丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠半暗带区神经细胞凋亡与即早基因表达的影响

目的：探讨丹龙醒脑方对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质半暗带（ischemic penumbya, IP）区神经细胞凋亡与即早基因c-fos、c-jun、c-myc表达的关系。方法将48只雄性SD大鼠随机均分为假手术组,脑缺血再灌注（模型）组,尼莫地平组及丹龙醒脑方小、中、大剂量组（丹小组、丹中组、丹大组）。后五组用线栓法制备大脑中动脉栓塞再灌注（MCAO/R）模型,再灌注24 h进行神经功能缺损评分后,取缺血侧大脑皮质,采用原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡的神经细胞,免疫组化法分别检测c-fos、c-jun、c-myc蛋白。结果与假手术组比较,其余各组的神经功能缺损评分、神经细胞凋亡指数（AI）及c-fos、c-jun、c-myc蛋白的积分光密度（IOD）值均升高,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,尼莫地平组和丹龙醒脑方各剂量组的神经功能缺损评分、神经细胞AI及c-fos、c-jun、c-myc蛋白的IOD值均减小,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;尼莫地平组、丹龙醒脑方各剂量组组间比较,各指标差异均无统计学意义（P>0.05）。结论丹龙醒脑方能显著降低脑缺血后神经功能缺损和减少神经细胞凋亡,其机制可能与下调即早基因c-fos、c-jun和c-myc的表达有关。     

丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠海马区Notch信号通路相关蛋白表达的影响

目的 探讨丹龙醒脑方对脑缺血再灌注模型大鼠海马区Notch信号通路相关蛋白Notch1、Notch2及Hes1表达的影响.方法 将80只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、丹龙醒脑方小剂量组(丹小组7.4 g/kg)、大剂量组(丹大组14.8 g/kg),线栓法建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,再灌注7 d取缺血侧海马组织.采用免疫组织化学法、免疫印迹法检测大鼠海马区Notch1、Notch2及Hes1蛋白表达.结果 与假手术组比较,各组Notch1、Notch2及Hes1蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,丹小组、丹大组Notch1、Notch2及Hes1蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01).结论 丹龙醒脑方能通过上调海马区Notch1、Notch2及Hes1蛋白表达水平,调节Notch信号转导通路,这可能是其促进脑缺血损伤后神经功能修复的机制之一.     

大鼠脑缺血/再灌注后海马CA1区HSP90的表达

目的观察大鼠脑缺血/再灌注后海马CA1区热休克蛋白90（HSP90）的表达。方法应用免疫印迹法观察大鼠脑缺血/再灌注后不同时间点海马CA1区HSP90的表达。结果缺血/再灌注30 min后HSP90的表达开始增高,6 h达最高峰,持续升高至第3天,6 h后HSP90的表达与对照组相比较有显著性差异（P〈0.05）。结论大鼠脑缺血/再灌注早期可诱导海马CA1区HSP90的合成及表达增加,表明HSP90参与了脑缺血有关的病理及生理过程。     

大鼠全脑缺血再灌流后海马CA1区P53mRNA及蛋白的表达

海马对缺血损伤尤其敏感,以往认为,脑缺血后海马ＣＡ１区迟发性神经元死亡（ＤＮＤ）的发生主要是一种被动的坏死过程［１］。然而,近年来的资料表明,主动的细胞凋亡与ＤＮＤ紧密相关［２,３］,但目前对脑缺血后细胞凋亡的分子机制尚不清楚。Ｌｉ等［４］报道,ｐ５...     

丹龙醒脑片对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的研究丹龙醒脑片对大鼠脑缺血再灌注海马区神经细胞凋亡的影响。方法采用大脑中动脉栓塞(MCAO)再通法建立大鼠脑缺血再灌注模型,进行海马区病理组织形态学观察,利用末端标记法(TUNEL),检测海马区神经细胞凋亡的变化。结果与假手术组相比,模型组神经细胞凋亡指数(AI)和凋亡神经细胞积分光密度(IOD)明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),海马区存活细胞数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,丹龙醒脑片组神经细胞AI和凋亡神经细胞IOD明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),海马区存活细胞数明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05),病理损害减轻。结论抑制由缺血再灌注损伤诱导的脑神经细胞凋亡可能是丹龙醒脑片脑保护作用的机制之一。     

