地塞米松对小鼠胚胎腭突间充质细胞增殖的影响

目的　探讨地塞米松对小鼠胚胎腭突间充质 (EPM )细胞增殖的影响。方法　在显微镜下解剖妊娠第 13d的鼠胚腭突 ,用 0 .2 5 %胰蛋白酶进行消化获得游离分散的EPM细胞 ,在DMEM培养基中进行培养 ,并采用反复贴壁法纯化EPM细胞。在培养基中加入 10 6M地塞米松 ,采用AgNOR染色、Feulgen染色及透射电子显微镜观察 ,检测地塞米松对EPM细胞增殖能力的影响。结果　地塞米松处理的EPM细胞银染颗粒数减少 (P <0 .0 1) ,核面积比及DNA合成能力下降 (P <0 .0 1) ,胞浆内线粒体数目减少 ,粗面内质网肿胀。结论　地塞米松对EPM细胞的增殖及生物合成有明显的抑制作用 ,影响腭突的正常发育 ,是腭裂发生的机制之一     

地塞米松对小鼠胚胎腭胚胎腭突间充质细胞增殖的细胞

目的 探讨地塞米松对小鼠胚胎腭突间充质（EPM）细胞增殖的影响。方法 在显微镜下解剖妊娠第13d的鼠胚腭突，用0．25％胰蛋白酶刊物消化获得游离分散的EPM细胞，在DEMF培养基中进行培养，并采用反复贴壁纯化EPM细胞。在培养基中加入10^-6M地塞米松，采用AgNOR染色、Feulen染色及透射电子量显微镜观察，检测地塞米松对EPM细胞增殖功能力的影响。结果 地塞米松处理的EPM细胞银梁颗粒数减少（P＜0．01），核面积比及DNA合成能力下降（P＜0．01），胞浆内线粒体数目减少，粗面内质网肿胀。结论 地塞米松对EPM细胞的增殖及生物合成有明显的抑制作用，影响腭突的正常发育，是腭裂发生的机制之一。     

在胚胎发育期腭突中嵴上皮细胞和腭间充质细胞与腭裂畸形

胚胎期腭突中嵴上皮细胞和腭间充质细胞的正常分化与否在腭裂的发生机制中起着重要的作用，近年来，国外学者对这两种细胞与腭裂发生的关系进行了较为深入的研究，结果证明致畸因子干扰其正常分化与腭裂发生有密切关系。     

不同浓度地塞米松对小鼠腭胚突间充质细胞作用规律的研究

目的 研究细胞水平地塞米松(Dex)致腭裂畸形的生物学机制,筛选出影响腭胚突间充质(EPM)细胞生长的地塞米松最适浓度.方法 腭胚突问充质细胞进行原代培养,实验组细胞分别以1×l0-9、1×10-8、1×10-7和1×10-6mol·L-1地塞米松加以干预,MTT比色法检测各组细胞的增殖率,碘化丙啶(PI)染色观察各组...     

ARHGAP29调控小鼠腭突间充质细胞增殖能力的研究

目的:探讨ARHGAP29对小鼠腭突间充质细胞增殖能力的影响.方法:免疫组织化学染色确定ARHGAP29在腭突组织中的表达;体外培养GD13.5小鼠腭突间充质细胞,免疫荧光染色鉴定细胞来源;合成3条Arhgap29基因特异性小干扰RNA进行体外沉默实验,利用Real-time PCR和Western blot检测沉默效...     

atRA对C57BL/6N小鼠腭突间充质细胞周期分布的影响及其作用机制

目的：在全反式维A酸（all-trans retinoic acid,atRA）诱导建立腭裂小鼠模型的基础上,检测胎鼠体内胚胎腭突间充质细胞的周期分布,并检测相关周期蛋白的变化情况,为进一步阐明维A酸（retinoic acid,RA）诱导腭裂机制提供新的线索。方法：以atRA建立C57BL/6N胎鼠腭裂模型,采用流式细胞术及免疫组化检测小鼠胚胎腭突间充质细胞的周期分布,通过实时定量RT-PCR和Western印记法检测p21和pRb在胎鼠胚胎腭突间充质中的mRNA和蛋白表达水平。采用SPSS11.0软件包对数据进行单因素方差分析和t检验。结果：流式细胞术及免疫组化检测发现,在小鼠妊娠日（gestation day,GD）第10天时给予atRA,可以诱导胎鼠胚胎腭突间充质细胞在一定妊娠阶段出现G1期细胞周期阻滞,同时也使胎鼠胚胎腭突间充质内p21和pRb的表达水平出现改变。而妊娠第12天（GD12）时给予atRA则无此现象。结论：p21与pRb参与了GD10时给予atRA诱导组胎鼠胚胎腭突间充质细胞G1期阻滞的发生。     

