RGD多肽结合型长循环脂质体的肿瘤靶向性研究

目的 :研究RGD(精氨酸、甘氨酸、天门冬氨酸 )多肽结合型长循环脂质体的肿瘤靶向性。方法 :将长循环脂质体 ,通过共价键反应与RGD基元多肽进行结合 ,然后研究其在荷瘤小白鼠体内的肿瘤靶向性。结果 :RGD结合型长循环脂质体在Colon26荷瘤小白鼠体内具有较好的肿瘤靶向性。结论 :含RGD基元多肽结合型长循环脂质体可能成为一种新型的受体介导靶向制剂     

阿克拉霉素A毫微囊制备工艺及抑瘤试验

本文以氰基丙烯酸正丁酯（ＢＣＡ）为囊材制备了阿克拉霉素Ａ毫微囊（ＡＣＭ－Ａ－ＮＣ），利用均匀设计方案选出了较佳处方，加冻干赋型剂制得了阿克拉霉素Ａ毫微囊冻干品，冻干前后的平均粒经分别为（１２０±３４）ｎｍ和（１４６±３３）ｎｍ，应用凝胶过滤色谱法得阿克拉霉素Ａ的包封率为４７．６％，并进行了ＡＣＭ－Ａ－ＮＣ的ＬＤ５０测定以及对Ｓ１８０肉瘤，Ｐ３８８白血病的抑瘤实验，结果表明，ＡＣＮ－Ａ－ＮＣ降低了Ａ     

阿霉素,阿克拉霉素A及B对豚鼠离体心房的作用

阿霉素(ADR)是一种良好的抗肿瘤抗生素。但是由于其易致充血性心力衰竭而限制了临床应用.阿克拉霉素A(ACM-A)和阿克拉霉素B(ACM-B)为两种结构非常类似的蒽环类抗生素.实验比较了ACM-A和ACM-B与ADR对离体豚鼠心房的作用,结果表明三种药物在50μM浓度时,对右心房收缩频率均有抑制,对功能性不应期均延长,但对右心房收缩力及肾上腺素诱发的自律性无明显作用。ACM-B的作用强度与ADR相近,而ACM-A的作用较ADR弱。结果提示三种药物可能有相同的心脏作用机制,而ACM-A的心脏毒性可能较弱。     

阿克拉霉素A毫微囊制备工艺及抑瘤试验

本文以氰基丙烯酸正丁酯（ＢＣＡ）为囊材制备了阿克拉霉素Ａ毫微囊（ＡＣＭ－Ａ－ＮＣ），利用均匀设计方案选出了较佳处方，加冻干赋型剂制得了阿克拉霉素Ａ毫微囊冻干品，冻干前后的平均粒经分别为（１２０±３４）ｎｍ和（１４６±３３）ｎｍ，应用凝胶过滤色谱法得阿克拉霉素Ａ的包封率为４７．６％，并进行了ＡＣＭ－Ａ－ＮＣ的ＬＤ５０测定以及对Ｓ１８０肉瘤，Ｐ３８８白血病的抑瘤实验，结果表明，ＡＣＮ－Ａ－ＮＣ降低了ＡＣＭ－Ａ的毒性，其抗癌活性也有所改善。     

两种RGD肽修饰的新型阿霉素脂质体的体外表征

目的作为配体,肽对于多种受体显示出良好的靶向性,例如在肿瘤表面过度表达的整合素家族受体。本文主要研究和表征分别用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽和甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(GRGDS)五肽修饰的载药脂质体。方法分别采用RGD和GRGDS对包载阿霉素的立体稳定脂质体(SSL-doxorubicin)进行修饰,以制备RGD-SSL-doxorubicin和GRGDS-SSL-doxorubicin。在体外表征试验中,测定了各种脂质体的包封率、粒径、Zeta电位和释放率,采用SRB试验研究了各脂质体对卵巢癌细胞的细胞毒作用,并应用流式细胞仪和共聚焦显微镜考察了肿瘤细胞对各脂质体包封的阿霉素的摄取情况。结果所有脂质体的包封率均在95%以上,采用RGD或GRGDS进行的修饰并未影响长循环脂质体的包封率。各种脂质体的平均粒径在105.7±3.5nm和130.5±3.0nm之间,Zeta电位在–3.3±0.3和–6.1±0.3mV之间,在模仿体内环境的释放介质(含胎牛血清)中,12小时内约有2/5的阿霉素从脂质体中释放。与游离阿霉素相比,修饰后的脂质体对肿瘤细胞的抑制率略有下降;在研究对阿霉素摄取的流式细胞试验和共聚焦试验中,也有类似现象出现。将各种脂质体分别加入肿瘤细胞后,阿霉素主要分布于SKOV-3的细胞核。结论本研究成功制备了两种分别用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽和甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(GRGDS)五肽修饰的阿霉素脂质体。体外表征结果显示,该修饰不会显著改变立体稳定脂质体的性质。     

