体外培养人角膜上皮细胞中CD44的表达及IFN-γ和雷公藤多甙对其的影响

目的探讨黏附分子CD44在角膜上皮细胞中的表达及干扰素-γ（IFN-γ）和雷公藤多甙对角膜上皮细胞中CD44表达的影响。方法采用细胞培养和流式细胞技术,分别观察同一培养时间（24h）不同IFN-γ含量和同一IFN-γ含量不同培养时间对人角膜上皮细胞CD44表达的影响及0.03%雷公藤多甙对角膜上皮细胞中CD44表达的影响。结果体外培养的人角膜上皮细胞可基础表达一定量的CD44（1.944±0.237）,IFN-γ可上调CD44的表达,其上调作用呈量和时间依赖性（P〈0.05）。雷公藤多甙可以使角膜上皮中CD44的表达降低（P〈0.01）。结论IFN-γ可以使角膜上皮细胞中CD44的表达升高,使排斥反应加剧;雷公藤多甙可以抑制角膜上皮细胞中CD44的表达,从而抑制角膜移植排斥反应。     

TGF-β2对体外培养豚鼠巩膜成纤维细胞的影响

目的探讨豚鼠巩膜成纤维细胞(guineapigscleralfibroblast,GSF)体外培养的方法,研究转化生长因子-β2(transforminggrowthfactor-β2,TGF-β2)对体外培养GSF的增生及胶原蛋白合成的影响。方法GSF原代培养,取生长状态良好的3~6代GSF分别加入不同浓度的TGF-β2(0.00~50.00μg·L-1)。应用MTT法和氯胺T法分别观察比较GSF的增生及胶原蛋白合成情况。结果TGF-β2体外能促进GSF的增生,最佳作用浓度为10.00μg·L-1。在0.01~10.00μg·L-1浓度范围内促进胶原蛋白的合成,呈剂量依赖性。结论TGF-β2体外能够促进GSF增生及胶原蛋白的合成。     

细胞因子对培养的人视网膜色素上皮细胞胶原合成的影响

目的 观察转化生长因子β(transforming growth factor-beta,TGF-β)和干扰素γ(interferon-gamma,IFN-γ)对人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPE)胶原合成的影响。 方法 用³Ｈ-脯氨酸掺入、免疫细胞化学及分子杂交技术观察TGF-β和IFN-γ分别及联合作用下培养的人RPE胶原合成活性。 结果 TGF-β在10 ng/ml浓度使RPE对³Ｈ-脯氨酸的摄取增加130.87％,并增强Ⅳ、Ⅰ和Ⅲ型胶原荧光染色和mRNA表达。IFN-γ在10 000 U/ml浓度抑制54.72％的脯氨酸摄取,并减弱Ⅳ型胶原染色和3种胶原的mRNA表达。 结论 TGF-β和IFN-γ对RPE的胶原合成分别具有正向及负向调控作用,IFN-γ可能用于抑制RPE胶原合成。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 245-248)     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞增生和迂移的影响

目的探讨Tumstatin肽对视网膜血管内皮细胞增生和迁移的影响,了解其抑制血管生成的途径。方法采用MTT比色法观察1mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1、20mg.L-1和40mg·L-1的Tumstatin肽(T8肽)对恒河猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)增生的影响;采用流式细胞仪检测20mg·L-1的T8肽对RF/6A细胞细胞周期的影响;采用划痕修复实验观察0mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1和20mg·L-1的T8肽对RF/6A细胞迁移的影响。结果5mg·L-1以上浓度的T8肽对RF/6A细胞增生有抑制作用且呈剂量依赖性,1mg·L-1、5mg.L-1、10mg·L-1、20mg·L-1和40mg·L-1浓度的T8肽抑制率分别为(2.69±1.10)%、(6.58±1.91)%、(16.77±3.05)%、(31.60±7.57)%和(40.05±8.43)%,各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。未加入T8肽时,RF/6A处于G0～G1期、S期和G2～M期的细胞比例分别为(43.66±1.37)%、(44.13±0.99)%和(12.21±0.39)%,而加入20mg·L-1的T8肽后则分别为(55.27±0.63)%、(28.51±0.68)%和(16.23±1.00)%,细胞凋亡率也由原来的0增加到(7.18±0.25)%,2组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。培养基中加入0mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1和20mg·L-1的T8肽后RF/6A细胞24h的迁移距离分别为(248.09±2.28)μm、(175.27±3.22)μm、(120.81±3.59)μm和(44.65±1.83)μm,而48h时则为(393.68±2.21)μm、(341.62±4.27)μm、(254.65±2.93)μm和(118.69±5.96)μm,在同一时段,各组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论T8肽能够抑制RF/6A细胞的增生和迁移,使细胞阻滞于G0～G1期及诱导细胞凋亡是其抑制RF/6A细胞生长的原因。     

