敲低Piezo2对人结肠癌细胞HCT116和SW620增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨敲低机械敏感性离子通道Piezo2对人结肠癌细胞HCT116和SW620增殖、迁移侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测结直肠癌组织及其相应癌旁组织中Piezo2的mRNA和蛋白表达情况;Western blot检测Piezo2在正常结肠上皮细胞NCM460、结肠癌细胞SW480和HCT116、结肠癌淋巴结转移细胞SW620的表达;将HCT116、SW620细胞系稳定转染Piezo2敲低慢病毒载体,利用RT-qPCR和Western blot检测转染后HCT116和SW620细胞的Piezo2表达情况;CCK-8法检测转染后HCT116和SW620细胞的增殖能力;Transwell法和细胞划痕修复实验检测转染后HCT116和SW620细胞的侵袭和迁移能力;通过裸鼠皮下成瘤检测HCT116和SW620细胞敲低Piezo2后肿瘤大小变化,通过免疫组化检测ki67表达。结果 RT-qPCR及Western blot实验显示,癌组织Piezo2的mRNA和蛋白表达均高于癌旁组织（P均<0.05）;Wes...     

参山固体饮料对人结直肠癌细胞HT-29增殖和迁移的影响

目的:探讨药食同源药膳产品参山固体饮料在体外对人结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移的影响。方法:①将不同质量浓度的参山固体饮料、参山固体饮料中药总组分及参山固体饮料真菌总组分分别体外作用于人结直肠癌HT-29细胞,采用CCK-8法检测其对HT-29细胞增殖的影响。②将不同质量浓度的参山固体饮料(5、10、20 g·L~(-1))作用于人结直肠癌HT-29细胞,倒置显微镜观察HT-29细胞形态变化。③将人结直肠癌HT-29细胞分为对照组、参山固体饮料10 g·L~(-1)组,干预后采用Transwell小室迁移实验和细胞划痕实验检测HT-29细胞的迁移能力。结果:①与对照组和参山固体饮料真菌总组分组比较,参山固体饮料及参山固体饮料中药总组分能显著抑制HT-29细胞增殖,其IC_(50)值分别为11.382 g·L~(-1)、2.882 g·L~(-1);②与对照组比较,形态学观察发现参山固体饮料组HT-29细胞密度明显减小;③参山固体饮料干预后,HT-29细胞的迁移能力减弱(P<0.05)。结论:参山固体饮料及参山固体饮料中药总组分可以显著抑制人结直肠癌HT-29细胞增殖;参山固体饮料对人结直肠癌HT-29细胞迁移具有抑制作用。     

参山固体饮料对人结直肠癌细胞HT-29增殖和迁移的影响

目的:探讨药食同源药膳产品参山固体饮料在体外对人结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移的影响。方法:①将不同质量浓度的参山固体饮料、参山固体饮料中药总组分及参山固体饮料真菌总组分分别体外作用于人结直肠癌HT-29细胞,采用CCK-8法检测其对HT-29细胞增殖的影响。②将不同质量浓度的参山固体饮料(5、10、20 g·L~(-1))作用于人结直肠癌HT-29细胞,倒置显微镜观察HT-29细胞形态变化。③将人结直肠癌HT-29细胞分为对照组、参山固体饮料10 g·L~(-1)组,干预后采用Transwell小室迁移实验和细胞划痕实验检测HT-29细胞的迁移能力。结果:①与对照组和参山固体饮料真菌总组分组比较,参山固体饮料及参山固体饮料中药总组分能显著抑制HT-29细胞增殖,其IC_(50)值分别为11.382 g·L~(-1)、2.882 g·L~(-1);②与对照组比较,形态学观察发现参山固体饮料组HT-29细胞密度明显减小;③参山固体饮料干预后,HT-29细胞的迁移能力减弱(P0.05)。结论:参山固体饮料及参山固体饮料中药总组分可以显著抑制人结直肠癌HT-29细胞增殖;参山固体饮料对人结直肠癌HT-29细胞迁移具有抑制作用。     

