雪旺细胞体外培养的研究进展

近年来,人们研究发现,雪旺细胞(SC),作为周围神经系统的主要胶质细胞,其功能极其活跃,它能分泌多种神经营养因子及轴突引导因子,维持周围微环境的稳定,防止神经元胞体死亡和促进神经元轴突的再生;合成和分泌诸如层黏连蛋白(LN),纤维黏连蛋白(FN)及Ⅰ、Ⅲ和Ⅴ型胶原等细胞外基质和细胞黏附因子,与神经系统的发育和再生有着密切的关系,尤其是在神经系统损伤后功能恢复上有着重要的作用。     

高糖对体外培养雪旺细胞影响的研究进展

雪旺细胞在糖尿病周围神经病变过程中起着重要的作用，近年来伴随组织细胞体外培养技术的日趋成熟，探讨体外高糖环境对雪旺细胞的影响逐渐成为研究新热点。本文就近年来高糖环境对体外培养雪旺细胞影响的相关研究作一综述。     

格林巴利血清蛋白对体外培养的雪旺细胞的影响

目的：探讨格林巴利血清蛋白对聚酯纤维上雪旺细胞粘附力的影响。材料和方法：实验组和对照组分别用含格林巴利血清蛋白的培养液和含健康者血清蛋白的培养液培养聚酯纤维网架上SD大鼠的雪旺细胞（SchwannCellSC);常规培养组用小牛血清培养液培养,在培养60min,120min,4h,8h,24h,72h观察SC的形态和对纤维粘附力的变化。结果：和常规培养组比较,对照组SC无明显差异;实验组从120min到8h,已包卷纤维的单个SC或SC链由梭形变为球形或者聚集成团;最后,绝大部分SC溶解成碎屑漂浮在纤维旁;24h,有少量新的SC从神经段迁移到纤维上。结论：格林巴利血清蛋白降低SC的粘附力是髓鞘脱失的重要因素。     

雪旺细胞分步消化培养及其纯化实验研究

目的：探讨双酶分步消化法从乳兔周围神经中分离培养雪旺细胞，以及纯化获得高纯度的雪旺细胞的方法。方法：采用出生1周内乳兔的坐骨神经，先用胰蛋白酶消化分离出一部分细胞，移出后，再予胶原酶消化分离其余的细胞，计算上两步消化后的活细胞的百分率，另外采用：(1)无任何处理；(2)单纯双30min差速贴壁；(3)Ara—c；(4)Geniticin纯化法，以及后3种方法联合应用进行纯化，计算雪旺细胞的纯度。结果：采用分步消化法所得到的活细胞百分率分别为96．5％以上和95％以上，无任何处理的雪旺细胞纯度为85％，单纯双30min差速贴壁纯度为90％，Ara—c纯化的纯度为91％，Geniticin纯化的纯度为95％，(2)、(3)、(4)方法的联合应用纯化的纯度为98％。结论：双酶消化法和联合应用双30min差速贴壁、Ara—c、Geniticin纯化是获取高纯度雪旺细胞的理想方法。     

一种新的组织块培养新生大鼠雪旺细胞方法(英文)

目的:为了建立一种组织块培养雪旺细胞的有效方法,为周围神经组织工程修复的研究提供种子细胞。方法:本研究从新生大鼠的周围神经分离雪旺细胞,经组织块法培养并纯化,观察并记录其形态特征;经HE染色以及S-100免疫组化染色鉴定并计算其纯度。结果:结果显示,4 d后,获得的雪旺细胞突起呈双极或三极,S-100阳性细胞纯度达到95%以上。结论:上述结果表明该方法快速有效,所获得的雪旺细胞纯度高、活性好。     

一种简便的雪旺细胞培养方法

目的介绍一种简便的雪旺细胞培养方法。方法采用反复组织块种植法,进一步在2.5%胎牛血清条件下抑制成纤维细胞生长,进行雪旺细胞培养;以S-100抗体染色鉴定雪旺细胞。结果获得纯度在98%以上的大量高活性雪旺细胞。结论本方法可以简便的获得较高纯度的雪旺细胞,值得进一步推广。     