TGF-β1 AS-ODN对牛眼小梁细胞TGF-β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原表达的影响

目的　观察转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor β1,TGF β1)反义寡核苷酸对牛眼小梁细胞 (bovinetrabecularmeshworkcells,BTMC)表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原的影响。方法　脂质体介导下 ,将 0 .1,0 .5 ,1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸作用于BTMC ,对照组分别加入 1μmol·L-1TGF β1正义寡核苷酸脂质体复合物、2 0g·L-1脂质体、无血清RPMI 16 4 0。然后用半定量RT PCR检测TGF β1反义寡核苷酸对BTMC表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原的影响。结果　与无血清RPMI 16 4 0对照组相比 ,0 .1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸即可抑制BTMC表达TGF β1,0 .5 ,1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸可完全抑制BTMC表达TGF β1(P <0 .0 5 )。 0 .1,0 .5 μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸可浓度依赖性抑制BTMC表达纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 ,1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸可完全抑制BTMC表达纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 (P <0 .0 5 )。 2 0 g·L-1脂质体、1μmol·L-1TGF β1正义寡核苷酸不能抑制BTMC表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 (P >0 .0 5 )。结论　进一步证实TGF β1可通过自分泌方式作用BTMC ,促进细胞外基质的合成。通过TGF β1反义寡核苷酸抑制BTMC表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 ,     

CD40在人球后成纤维细胞的表达

目的:探讨rhIFN-γ作用下,正常人和TAO患者球后成纤维细胞(RF)CD40 mRNA的表达情况.方法:用RT-PCR法,对rhIFN-γ诱导正常人和TAO患者RF CD40的mRNA进行半定量分析.结果:经100,200,400,1 000kU/L rhIFN-γ作用48h后,正常人和TAO患者RF CD40的吸光度比值分别为0.483±0.095和0.476±0.051,0.647±0.034和0.659±0.083,0.849±0.017和0.852±0.024,0.891±0.082和0.894±0.041与各自对照组0.203±0.032和0.213±0.020相比,差异有统计学意义(P≤0.01);两者同一浓度相比差异无统计学意义(P＞0.05).经400kU/L rhIFN-γ作用12,24,48,72h后,正常人和TAO患者RF CD40的吸光度比值分别为0.331±0.047和0.329±0.025,0.668±0.067和0.683±0.104,0.849±0.017和0.852±0.024,0.865±0.021和0.876±0.014与各自对照组0.203±0.032和0.213±0.020相比,差异有统计学意义(P＜0.05),两者同一时间相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:rhIFN-γ可上调正常人和TAO患者RF CD40mRNA的水平,呈浓度和时间依赖.     

四种细胞因子对牛晶状体上皮细胞胶原合成的影响及对前胶原mRNA表达的调控

目的 探讨表皮生长因子(EGF)、白细胞介素1(IL-1)、γ干扰素(IFN-γ)和生长抑素8肽(SS-8肽)在晶状体后囊膜混浊形成中的作用及影响胶原合成的机制。方法 细胞接种于96孔培养板贴壁后分别加入含有浓度为10^-2～10^2ng／ml的EGF、10～10^5ng／ml的IL-1、10^-11～10^-7mol／L的SS．8肽及10～10^5U／ml的IFN-γ细胞培养液,采用^3H-脯氨酸掺人法检测对胶原合成的影响;用Northern blot技术检测对Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的调控。结果 EGF 10^-1～10^2ng／ml、IL-1 10^2～10^5ng／ml显著促进胶原合成,IFN-γ 10^3～10^5U／ml、SS-8肽 10^-10～10^-7mol／L显著抑制胶原合成;1ng／ml的EGF及10^3ng／ml的IL-1可增加Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达,而10^3U／ml的IFN-γ及10^-9mol／L的SS-8肽可减少Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达。结论 EGF、IL-1参与了晶状体后囊膜混浊形成中的胶原合成,且对胶原合成的影响是作用于转录水平;IFN-γ、SS-8肽的作用提示其可用于防治晶状体后囊膜混浊。（中华眼科杂志,2004,40：545-548)     