当归补血汤对局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠行为学及海马CA1区神经元形态学的影响

目的 探讨当归补血汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 雄性SD大鼠108只随机分为正常组、缺血再灌注组(模型组)和当归补血汤组(治疗组).采用线栓法复制大鼠右侧大脑中动脉栓塞缺血再灌注模型.治疗组术后连续15d以0.36 g/mL浓度当归补血汤3.6g/kg灌胃,每日2次(早、晚各1次).治疗10d后进行各组大鼠神经行为学测试;TTC染色观察大脑皮质梗死体积变化;股静脉注入2％伊文斯蓝溶液观察血脑屏障通透性变化;Nissl染色法观察大鼠海马CA1区神经元的形态和数量.结果 与缺血再灌注组比较,当归补血汤治疗组神经功能评分增高,大脑皮质脑梗死体积减少(P＜0.05),伊文斯蓝的含量减少(P＜0.05),神经元数量增加(P＜0.05).结论 当归补血汤可改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能,减少脑梗死体积,减少大鼠海马CA1区神经元的死亡,对海马CA1区神经元具有保护作用.     

缺血预处理对局灶性缺血大鼠脑梗死区周围TLR4及GFAP表达的影响

目的观察局灶性脑缺血预处理(CIP)对Toll样受体4(TLR4)及胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,探讨TLR4介导的炎性信号通路及星形胶质细胞活化在诱导脑缺血耐受(BIT)发生中的作用。方法第1次脑缺血20min作为预处理,72h后行持续2h的第2次局灶性脑缺血。45只SD雄性大鼠随机分为脑缺血预处理(CIP)组、大脑中动脉阻塞(MCAO)组、假手术(sham)组。MCAO组第1次脑缺血以假手术代替,假手术组两次均为假手术。第2次脑缺血后每组又分再灌注6、24、72h等3个时间段。光学显微镜下观察脑组织病理改变,免疫组织化学染色和图像分析评价各组TLR4及GFAP的表达。结果 CIP组TLR4阳性细胞数明显低于同时间段的MCAO组,而GFAP阳性细胞数则均高于同时间段的MCAO组(P<0.05)。TLR4、GFAP在CIP组及MCAO组的表达高峰均分别出现于再灌注后6、72h。结论短暂的CIP可能通过抑制TLR4炎症信号通路,明显激活反应性星形胶质细胞,从而诱导脑缺血耐受的发生。     

两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠Nestin、NSE和GFAP表达的影响

目的 比较益气活血方(脑络欣通)和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠缺血侧侧脑室下区神经上皮干细胞蛋白(Nestin)、缺血半暗带神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注动物模型,动物随机分为假手术组、模型组、益气活血方组及补肾生髓方组.脑缺血2h,分别再灌注1周、2周、3周,采用免疫荧光法检测Nestin、NSE和GFAP表达的阳性细胞数或平均吸收光密度值(A值).结果 缺血侧侧脑室下区,再灌注1周、2周益气活血方组,再灌注2周、3周补肾生髓方组,Nestin表达的阳性细胞数较模型组显著增多(P＜0.05或P＜0.01);再灌注1周益气活血方组较补肾生髓方组显著增多(P＜0.01),再灌注2周、3周补肾生髓方组较益气活血方组显著增多(P＜0.05).缺血半暗带区,再灌注1周、2周益气活血方组,再灌注2周补肾生髓方组,NSE表达的阳性细胞数较模型组显著增多(P＜0.01);再灌注1周时益气活血方组较补肾生髓方组显著增多(P＜0.01),再灌注2周时补肾生髓方组较益气活血方组显著增加(P＜0.01).缺血半暗带区,再灌注1周、2周益气活血方组与补肾生髓方组GFAP表达平均吸光度较模型组明显增加(P＜0.05或P＜0.01);再灌注各时间段两复方组比较无显著差异(P＞0.05).结论 益气活血方与补肾生髓方能通过增加缺血侧侧脑室下区Nestin、缺血半暗带区NSE数量、增强GFAP的表达,促进局灶性脑缺血后神经干细胞的增殖分化,两种复方在增加Nestin、NSE数量方面存在一定差异.     