阿克拉霉素A毫微囊在大鼠体内的组织分布研究

本文利用反相高效液相色谱法测定了阿克拉霉素Ａ毫微囊（ＡＣＭ－Ａ－ＮＣ）在大鼠体内各组织的分布，结果表明：阿克拉霉素Ａ在肺，脾，小肠和胸腺分布较多，而心，肝、肾中分布较少，与ＡＣＭ－Ａ水溶液对比研究表明：ＡＣＭ－Ａ－ＮＣ在肺内分布量较其水溶液提高３．６倍。在脾中提高１．４位，肝中２．２倍，肾中１．６倍，胸脾中１．２倍，大肠１．１倍，心中约１．２倍。     

自组装白蛋白纳米粒作为阿克拉霉素A递送载体

目的 本研究旨在通过阿克拉霉素(ACM)共价结合氨基氧乙酸(AOA)产生的活性中间体,以降低ACM毒性和提高靶向药物.方法 采用三(2-羧乙基)膦(TCEP)作为二硫键断裂分子,通过分子间的"打开-中间-闭合"开关制备人血清白蛋白(HSA)的自组装纳米粒(Nanoparticle,NPs).结果 核磁共振氢谱(1 H-NMR)分析表明ACM和AOA之间的结合发生在ACM的酮基(12 C)位置.HSA纳米粒(NPs-ACM)负载ACM的载药量为7.4%.NPs-ACM的释放与pH相关.与游离ACM相比,NPs-ACM的细胞毒性和心脏毒性降低.体内研究表明,NPs-ACM对荷瘤小鼠靶向性比游离ACM高4倍(P<0.05).结论 纳米粒NPs-ACM前体药物是理想的ACM肿瘤靶向药物载体.     

Liposomes Modified with Cyclic RGD Peptide for Tumor Targeting

Cyclic RGD peptide anchored sterically stabilized liposomes (RGD-SL) were investigated for selective and preferential presentation of carrier contents at angiogenic endothelial cells overexpressing α_vβ₃ integrins on and around tumor tissue and thus for assessing their targetabilty. Liposomes were prepared using distearoylphosphatidylcholine (DSPC), cholesterol and distearoylphosphatidylethanolamine–polyethyleneglycol–RGD peptide conjugate (DSPE–PEG–RGD) in a molar ratio 56:39:5. The control RAD peptide anchored sterically stabilized liposomes (RAD-SL) and liposome with 5 mol% PEG (SL) without peptide conjugate which had similar lipid composition were used for comparison. The average size of all liposome preparations prepared was approximately 105 nm and maximum drug entrapment was 10.2±1.1%. In vitro endothelial cell binding of liposomes exhibited 7-fold higher binding of RGD-SL to HUVEC in comparison to the SL and RAD-SL. Spontaneous lung metastasis and angiogenesis assays show that RGD peptide anchored liposomes are significantly (p<0.01) effective in the prevention of lung metastasis and angiogenesis compared to free 5-FU, SL and RAD-SL. In therapeutic experiments, 5-FU, SL, RGD-SL and RAD-SL were administered intravenously on day 4 at the dose of 10 mg 5-FU/kg body weight to B16F10 tumor bearing BALB/c mice resulting in effective regression of tumors compared with free 5-FU, SL and RAD-SL. Results indicate that cyclic RGD peptide anchored sterically stabilized liposomes bearing 5-FU are significantly (p<0.01) active against primary tumor and metastasis than the non-targeted sterically stabilized liposomes and free drug. Thus cyclic RGD peptide anchored sterically stabilized liposomes hold potential of targeted cancer chemotherapeutics.     