地塞米松对A系小鼠胚腭突间充质细胞增殖代谢的影响

目的研究不同剂量地塞米松(DEX)对A系小鼠胚腭突间充质细胞增殖和DNA、蛋白质及PGB合成的影响。方法实验分为9组，每组设平行4孔(瓶)，每组分别加入DEX使其终浓度为0．05ng／ml，0.1ng／ml．0．5ng／ml，1ng／ml，5ng／ml，10ng／ml，50ng／ml，100ng／ml，1000ng／ml，每组均设空白对照，在实验后第1、3、5天分别检测细胞的OD值及PGE2的含量，并在第3天时检测DNA、蛋白质的含量。结果DEX可显著增加腭突间充质细胞的OD值，促进DNA及蛋白质合成，在含量0．5ng／ml时DEX的促进生长作用最强。在培养早期DEX轻度降低腭突间充质细胞PGE2的合成，而在培养后期则表现为显著抑制作用。结论DEX显著促进腭突间充质细胞的增殖代谢，可能干扰腭突间充质细胞的正常生长代谢而影响了腭发育。     

小鼠胚胎腭突间充质细胞体外培养及生物学特性研究

目的 研究小鼠胚胎腭突间充质（EPM）细胞的生物学特性。方法 在显微镜下解剖妊娠第13天的母鼠胚胎腭突，用0.25%胰蛋白酶进行消化获得游离分散的EPM细胞，在含10％胎牛血清的DMEM培养基中进行培养。采用免疫组化方法进行细胞鉴定，通过相差显微镜，生长曲线及透射显微镜观察细胞形态，增殖能力及超微结构。结果 EPM细胞为成纤维细胞样细胞，排列无序，细胞核大，核分裂象多，核膜内陷，核呈分叶状，胞浆含大量线粒体及粗面内质网。免疫组化显示角蛋白标记为阴性，S－100蛋白及波形蛋白标记为阳性。EPM细胞呈指数生长，有较强的增殖能力。结论 EPM细胞体外培养生长及增殖良好，可作为腭裂基础研究较理想的研究对象。     

MTHFR基因沉默对小鼠胚胎腭突间充质细胞增殖和凋亡的影响

目的:应用RNA干扰技术,从细胞水平研究5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因突变导致腭裂发生的机制.方法:构建MTHFR基因沉默载体,对13天胚胎的腭突间充质细胞进行RNA干扰实验.MTT法检测MTHFR基因沉默后细胞增殖的改变.流式细胞仪检测MTHFR基因沉默后对胚胎腭突间充质细胞凋亡的影响.实验结果采用SPSS11.0软件包进行分析,细胞增殖的比较用重复测量方差分析,凋亡率检测应用U检验.结果:MTHFR基因表达下调后,在无叶酸存在的情况下,腭突间充质细胞的增殖速度明显减慢,与对照组相比有显著性差异(P<0.001);实验组的凋亡率显著高于对照组(P<0.05).结论:在外源性叶酸补充不足的情况下,腭突间充质细胞增殖减弱并发生凋亡,这可能是MTHFR基因突变与先天性唇腭裂发生相关的病理学基础.     

RNA干扰原代培养胚胎腭间充质细胞Smad2/3基因对atRA阻滞细胞周期作用的影响

目的：证实atRA可以通过Smad2/3作用于p21,从而导致胚胎腭间充质细胞周期受阻而出现腭裂。方法：原代培养胎鼠胚胎腭间充质细胞并进行鉴定。采用RNA干扰原代培养胚胎腭间充质细胞Smad2/3基因后,Western印迹检测Smad2/3、pSmad2、pSmad3和p21的蛋白表达水平及干扰后细胞周期的变化。采用SPSS11.0软件包对数据进行单因素方差分析和t检验。结果：经过免疫组化鉴定,证实原代培养C57BL/6N胎鼠腭突间充质细胞成功,并且Smad2/3siRNA可以有效干扰Smad2/3在原代培养MEPM细胞中的表达。Western印迹检测结果证实,Smad2/3siRNA可以通过敲减atRA诱导的Smad2/3表达增高现象,继而降低atRA诱导的p21表达增高现象。此外,Smad2/3siRNA在一定程度上降低了atRA诱导的胎鼠腭突间充质细胞G1期阻滞现象。结论：Smad2/3通过p21参与atRA诱导的胚胎腭突间充质细胞G1期阻滞现象。     

叶酸拮抗亚甲基四氢叶酸还原酶基因沉默的实验研究

目的:探讨叶酸补充拮抗5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因下调的作用机制.方法:MTT法检测叶酸梯度补充后拮抗MTHFR基因功能下调对细胞增殖的影响;流式细胞仪分析MTHFR基因功能下调补充叶酸前后细胞周期的改变.结果:MTHFR基因功能下调后,不同剂量叶酸补充可以逆转MTHFR基因功能下调对EPM细胞的不良影响,影响程度与补充叶酸的浓度在一定范围内具有剂量依赖性.结论:MTHFR基因是重要的先天性唇腭裂候选基因,叶酸补充可以拮抗MTHFR基因功能下调对胚胎腭突发育的不良影响.     

