实验室保存的恙虫病东方体Karp株与福建省分离株的sta56基因的序列分析

目的比较实验室保存的恙虫病东方体Karp株、福建省两个分离株的sta 56基因序列的差异。方法提取感染各株恙虫病东方体的Vero细胞的DNA,扩增出sta56的ORF。对不同株的ORF进行测序,对15株恙虫病东方体的sta56构建进化树并进行分析。结果实验室保存的Karp株的sta56基因序列有98%与参考株一致;FQ株和NA株仅有两个碱基的差异,有96%的序列与Karp株一致。结论实验室保存的Karp株sta56基因在长期传代中可发生变异,FQ株和NA株均属于Karp株。     

立克次氏体传染病

恙虫病东方体Karp株相对分子质量为47蛋白基因的克隆与表达;实验室保存的恙虫病东方体Karp株与福建省分离株的sta 56基因的序列分析；我国近十年斑疹伤寒疫情概况及分析。     

恙虫病东方体黑龙江分离株的PCR分型

目的　鉴定恙虫病东方体黑龙江分离株的基因型。方法　采用PCR技术对分离自黑龙江省密山地区的 6株恙虫病东方体sta5 6kD目的基因进行分析研究 ,并与国际参考株进行比较。结果　MSAa930 1株、MSAa930 3株、MSAa930 4株及MSAp930 5株属于Gilliam型 ;MSAa930 6株属于Karp型 ;MSAp930 2株属于Kato型。 结论　黑龙江密山地区恙虫病东方体存在Gilliam、Karp和Kato 3种型别。     

云南省永善县恙虫病流行病学调查

目的 对云南省永善县恙虫病开展流行病学调查。方法 应用胶体金免疫试验对发热患者血清进行恙虫病东方体(Orientia tsutsugamsushi)IgG和IgM抗体检测,采用夜夹法诱捕调查地区鼠类,用巢氏PCR方法对鼠脾脏做groEL基因片段扩增和基因序列分析。结果 2015年5-10月在永善县发现恙虫病患者34例,其中实验室确诊病例21例,临床诊断病例13例;主要发病于8月,占总病例数的32.35%;40—49岁年龄组发病最多,占总病例数的32.35%;农民发病数最多,占总病例数的79.41%;有焦痂或溃疡的病例占总病例数的94.12%,其中位于腹股沟最多(占有焦痂或溃疡患者的31.25%);有皮疹的病例占总病例数的50.00%。在捕获的39份黄胸鼠(Rattus flavipectus)脾组织样品中,恙虫病东方体groEL基因片段扩增阳性9份(阳性率23.08%)。groEL基因片段序列进化树分析显示本次检测到的YSP30株与的HSB1、FAR1、UAP4等Saitama型菌株的遗传进化关系最密切, 检测到的其余8株与UT213、UT221、SH205等Karp型菌株的遗传进化关系最密切。结论 血清学和分子生物学方法证实了永善县存在恙虫病疫源地,当地存在Karp和Saitama相关的2种基因型恙虫病东方体。     

西沙群岛恙螨所携恙虫病东方体的序列分析

目的　用分子生物学技术鉴定西沙群岛恙虫病东方体的基因序列 ,探讨南海岛屿恙虫病疫源地的形成。方法　以巢式聚合酶链反应 (NPCR)检测西沙群岛恙螨所携恙虫病东方体的 5 6kDa蛋白基因片段 ,继而将NPCR产物克隆进pGEM-T载体并且测序 ,测序结果在国际互联网作多序列比较和进化树分析。结果　从西沙群岛收集的恙螨扩增出 5 0 7bp目的片段 ,序列分析证实与Karp株同源性 85 % ,与Gilliam株同源性 6 8% ,与Yonchon株同源性 6 7% ,与Kato株同源性 6 5 %。结论　西沙群岛的恙螨携带恙虫病东方体以Karp型为主。     

恙虫病东方体sta56部分基因的克隆和表达

目的 构建恙虫病东方体sta56基因的重组表达质粒,并在E.coli中表达Sta56重组抗原。方法 从恙虫病东方体Karp株基因组中扩增出sta56基因的ORF及其中长1053bp的大片段,用TA克隆技术将此大片段克隆,并以重组质粒为模板,扩增编码Sta56抗原亲水氨基酸区的一段长342bp的DNA,插入pProEX HTb载体,转化大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达,用SDS-PAGE及Western blot进行分析。结果 从恙虫病东方体基因组中扩增出sta56基因的ORF,以截短片段构建了重组表达质粒pHTbOt342,SDS-PAGE显示蛋白表达带的分子量约为15.4kDa,Western blot证实该融合蛋白能被恙虫病患者阳性血清所识别。结论 在大肠杆菌中表达的Sta56重组蛋白具有免疫反应性。     

