA试剂包被片段不同以及观察时间不够也是单采血小板 HBsAg漏检的常见原因。     

HBsAg和抗HCV EIA检测试剂质量监控的简易方法

一、材料①EIA抗-HCV和HBsAg检测试剂盒．②2NCU／ml抗-HCV或1ng／ml和1万ng／mlHBsAg参考血清（卫生部临床检验中心）．③抗-HCV和HBsAg阴性血清各10份（自留）．④伯乐450型酶标仪．二、方法1.将EIA抗-HCV或HBsAg检测试剂量室温平衡．2．用2NCU／ml抗-HCV或1ng／ml和1万ng／mlHBsAg参考血清，以及留取的抗-HCV或HBsAg阴性血清代替检测标本，按试剂说明进行操作．3．比色读取吸光度，计算阳性阈值（Cutoff，CO）．然后计算出各检测标本的S／CO比值（S为检测标本吸光度）．S／CO比值≥1．0者为阳性，反之，S／CO比…     

丁型肝炎病毒抗体IgM与乙型肝炎病毒标志物的相关性

目的：探讨酶联免疫吸附法（ELISA）检测丁型肝炎病毒抗体IgM（抗－HDIgM）与乙型肝炎病毒标志物（HBV—M）的相关性。方法：对182例执一HDIgM阳性标本进行HBV－M检测，并用变性正常人IgG中和部分乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性标本和全部HBsAg阴性标本后再检测抗－HDIgM。结果。182例执－HDIgM阳性标本经中和试验排步RF干扰后，仅有122例阳性。HBsAg阳性标本在中和试验前后执－HDIgM阳性例数不变；HBsAg阴性标本则由中和试验前伪65例抗－HDIgM阳性文为多例，其余为阴性；并且。抗－HDIgM与HBV－M相关性“模式”也由12种变为7种，HBsAg阳性率和用性率在中和试验前后有显著性差异（P＜0．005）。结论：HBsAg阳性患者可根据执－HDIgM诊断混和感染HDV；HBsAg阴性患者必须进行其它试验如聚合酶链反应（PCR）检测HDV—RNA后才能诊断混和感染HDV，任性活动性ABV感染患者比急性HBV感染患者更容易混和感染HDV。     

HBsAg阳性患者乙肝病毒表面大蛋白水平的变化及其与ALT的关系

目的 探讨HBsAg阳性患者体内乙型肝炎病毒表面大蛋白（IMBs）水平变化及其临床意义。方法 采用酶联免疫吸附实验（ELISA）对1066例HBsAg阳性血清标本进行IMBs检测，全自动生化分析仪检测ALT。结果 ①与正常对照组比较，HBsAg（＋）HBeAg（＋）、HBsAg（＋）HBcAb（＋）、HBsAg（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）、HBsAg（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）、HBsAg（＋）HBsAb（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）组IMBs含量均显著升高（P〈0．05）；0708份IMBs阳性血清ALT与358例阴性组比较，两者有显著性差异（t=2．095，P〈0．05）。结 论定量检测IMBs有助于了解HBsAg阳性患者的疾病活动状态。