Survivin反义寡核苷酸对人结肠癌细胞HT29增殖和凋亡的影响

[目的]观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对HT29细胞增殖和凋亡的影响。[方法]针对sur- vivin基因序列设计合成survivin反义寡核苷酸并通过脂质体将其转染至HT29细胞中。噻唑蓝(MTT)法观察survivin ASODN对HT29细胞的细胞毒作用,测定IC_(50);Hoechst33342/PI双荧光染色后,观察转染survivin A- SODN后HT29细胞核变化;流式细胞仪检测细胞周期。[结果]200、400、600、800、1 000及1 200 nmol/L survivin ASODN分别处理HT29细胞44 h后,Ic_(50)值为1 000 nmol/L。200、400、600、800和1 200 nmol/L组抑制率分别为(12.38±7.96)%、(22.30±4.49)%、(26.51 4±3.08)%、(38.90±3.66)%和(63.97±4.50)%。1 000 nmol/L survivin ASODN处理HT29细胞36 h后,经Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到染色质高度浓缩、边缘化,凝集成明亮的团块。流式细胞仪检测1 000 nmol/L survivin ASODN处理HT29细胞36 h后,G_2期细胞显著增多。[结论]Survivin ASODN可显著抑制HT29细胞增殖,诱导其凋亡。Survivin靶向治疗可能成为结肠癌综合治疗的一种重要方法。     

骨髓间充质干细胞促进结肠癌细胞HT29增殖和迁移

目的 探讨骨髓来源的间充质干细胞(bone marrowe-derived mesenchymal stem cells,BD-MSCs)对结肠癌细胞HT29的增殖与迁移能力的影响及其可能的机制.方法 将BD-MSCs与结肠癌细胞系HT29共培养,并观察共培养后对结肠癌细胞的增殖和迁移能力的影响.通过Transwell实验检测共培养组与对照组细胞在迁移能力方面的差异;CCK-8实验、克隆形成和成球实验检测HT29细胞的体外增殖能力;体内成瘤实验比较共培养组和对照组细胞的成瘤能力差异;机制的阐明是通过荧光定量PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测共培养组与对照组细胞间E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、Fibronectin、Snail1、Snail2、Twist1和Twist2的表达差异.结果 结肠癌细胞系HT29在与BD-MSCs共培养后,增殖能力显著增强(P＜0.05).与对照组相比,与BD-MSCs共培养后的HT29细胞的迁移能力[(259.6±19.23)个细胞/视野vs (81.6±15.74)个细胞/视野]显著增强(P＜0.05).克隆形成率[(37 ±2.94)％ vs (15.33±2.87)％]和成球率[(31±3.27)％vs(10.33±2.62)％]均显著提高(P＜0.05).在体内成瘤实验中,与BD-MSCs共同注射的实验组所成肿瘤的体积是显著大于对照组的,并且所成肿瘤的重量也是具有显著差异的[(1.73 ±0.62)g vs (0.54 ±0.81)g,P ＜0.05].最终在mRNA和蛋白水平检测到,与对照组细胞相比,与BD-MSCs共培养的HT29细胞中上皮样标记物E-Cadherin出现显著下调表达,而间质样标记物Vimentin和Twist1则显著上调表达.结论 骨髓来源的间充质干细胞促进结肠癌细胞HT29的增殖与迁移.     

黄连乌梅药对不同配伍比例的指纹图谱研究

目的:通过对比黄连乌梅药对的HPLC指纹图谱,探讨该药对的配伍原理。方法:以色谱柱:AgilentHC-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);检测波长:230nm;柱温:25℃为色谱条件,流动相:乙腈(A)-0.02mol/L磷酸二氢钾0.2%磷酸(B)梯度洗脱;检测波长:230nm;柱温:25℃为色谱条件,建立黄连乌梅药对的指纹图谱。结果:以黄连、乌梅单煎液作为对照,确定了13个共有峰,建立了不同配伍比例的指纹图谱。结论:乌梅与黄连的配伍比例趋近于1时,黄连中的盐酸药根碱、巴马汀、小檗碱溶出率达到最大。     

复方黄连降糖片对GK大鼠糖脂代谢紊乱的影响

目的：观察复方黄连降糖片对2型糖尿病（T2DM）糖脂代谢紊乱的影响。方法：将27只GK大鼠按血糖随机分为模型组,复方黄连降糖片组（中药组）与二甲双胍组（西药组）,饲以高脂饮食;另设Wistar大鼠12只作为正常组。各组给予饮用水或药物灌胃8周,并在治疗后测定空腹血糖（FPG）、糖负荷2h血糖（2hPG）、随机血糖（RPG）、糖化血红蛋白（HbAlc）、血清胰岛素（Ins）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、肝脏甘油三酯（Liver-TG）。结果：与正常组比较,模型组大鼠出现糖脂代谢紊乱,血糖、HbAlc、LDL-C、Liver-TG、TC显著升高,Ins显著降低。与模型组比较,治疗组血糖、HbAlc、TC、LDL-C、Liver-TG均显著降低,Ins有升高趋势。结论：复方黄连降糖片能显著降低GK大鼠的血糖、HbAlc、TC、LDL-C、Liver-TG水平,从而调整其糖脂代谢紊乱状况。     