糖基化终产物诱导视网膜微血管内皮细胞VEGF和ZO-1 mRNA合成的变化

目的 观察糖基化终产物(advanced glycosylation end products,AGEs)作用下,大鼠视网膜微血管内皮细胞(rat retinal microvascular endothelial cells,rRMEC)的增生和活力的变化,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)合成和紧密链接蛋白-1(zonula occludens protein-1,ZO-1)mRNA合成的变化.方法 采用免疫磁珠法分离培养rRMEC,0 mg·L-1、10 mg·L-1、100 mg·L-1和600 mg·L-1糖基化牛血清白蛋白(AGE-bovine serum albumin,AGE-BSA)作用rRMEc,观察4 d内细胞增生变化,并采用台盼蓝染色法测定细胞活力.不同浓度的AGE-BSA(0 mg·L-1、10 mg·L-1、50 mg·L-1、100 mg·L-1、200 mg·L-1、400 mg·L-1、600 mg·L-1)作用12 h,100 mg·L-1的AGE-BSA作用不同时间(0 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h)后,采用RT-PCR和Elisa测定rRMEC中VEGF mRNA、ZO-1 mRNA和上清中VEGF含量.结果 rRMEC在0 mg·L-1、10 mg·L-1和100 mg·L-1 AGE-BSA环境中可以继续增生,600 mg·L-1细胞增生可能受到抑制,造成rRMEC活力降低.在浓度为10～400 mg·L-1 AGE-BSA作用12 h时,VEGF mRNA合成增强,上清液中VEGF蛋白表达升高;在100 mg·L-1 AGE-BSA作用2～24 h,VEGF mRNA合成首先升高,后降低并趋于稳定;作用后各组均高于作用前(P＜0.01),上清液中VEGF蛋白表达随时间延长逐渐增加.随AGE-BSA浓度的增加,ZO-1 mRNA逐渐降低;随AGE-BSA作用时间的延长,ZO-1 mRNA逐渐降低.结论 在一定范围内,VEGF mRNA和ZO-1 mRNA合成呈AGE-BSA剂量和时间依赖性.VEGF可能是促进rRMEC ZO-1 mRNA合成降低的重要因素之一.     