病变侧亚低温对局灶脑缺血再灌注后胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 观察病变侧亚低温(32—33℃)对局灶脑缺血再灌注后星形胶质细胞活性和组织病理变化的影响。方法 采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，将雄性Wisutr大鼠随机分为缺血常温组、亚低温组和假手术组。根据缺血时间不同，每组又分为缺血3h和12h。缺血30min后应用反馈控温半导体制冷块对大鼠病变侧给予亚低温治疗，并持续至再灌期。采用免疫组织化学方法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达及HE染色观察组织病理变化。结果 缺血常温组GFAP阳性细胞数量增多，突体粗大，胞体肿胀；亚低温组GFAP表达数量明显减少。结论 病变侧亚低温能明显抑制脑缺血后星形胶质细胞反应性增生和肥大，并能减轻组织损伤程度。     

意向运动疗法对大鼠局灶性脑缺血后GFAP和SYP表达的影响

目的探讨意向运动疗法对大鼠局灶性脑缺血2 h后再灌注缺血周围脑组织GFAP和SYP表达的影响及其对神经再生修复作用的可能机制。方法采用线栓法建立(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠模型,缺血2 h后进行再灌注;再灌注24 h后根据Longa神经功能缺损评分选择实验模型,随机分为模型组(MCAO组)、环境改变组(environmental modification,EM)、意向运动组(willed movement,WM),每组再分为3、7、15 d三个亚组;大鼠处死前再进行Longa评分;通过免疫组织化学及免疫荧光观察缺血周围脑组织GFAP和SYP的表达。结果再灌注15 d时,WM组大鼠神经功能缺损评分低于MCAO组、EM组(P<0.05);再灌注7、15 d时,WM组大鼠GFAP和SYP的表达量均高于MCAO组、EM组(P<0.05);MCAO组与EM组比较:任一时间点的GFAP和SYP表达均无统计学差异(P>0.05)。结论意向运动疗法促进了MCAO大鼠神经功能缺损的恢复;可能与其促进缺血周围脑组织GFAP和SYP的表达有关。     

复方蒲黄颗粒对大鼠脑缺血再灌注后GFAP表达的影响

目的研究复方蒲黄颗粒对大鼠脑缺血再灌注后胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）表达的影响。方法实验采用90只清洁级SD大鼠,随机分为6组（每组15只）：假手术组（Sham组）,模型组（I/R组）,复方蒲黄大剂量组（PHH组）,复方蒲黄中剂量组（PHM组）,复方蒲黄小剂量组（PHL组）,脑血栓片组（NXS组）。采用右侧颈总动脉夹闭手术,建立大鼠脑缺血再灌注模型,分别在术后6 h、24 h、72 h,运用TTC染色计算脑梗死体积,运用免疫组化方法检测脑组织GFAP的动态变化。结果GFAP的表达呈现随时间增加而增长,与I/R组相比较,PHH组、PHM组在术后24 h、72 h表达增长显著增加（P〈0.05）。结论复方蒲黄颗粒能够有效减小大鼠脑缺血再灌注后脑梗死体积,调节脑缺血再灌注损伤后GFAP蛋白表达,以大、中剂量作用最为显著,这可能是本方对全脑保护的重要疗效机制之一。     

银杏内酯B对局灶性脑缺血时星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的 观察血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂银杏内酯B(GB)对局灶性脑缺血时星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,并探讨其作用机制.方法 建立光化学诱导树局灶性脑缺血模型,用HE染色和电镜技术观察缺血后不同时间脑组织星形胶质细胞的形态学改变;用免疫组织化学法观察脑缺血后4 h、24 h、72 h及给予GB后24 h半暗区及对侧皮层星形胶质细胞GFAP的表达,并测定其平均灰度值.结果 光镜下可见,HE染色显示树局灶性脑缺血后,随缺血时间延长,星形胶质细胞形态有不同程度改变;电镜观察显示缺血24 h时星形胶质细胞明显肿胀.免疫组织化学染色可见,半暗区星形胶质细胞GFAP表达在4 h时没有明显改变, 24 h时增加 (P＜0.01),72 h时仍维持在较高水平(P＜0.01);对侧皮层星形胶质细胞GFAP表达于72 h时开始增加(P＜0.05).缺血后6 h舌下静脉注射GB至缺血24 h时,星形胶质细胞GFAP表达少于缺血组(P＜0.05),但仍较假手术组高.结论 脑缺血后星形胶质细胞GFAP表达增强,GB可通过减少星形胶质细胞GFAP的表达而起脑保护作用.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血核心区NCCa-ATP通道的表达变化

