盐皮质受体对脂多糖诱导的巨噬细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3炎症复合体激活的作用及其机制

目的探讨盐皮质受体对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞炎症复合体激活的作用,并探讨其机制。 方法对小鼠巨噬细胞系RAW264.7,用LPS、嘌呤受体激动剂腺苷5′-（3-硫代三磷酸盐）四锂盐（ATP-γ-s）、盐皮质激素醛固酮（Ald）干预建立NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）炎症复合体模型;运用盐皮质受体阻滞剂螺内酯（SPI）、P₂X7嘌呤受体拮抗剂（A438）对LPS诱导的炎症复合体模型进行干预,分为生理盐水（NS）组、LPS组、LPS+SPI组、LPS+A438组、LPS+SPI+A438组,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组NLRP3炎症复合体的基因表达水平;使用三磷酸腺苷（ATP）检测试剂盒,检测LPS、Ald作用于RAW264.7细胞后培养上清ATP水平,并检测SPI对上述过程的干预作用。 结果LPS、Ald、ATP-γ-s干预RAW264.7细胞,细胞NLRP3的基因表达水平分别较NS组上调（2.51±0.42）、（2.22±0.28）、（2.07±0.11）倍,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;SPI、A438单独干预或SPI+A438同时干预,可以下调NLRP3的表达至NS组的（1.39±0.20）、（1.31±0.15）、（1.25±0.09）倍,均较LPS组显著下降（均P＜0.05）。LPS、Ald干预RAW264.7显著提高了细胞上清ATP水平,而SPI干预显著降低了LPS、Ald干预所致ATP释放,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。 结论SPI可能是通过阻断盐皮质受体以降低胞外ATP的释放,从而抑制LPS导致的NLRP3炎症复合体的激活。     

慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺组织中NLRP3炎症小体表达水平的变化及意义

目的 探讨NOD样受体热蛋白结构相关蛋白3(NLRP3)炎症小体在慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型中的变化及意义。方法 将30只雄性大鼠随机分为2组,正常对照组(n=10只)给予自由饮水和摄食,喂养75天; 吸烟组(n=20只)采用单纯吸入香烟烟雾的方法制造大鼠COPD模型,连续75天后再根据大鼠最大呼气流速(PEF)及气道肺组织病理变化分为吸烟COPD组(n=9只)和吸烟非COPD组(n=11只)。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计算巨噬细胞(AMC)、中性粒细胞(NEU)和淋巴细胞(LYM)的绝对计数。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别测定BALF,肺组织中NLRP3炎症小体的浓度以及NLRP3 mRNA的相对表达量。结果与正常对照组比较,吸烟非COPD组、吸烟COPD组BALF中NEU(×10⁶/L)(524.2±73.1,916.9±84.8 vs 106.6±31.8),AMC(×10⁶/L)(1 570.9±273.5,2 307.8±410.4 vs 496.6±61.7)和LYM(×10⁶/L)(72.1±14.7,115.4±23.8 vs 21.6±4.2),计数明显升高,吸烟COPD组BALF中NEU,AMC和LYM计数亦较吸烟非COPD组明显升高(F=350.59,100.57,82.63,均P<0.05)。与正常对照组比较,吸烟非COPD组、吸烟COPD组BALF(pg/ml)(107.8±23.5,126.7±34.9 vs 76.7±15.1),肺组织(pg/ml)(118.8±33.3,147.4±40.2 vs 84.1±21.5)中NLRP3炎症小体的浓度明显升高,与吸烟非COPD组比较,吸烟COPD组BALF,肺组织中NLRP3炎症小体的浓度亦明显升高(F=9.53,9.17,均P<0.05)。吸烟非COPD组和吸烟COPD组肺组织NLRP3 mRNA相对表达量均显著高于正常对照组(P<0.05),吸烟COPD组肺组织NLRP3 mRNA相对表达量显著高于吸烟非COPD组(P<0.05)。BALF,肺组织中NLRP3炎症小体浓度、肺组织NLRP3 mRNA相对表达量与NEU,AMC,LYM计数均呈显著正相关(P<0.05)。结论 NLRP3炎症小体参与了COPD慢性炎症的发生、发展,与肺组织炎症细胞以及气道病理改变密切相关,阻断NLRP3炎性小体的活化,有望成为治疗COPD新的靶点和方向。     