氧化应激条件下miR-21对人眼小梁网细胞胞外基质蛋白表达的影响

目的 探讨氧化应激条件下miR-21对人眼小梁网细胞(human trabecular meshwork cells,HTMCs)胞外基质蛋白表达的影响.方法 用不同浓度H2O2(0μmol·L-1、200 μmol·L-1、400 μmol·L-1、600 μmol·L-1)刺激HTMCs l h,MTT法检测其对HTMCs活力的影响,从而确定后续实验所需H2O2浓度.随后将细胞分成正常组和H2O2组,Real-time PCR检测miR-21的表达,Western blot检测胞外基质蛋白(纤维连接蛋白和胶原蛋白I)的表达.然后将细胞分成5组:H2O2组(只用H2O2处理)、miR-21干预组(H2O2+ miR-21模拟物)、miR-21对照组(H2O2+ miR-21对照模拟物)、miR-21抑制组(H2O2+ miR-21抑制剂)和miR-21抑制对照组(H2O2+miR-21抑制剂对照物),Real-time PCR检测miR-21、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β2和PTEN mRNA表达,Western blot检测胞外基质蛋白、TGF-β2和PTEN蛋白表达.最后将细胞分成3组:H2O2组(只用H2O2处理)、PTEN干扰组(H2O2 +PTEN siRNA)和干扰对照组(H2O2+ control siRNA),检测PTEN、胞外基质蛋白和TGF-β2蛋白水平表达.结果 当H2O2浓度≥400 μmol·L-1时,可显著抑制HTMCs的活性,后续实验选择此浓度.与正常组相比,H2O2组中miR-21、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ的表达均增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).检测氧化应激条件下miR-21对胞外基质蛋白、TGF-β2和PTEN表达的影响,发现与H2 O2组相比,miR-21对照组和miR-21抑制对照组中miR-21、纤维连接蛋白与胶原蛋白Ⅰ蛋白水平表达以及TGF-β2和PTEN mRNA及蛋白水平表达差异均无统计学意义(均为P＞0.05);与miR-21对照组相比,miR-21干预组miR-21、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ蛋白水平及TGF-β2 mRNA和蛋白水平表达均增加,PTEN蛋白水平表达降低,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),而PTEN mRNA表达差异均无统计学意义(均为P＞0.05);与miR-21抑制对照组相比,miR-21抑制组miR-21、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ蛋白水平及TGF-β2 mRNA和蛋白水平表达均降低,PTEN蛋白水平表达增加,差异均有统计学意义(均为P＜O.05),而PTEN mRNA水平差异无统计学意义(P＞0.05).采用Western blot检测氧化应激条件下PTEN对TGF-β2和胞外基质蛋白表达的影响,发现与H2O2组相比,干扰对照组PTEN、TGF-β2、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ的表达差异均无统计学意义(均为P＞0.05);与干扰对照组相比,PTEN干扰组PTEN的表达下调,TGF-β2、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ的表达均升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 氧化应激条件下miR-21可增加HTMCs胞外基质产物,这可能与其靶向沉默PTEN基因,调节TGF-β2的表达相关.     

Th1/Th2细胞因子在小鼠真菌性角膜炎中的表达

目的 通过检测Th1/Th2细胞因子在小鼠真菌性角膜炎中的表达水平,探讨机体免疫在该病发展中的作用. 方法应用角膜表层镜法建立Balb/c小鼠茄病镰刀菌性角膜炎模型,在感染后第1、3、5、7天,裂隙灯显微镜观察角膜炎特点;HE染色观察角膜病理变化;半定量RT-PCR和ELISA检测角膜中Thl细胞因子(IFN-γL-12)及Th2细胞因子(IL-4、IL-10)基因mRNA和蛋白的表达,半定量RT-PCR检测T-bet基因mRNA的表达;直线相关分析检测T-bet mRNA与IFN-比值的相关性. 结果角膜接种菌液后,早期角膜浸润混浊进行性加重,第5天后新生血管大量生长;HE染色可见第1、3天在角膜缘、角膜基质及前房中有大量的炎症细胞浸润,第5天后炎症细胞减少,角膜基质中纤维细胞逐渐增多;RT-PCR与ELISA检测结果表明,Thl细胞因子(IFN-γL-12)和Th2细胞因子(IL-4、IL-10)基因mRNA及蛋白在角膜接种菌液后均出现表达,且IFN-γL-12的表达显著强于IL-4、IL-10;IFN-γ/IL-4比值在第3天达最高值,而后逐渐降低;T-bet mRNA在第3天达最高值;T-bet mRNA的表达与IFN-γ/IL-4比值呈正相关(P＜0.05). 结论在真菌性角膜炎中,Thl/Th2型免疫应答共同参与调节机体的抗真菌免疫,但以Th1型应答为主;角膜感染真菌后第3天机体的免疫力达最强.     