目的了解局灶性脑缺血再灌注后磺酰脲类受体1(SUR1)调控的非选择性阳离子通道(nonselective cation channel,NCCa-ATP通道)表达的变化与脑缺血损伤的关系,探索脑缺血的治疗时间窗.方法以颈内动脉线栓法建立大鼠大脑左侧中动脉梗塞模型,缺血2 h后恢复再灌注.取实验性脑缺血再灌注损伤后3h、6 h、8 h、12 h、24 h等不同时间缺血核心区的脑组织,采用RT-PCR及Western-blot技术,测定SUR1的mRNA及蛋白表达水平.采用免疫荧光双标法技术,观察SUR1在缺血后脑微血管内皮细胞的表达情况.结果缺血再灌注核心区组织在缺血再灌注后3 h、6 h、8 h、12 h及24 h各时间点SUR1 mRNA和SUR1蛋白的表达量均上调,再灌注后8 h达高峰(P<0.05),缺血再灌注后12 h,SUR1在脑微血管内皮细胞的表达非常明显.结论局灶性脑缺血再灌注过程中SUR1调节的NCCa-ATP通道参与了脑缺血损伤,在脑缺血再灌注后其mRNA和蛋白的表达量均上调.推测应用SUR1受体的特异性抑制剂最佳时机在缺血再灌注后8~12 h.     

实验性局灶性脑缺血再灌注Fos蛋白的表达

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注Fos蛋白表达的意义及其机制。方法　采用免疫组化法观察Fos蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注后皮层和基底节区的动态变化。结果　Fos蛋白在大脑中动脉阻断 1h后 ,随再灌注时间延长其分布不同。基底节区持续时间长 ,阳性细胞多 ,而皮层持续时间短 ,阳性细胞少。其中再灌注 90min ,Fos蛋白表达最显著。大脑中动脉供血中心区皮层几无表达。结论　Fos蛋白的表达与神经细胞存活密切相关 ,出现Fos蛋白表达的区域神经元易于耐受缺血性损害而存活 ,可能是神经细胞自我保护机制之一 ,Fos蛋白的表达存在扩散抑制     

局灶性脑缺血再灌注后海马CA1区超微结构改变及川芎嗪的保护作用

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后各时相点海马CAI区超微结构以及中药川芎嗪对该区影响，、方法采用闭塞大鼠大脑中动脉建立局灶性脑缺血再灌注模型，透射电镜下观察海马CAI区超微结构改变、结果实验组海马CAI区超微结构的改变总体较对照组明显减轻，表现为：再灌注6h(B1组)的星形胶质细胞，突起稍肿胀，线粒体结构无明显变化；神经细胞内仅部分线粒体肿胀，内质网扩张?再灌注12h(B2组)的星形胶质细胞，突起肿胀，线粒体结构无明显变化；未与星形胶质细胞相连的神经细胞，胞浆内线粒体肿胀、轴突内线粒体空泡化；与星形胶质细胞相连的神经细胞，内质网脱颗粒，线粒体无明显改变，结论川芎嗪不仅直接保护脑神经元，而且通过保护星形胶质细胞而间接起到保护和修复受损神经细胞的作用。     

氯胺酮联合应用咪唑安定麻醉对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响

目的　研究氯胺酮联合应用咪唑安定麻醉对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响。方法　30只SD大鼠在氯胺酮或氯胺酮-咪唑安定麻醉下制备永久性大脑中动脉阻塞模型。术后4 h行神经病学评分、2 4 h测量梗塞体积、3d进行TU NEL染色检测半暗带内的细胞凋亡。结果　在氯胺酮-咪唑安定组和氯胺酮组间,神经病学评分(1.74±0 .5 2 vs 1.5 7±0 .6 5 )无显著性差异(P>0 .0 5 ) ,但氯胺酮-咪唑安定组大鼠的脑梗塞体积和半暗带内凋亡细胞密度明显低于氯胺酮组大鼠〔梗塞体积:(2 4 .1±4 .6 3) % vs (38.4 8±4 .18) % ;凋亡细胞密度:(178±2 3) / mm2 vs(2 5 8±15 ) / mm2 ,P<0 .0 5〕。结论　氯胺酮麻醉中联合应用咪唑安定对大鼠局灶性脑缺血损伤具有保护作用。     

胶质细胞源性神经营养因子对局灶性脑缺血大鼠海马区环氧酶2表达的影响

目的 观察胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对局灶性脑缺血再灌注损伤(CIPI)大鼠海马环氧酶2(COX-2)表达的影响.方法 大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,立体定位下侧脑室注射GDNF,观察模型对照组、生理盐水组、GDNF组大鼠海马COX-2表达.结果 GDNF组海马COX-2表达明显减少,与模型对照组、生理盐水组比较差异显著(P<0.05).结论 GDNF可能通过减少海马COX-2表达,增强对局灶性缺血脑组织的保护能力,加速中枢神经损伤的修复.     

