聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶反应性质研究

研究了聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)固定化L-天门冬酰胺酶催化缓冲液中天冬酰胺的反应过程,考察了底物浓度、给酶量、温度、搅拌速率等条件对固定化酶在缓冲液中间歇催化反应过程的影响;以及底物浓度、流量、温度、床层高度等因素对固定化酶在缓冲液中连续催化反应过程的影响。实验结果表明:在适当的反应条件下,聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶可以很好地水解缓冲液中的天冬酰胺。     

壳聚糖固定L-天门冬酰胺酶的研究

研究了以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，固定化Ｌ－天门冬酰胺酶的最适条件，并对固定化天门冬酰胺酶的理化性质进行了初步探讨。分别从不同固定化程序、缓冲液及保护剂等方面进行了固定化天门冬酰胺酶的条件优化；固定化酶的活力回收可达２０％左右。固定化酶的最适范围变宽，由游离酶的最适ｐＨ＝４～６变为ｐＨ＝６～１０。连续使用６次后仍可基本维持固定化酶的活力。固定化酶对胃蛋白酶的水解性也较游离酶大大提高。     

固定化酶催化合成半乳糖寡糖

以壳聚糖固定化米曲霉β－半乳糖苷酶,连续催化合成半乳糖寡糖（ＧＯＳ）,在填充床固定化酶反应器中,研究底物浓度、ｐＨ,反应温度和停留时间对ＧＯＳ连续合成的影响,最佳反应条件为：底物浓度４００ｇ／Ｌ,反应温度５０℃,ｐＨ５．８,停留时间３５ｍｉｎ,产物的最高得率为６２％。     

固定化L-天冬酰胺酶间歇催化反应的动力学模型

测定了３７°Ｃ下以固定化Ｌ－天冬酰胺酶为催化剂,５０μｍｏｌ／ＬＬ－天冬酰胺的Ｔｒｉｓ缓冲液（ｐＨ＝７．４）为底物的时歇反应转化率,并用建立的数学模型对反应过程进行拟合。计算结果表明,提出的传质－催化反应动力学模型能较好地描述反应过程,并揭示固定化酶的传质－催化过程受扩散作用控制。     

聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶的工艺研究

采用交联法制备了聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)载体，并将其用于固定化L-天门冬酰胺酶。研究了聚乙二醇浓度、交联剂戊二醛浓度、活化剂甲醛浓度、酶溶液浓度等因素对PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶活力的影响。结果表明：在适当的条件下，PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶的活力可达20～40U／g，并且PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶具有良好的生化性质。     

固定化L—天冬酰胺酶连续催化过程的数学描述

研究了固定化Ｌ－天冬酰胺酶连续化血浆过程,提出描述固定化酶连续催化过程的反应动力学模型,得到的拟合曲线能够和实验值较好地吻合,表明该数学模型能适用于类似血浆的生物流体     

甲壳糖固定血管紧张素转换酶的制备及其性质

目的 将血管紧张素转换酶(ACE)固定化并测定其动力学性质。方法 以甲壳糖为载体，碳二亚胺(EDC)为交联剂，与分离纯化的ACE混合,使ACE固定化；并以马尿酰甘氯酰甘氨酸(HCG)为底物，分别测定了其游离酶和固定化酶的动力学性质。结果 固定化酶活力110u／g湿重，固定化率为22％，与游离酶比较，固定化酶稳定且具良好的耐热性，在50—80℃固定化酶较游离酶稳定。在pH7．1的底物缓冲体系中，37℃，游离酶Km=0.026mol／L；在间歇振摇下固定化酶的表现Km=0．040mol／L。游离酶最适pH为、8.0固定化酶最适pH为9．0。结论 用甲壳糖固定ACE方法简便可行，且固定后的甲壳糖性能稳定，有广阔的应用前景。     

固定化青霉素酰化酶在光敏感可再生两水相体系中催化青霉素G为6-APA

在一种光敏感可再生高聚物(PNBC 300000)与葡聚糖20000(Dextran 20000)形成的两水相体系中进行固定化青霉素酰化酶的相转移催化青霉素G产生6-APA的反应。在这个两水相体系中,当pH为7.8,底物浓度为62 mmol/L,反应温度为20℃,在50 mmol/L KCl存在下,6-APA的分配系数可达8.4。催化动力学显示,达到平衡的时间近6 h,PG(Na)转化率约82.6%。3批半连续反应转化率为60%~70%,较相近条件下的单水相反应得率提高近20%。在两水相中,底物及产物主要分配在上相,固定化酶分配在下相,底物青霉素G进入下相经酶催化产生的6-APA及苯乙酸又转入上相,从而解除了青霉素酰化酶催化反应的底物及产物抑制作用,达到提高产物得率的效果。形成两水相的高聚物通过488 nm的激光照射可实现循环利用,高聚物的光照回收率在95%~98%。     

乙二胺羟丙基壳聚糖固定化天门冬酰胺酶的研究

研制了新型壳聚糖胺基衍生物-乙二胺羟丙基壳聚糖（EDA-HPCS）,并将其用于固定天门冬酰胺酶,分别考察了甲醛活化载体和戊二醛活化载体对固定化酶活力的影响,结果表明,在适当的固定化条件下,甲醛活化EDA-HPCS的固定化酶活力约为30U/g载体,而戊二醛活化EDA-HPCS固定化酶活力约为16U/g载体。     

