人毛乳头细胞生长相关蛋白作用下细胞VEGF的表达

目的研究人毛乳头生长相关蛋白作用下不同代人毛乳头细胞VEGF的表达。方法通过体外培养低传代的人毛乳头细胞,收集其上清配制成条件培养基,用此条件培养基培养高传代人毛乳头细胞,通过RT-PCR观察各代毛乳头细胞的VEGF变化。结果用低传代人毛乳头细胞的上清液培养过的9代人毛乳头细胞的VEGF表达不仅明显好于对照组(P<0.01),而且明显好于基础培养基作用下的7代人毛乳头细胞的VEGF表达(P<0.01)。结论低传代人毛乳头细胞的培养液在体外能明显地促进VEGF的表达。     

猪毛乳头细胞条件培养基的生物学活性研究

目的:研究猪毛乳头细胞条件培养基的生物学活性。方法:通过体外培养低传代猪毛乳头细胞,收集其基础培养基的上清液配制成条件培养基,用于培养高传代人毛乳头细胞,观察细胞形态及细胞生长曲线的变化;同时观察高传代人毛乳头细胞与低传代猪毛乳头细胞共培养情况。结果:条件培养基使高传代人毛乳头细胞出现了凝集生长现象,其生长曲线显著优于基础培养基培养的高传代人毛乳头细胞(P<0.05),其细胞的3H-TdR测定值亦显著升高(P<0.05)。高传代人毛乳头细胞与低传代猪毛乳头细胞共培养后出现凝集性生长趋势。结论:低传代猪毛乳头细胞在体外培养状态下可分泌具有明确生物学活性的物质。     

雄激素与体外培养的人毛乳头细胞和外根鞘细胞相互作用的研究

目的观察不同浓度雄激素(睾酮)对体外培养人毛乳头细胞和外根鞘细胞增殖活性的影响.方法采用脱发和非脱发成人头皮标本,用胶原酶消化法分离毛乳头,在角质形成细胞无血清培养基上,对其进行体外培养.采用非脱发成人头皮标本,组织法培养毛囊外根鞘细胞.然后将不同浓度睾酮加入两种毛乳头细胞与外根鞘细胞的共同培养基中,比较其对外根鞘细胞的增殖活性的影响.结果不同浓度睾酮对单独培养的两种毛乳头细胞和外根鞘细胞的增殖性均无作用(与对照组相比P>0.05).10-9 ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-8 ml/L浓度、10-7 ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与非脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,可促进外根鞘细胞增殖.而10-10 ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-9 ml/L浓度、10-8 ml/L浓度、10-7 ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,对外根鞘细胞出现增殖抑制作用.结论睾酮对外根鞘细胞的影响,与其剂量和毛乳头细胞的存在有关.在这个过程中,毛乳头细胞可能起介导作用.     

雄激素与体外培养的人毛乳头细胞和外根鞘细胞相互作用的研究

目的观察不同浓度雄激素(睾酮)对体外培养人毛乳头细胞和外根鞘细胞增殖活性的影响。方法采用脱发和非脱发成人头皮标本,用胶原酶消化法分离毛乳头,在角质形成细胞无血清培养基上,对其进行体外培养。采用非脱发成人头皮标本,组织法培养毛囊外根鞘细胞。然后将不同浓度睾酮加入两种毛乳头细胞与外根鞘细胞的共同培养基中,比较其对外根鞘细胞的增殖活性的影响。结果不同浓度睾酮对单独培养的两种毛乳头细胞和外根鞘细胞的增殖性均无作用(与对照组相比P>0.05)。10-9ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-8ml/L浓度、10-7ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与非脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,可促进外根鞘细胞增殖。而10-10ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-9ml/L浓度、10-8ml/L浓度、10-7ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,对外根鞘细胞出现增殖抑制作用。结论睾酮对外根鞘细胞的影响,与其剂量和毛乳头细胞的存在有关。在这个过程中,毛乳头细胞可能起介导作用。     

改良一步酶消化法分离培养人头皮毛乳头细胞的实验研究

目的进一步简化人头皮毛乳头的分离方法,实现高纯度毛乳头细胞的体外扩增.方法将含有毛球部的头皮皮下组织剪成肉泥状,胶原酶Ⅰ(2 mg/ml) 37 ℃消化2～3 h后,加入10倍体积的DMEM,以吸管反复吹打消化液使毛乳头全部游离出来,在显微镜下用微量移液器逐个收集表面无杂质黏附的毛乳头.结果 "改良一步酶消化法" 分离毛乳头所需的操作时间进一步缩短,劳动强度降低;所得毛乳头纯度高,贴壁率达到99%,其细胞迁出加速.结论 "改良一步酶消化法"是一种高效、快速分离培养人头皮毛乳头细胞的方法.     