PPAR-γ激动剂对大鼠角膜碱烧伤后NF-κB和TNF-α表达的影响

目的 探讨眼局部应用过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPAR-γ)激动剂吡格列酮对大鼠角膜碱烧伤后核因子-κB(nuclear factor κB,NF-κB)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)表达的影响.方法 48只健康SPF级SD大鼠角膜碱烧伤后随机分组,每组12只鼠(12眼),Ⅰ组为碱烧伤治疗组(Ⅰ A为低剂量组;Ⅰ B为高剂量组),结膜下分别注射0.2 g·L-1、0.8 g·L-1吡格列酮0.1 mL,每天1次.Ⅱ组为治疗对照组,结膜下注射地塞米松0.5 mg(0.1 mL),每天1次.Ⅲ组为空白对照组,结膜下注射生理盐水0.1 mL,每天1次.所有大鼠右眼为实验眼,左眼做力阴性对照,均连续注射2周.观察碱烧伤后第1天、第4天、第7天、第14天的角膜新生血管(corneal meovascularization,CNV)的发展及PPAR-γ、NF-κB和TNF-α在各时间段表达.结果 PPAR-γ,自烧伤后第 1天开始表达,随着CNV的发生发展,PPAR-γ、NF-κB及TNF-α的表达呈上升趋势.与Ⅰ B组CNV发生率相比较,Ⅱ组、Ⅲ组明显延迟、生长抑制;Ⅰ A组与Ⅱ组相比,差异无统计学意义(P>0.05).Ⅰ B组在碱烧伤后第4天、第7天、第14天CNV生长面积分别为(5.42±0.25)mm2、(8.14±0.25)mm2、(9.67±0.42)mm2,与Ⅰ A组、Ⅱ组、Ⅲ组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);碱烧伤后第7天,Ⅰ B组PPAR-γ的表达较Ⅱ组、Ⅲ组明显上升,NF-κB、TNF-α表达均有不同程度的下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 PPAR-γ激动剂吡格列酮抑制大鼠CNV的生成,减轻炎性反应且与剂量浓度有关.其机制可能与活化后的PPAR-γ,在炎症早期有效阻止NF-κB活化,降低TNF-α表达有关.     

反义CD44基因转染对人眼小梁细胞合成细胞外基质的影响

目的：观察反义CD44基因转染对人眼小梁细胞合成细胞外基质的影响,探讨黏附分子CD44在原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma, POAG)发病过程中可能的作用。 方法：采用硫代修饰的CD44反义寡核苷酸,通过脂质体介导转染体外培养的人眼小梁细胞,免疫组织化学染色观察CD44反义寡核苷酸对小梁细胞合成胶原蛋白Ⅰ型、层黏附蛋白的影响,放射免疫法观察CD44反义寡核苷酸对小梁细胞合成透明质酸的影响。 结果：CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞合成胶原蛋白Ⅰ型、层黏附蛋白起促进作用,且呈浓度依赖性,浓度越高促分泌作用越强,但对小梁细胞合成透明质酸起抑制作用,浓度越高抑制作用越明显。 结论：CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达后人眼小梁细胞合成胶原蛋白Ⅰ型、层黏附蛋白增加而合成透明质酸减少。黏附分子CD44可能通过影响小梁细胞合成细胞外基质功能参与了POAG发病过程。     

雷公藤红素对大鼠视网膜血管内皮细胞增生和凋亡的影响

目的 观察雷公藤红素对体外培养的大鼠视网膜血管内皮细胞(mouse retinalvascular endothelial cells,MRECs)增生和凋亡的影响.方法 体外原代培养MRECs,通过免疫细胞化学方法检测FⅧr-Ag从而鉴定培养的MRECs;使用不同浓度的雷公藤红素(0.01 mg·L-1、0.02 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.20 mg·L-1、0.50 mg·L-1)作用于原代培养的MRECs 24 h、48 h、72 h,分别使用MTT法和流式细胞术观察其对MRECs增生和凋亡的影响.结果 雷公藤红素0.02 mg·L-1以上时,吸光度A值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).作用24 h细胞增生抑制率分别为(8.62±4.23)%、(24.41±6.27)%、(46.51±5.95)%、(65.62±9.21)%、(72.83±8.24)%、(74.69±11.26)%;作用48 h细胞增生抑制率分别为(9.34±3.78)%、(26.21±7.35)%、(51.36±6.39)%、(65.59±8.99)%、(73.19±10.24)%、(76.16±15.21)%:作用72 h细胞增生抑制率分别为(11.24±4.62)%、(32.69±7.21)%、(55.28±10.25)%、(70.22±9.34)%、(75.84±13.69)%、(78.93±10.76)%.流式细胞术结果分析显示,当雷公藤红素浓度为0.05 mg·L-1时,MRECs的凋亡率为(8.42±1.07)%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 雷公藤红素对体外培养的MRECs的增生有抑制作用,并能诱导细胞的凋亡.     