RGD修饰的多柔比星脂质体的制备及体外抗肿瘤活性

合成了胆固醇-聚乙二醇-RGD (CHOL-PEG 2000-RGD),并经1H NMR确证结构.采用pH梯度法制备多柔比星脂质体,再以上述RGD衍生物为配体以后插入法制备RGD修饰脂质体.所得制品平均粒径为(122.5±2.8) nm,ζ电位为(-18.35±0.78) mV,包封率为(95.23±1.14)％,透射电镜显示脂质体形态为类球体.对黑素瘤细胞B16的体外生长抑制试验结果显示,原药、未修饰及经RGD修饰的多柔比星脂质体的IC50分别为0.264、0.191和0.106 μg/ml.且经RGD修饰的空白脂质体并无明显的细胞抑制作用.     

RGD肽修饰的异长春花碱-粉防己碱脂质体的制备及体外抑瘤作用研究

目的:制备RGD肽修饰的异长春花碱(VRB)-粉防己碱(TET)脂质体,研究其对脑胶质瘤C6细胞的抑制作用。方法:采用薄膜分散法和硫酸铵梯度法制备RGD肽修饰的VRB-TET脂质体,观察其形态和粒径分布,测定其中VRB的含量;以磺酰罗丹明B法分别测定空白靶向脂质体、VRB普通脂质体和RGD肽修饰的VRB-TET脂质体对C6细胞的抑制作用。结果:所制RGD肽修饰的VRB-TET脂质体呈圆球状或类圆球状,表面光滑,粒径为120 nm左右,其中VRB的平均含量为28.27μg/m L(RSD=0.38%,n=3)。空白靶向脂质体对C6细胞生长无显著影响;RGD肽修饰的VRB-TET脂质体能明显抑制C6细胞生长,其作用后细胞存活率明显低于VRB普通脂质体(P<0.05)。结论:成功制得RGD肽修饰的VRB-TET脂质体,其具有明显的抑制C6细胞生长的作用。     

黄芩苷脂质体的制备工艺研究

目的:探讨黄芩苷脂质体的制备工艺.方法:采用逆相蒸发法、乙醚注入法和薄膜超声法制备黄芩苷脂质体,SephadexG-50凝胶柱分离脂质体,UV-法测定包封率,Zetasizer3000粒度测定仪测定其粒径,透射电子显微镜进行形态学观察.结果:逆相蒸发法制备的黄芩苷脂质体平均粒径360nm,包封率56.02%;乙醇注入法平均粒径2600nm,包封率26.14%;薄膜-超声法平均粒径1200nm,包封率53.65%.结论:逆相蒸发法制备的黄芩苷脂质体粒径小,包封率高,条件易掌握,可作为黄芩苷脂质体的常规制备方法.     

白细胞介素2脂质体的制备及其抗肿瘤作用的研究

采用逆相蒸发法制备稳定的白细胞介素2（IL－2）大单层脂质体，对其包封率、稳定性及活性进行了测定。建立C57BL／6小鼠荷瘤动物模型，通过给荷瘤小鼠腹腔注射空白脂质体、单纯IL-2及IL-2脂质体来比较其在肿瘤生长中的抑制作用，结果3组抑癌率分别为4．26％、34．04％和54.60％。空白脂质体组与单纯对照组相比尤显著性差异（P＞0．05），脂质体-IL-2组与单纯IL-2组之间存在显著性差异（P＜0．05），抑瘤率提高了20.6％。     