电针对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质区内皮抑素、血小板反应蛋白-1表达的影响

目的 观察电针对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质区内皮抑素（endostatin,ES）、血小板反应蛋白-1（thrombospondin-1,TSP-1）表达的调控作用及其机制。方法 将54只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组18只。利用改良线栓法复制局灶性大脑中动脉闭塞模型,电针组选取“百会”与“水沟”穴进行治疗,每次30 min,每日1次,共干预7 d。比较术后7 d各组大鼠神经功能评分,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色法测量脑梗死面积,免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法检测ES、TSP-1蛋白在大鼠脑缺血皮质区的表达情况。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损体征较为显著,梗死范围明显,脑缺血皮质区ES和TSP-1蛋白表达均显著上调（P<0.05）;与模型组比较,电针组大鼠神经功能评分降低（P<0.05）,梗死面积缩小（P<0.05）,脑缺血皮质区ES、TSP-1蛋白表达水平均明显下调（P<0.05）。结论 电针可促进局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复,缩小梗死面积,其机制可能与血管新生抑制因子ES、TSP-1的表达下调有关。     

脊髓半切损伤后髓鞘碱性蛋白及胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的 研究大鼠脊髓半切损伤后后肢运动功能恢复情况及损伤远端星形胶质细胞和近端少突胶质细胞反应性增生关系，探讨损伤后星形胶质细胞和少突胶质细胞反应性增生在脊髓损伤修复中的作用。方法 将35只SD大鼠随机分成7组：对照组5只；实验组6组，每组5只，分别是伤后1天组，3天组，7天组，14天组，21天组，28天组。实验组动物均行T9左侧半切，分别于伤后1，3，7，14，21，28d行后肢运动功能联合评分（CBS）及Basso-Beattle．Bresnahan（BBB）评分。每次评分后处死5只大鼠，进行HE染色及GFAP、MBP免疫组织化学检测。结果 伤后后肢均有不同程度的恢复，1～2周时恢复幅度最大，2～3周时后肢运动功能继续恢复，3周时BBB评分最高达12分，3～4周运动功能无显著性恢复，损伤后1d损伤远端3-6mm处GFAP阳性星形胶质细胞开始增生肥大，3～4d灰质中星形胶质细胞明显增多，2周时达到高峰，损伤近端3～6mm处少突胶质细胞的增生反应过程与星形胶质细胞相似。结论 脊髓损伤后近端少突胶质细胞和远端星形胶质细胞反应性增生可能有助于损伤的修复和再生。     

环磷酰胺对脑缺血再灌注海马GFAP表达的影响

目的观察环磷酰胺对脑缺血再灌注后大鼠大脑海马区胶原纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。方法设正常组、假手术组、缺血再灌注组（I／R）和环磷酰胺处理组（T）,以改良Longa线栓法建立sD大鼠局灶性脑缺血模型。处理组缺血后1h给予环磷酰胺腹腔注射,处理组和I／R组均于缺血后2h形成再灌注,每组均分为三个时间段（24h、72h和5d）分别观察。应用免疫组织化学技术检测各组脑组织不同时段以及正常脑组织中海马GFAP的表达情况。结果脑缺血再灌注5d内,随着缺血时间的延长,GFAP在海马区星形胶质细胞中的阳性表达逐渐增多,缺血24h后即有表达,缺血再灌注72h后增多,5d后表达最高;经过环磷酰胺处理后,海马区GFAP表达减少（P〈0．05）。正常组及假手术组未见GFAP表达。结论大鼠脑缺血再灌注后5d内GFAP在海马中的表达与缺血时间呈明显的相关性,随着缺血时间延长而增加。用环磷酰胺处理后GFAP表达明显减少,提示环磷酰胺对缺血诱导的星形胶质细胞活化具有抑制作用,可能对脑缺血再灌注损伤的恢复起重要作用。