γ-干扰素对人角膜基质细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的抑制作用

初步探讨γ－ＩＦＮ如何抑制人角膜基质细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成。用体外培养的２—３代人角膜基质细胞在亚汇合状态下分别加入０．５、５、５０、５００和５０００Ｕ／ｍｌ的γ－ＩＦＮ，共培养４８小时；５００Ｕ／ｍｌ共培养１２、２４、４８小时。地塞米松作为对照。应用Ⅰ、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白（Ｆｉ－ｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ＦＮ）ｃＤＮＡ探针行原位杂交检测ｍＲＮＡ的表达。结果表明，Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ的表达与γ－ＩＦＮ的剂量成反比，其表达从～±；相同剂量下，在７２小时Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ的表达量最低。ＦＮｍＲＮＡ的表达不受γ－ＩＦＮ的影响。地塞米松对其表达无任何影响。提示：γ－ＩＦＮ通过抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ的转录而减少胶原的合成，这种抑制作用具有相对特异性。γ－ＩＦＮ的这种特异性抑制作用可能成为减轻角膜创伤后角膜混浊的新方法     

中药单体榄香烯体外对人晶状体上皮细胞内胶原蛋白合成的影响

目的:探讨中药单体榄香烯(effects of elemene,Ele)对人晶状体上皮细胞系(human lens epithelial cells B3,HLE-B3)内Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白合成的影响。方法:利用10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)诱导HLE-B3增殖,将80mg/L的Ele作用在处于增殖状态下的HLE-B3,24h后采用双抗体夹心ABC-酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测Ele作用后HLE-B3内Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达。结果:rhbFGF作用后HLE-B3内Ⅰ型胶原蛋白浓度为53.5±5.4μg/L,较正常组(38.5±2.3μg/L)明显升高,Ele作用后HLE-B3内Ⅰ型胶原蛋白的浓度为29.5±2.9μg/L,较rhbFGF组明显下降(P<0.01)。rhbFGF作用后HLE-B3内Ⅲ型胶原蛋白浓度为1.27±0.29μg/L,较正常组(0.83±0.12μg/L)明显升高,Ele作用后HLE-B3内Ⅲ型胶原蛋白的浓度为0.69±0.11μg/L,较rhbFGF组明显下降(P<0.01)。结论:Ele抑制rhbFGF诱导的HLE-B3增殖的同时也能抑制HLE-B3内Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白合成,干扰HLE-B3纤维化,可望成为防治后囊膜混浊的理想药物。     

雷公藤红素对高糖环境下大鼠视网膜血管内皮细胞VEGF和PEDF表达的影响

目的观察雷公藤红素对高糖环境下大鼠视网膜血管内皮细胞VEGF和PEDF表达的影响。方法将体外培养的大鼠视网膜血管内皮细胞分为空白对照组、高糖组、高糖+雷公藤红素(0.05mg·L-1)组,进行相应处理后分别用免疫细胞化学及ELISA法检测细胞中VEGF和PEDF的表达。结果免疫细胞化学灰度值测定,空白组、高糖组及高糖+雷公藤红素组VEGF表达分别为74.40±4.19、110.12±7.32、78.11±5.81,PEDF表达量分别为124.65±6.01、88.73±7.84、93.31±5.67;ELISA结果显示空白组、高糖组及高糖+雷公藤红素组VEGF表达量分别为(155.21±13.36)ng·L-1、(237.69±19.41)ng·L-1、(168.57±26.32)ng·L-1,PEDF表达量分别为(251.37±17.95)ng·L-1、(178.35±25.36)ng·L-1、(191.58±31.37)ng·L-1,与正常对照组相比,高糖组VEGF表达增高(P<0.05),PEDF表达减少(P<0.05);与高糖组相比,高糖+雷公藤红素组VEGF表达减少(P<0.05),PEDF表达无明显差异性(P>0.05)。结论雷公藤红素能减少高糖环境下大鼠视网膜血管内皮细胞中VEGF表达,对PEDF表达的影响不明显。     