复方黄连降糖片对GK大鼠糖脂代谢紊乱的影响

目的:观察复方黄连降糖片对2型糖尿病(T2DM)糖脂代谢紊乱的影响。方法:将27只GK大鼠按血糖随机分为模型组,复方黄连降糖片组(中药组)与二甲双胍组(西药组),饲以高脂饮食;另设Wistar大鼠12只作为正常组。各组给予饮用水或药物灌胃8周,并在治疗后测定空腹血糖(FPG)、糖负荷2h血糖(2hPG)、随机血糖(RPG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、血清胰岛素(Ins)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、肝脏甘油三酯(Liver-TG)。结果:与正常组比较,模型组大鼠出现糖脂代谢紊乱,血糖、HbAlc、LDL-C、Liver-TG、TC显著升高,Ins显著降低。与模型组比较,治疗组血糖、HbAlc、TC、LDL-C、Liver-TG均显著降低,Ins有升高趋势。结论:复方黄连降糖片能显著降低GK大鼠的血糖、HbAlc、TC、LDL-C、Liver-TG水平,从而调整其糖脂代谢紊乱状况。     

反义CDK4基因抑制人结肠癌细胞HT29生长

目的 将反义CDK4导入人结肠癌细胞株HT29细胞,观察其对肿瘤细胞生长的影响。方法 采用lipofectamine转染方法转染HT29细胞,Northern印迹,Western印迹,形态学和流式细胞术等方法用于转染效果的鉴定。结果 转化细胞有反义CDK4的表达,而内源性CDK4mRNA表达和蛋白合成下调,并且转化细胞的恶性行为及表型部分逆转,细胞生长受到抑制、软琼脂集落形成能力明显降低,同时揭示G1期阻滞。HT29-asCDK4细胞有较高的凋亡率。结论 反义CDK4基因可抑制HT29细胞的生长和增殖、诱导其凋亡。为结直肠癌的基因治疗提供了一种新的可能的途径。     

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT116和HT29的增殖与凋亡

目的:观察青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度青蒿琥酯处理HCT116和HT29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测青蒿琥酯对人结肠癌细胞的增殖抑制效应,采用流式细胞术检测细胞凋亡的情况。结果:不同浓度青蒿琥酯(7.5、15、30、60、120μg/m L)处理两种人结肠癌细胞48 h后,抑制率随浓度增加呈上升趋势(HCT116:19.42%、24.59%、44.84%、74.15%、92.87%;HT29:11.77%、17.63%、34.23%、48.51%、70.59%)。不同浓度青蒿琥酯(0、60、120μg/m L)处理两种人结肠癌细胞24 h后凋亡率随浓度增加逐渐上升(HCT116:2.46%、51.36%、64.10%;HT29:1.14%、35.95%、43.45%)。结论:青蒿琥酯对人结肠癌CHT116和HT29细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用。     

鸦胆子素D对结肠癌HT29细胞株增殖的抑制及诱导其凋亡的机制

目的 探讨鸦胆子素D对结肠癌细胞株HT29增殖的抑制及诱导其凋亡的机制。方法 人结肠癌细胞株HT29经不同浓度鸦胆子素分别作用24、48、72h后,应用CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测鸦胆子素D对HT29细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测鸦胆子素D对HT29凋亡的影响;Western blot法检测HT29细胞株经不同浓度鸦胆子素D处理24h后以及20μmol/L的鸦胆子素D处理24、48、72h后,细胞中JNK、p-JNK的表达。结果 不同浓度鸦胆子素D分别作用结肠癌HT29细胞24、48、72h后,细胞存活率随药物浓度升高,细胞存活率降低,细胞的凋亡率增加。HT29细胞株经不同浓度鸦胆子素D处理24h后以及20μmol/L的鸦胆子素D处理24、48、72h后,JNK蛋白表达随鸦胆子素D作用时间延长而下调,p-JNK则相应上调。结论 不同浓度的鸦胆子素D随着浓度的增加及时间的延长,结肠癌HT29细胞的存活率降低、凋亡率增高,呈明显的作用-时间-药物浓度依赖性。     