珠海市恙虫病东方体基因型研究

目的 对广东省珠海市恙虫病东方体进行基因分型。方法 予高热期恙虫病患者静脉采血后,立刻床旁小白鼠腹腔接种,待发病后解剖,取其腹壁刮液涂片、吉姆萨染色镜检;以巢式PCR进行恙虫病东方体DNA检测和序列分析,将结果进行同源性分析。结果 床旁小白鼠腹腔接种,腹壁刮液涂片镜检可见紫红色圆形、椭圆形、短杆状恙虫病东方体菌体。10例恙虫病患者进行特异性的巢式PCR扩增,其中6例扩增出目的基因片段,阳性率为60%。将扩得珠海恙虫病东方体基因片段的DNA序列与基因库序列进行比对,发现其与韩国株Yonchon株同源性最高,大于95%,系统进化树显示其与Karp株在同一分支。结论 珠海市为恙虫病的自然疫源地,该地区恙虫病东方体的基因型与Yonchon株最相近。     

应用PCR/RFLP对山东地区恙虫病东方体的基因型分析

目的　鉴定山东地区恙虫病东方体的基因型。方法　采用聚合酶链反应 /限制性片段长度多态性分析 (PCR/RFLP)技术对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病病人全血中提取的DNASta5 6基因进行分析研究 ,并与NestedPCR基因分型的结果进行比较。结果　山东地区 35份标本 ( 2 3株恙虫病东方体山东分离株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及 10份恙虫病人全血 )提取的DNA群引物扩增产物经HinfⅠ、HhaⅠ、SnaBⅠ酶切后呈现 2种不同的RFLP图谱 ,经与已知序列的Ot内切酶图谱相比 :33份Ot内切酶图谱与文献报告的日本地方株—Kawasaki株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏HhaⅠ的酶切位点 ;另 2份与Karp参考株具有相同的酶切图谱。该结果与NestedPCR基因分型的结果相一致。结论　山东地区恙虫病东方体流行株主要基因型与日本地方株Kawasaki型类似 ,但与日本地方株存在遗传差异 ;同时还有Karp型Ot存在。采用PCR/RFLP方法可以准确对Ot-Sta5 6基因分型。     

山西恙虫病立克次体分型及其56—kD蛋白基因序列分析

作者在我国新发现的山西恙虫病疫区病人血液中分离出3株恙虫病立克次体，SXh951，Sxh952，Sxh953。为明确其分类地位．对其进行了血清型，基因型和56－kD蛋白基因的部分序列分析。用免疫荧光抗体染色法将病人血清抗体与Karp,Gilliam．Kato株抗原反应．结果显示山西株与Gilliam型一致；用来自56－kD蛋白基因的引物扩增后，分别用限制性核酸内切酶Hinfl，HaeⅢ．Hhal消化DNA片段的多态性（PCR／RFLP）显示山西3株基因型一致，但均与Karp，Kato，Gilliam株的电泳图谱不同，显示为一独有的PCR／RFLP基因型；对Sxh951株56-kD蛋白基因片段扩增产物（1．2kb）进行DNA序列分析后．根据所推导氨基酸序列，比较Sxh951株与三个标准株氨基酸序列的同源性，发现Sxh951株与Karp、Kato和Gilliam株均有明显差异。对此，本实验室正在进一步研究，以便进一步确定其分类地位。     

云南省恙虫病与肾综合征出血热混合感染的诊断及分析

目的 调查云南省不明原因发热患者中是否存在恙虫病与肾综合征出血热混合感染病例.方法 采用间接免疫荧光法和胶体金法检测不明原因发热患者血清中的恙虫病东方体(OT)抗体及肾综合征出血热(HFRS)病毒抗体,用巢式PCR扩增患者血液中的OT 基因sta56片断与汉坦病毒(HV)基因L片断.结果 79例患者中,实验室确诊HFRS 5例,恙虫病3例,HFRS与恙虫病混合感染4例;巢式PCR检测到HV L片断核酸2例(DLR2和DLR6), 序列分析两者间的同源性100%,DLR2与老挝汉城病毒L0199株核苷酸序列同源性最高为94.6%, 与中国汉城病毒L99株的同源性80.5%, 与云南汉坦病毒YN06-256的同源性69.8%.结论 首次证实云南省存在恙虫病与肾综合征出血热混合感染病例,其HFRS病原体遗传进化关系与老挝汉城病毒L0199株密切相关.     