辣椒碱脂质体的制备及体外透皮研究

目的：制备辣椒碱脂质体及通过体外透皮试验研究其可行性。方法：采用薄膜-超声法制备辣椒碱脂质体,以包封率为指标,在单因素试验基础上采用正交试验法,筛选最优处方。采用改良Franz扩散池进行透皮试验,比较辣椒碱混悬液、辣椒碱脂质体和辣椒碱软膏经大鼠离体皮肤的累积透过量。结果：辣椒碱脂质体的最佳处方：药脂比1∶5,100 mg吐温-80,50 mg维生素E,10 ml二氯甲烷,10 ml外水相PBS及pH 6.5,超声8 min。透皮试验12 h累积透过率：辣椒碱脂质体〉辣椒碱-PBS混悬液〉辣椒碱软膏;辣椒碱脂质体12 h累积透过量最多,且呈现明显的缓释效果。结论：所制备的辣椒碱脂质体包封率高,并具有良好透皮作用和缓释作用,该工艺简便易行。     

氧化苦参碱脂质体的制备及其质量评价

目的:制备氧化苦参碱脂质体并建立其质量评价方法。方法:采用逆相蒸发法,以包封率为检测指标,利用正交试验法优选处方和制备工艺;考察优选处方所制脂质体形态与粒径,并采用透析法结合反相高效液相色谱法测定其包封率。结果:最佳处方为磷酸盐缓冲液pH7.2,大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为2∶1,大豆卵磷脂与氧化苦参碱质量比为10∶1,水相与有机相体积比为1∶3;制备的脂质体为球状小囊泡,外观圆整,粒径范围60～150nm,包封率为60.72%;氧化苦参碱检测浓度线性范围为10～150μg.mL-1(r=0.9998),平均回收率为98.62%(RSD=1.47%,n=5)。结论:优选处方和制备工艺稳定可行,可为开发其新剂型提供参考。     

脱氧氟尿苷脂质体的制备及其质量评价

目的:优选脱氧氟尿苷脂质体的制备工艺及建立其质量评价方法。方法:采用逆相蒸发法制备脂质体,并以包封率为参考指标,以处方中卵磷脂与胆固醇摩尔比(A)、有机相与水相体积比(B)、脱氧氟尿苷浓度(C)、磷酸盐缓冲液pH值(D)为因素通过正交试验优选该脂质体的处方,并对脂质体粒径、包封率、稳定性、体外释药情况等进行考察。结果:最佳处方为A2:1、B5:1、C2mg.mL-1、D7.0。以此处方制备的脂质体平均粒径231nm,包封率(52.22±1.30)%,贮藏49d稳定性较好,与脱氧氟尿苷溶液比较具有明显的缓释性。结论:建立的脱氧氟尿苷脂质体制备方法简便、可行,以优选处方制备的脂质体质量符合要求。     

用连接叶酸的脂质体增加对体外培养的HeLa细胞的输送

在传代培养的ＨｅＬａ细胞上观察了叶酸对脂质体靶向摄取功能的影响。将内含钙黄绿素的叶酸．脂质体和脂质体分别加入ＨｅＬａ细胞中培养,并以荧光法检测细胞摄取量。共同培养４ｈ,细胞摄取叶酸一脂质体量为脂质体４倍以上,在０．４５ｍｇ·　ｍＬ~（－１）时达饱和;过量游离叶酸竞争抑制细胞对叶酸－脂质体的摄取;磷脂酶Ｄ或磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Ｃ通过影响叶酸受体而抑制细胞对叶酸－脂质体的摄取。因此,ＨｅＬａ细胞主要通过叶酸受体途径介导摄取叶酸－脂质体：叶酸受体高表达或高活性细胞摄取叶酸－脂质体的能力较未接叶酸的脂质体显著提高。     

盐酸5-氨基酮戊酸脂质体的制备与表征

目的 研究盐酸5-氨基酮戊酸(5-ALA)脂质体处方组成及制备工艺. 方法 采用薄膜分散 pH梯度法制备5-ALA脂质体,以包封率为评价指标进行正交实验筛选出最佳处方,采用高效液相色谱(HPLC)法测定其包封率. 并对其粒径、电位等理化性质进行研究. 结果最佳处方工艺为：卵磷脂与胆固醇的质量比为6：1,卵磷脂与5-ALA质量比为6：1,孵育温度为60 ℃. 所制脂质体为乳白色,平均粒径为100 nm,Zeta电位为-40 mV,平均包封率为65.0%. 结论 该制备方法 得到的5-ALA脂质体处方合理,工艺可行,包封率较高.