紫草素对人大肠癌HT29细胞化疗增敏作用研究

目的:研究紫草素对人大肠癌HT29细胞奥沙利铂化疗增敏作用及其机制。方法:体外培养并取对数生长期人大肠癌HT29细胞,设紫草素(0.5 mg·L^-1)、奥沙利铂(25 mg·L^-1)、联合[紫草素(0.5 mg·L^-1)+奥沙利铂(25 mg·L^-1)]组,并设空白对照组。给药干预48 h后,CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、激活型Caspase-3的表达。结果:较空白对照组,紫草素组人大肠癌HT29细胞处于G0/G1期比例升高且G2/M期比例降低(P<0.05;P<0.01),Bax蛋白表达量升高且Bcl-2表达量降低(P<0.05;P<0.01)、Bax/Bcl-2值升高(P<0.01),激活型Caspase-3蛋白表达量升高(P<0.01)。较奥沙利铂组,联合组人大肠癌HT29细胞增殖率明显降低(P<0.05);细胞凋亡率显著升高(P<0.01);处于G0/G1期细胞比例升高而G2/M期比例降低(P<0.05;P<0.01);Bax、激活型Caspase-3蛋白表达量升高且Bcl-2表达量降低(P<0.05;P<0.01),Bax/Bcl-2值显著升高(P<0.01)。结论:紫草素具有提高人大肠癌HT29细胞奥沙利铂化疗敏感性的作用,机制可能与紫草素阻滞细胞周期进程、调节凋亡相关蛋白表达而促进HT29细胞凋亡有关。     

二甲双胍对人结肠癌HT29细胞的抑制作用及可能机制

目的 探讨二甲双胍对人结肠癌HT29细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。 方法 体外培养人结肠癌细胞株HT29,随机分为2组,二甲双胍干预组采用5,10,20及40 mmol/L的二甲双胍进行干预,对照组加入等量PBS液,干预24,48及72 h后用MTT法检测细胞的增殖情况。二甲双胍干预组HT29细胞在上述各浓度的二甲双胍干预24 h后,于光镜下观察形态学改变; 40 mmol/L的二甲双胍干预48 h后,行AnnexinV-FITC和PI染色,并采用流式细胞术检测分析凋亡情况。二甲双胍干预组二甲双胍干预浓度为5及40 mmol/L,对照组加入等量PBS液,干预48 h,Western-blot法检测PI3K,AKT,P-AKT,GSK-3β及P-GSK-3β蛋白的表达。 结果 二甲双胍可抑制结肠癌HT29细胞的增殖,并呈时间-剂量依赖性,各组间抑制率差别有统计学意义(P均<0.05)。光镜下可见细胞数目减少,由多边形变为圆形,体积缩小,核固缩,细胞核溶解,且随着二甲双胍浓度的增高,细胞凋亡比例升高。流式实验结果显示,干预48 h的二甲双胍干预组凋亡率大于对照组(P<0.05)。Western-blot检测结果显示,二甲双胍可抑制HT29细胞的PI3K,P-AKT及P-GSK-3β蛋白表达量,且呈浓度依赖性,而对AKT及GSK-3β蛋白表达量无明显影响。 结论 二甲双胍可抑制人结肠癌HT29细胞的增殖能力并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT/GSK-3β通路相关蛋白的表达有关。     

STAT6基因沉默对结肠癌细胞增殖的影响

目的:研究细胞信号传导子和转录激活子6(STAT6)信号传导通路与结肠癌细胞增殖的关系及其可能机制。方法:构建STAT6特异的shRNA慢病毒表达载体,转染人结肠癌细胞HT-29,以阻断STAT6信号通路;用RT-PCR方法检测STAT6 mRNA表达和流式细胞术检测磷酸化STAT6蛋白(pSTAT6)表达来验证构建效果;流式细胞术分析细胞周期变化;MTT法检测肿瘤细胞增殖状况;RT-PCR和Western blot观察p21^(WAF1)、p27(WAF1)、p27^(KIP1)基因表达。结果:成功构建STAT6特异的shRNA慢病毒表达载体;STAT6基因沉默的结肠癌细胞中细胞增殖受到明显抑制(F=62.527,P<0.001);STAT6信号通路被阻断的结肠癌细胞中p21(KIP1)基因表达。结果:成功构建STAT6特异的shRNA慢病毒表达载体;STAT6基因沉默的结肠癌细胞中细胞增殖受到明显抑制(F=62.527,P<0.001);STAT6信号通路被阻断的结肠癌细胞中p21^(WAF1)、p27(WAF1)、p27^(KIP1)基因表达明显增多(P<0.01)。结论:STAT6信号传导通路能促进结肠癌细胞增殖,可能是通过调节p21(KIP1)基因表达明显增多(P<0.01)。结论:STAT6信号传导通路能促进结肠癌细胞增殖,可能是通过调节p21^(WAF1)、p27(WAF1)、p27^(KIP1)基因的表达起作用。     

