小分子化合物ITE对肺癌H446干细胞增殖的作用及机制研究

目的:探讨小分子化合物I T E对人小细胞肺癌H446干细胞增殖的作用及机制.方法:免疫荧光法检测人肺癌H446干细胞中Oct4蛋白的表达.MTT法测定ITE对肺癌H446干细胞增殖的影响.Western blot法检测ITE对Oct4和Bcl-2蛋白表达的影响.结果:与H446亲本细胞相比,富集干细胞中Oct4的表达明显增加(P<0.05).与DMSO组相比,ITE呈浓度梯度依赖性地降低H446富集干细胞活力,20μM的ITE处理24 h可降低富集干细胞活力至0.46±0.03(P<0.05).与Control组相比,ITE显著下调富集干细胞中Oct4及Bcl-2蛋白表达(均P<0.05).结论:小分子化合物IT E可通过下调干细胞转录因子Oct4和凋亡抑制基因Bcl-2,抑制人H446干细胞的增殖.     

Rho激酶抑制剂Y-27632对肝癌HepG2细胞株增殖的影响及机制探讨

目的:体外观察Rho激酶抑制剂Y-27632与化疗药物联用对肝癌HepG2细胞增殖能力的影响.方法:Y-27632单独或与顺铂联用处理HepG2细胞株,M T T法检测肝癌HepG2细胞株的增殖能力;流式细胞仪分析HepG2细胞株凋亡情况;Western-blot、RT-PCR检测P53、Bax及Bcl-2蛋白的表达.结果:顺铂、Y-27632分别处理均能显著抑制HepG2细胞的生长,两药联用可产生协同效应(均P<0.05).顺铂可促进肝癌HepG2细胞株凋亡,Y-27632对细胞凋亡作用不明显,两药联用其凋亡效应显著增强(均P<0.05).顺铂能显著增加P53和Bax的表达、抑制Bcl-2的表达,Y-27632单用对Bcl-2表达的影响较小,两药联用其效应更明显.单用顺铂或Y-27632均能促进P53、Bax的m RN A表达,并抑制Bcl-2 m RN A表达,两药联用其效应更明显(均P<0.05).结论:Rho激酶抑制剂Y-27632能显著提高肝癌HepG2细胞株对顺铂的化疗敏感性.     

柚皮素对K562细胞的增殖抑制作用及其作用机制研究

目的观察柚皮素(naringenin,NG)对人慢性髓系白血病K562细胞株的增殖抑制作用及其对HO-1蛋白和Bcl-2蛋白表达的影响。方法将不同浓度的NG分别作用于K562细胞12、24、48小时,采用MTT法检测NG对K562细胞的生长抑制作用;采用流式细胞仪检测NG对K562细胞的诱导凋亡作用;免疫组织化学S-P法观察NG在不同浓度下作用于K562细胞48小时后,HO-1蛋白和Bcl-2蛋白的表达变化,采用光密度分析其结果,并对二者进行相关性分析。结果 NG 0、100、200、400、800μmol/L体外培养K562细胞12、24、48小时,NG 100~400μmol/L对K562细胞生长呈剂量依赖性抑制(P<0.05);在同一浓度下,NG对K562细胞生长呈时间依赖性抑制(P<0.05);同一浓度NG作用下,NG诱导的K562细胞凋亡率随培养时间的延长而升高(P<0.05),同一培养时间NG诱导的K562细胞凋亡率随NG浓度的增加而升高(P<0.05),提示NG诱导K562细胞凋亡的作用呈剂量依赖性增强;K562细胞与不同浓度NG培养48小时,随着NG浓度的升高,K562细胞的HO-1蛋白和Bcl-2蛋白表达逐渐下降(r=-0.884,r=-0.864,P<0.05),HO-1蛋白表达与Bcl-2蛋白表达呈正相关(r=0.950,P<0.05)。结论 NG对K562细胞具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能是通过减少K562细胞HO-1蛋白和Bcl-2蛋白的表达来实现。     