呼吸机相关肺损伤患者血清及诱导痰液NLRP3炎症小体的表达及与其它炎症因子的相关性

目的分析呼吸机相关肺损伤(VILI)患者血清及诱导痰液No d样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体及炎性因子的表达,探讨两者在VILI发病中的作用。” 方法测定76例VILI患者及30例健康体检者(对照组)的血清、诱导痰中NLRP3 炎症小体的表达,以及血清中白介素1β(IL-1β),IL-18,IL-6和肿瘤坏死因子-α(TN F-α)等炎性指标。根据Murray肺损伤评分(LIS)将VILI患者分为两个亚组:轻、中度肺损 伤组(LIS≤2.5分)、重度肺损伤组(LIS>2.5分)。分析各组NLRP3炎症小体与炎性因子的相 关性。结果轻中度肺损伤组、重度肺损伤组血清、诱导痰中NLRP3 炎症小体表达水平明显高于对照组［血清:106.3±29.3,131.1±37.1 vs 79.2±27 .3 pg/ml;诱导痰:95.1±24.4,119.2±36.7 vs 76.0±20.6 pg/ml］,重度肺损 伤组上述指标亦明显高于轻中度肺损伤组( t=3.82,4.03,均P <0.05)。与对照组比 较,轻中度肺损伤组、重度肺损伤组血清中IL-1β(8.7±2.4,11.6±2.7 vs　5.5± 1.9 pg/ml),IL-18(11.3±3.4,15.6±4.7 vs 4.5±1.3 pg/ml),IL-6(46.4± 12.1,74.6±24.8 vs　6.4±1.8 pg/ml),TNF-α(16.1±4.4,22.8±5.1 vs 　9.2±1.5 ng/ml)水平明显升高;与轻中度肺损伤组比较,重度肺损伤组血清中各炎性 因子水平亦明显升高( t=4.87,4.62,7.94,5.33,均P <0.05)。轻中度肺损伤组 患者血清、诱导痰中NLRP3炎症小体浓度与IL-1β,IL-18均呈显著正相关( P <0.05) 。重度肺损伤组患者血清、诱导痰中NLRP3炎症小体浓度与IL-1β,IL-18,IL-6,TNF- α均呈显著正相关( P <0.05)。结论 VILI患者血清、诱导痰中 NLRP3表达明显上调,且与炎性因子密切相关,参与VILI的发生、发展,阻断NLRP3炎性小体 的激活可能成为VILI的潜在治疗靶点。     

COPD患者血清PGRN、GDF-15和NLRP3炎性小体水平与病情严重程度的相关性及发病危险因素分析

目的 探讨血清中颗粒蛋白前体(PGRN)、生长分化因子-15(GDF-15)和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)及病情严重程度的关系,并分析其发病危险因素.方法 选取该院2020年1-5月收治的216例COPD患者为COPD组,根据不同病情分为稳定期组121例,急...     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体对冠状动脉支架植入术后支架内再狭窄的影响

目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达水平与冠状动脉支架植入术后支架内再狭窄(ISR)的相关关系.方法 选取住院治疗并成功行初次经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术的患者150例,术前、术后24 h应用免疫印迹法定量分析NLRP3.1年后复查冠状动脉造影,根据ISR诊断标准将患者分为ISR组(n=22)与对照组(n =128),分析NLRP3表达水平与ISR严重程度的相关关系.结果 1年后复查时,ISR组NLRP3表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.05),且在一定范围内随着ISR严重程度的升高,NLRP3表达水平可逐渐增高,二者存在简单线性正相关关系(r =0.862,P=0.001).结论 NLRP3表达水平与冠状动脉ISR严重程度呈正相关.     