Sunitinib对视网膜微血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨苹果酸舒尼替尼(Sunitinib)对体外培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A)增殖和迁移及KDRmRNA表达的影响.方法 选取不同浓度的Sunitinib作用于RF/6A,分别于培养24h和48h后采用SRB染色法观察不同浓度的Sunitinib对RF/6A增殖的影响;采用细胞划痕修复实验观察不同浓度的Sunitinib对RF/6A迁移的影响;同时利用RT-PCR法检测不同浓度的Sunitinib处理前后RF/6A KDR mRNA表达水平的变化.结果 Sunitinib对RF/6A的增殖有抑制作用且呈时间-剂量依赖性,0.00125 mg·L-1、0.002 5 mg·L-1、0.005 mg·L-1、0.01 mg·L-1、0.02 mg·L-1和0.04 mg·L-1浓度的Sunitinib作用24 h,对RF/6A增殖的抑制率分别为(12.009±0.038)%、(21.440 4±0.007)%、(35.434±0.015)%、(43.125±0.002)%、(53.700±0.001)%、(60.971±0.003)%,各组两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.01);而48h后,其抑制率则分别为(36.872±0.006)%、(40.673±0.013)%、(47.313±0.004)%、(55.910±0.003)%、(63.120±0.003)%、(69.975±0.014)%.各组两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.01).培养基中加入0 mg·L-1、0.0025mg·L-1、0.005 mg·L-1、0.01 mg.L-1、0.02 mg·L-1浓度的Sunitinib 24 h后RF/6A的迁移距离分别为(203.3±2.2)μm、(145.4±4.4)μm、(123.9±2.6)μm、(96.1±3.1)μm、(46.6±2.9)μm.而48h后则为(313.1±4.1)μm、(213.9±2.8)μm、(193.9±4.2)μm、(134.5±3.2)μm、(109.9±5.7)μm.在同一时段,各组两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.01).0mg·L-1、0.0025 mg·L-1、0.005 mg.L-1、0.01 mg·L-1、0.02 mg·L-1浓度的Sunitinib作用24 h后,RF/6A KDR mRNA的相对表达量分别为0.583±0.004、0.570±0.008、0.553±0.007、0.531±0.003、0.513±0.005.而48 h后则分别为0.628±0.005、0.610±0.002、0.588 4±0.002、0.564±0.005、0.525±0.004.在同一时段,各组两两比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论 Sunitinib能够抑制视网膜微血管内皮细胞的增殖和迁移,其机制可能是通过下调VEGFR mRNA的表达来实现的.     

人类永生化角膜内皮细胞的生物学特性

目的探讨人类永生化角膜内皮细胞在免疫反应中的分子表达及其刺激T淋巴细胞活化的能力。方法人类永生化角膜内皮细胞分别培养在含干扰素-γ（IFN-γ）（1000U／mL）和不包含IFN-γ（1000U／mL）的F99和M199培养液中,按照1：1等比例混合并含有5％小牛血清。健康志愿者采集外周血并分离外周血单核细胞（PBMCs）,应用锥虫蓝染色鉴定细胞的完整性和细胞数量。免疫组织化学染色法测定人类永生化角膜内皮细胞分别在有无IFN-γ诱导条件下的HLA—DP、DQ、DR抗原及CD40的表达。同时,体外共同培养人类永生化角膜内皮细胞和PBMCs,荧光活化细胞分类（FACS）法测定活化的T淋巴细胞中CD69的表达。结果IFN-γ能够诱导HLA—DP、DQ、DR抗原和CD40在人类永生化角膜内皮细胞上的阳性表达,表现为细胞膜和细胞质中的红色染色。CD3和CD28抗体预处理的外周血单核细胞中,20％的CD69阳性T淋巴细胞活化,无IFN-γ诱导时有10％阳性T淋巴细胞,而IFN-γ诱导组中,有12％的阳性T淋巴细胞,说明共同培养人类永生化角膜内皮细胞和PBMCs体系中,CD69阳性淋巴细胞数量增加。结论外周血中的T淋巴细胞可以被人类永生化角膜内皮细胞活化,由此人类永生化角膜内皮细胞是具有免疫学特性潜能的抗原递呈细胞。     