Kiss-1与结肠癌SW480细胞增殖的关系

目的以结肠癌细胞SW480为模型,初步探讨Kiss-1基因过表达与结肠癌细胞增殖的关系。方法采用脂质体转染的方法将Kiss-1/pEGFP-N1重组质粒转染至SW480细胞,上调结肠癌细胞中Kiss-1的表达水平,经G418筛选出稳定表达株;根据细胞分为3组：阴性对照组（转染pEGFP-N1空载体）、实验组（转染pEGFPN1-Kiss1）及空白对照组（未转染）。Western blot检测转染后细胞中Kiss-1表达量的变化;采用CCK8试验分析Kiss-1对SW480细胞增殖的抑制效果。结果成功将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞,western blot检测出阴性对照组和空白对照组中显示Kiss-1低表达,实验组Kiss-1表达量增加,CCK8试验表明实验组细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。结论 Kiss-1可抑制结肠癌细胞的增殖率。     

盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞鸟氨酸脱羧酶表达的影响

[目的]观察盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达的影响.[方法]以不同浓度的盐酸小檗碱作用于HT29细胞72 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖抑制,采用荧光定量PCR法及Western blot方法分别检测ODC mRNA及蛋白的表达水平.[结果]盐酸小檗碱可抑制HT29细胞增殖,剂量依赖性地显著下调ODC蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),但对ODCmRNA表达无显著影响.[结论]盐酸小檗碱具有抑制HT29细胞的增殖作用,其机制可能与下调ODC蛋白表达相关.     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷联合苯丁酸钠对人结肠癌细胞HT29的抑制作用

目的:探讨DNA甲基化抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)联合组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(SPB)的抗肿瘤效应及其机制。方法:将HT29细胞分为:对照组、SPB(1mmol/L)处理组、5-aza-2dC(10μmol/L)处理组、5-aza-2dC(10μmol/L)+SPB(1mmol/L)处理组。MTT法测定各处理组细胞的生存曲线,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率和细胞周期。结果:生长曲线结果提示:5-aza-2dC和SPB均能抑制HT29细胞的生长增殖,但差异不明显,联合应用后,细胞增殖得到明显抑制;流式细胞术检测细胞凋亡结果显示:SPB、5-aza-2dC、SPB+5-aza-2dC处理HT29后,细胞凋亡率分别为11.32%、20.25%和42.37%,三者比较有统计学差异(P<0.05);细胞周期分布检测显示:与对照组相比,单用SPB处理细胞,细胞周期分布变化不明显,5-aza-2dC处理细胞后,59.02%的细胞周期阻滞在G1期,而SPB联合5-aza-2dC后,S期细胞比例明显减少,G1期细胞比例可达73.7%,4组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-杂氮-2′-脱氧胞苷联合苯丁酸钠可通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞发挥抗肿瘤作用。     

血根碱对人类宫颈癌细胞生长和转移的抑制作用

目的利用宫颈癌细胞株探讨血根碱（SAN）的抗肿瘤作用。方法采用MTT、克隆形成及细胞划痕试验研究不同浓度SAN对体外培养的人类宫颈癌HeLa和Siha细胞的影响。结果经1.0μmol/L和5.0μmol/LSAN处理后,Siha细胞的存活率分别为对照组的72%和10%（P〈0.01）,HeLa细胞比Siha细胞更敏感。用1.0μmol/LSAN处理后,HeLa和Siha细胞的克隆形成数从33个降低到14个和16个（P〈0.05）。划痕试验显示培养48h后,HeLa细胞和Siha细胞的“细胞伤口”宽度对照组分别为（0.51±0.04）mm和（0.64±0.02）mm,而0.5μmol/LSAN处理组为（1.22±0.02）mm和（1.63±0.01）mm（分别P〈0.01和P〈0.05）。MTT、克隆形成及细胞划痕试验均呈剂量和时间依赖性。结论SAN可抑制宫颈癌细胞的生长和转移。该研究为SAN作为一种新药应用于宫颈癌的治疗提供了初步的实验依据和理论基础。