人体正中神经源雪旺细胞培养技术

雪旺细胞 (ＳＣ)是周围神经系统中一种功能特殊的胶质细胞 ,它不仅与周围神经发生、发育以及形态、功能密切相关 ,而且在周围神经受损后修复与再生过程中起重要作用。研究表明ＳＣ一方面能产生多种神经营养因子 ,这些神经营养因子在神经受损后能维持神经元存活 ;另一方面ＳＣ可以产生细胞外基质、细胞粘着分子 ,对神经轴突再生起支持和引导作用 ,为神经轴突提供适宜再生的微环境[1] 。ＳＣ的培养是研究ＳＣ及其产物的作用的前提 ,也为临床用于周围神经受损后修复、再生提供ＳＣ移植的材料来源[2 ] 。然至今动物实验很多[4] ,而人体ＳＣ培养…     

体外培养雪旺氏细胞纯化方法的探讨

本文比较了雪旺氏细胞体外培养的主要纯化方法,单纯酶消化法、阿糖胞苷抑制法、差速贴壁分离法、低浓度酶传代法、综合纯化法,以寻找有效的纯化方法。结果显示,综合纯化法获得的SCs纯度最高。     

中国对弓形虫体外培养和分离纯化的研究

本对我国弓形虫的体外培养及分离纯化技术，进行综合概述。     

神经组织的体外培养方法

本文综述了神经组织植块培养方法与神经元分离细胞培养方法及其新进展。重点讨论神经元体外培养时有关材料获取、培养基的选择与改良、分离神经元培养方法、体外生长特征等方面的问题。另外，对神经干细胞的体外培养也作了简要介绍。     

基于雪旺细胞-背根节神经元共培养建立周围神经髓鞘化体外模型

目的:为探讨雪旺细胞与背根节(DRG)神经元髓鞘化共培养的标准化方法,并建立周围神经髓鞘化体外模型。方法:采用新生大鼠DRG神经节组织块培养法和胚胎大鼠DRG神经节分散培养法分别进行雪旺细胞和DRG神经元的培养和纯化,将雪旺细胞接种到培养DRG神经元的盖玻片上,按髓鞘化共培养程序进行雪旺细胞-DRG神经元共培养。结果:(1)雪旺细胞和DRG神经元的纯度、数量及比例;(2)共培养载体的包被基质;(3)髓鞘化共培养步骤和培养基成分是影响髓鞘形成的关键因素。原代雪旺细胞和DRG神经元S-100、神经元特异性烯醇化酶免疫荧光染色结果显示其纯度分别达到95%、90%;在髓鞘化培养基中共培养14d后相差显微镜和扫描电子显微镜下均观察到雪旺细胞包裹DRG神经元轴突形成髓鞘节段,髓鞘碱性蛋白免疫荧光染色结果显示免疫反应性;共培养体系和髓鞘结构可保持两个半月左右。结论:基于雪旺细胞和DRG神经元的条件化共培养能建立一种可靠的周围神经髓鞘化体外模型,为周围神经髓鞘化的主要调节因素及其作用机制研究提供有效的实验模型。     

Effect of Xymedon on Cell Survival in the System Sensory Neuron Schwann Cell

Pyrimidine derivative xymedon inhibits neuronal death in L4-L5 spinal ganglia 30 days after ligation of rat sciatic nerve. After treatment with xymedon the number of neurons on the operated side decreased by 22.1% compared to that on the contralateral side, while in the control group this parameter decreased by 28.7%. At the same terms, the number of Schwann cells on the operated side after xymedon injection increased by 27.7% in comparison with that on the contralateral side, while in the control group this parameter decreased by 57.3%.     

体外培养Schwann细胞缺氧模型的建立

目的:建立体外培养Schwann细胞的缺氧模型。方法:取体外培养Schwann细胞,置于通入体积分数为5%CO2和95%N2的有机玻璃盒中继续缺氧培养10、15和20min,用H-E染色观察细胞形态,MTT比色试验检测细胞的活力。结果:缺氧10min组细胞形态及活力与正常组无明显差异;而缺氧15min组的细胞突起回缩,活力为缺氧前的66·3%;缺氧20min组的细胞多数死亡,活力仅为缺氧前的20·6%。结论:本方法可以成功建立有效、简便、易行的Schwann细胞缺氧模型。     