99Tc-MDP对兔实验性葡萄膜炎房水及血清细胞因子的影响

目的 探讨99锝-亚甲基二膦酸盐(99Tc-MDP,商品名为云克)对兔实验性葡萄膜炎的治疗作用.方法 将实验兔21只随机分为生理盐水对照组、地塞米松治疗组、99Tc-MDP治疗组,每组各7只.ELISA法测定实验性兔葡萄膜炎动物模型造模前、造模后5 d、给药治疗后10 d、停药后5 d房水白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)及转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)含量值、血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)及干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)含量值.结果 生理盐水对照组房水中IL-10和TGF-β在给药后10 d分别为(86.2±51.2)ng·L-1、(91.2±67.9)ng·L-1,均低于造模后5 d的(95.1±44.7)ng·L-1、(135.6±106.3)ng·L-1;给药后10 d血清TNF-α及IFN-γ分别为(151.9±57.9)ng·L-1、(4.7±1.2)ng·L～,均低于造模后5 d的(175.6±96.0)ng·L-1、(5.8±2.3)ng·L-1.地塞米松治疗组给药后10 d房水IL-10和TGF-β分别为(106.9±28.5)ng·L-1、(168.1±56.6)ng·L-1,高于造模后5 d的(82.7±41.4)ng·L-1和(117.4±45.5)ng·L-1;给药后10 d血清TNF-α及IFN-γ分别为(80.3±23.4)ng·L-1、(3.2±2.3)ng·L-1,低于造模后5 d的(188.2±104.9)ng·L-1、(5.7±3.6)ng·L-1.99Tc-MDP治疗组给药后10 d房水IL-10和TGF-β分别为(136.2±47.2)ng·L-1、(183.1±79.6)ng·L-1,高于造模后5 d的(98.1±31.3)ng·L-1和(131.7±53.4)ng·L-1;给药后10 d血清TNF-α及IFN-γ分别为(82.7±66.1)ng·L-1、(2.8±1.4)ng·L-1,均低于造模后5 d的(191.7±72.4)ng·L-1、(6.8±4.1)ng·L-1;与生理盐水对照组比较,地塞米松治疗组及99Tc-MDP治疗组均可使兔房水IL-10及TGF-β升高,血清TNF-α及IFN-γ降低,差异均有统计学意义(P均<0.05).但地塞米松治疗组与99Tc-MDP治疗组之间比较差异无统计学意义.结论 99Tc-MDP有升高兔实验性葡萄膜炎房水中IL-10和TGF-β及降低血清中TNF-α和IFN-γ的作用.由于其全身并发症少,可能成为有前景的葡萄膜炎治疗用药.     

^99Tc-亚甲基二磷酸盐对细胞因子刺激后人球后成纤维细胞增生的影响

背景Graves眼病是一种器官特异性自身免疫性疾病。研究表明,^99Tc-亚甲基二磷酸盐（^99Tc-MDP）在治疗Graves眼病方面有一定的疗效,但其机制尚不明了。目的观察^99Tc-MDP对细胞因子刺激后Graves眼病患者球后成纤维细胞（RFs）增生、合成透明质酸和表达人类白细胞DR抗原（HLA—DR）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）的影响。方法球后结缔组织取自严重Graves眼病行球后减压术的女性患者2例,用组织块培养法在含质量分数20％胎牛血清（FBS）的DMEM培养液中培养RFs并进行传代,取2～7代细胞用于实验。分别将干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素1（IL-1）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）以及不同质量浓度的^99Tc—MDP加入不同组的细胞培养液中孵育后,利用。H—TdR掺人法检测^99Tc—MDP对RFs增生的影响,采用放射免疫法检测培养细胞合成透明质酸的情况,用流式细胞仪检测HLA—DR、ICAM-1的表达。结果培养的细胞呈成纤维原细胞型,波形蛋白染色阳性,细胞角蛋白染色呈阴性。TNF—α、IFN-γ和IL-1作用后,培养的RFs增生值、透明质酸值、RFs中HLA—DR表达率及ICAM-1表达率分别为（4918．33±297．91）cpm、（505．83±41．29）mg／L、（56．88±14．67）％和（63．57±14．11）％,均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）,培养基中分别加入〉100mg／L ^99Tc—MDP后,RFs增生值、透明质酸值、RFs中HLA-DR表达率及ICMA-1表达率均明显低于TNF—α、IFN-γ、IL-1单独作用组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论^99Tc—MDP能够以剂量依赖的方式抑制体外培养的人RFs的增生。