细胞焦亡及NOD样受体家族Pyrin域蛋白3炎症小体在血液系统恶性肿瘤中的研究进展

细胞焦亡是一种由GSDM家族蛋白介导形成细胞膜孔道的炎性程序性细胞死亡过程,通常由炎性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-1、-4、-5、-11介导。细胞焦亡参与骨髓增生异常综合征(MDS)发病。细胞焦亡过程中产生的NOD样受体家族Pyrin域蛋白(NLRP)3炎症小体与血液系统恶性肿瘤的发生、发展密切相关。目前...     

罗汉果醇对脂多糖诱导急性肺损伤的作用及机制研究北大核心CSCD

目的通过脂多糖刺激小鼠以及人单核细胞THP-1诱导的急性炎症模型, 探索罗汉果醇促进AMPK磷酸化后靶向调控炎症通路的作用以及相关机制, 为罗汉果醇(MO)能否对急性肺损伤的临床治疗中得到应用提供研究证据。方法动物实验:取用24只6~8周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠, 采用随机(随机数字法)法将小鼠分为对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组, 每组各分配6只。对照组小鼠腹腔注射生理盐水(30 mL/kg),MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg),脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖(10 mg/kg), 脂多糖+MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg), 30 min后另一侧腹腔注射脂多糖(10 mg/kg)。经过12 h后, 处死小鼠取材, 并进行病理学、分子生物学检测。细胞实验:取用状态良好的THP-1细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中培养24 h后, 用100 ng/mL PMA诱导分化成巨噬细胞, 设置对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组。药物刺激结束后收集各组细胞悬液, 所得细胞及培养基上清液用于后续检测。结果与对照组相比, 脂多糖组的损伤程度明显, 组织切片的H&E染色结果中可见肺泡腔结构破坏, 炎症细胞浸润增多, 且有出血以及肺泡腔间隔明显增厚;在加入MO干预下, 小鼠肺组织的损伤程度大幅度改善, MPO、肺湿/干重比等也有了显著的降低。肺组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平也同样在MO的干预下显著下调[(2.96±0.10)vs. (5.53±0.14), (8.62±0.17)vs. (12.31±0.09), (3.01±0.09)vs.(4.85±0.36)]。在脂多糖组小鼠肺组织中炎性小体的主要成分蛋白NLRP3、caspase-1 p20、GSDMD-N、ASC表达量显著高于对照组,而脂多糖+MO组中AMPK磷酸化水平提高, 焦亡相关蛋白的表达均得到有效地抑制[(0.58±0.09)vs.(0.89±0.15)、(0.19±0.08)vs. (0.93±0.16)、(0.65±0.09)vs. (0.86±0.14)、(0.30±0.12)vs. (0.47±0.10), 均P<0.05];同时通过ELISA法测得在组织中焦亡的主要标志物炎症因子IL-1β、IL-18的分泌同样可以被MO缓解。而细胞实验中MO同样促进了AMPK的磷酸化, 抑制NLRP3炎症小体相关成分蛋白表达, 同时明显提高了细胞活力。结论 MO通过促进AMPK的磷酸化抑制NLRP3介导的细胞焦亡, 进而缓解脂多糖诱导的急性肺损伤。     

罗汉果醇对脂多糖诱导急性肺损伤的作用及机制研究

目的通过脂多糖刺激小鼠以及人单核细胞THP-1诱导的急性炎症模型, 探索罗汉果醇促进AMPK磷酸化后靶向调控炎症通路的作用以及相关机制, 为罗汉果醇(MO)能否对急性肺损伤的临床治疗中得到应用提供研究证据。方法动物实验:取用24只6～8周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠, 采用随机(随机数字法)法将小鼠分为对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组, 每组各分配6只。对照组小鼠腹腔注射生理盐水(30 mL/kg),MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg),脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖(10 mg/kg), 脂多糖+MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg), 30 min后另一侧腹腔注射脂多糖(10 mg/kg)。经过12 h后, 处死小鼠取材, 并进行病理学、分子生物学检测。细胞实验:取用状态良好的THP-1细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中培养24 h后, 用100 ng/mL PMA诱导分化成巨噬细胞, 设置对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组。药物刺激结束后收集各组细胞悬液, 所得细胞及培养基上清液用于后续检测。结果与对照组相比, 脂多糖组...