C57BL/6N系小鼠腭裂模型的建立及扫描电镜观察

观察腭裂形成过程及腭突正常发育中形态发生、组织学变化。方法１６只妊娠１０天的Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ系小鼠随机分为实验组、对照组、于ＧＤ１３＾１４,（１３ｄ１４ｈ略写为３＾１４以下类同）,ＧＤ１３＾３２,ＧＤ１４＾８,ＧＤ１４＾２２,ＧＤ１５＾８,ＧＤ１５＾２２,ＧＤ１６＾８剖腹取鼠头部标本分别做扫描电镜及ＨＥ染色。     

BALB/c����ϵС������ͻ�����ϸ��������������ѧ�����о�

目的建立BALB／c近交系小鼠腭胚突间充质（EPM）细胞体外培养模型并研究其生物学特性。方法芩研究于2012年11月至2013年7月在山西医科大学医学寄生虫研究所进行。采用机械分离及胰蛋白酶消化法，简便、准确、快速地获得高成活率的BALB／c近交系小鼠EPM细胞，采用免疫组化法鉴定细胞，并进行细胞增殖和形态学观察。结果EPM细胞为成纤维细胞样细胞，呈梭型，单层漩涡状排列，排列无序，细胞核大，核分裂像较多。免疫组化染色显示，角蛋白标记为阴性，波形蛋白标记为阳性。EPM细胞呈指数生长，有较强的增殖能力。结论建立的BALB／c近交系小鼠EPM细胞体外培养技术模型可较好地保持EPM细胞的基本生物学特性。     

Inhibition of human embryonic palatal mesenchymal cell cycle by secalonic acid D: a probable mechanism of its cleft palate induction

OBJECTIVE: To assess the mechanism(s) of cleft palate induction by secalonic acid D (SAD) in human embryonic palatal mesenchymal (HEPM) cells and compare them with those evaluated in the murine embryonic palate. DESIGN: Effect of SAD on HEPM cell proliferation was studied by obtaining dose response curves for cell numbers, uptake of 3H-thymidine and the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA). Effects of SAD on cell cycle were assessed by flowcytometry. Cell-labeling with 3H-glucosamine and immunoblot analysis were conducted to study SAD effects on the synthesis of glycosaminogycans (GAG) and the expression of fibronectin and tenascin, respectively. RESULTS: SAD induced a concentration-dependent decrease in HEPM cell number and 3H-thymidine uptake beginning at 0.1 microg of SAD/ml. Expression of PCNA and progression of cell cycle from G1 to S phase were inhibited following SAD exposure. Cell viability was significantly reduced only at 7.5 microg/ml of SAD or higher indicating that the reduction in cell numbers by SAD at lower concentrations is likely due to reduced proliferation and at higher concentrations due to both reduced proliferation and cell death. Synthesis of extra cellular matrix components (GAGs, fibronectin or tenascin) by HEPM cells, however, was not inhibited by SAD. CONCLUSION: The results of these studies confirmed those of our previous studies with mice and the MEPM cells that SAD may induce cleft palate by reducing numbers of palatal mesenchymal cells by inhibition of their proliferation thereby leading to a reduction in the size of the developing palate shelves.     

腭发育不同时期维甲酸对腭突细胞增殖和凋亡的影响

目的研究维甲酸对小鼠腭突融合期细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法在SPF级C57BL/6J近交系母鼠妊娠10 d和12 d给予维甲酸（RA）建立小鼠腭裂模型,利用BrdU免疫组化方法和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测胚胎15 d（即腭突融合期）小鼠腭突中细胞增殖及细胞凋亡的表达和分布。结果10 d给药组腭胚间充质细胞及腭中嵴上皮细胞中BrdU阳性细胞率和TUNEL阳性细胞率均低于对照组,12 d给药组和对照组BrdU阳性细胞率和TUNEL阳性细胞差异无统计学意义。结论维甲酸作用于腭发育的不同时期对腭突细胞增殖及凋亡水平有不同的影响,作用于腭突发生前期可引起腭间充质细胞增殖抑制、凋亡过度而发生腭裂,作用于腭突快速生长期可能影响腭中嵴上皮细胞的上皮间充质转化和迁移等其他转归形式。