角质形成细胞培养基培养毛乳头细胞的实验研究

目的毛乳头细胞被广泛用于组织工程毛囊和皮肤构建。探讨用含血清的角质形成细胞培养基(keratinocyte medium,KM)和普通培养基(normal medium,NM)培养毛乳头细胞的生物学特性差异,以及KM培养的毛乳头细胞是否可用于组织工程毛囊研究。方法采用两步酶消化法从除皱术时切下的头皮标本中分离培养毛乳头,接种后分别采用KM和NM培养毛乳头细胞并传代。记录毛乳头最早贴壁时间及细胞迁出时间,接种5d时统计毛乳头贴壁率。倒置显微镜下观察两组细胞形态学变化,计数第3代细胞每皿聚集体个数;记录细胞最大传代次数;细胞融合成膜后对消化的细胞膜片行HE染色观察。取第3代细胞行MTT法检测细胞增殖;免疫荧光染色和ALP染色观察α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和ALP在两组细胞中的表达,并统计ALP蓝色阳性区域面积。结果KM组毛乳头最早贴壁时间及细胞迁出时间分别为24h及64h,早于NM组的48h及80h。5d时KM组及NM组毛乳头贴壁率分别为54.17%及36.78%。NM组细胞体积较KM组大。NM组第3代细胞每皿形成(3.06±1.12)个聚集体,KM组每皿形成(9.25±1.73)个聚集体,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。KM组细胞融合后细胞膜片行HE染色可见细胞呈多层性;NM组细胞不能多层性生长,未行HE染色观察。NM组细胞最多可传7代;KM组最多可传15代。MTT检测显示KM组细胞增殖迅速,7d后KM组吸光度值明显高于NM组,差异有统计学意义(P0.05)。免疫荧光染色显示,两组第3代细胞α-SMA均为阳性。ALP染色显示,NM组第6代细胞中仅少量细胞表达ALP,阳性区域面积为(987±146)μm2;KM组第14代细胞ALP染色仍为阳性,阳性区域面积为(8757±558)μm2;两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论毛乳头细胞在含血清的KM中增殖迅速,聚集生长明显,传代次数增多;用含血清KM培养毛乳头细胞用于组织工程毛囊构建是可行的。     

胎儿毛乳头细胞分化为类成骨细胞的实验研究

目的 研究胎儿毛乳头细胞的体外成骨能力，为骨组织工程提供一种新的种子细胞。方法 Ⅰ型胶原酶消化法分离毛乳头，常规成纤维细胞培养液培养毛乳头细胞。第3代和第7代细胞经成骨诱导液诱导培养7d，以免疫荧光、Von Kossa等方法鉴定毛乳头细胞及检测细胞的成骨特性。结果 培养的毛乳头细胞呈聚集性生长，表达平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原。经成骨诱导后表达骨桥蛋白，有钙结节形成。结论 毛乳头细胞具有成骨活性，可作为骨组织工程的种子细胞。     

不同浓度胰岛素对毛乳头细胞的生物学作用的研究

目的：了解不同浓度胰岛素对毛乳头细胞的生物学作用。方法：人头皮组织分离、培养、获得毛乳头细胞,根据胰岛素浓度分为1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol/L3个组,设无胰岛素培养液为对照组。应用不同浓度胰岛素的2%新生牛血清培养液培养毛乳头细胞3天,分别用MTT法测定毛乳头细胞的增殖;AnexinV/PI双染色法测定毛乳头细胞的凋亡情况;体外细胞划痕法测定其迁移能力。结果：与对照组比较,1×10^-8、1×10^-7mol/L胰岛素组毛乳头细胞增殖、抗凋亡及迁移能力显著增加（P〈0.05或P〈0.01）,且1×10^-7mol/L组作用最强（P〈0.05或P〈0.01）。结论：1×10^-8～1×10^-7mol/L胰岛素可以增强毛乳头细胞增殖、迁移和抑制凋亡的作用。     

改良一步酶消化法分离培养人头皮毛乳头细胞的实验研究

目的进一步简化人头皮毛乳头的分离方法,实现高纯度毛乳头细胞的体外扩增。方法将含有毛球部的头皮皮下组织剪成肉泥状,胶原酶Ⅰ(2mg/ml)37℃消化2~3h后,加入10倍体积的DMEM,以吸管反复吹打消化液使毛乳头全部游离出来,在显微镜下用微量移液器逐个收集表面无杂质黏附的毛乳头。结果“改良一步酶消化法”分离毛乳头所需的操作时间进一步缩短,劳动强度降低;所得毛乳头纯度高,贴壁率达到99%,其细胞迁出加速。结论“改良一步酶消化法”是一种高效、快速分离培养人头皮毛乳头细胞的方法。     

微囊化人头皮毛乳头细胞移植诱导毛发形成

目的探索微囊化人头皮毛乳头细胞（以下简称毛乳头细胞）对裸鼠背部皮肤毛囊形成的诱导作用。方法胶原酶消化法体外分离、培养毛乳头细胞，再将毛乳头细胞以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠（alginate-polylysine—alginate，APA）微囊包裹，以胶原凝胶作为载体，植入裸鼠背部皮下；移植空囊、游离毛乳头细胞各作为对照。观察移植部位毛发生长情况，利用组织学方法观测所形成的毛囊结构。结果微囊化毛乳头细胞皮下移植4周后，裸鼠背部移植区有白色、浓密、分布均匀的毛发长出。局部组织切片见大量发育完整的毛囊结构；而空囊及游离毛乳头细胞移植均未能诱导出上述现象。结论聚集性生长的微囊化毛乳头细胞能够保持诱导皮肤毛囊形成的作用，且这种作用无种属特异性。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。