体外器官培养法评价四种高分子材料毒性

本文应用玻璃管架法培养鸡胚股骨的体外器官培养法评价了指关节、Ⅴ型节育环、男性依赖性假体修复件和宫颈帽四种硅橡胶材料,并进行了组织学观察和电镜的超微结构变化检查。结果显示:组织学观察,阴性对照毒性分级为0级,阳极对照毒性分级Ⅳ级,男性依赖性假体修复件硅橡胶的毒性分级为Ⅱ级,余为Ⅰ级。超微结构电镜观察,阴性对照软骨细胞呈双核,核大,核膜完整,胞浆中的内质网丰富,有少量空泡。阳性对照细胞明显变性,胞膜破裂,细胞器溶解,部分核膜破裂,核内有空泡变性。男性依赖性假体修复件硅橡胶所致细胞浆内部分区域细胞器结构不清楚,粗面内质网数目较少,显示了轻微的毒性反应,其它三种材料未见异常,四种材料中以男性依赖性假体修复件材料对组织器官的影响较为明显,但均属轻度毒性反应。     

雪旺细胞分离技术的研究

作者用酶消化的方法分离雪旺细胞（Schwanncell，SCs），比较了匀浆与否，及不同浓度的胰酶、胶原酶、胰酶／胶原酶混合液对不同材料所获分离SCs数量的影响。发现：1．不同酶的消化效果有一定的差异，其中胶原酶最好，胰酶／胶原酶混合液次之。2．浓度高的酶较浓度低者分离的细胞多。3．匀浆后用酶消化较不匀浆者效果好。4。匀浆后用酶消化，SCs数于20分钟时达到高峰；若不匀浆，酶消化30-40分钟SCs数才达到高峰。5．从脊神经节分离获得的SCs较坐骨神经者多。     

利用贴壁特点提取和纯化乳鼠雪旺细胞

目的主要利用乳鼠的雪旺细胞比成纤维细胞贴壁快的特点,介绍简单而快速提取和纯化乳鼠雪旺细胞的方法。方法取3天SD大鼠双侧坐骨神经,在解剖镜下剥离去除神经外膜,剪碎后用Ⅰ型胶原酶消化,差速法去除成纤维细胞,分小皿培养进一步纯化细胞;光镜下计算细胞纯度;S-100免疫荧光鉴定细胞性质。结果获取的雪旺细胞纯度大于96%;S-100免疫荧光鉴定细胞为阳性。结论本方法可以简单而快速地获得高纯度雪旺细胞。     

SchWann细胞在壳聚糖纤维上的立体培养

目的：探讨壳聚糖纤维与体外培养Schwann细胞的相容性和亲和力。方法：新生SD鼠的臂丛和坐骨神经组织块种植于壳聚糖纤维支架上培养Schwann细胞。结果：壳聚糖纤维支架上的Schwann细胞为橄榄形或椭圆形,细胞在纤维上分裂、迁移,形成链状结构,细胞突起的末端呈扁平状膨大,伸出爪形伪足贴附于纤维。结论：壳聚糖纤维不仅与Schwann细胞的相容性良好,而且对在其表面培养的Schwann细胞形成髓鞘可能有诱导作用。     

雪旺细胞无血清条件培养液中的神经营养蛋白活性

目的　进一步探测雪旺细胞无血清条件培养液中神经营养蛋白活性 .方法　收集成年大鼠坐骨神经雪旺细胞无血清条件培养液 (Schwanncellserum -freecondionedmedium ,SC -SFCM ) ,通过PM10超滤获取 >10Kd浓缩液 ,再经Disc -PAGE分离和Biotrap电洗脱 ,从SC -SFCM中分离出A、B、C、D四组蛋白带 ,选择其最佳活性浓度 ,四组蛋白带按照 7种不同组合加入脊髓前角神经元 (SAHN)培养液中 ,通过MTT法进行神经营养活性检测 .结果　含D蛋白带的各组 ,其OD值均显著高于对照组 p <0 .0 1) ,而不含D蛋白带的其它各组 ,其OD值与对照组比较无显著性差异 (p >0 .0 5 ) .结论　来自于SC -SFCM中的D蛋白带具有明显促进SAHN体外存活的神经营养活性     

人角膜缘干细胞的体外原代培养和生物学鉴定

目的　建立人角膜缘干细胞体外培养方法,观察其生物学特性。方法　用含20%胎牛血清1640培 养液对人角膜缘干细胞进行体外培养,进行形态学观察和免疫细胞化学鉴定。结果　植块3～4d后细胞开始贴壁 生长,10～15d形成良好的单层,细胞呈圆形、卵圆形,类角膜上皮细胞;免疫细胞化学染色显示,培养第11d,少量 细胞表达AE5,大量细胞表达p63。结论　应用20%胎牛血清1640培养液组织培养的方法获得的原代培养细胞具 有与正常角膜缘干细胞相一致的生物学特性。