恙虫病东方体CMY株sta56基因片段序列分析

目的　了解恙虫病东方体 Ｃ Ｍ Ｙ 株与其它株的关系。方法　测定 Ｃ Ｍ Ｙ 株 ｓｔａ５６ 基因片段的核苷酸序列并与其它株相应序列进行比较。结果　在测定的３２４ｂｐ 序列中, Ｇ Ｃ 含量为４３５ ％ ; 与 Ｋａｒｐ 、 Ｇｉｌｌｉａｍ 、 Ｋａｔｏ 、ｋｕｒｏｋｉ、 Ｋａｗａｓａｋｉ 及 Ｓｈｉｍｏｋｏｓｈｉ 株相应序列的同源性分别为９１０ ％ 、８７３ ％ 、８７０ ％ 、８７３ ％ 、８６１ ％ 及７３８ ％ 。结论　 Ｃ Ｍ Ｙ 株与已报道的恙虫病东方体菌株不同, 与 Ｋａｒｐ 株有很高的同源性。     

南澎列岛恙虫病东方体分离株的基因分型

目的 用分子生物学技术鉴定南澎裂岛恙虫病东方体及其分型。方法 以巢式聚合酶链反应（NPCR）检测南澎列岛恙虫病东方体8个分离株的56kD蛋白基因片段,阳性产物进行限制性片段长度多态性分析（RFLP）。选择其中4株的PCR产物克隆进pGEM－T载体并且测序,测序结果在国际互联网作多序列比较和进化树分析。结果 7株分离株扩增出500bp目的片段,RFLP分析表明南澎列岛存在三种不同的恙虫病东方体。从4个样品获得7个克隆,序列分析证实2个克隆（DY1,DY21）与Yonchon同源性99％,3个克隆（DY22,NY12,NS2）与Karp株同源性92％,2个克隆（NY11,NS1）与Kato株同源性98％。南澎列岛存在Karp,Kato,Yonchon三种类型的恙虫病东方体。     

Sequence analysis of Orientia tsutsugamushi DNA from mites collected in the Xisa archipelago,China

The genotype of Orientia tsutsugamushi DNA from mites in the Xisa archipelago of China were identified. A natural focus of tsutsugamushi disease in the archipelago was found. The DNA sequence that codes for the 56 kDa protein of O. tsutsugamushi was amplified by nested polymerase chain reaction (N-PCR). The purified positive products were cloned into a pGEM-T vector and sequenced. The DNA sequence was compared with various sequences on the internet for sequence homology. A 507 bp DNA fragment encoding the 56 kDa protein was amplified from the samples. The sequence homology was 85% (Karp strain), 68% (Gilliam strain), 65% (Kato strain), and 67% (Yonchon strain). Orientia tsutsugamushi is carried by the mites of the Xisa archipelago; the main genotype is the Karp strain.     

应用NPCR发现我国Kawasaki型恙虫病立克次体

本文报告用恙虫病立克次体表面蛋白５６ＫＤａ型特异抗原基因编码区的引物，采用嵌合式聚合酶链反应鉴定江苏地区的２株恙虫病立克次体。结果该２株恙虫病立克次体与ＧｉｌｌｉａｍＫａｒｐ，Ｋａｔｏ和Ｋｕｒｏｋｉ型特异引物无任何ＤＮＡ扩增带，而与日本Ｋａｗａｓａｋｉ株型特异引物扩增后有５２３ｂｐ的ＤＮＡ扩增带，表明我国存在Ｋａｗａｓａｋｉ型恙虫病立克次体。     

Serologic classification of scrub typhus isolates from Pakistan.

Detailed serologic characterization of 79 isolates of Rickettsia tsutsugamushi from Pakistan was performed by using complement fixation and direct immunofluorescence techniques for comparison with three prototype strains. Seventy-one were of the Karp serotype and one was of a Gilliam serotype. Seven isolates were multiply-reactive: one with Karp and Gilliam, 3 with Karp and Kato, and 3 with Karp, Gilliam and Kato, No strain failed to react with at least 1 of the 3 prototype antisera. No correlation of antigenic types with local geographic factors, animal hosts, vecotr mites, or specific strain virulence was observed. These findings suggest the possibility that antigenic heterogeneity may be more restricted in areas peripheral to the geographic epicenter of scrub typhus endemicity, that the serotypes are relatively stable genetically and that new geographic variants are probably infrequent. The importance of these findings to the practical problems of immunoprophylaxis and serodiagnosis are discussed.     

Follow-up analysis on the epidemic strains of Orientia tsutsugamushi in the first outbreak of scrub typhus in Henan Province, China

To obtain knowledge of the genetic characteristics and types of the epidemic strains of Orientia tsutsugamushi in the first outbreak of scrub typhus in Henan Province, genus and type-specific primers were employed to amplify a fragment of the gene of 56 kDa protein. Serotyping demonstrated that, of the 19 patients [15 patients in recovery phase (10-40 days) and 4 of patients in acute phase (1-7 days)], 4 were infected with Gilliam type, 8 with Kato type, 6 with Karp type, and 1 with an unknown type. Successful genotyping was obtained for only 3 patients, indicating that 2 were infected with Karp type and 1 with Taiwan Kato type. Thus the outbreak of scrub typhus in Henan Province was caused by at least two epidemic strains.