姜黄素联合顺铂对宫颈癌Hela细胞化疗敏感性的影响及机制探讨

目的研究姜黄素联合顺铂对宫颈癌Hela细胞化疗敏感性的影响以及机制,为临床实践提供参考和借鉴。方法选用人宫颈癌Hela细胞进行体外培养,利用不同浓度姜黄素(配伍顺铂方案)干预人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测药物对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制率;采用RT-PCR和Western blot法检测p53蛋白的表达情况,探讨姜黄素联合顺铂方案对宫颈癌Hela细胞化疗敏感性的影响以及机制。结果实验组对宫颈癌Hela细胞增殖的抑制率、诱导凋亡率明显高于对照组及姜黄素组(P<0.05);实验组COX-2、Caspase-3、Maspin的表达情况明显优于对照组及姜黄素组(P<0.05);不同浓度姜黄素作用24小时后,p53蛋白的表达随姜黄素浓度的增加而增加,差异具有显著性(P<0.05)。结论姜黄素联合顺铂对宫颈癌Hela细胞化疗敏感性具有重要影响,可以抑制宫颈癌Hela细胞的增殖并诱导细胞凋亡,能够增加其敏感性,这可能是通过增加p53基因的表达而实现的。     

大鼠弥漫性脑损伤Caspase-3表达及细胞凋亡的检测

目的研究大鼠弥漫性脑损伤脑细胞凋亡及Caspase-3表达的时程变化。方法参照Mamarou方法制作大鼠弥漫性脑损伤模型,免疫组化法检测Caspase-3蛋白在损伤脑组织中的分布,流式细胞术检测细胞凋亡率,透射电镜观察凋亡细胞的超微结构。结果弥漫性脑损伤后3 h皮层细胞Caspase-3表达增高,72 h达高峰,持续高表达至7 d。流式细胞术检测显示细胞凋亡在损伤后3 h增加,24~72 h为高峰期。结论弥漫性脑损伤后皮层Caspase-3表达增高,细胞凋亡率增高,细胞凋亡参与了脑损伤后的继发病理损害过程。     

依帕司他对四氯化碳致小鼠慢性肝损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨依帕司他对四氯化碳(CCl4)致小鼠慢性肝损伤的保护作用及机制.方法 将75只C57BL/6J小鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、阳性对照组(C组)、依帕司他低剂量组(D组)和依帕司他高剂量组(E组).A组小鼠腹腔注射橄榄油(2 mL/kg),其余各组小鼠腹腔注射等量体积分数0.20的CCl4橄榄油溶液,每周2次,持续8周.建模成功后A、B组小鼠灌胃生理盐水,C组小鼠灌胃甘草酸二铵50 mg/kg,D、E组小鼠分别灌胃依帕司他50、100 mg/kg,每天1次,连续给药4周.利用生化仪检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;利用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肝组织病理变化;采用TUNEL法检测各组小鼠肝细胞凋亡情况;采用ELISA法检测各组小鼠肝组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性;采用Western blot方法检测各组小鼠肝组织中B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平.结果 D、E组与B组相比,小鼠血清中ALT、AST水平显著下降(F=12.00、7.42,t=4.24～5.27,P<0.05);肝组织中MDA含量显著降低(F=7.70,t=3.58、4.98,P<0.05),SOD、GSH-Px、CAT活性显著上升(F=3.36～8.70,t=2.28～3.42,P<0.05);肝组织中Bcl-2蛋白表达水平显著上调(F=8.39,t=4.05、4.71,P<0.05),Bax及Caspase-3蛋白表达水平显著下调(F=6.46、5.29,t=2.75～4.36,P<0.05).E组与B组相比,小鼠肝细胞凋亡率显著下降(F=7.99,t=4.38,P<0.05).病理结果显示,D、E组与B组相比细胞水肿及坏死减轻,炎性细胞浸润减少.结论 依帕司他可能通过抑制氧化应激、减轻肝细胞凋亡来改善CCl4诱导的小鼠慢性肝损伤.     

吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的增殖、细胞周期、细胞凋亡及STAT3蛋白的影响

目的探讨吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的增殖、细胞周期、细胞凋亡及STAT3蛋白表达的影响。方法 MTT法测定吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的增殖抑制作用,PI单染流式细胞术检测人食管癌Eca-109细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测人食管癌Eca-109细胞的凋亡情况,蛋白质印迹法检测STAT3蛋白的表达情况。结果不同浓度吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的抑制率均明显高于正常对照组(P<0.05),且随着药物浓度的增加,抑制率越高;吉西他滨0.20 mg/L组、0.40 mg/L组及0.80 mg/L组G0/G1期人食管癌Eca-109细胞百分数逐渐下降(P<0.05),G2/M期细胞百分数无变化(P>0.05),而S期细胞百分数逐渐增加(P<0.05)。吉西他滨0.20 mg/L组、0.40 mg/L组、0.80 mg/L组细胞凋亡率均明显高于正常对照组(P<0.05),且上述三组的STAT3蛋白表达均低于正常对照组(P<0.05),呈剂量依赖性。结论吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞具有增殖抑制作用,阻滞细胞于S期,明显促进细胞凋亡,下调STAT3蛋白的表达。     

母系表达基因3对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响机制研究

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)对卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达和侵袭、迁移能力的影响。方法荧光定量聚合酶链反应检测卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞MEG3表达情况。通过慢病毒转染携带MEG3全长序列的载体和空白载体于SKOV3人卵巢癌细胞中,分别作为实验组细胞和对照组细胞,通过Transwell侵袭实验检测两组细胞的侵袭能力,通过Transwell迁移实验检测两组细胞的迁移能力,通过蛋白质印迹法检测两组细胞MMP-2和MMP-9的表达情况。结果人卵巢癌细胞SKOV3、OVCAR3和A2780中MEG3的表达显著低于人卵巢上皮细胞IOSE80(均P<0.05)。通过慢病毒转染外源性上调SKOV3细胞MEG3的表达,实验组细胞MEG3表达显著高于对照组(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示实验组穿过基质胶的细胞数显著少于对照组(P<0.05);Transwell迁移实验结果显示实验组迁入下室的细胞数显著少于对照组(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示实验组细胞MMP-2和MMP-9表达水平均显著低于对照组(均P<0.05)。结论 MEG3低表达于人卵巢癌细胞系,并可下调MMP-2和MMP-9的表达,抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。     

3种金属全冠修复对犬牙龈细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的检测钴铬合金、银钯合金及纯钛金属全冠修复后犬牙龈细胞中Bcl-2和Bax基因m RNA的表达,探讨3种材料全冠修复对细胞凋亡的影响。方法选取5只成年雄性实验犬,将每只犬的牙弓分为4个区,以每区的尖牙为实验对象,分别行钴铬合金(A组)、银钯合金(B组)及纯钛(C组)金属全冠修复,第4区为空白对照(D组);分别于修复后1、2、3个月采集尖牙牙龈组织,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测牙龈细胞中Bcl-2、Bax基因m RNA的表达并计算Bcl-2/Bax的比率。结果修复后3个月,A组Bcl-2/Bax的比率高于D组,差异有统计学意义(P0.05);修复后2、3个月,B组Bcl-2/Bax的比率低于D组,差异有统计学意义(P0.05);修复后1、2、3个月,C组Bcl-2/Bax的比率与D组相比,差异均无统计学意义(P0.05)。结论钴铬合金抑制牙龈细胞凋亡,银钯合金促进牙龈细胞凋亡,而纯钛对牙龈细胞的凋亡无明显影响。     

miR-122-5p对滑膜肉瘤细胞株SW982增殖及放疗敏感性的影响

目的:探讨miRNA-122-5p对人滑膜肉瘤细胞株SW982增殖及放疗敏感性的影响.方法:采用脂质体法分别转染miR-122-5p mimic和inhibitor至SW982细胞.流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,MTT法检测细胞活力.通过γ-射线干预细胞,分析其对放疗的敏感性.结果:与癌旁组织相比,滑膜肉瘤m iR-122-5p明显低表达,而且在转移者及低分化型中水平最低,而甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)的表达与之呈显著负相关(均P<0.05).与对照组相比,miR-122-5p mimic可上调miR-122-5p水平,下调MeCP2蛋白表达,抑制SW982细胞增殖,并增加SW982细胞对射线的放疗敏感性(均P<0.05);而过表达MeCP2却能阻断miR-122-5p的作用,增加细胞对放疗的抵抗(均P<0.05).结论:miR-122-5p在滑膜肉瘤中低表达,miR-122-5p/MeCP2轴参与调控肿瘤细胞增殖以及肿瘤细胞对γ-射线的放疗敏感性.