固定化青霉素酰化酶动力学参数测定

本文介绍一种测定固定化酶催化反应动力学参数的新方法。在纤维间扩散阻力和外扩散阻力存在下,改变底物输送流速,测定纤维状固定化酶的一系列对应反应初速度;用双倒数图和Dixon图分别求各种流速下的表观米氏常数(K_m~(?))和表观产物抑制常数,再用所求得的各种表观动力学参数与对应的底物输入酶柱的线速度倒数的线性关系式,两次图解求得本征动力学参数。采用这一方法求得纤维状固定化青霉素酰化酶催化重排酸水解的本征米氏常数(K_m)、产物7-ADCA和苯乙酸抑制常数的本征值(K_p,K_q)分别为6.9,16.8和94.4mmol/L。     

用酶热敏法测定青霉素浓度

采用固定化酶热敏装置,对青霉素的浓度进行测量,此法适合于在线分析和控制。还研究了此酶反应的动力学,获得了固定化管式酶反应器的动力学参数。     

抗癌酶制剂L—天冬酰胺酶在甲壳素上的固定化

研究了以甲壳素为载体固定化Ｌ－天冬酰胺酶的最适条件,探讨了固定化Ｌ－天冬酰胺酶的一系列理化性质。交联剂用量、缓冲液ｐＨ值和载体活化时间均对Ｌ－天冬酰胺酶的固定化有一定影响,得到的固定化Ｌ－天冬酰胺酶的活力回收可达２５．４％。固定化Ｌ－天冬酰胺酶理化性质的实验研究表明,酶经固定化后,对蛋白水解酶的稳定性及存贮稳定性均较游离酶有很大程度的提高。     

固定化壳聚糖酶的动力学性能研究

目的通过壳聚糖酶固定化前后最适宜的反应温度、pH值、米氏常数等动力学性质的变化研究载体电荷极性、空间阻力对壳聚糖酶动力学性质的影响。方法以两种极性不同的物质(几丁质、DEAE纤维素)为载体、戊二醛为交联剂,对本实验室自制的壳聚糖酶进行了固定化,然后分别分析酶经固定化后最适宜的反应温度、pH值、米氏常数等动力学性质的变化。结论酶经固定化后所产生的空间扩散阻力对壳聚糖酶的动力学性质的影响要比在固定化过程中所用载体所带的电荷的极性对酶的动力学性质的影响大的多。     

在可回用两水相体系中进行青霉素酰化酶的相转移催化裂解青霉素G为6-APA

在光敏感可回用高聚物PNBC与pH敏感型可回用高聚物PADB形成的两水相体系中进行同定化青霉素酰化酶的相转移催化青霉素G产生6-APA的反应.在这个两水相体系中,通过优化,在1%NaCl存在下,6-APA的分配系数可达5.78.催化动力学显示,达平衡的时间近7 h,反应最高得率约85.3%(pH 7.8,20℃).较相近条件下的单水相反应得率提高近20%.在两水相中,底物及产物主要分配在上相,固定化酶分配在下相,底物青霉素G进入下相经酶催化产生的6-APA及苯乙酸义转入上相,从而解除了青霉素酰化酶催化反应的底物及产物抑制作用,达到提高产物得率的效果.此外,采用周定化酶较固定化细胞效率高,占用下相体积小,较游离酶稳定性高,且完全单侧分配在下相.因此,在两水相中进行固定化酶的催化反应具有明显的优越性.形成两水相的高聚物PNBC通过488 nm的激光照射或经滤光的450nm光源照射,pH敏感型成相聚合物PADB可实现循环利用,高聚物的回收率在95%～98%之间.     

有机氯化物的固定化酶处理技术研究

研究了Ｆｅ３Ｏ４固定辣根过氧化物酶的吸附特性、贮存稳定性,考察了固定化酶浓度、ｐＨ值、Ｈ２Ｏ２浓度对催化氧化反应的影响。对均相与非均相酶处理氯酚的效果进行比较,显示固定化酶处理有机氯化物具有很大的优越性。     

血管紧张素转换酶的固相化与性质

目的为从天然肽类混合物中分离血管紧张素转换酶（ angiotensin converting enzyme, ACE）抑制活性物质,对固相化 ACE（固相酶）进行研究。方法在低水活度条件下利用苯甲磺酰氯活化 Sepharose CL- 4B凝胶侧链基团上的羟基,形成高反应活性的苯磺酰基团,通过与 ACE上的氨基反应将酶固定于琼脂糖凝胶。结果固相化 ACE的反应 pH范围较宽,最适反应 pH比溶液酶（自由酶）增加 0.6个单位,达到 8.8。分别在 pH9.0和 pH6.5条件下处理 24 h,固相酶活力保留 82％和 68％,溶液酶只剩下 64％和 39％。两种酶均在 50℃左右活力最大,温度继续升高溶液酶迅速失活。分别在 40℃和 50℃处理 2 h,固相酶剩余活力为 82％和 34％,溶液酶为 52％和完全失活。 20℃放置 1个月,固相酶剩余活力为 61％,而溶液酶只有 20％。结论 ACE固相酶在 pH和温度稳定性方面强于溶液酶。     

非水相酶促转酯化反应动力学

研究了无溶剂体系酶促乌桕脂与硬脂酸甲酯转酯化反应的工艺条件及动力学,提出了反应初速度和初始浓度及反应历程中组分浓度和时间关系的两种动力学模型,结果表明,模型计算值与实验值相符。     

人白细胞弹性蛋白酶抑制剂体外筛选模型的建立及优化

目的探讨人白细胞弹性蛋白酶(HLE)与其底物反应的最适条件,建立一种高通量的HLE抑制剂体外筛选模型。方法通过测定反应产物———对硝基苯胺(p-NA)的光密度值,研究电解质浓度、反应温度、反应体系pH值、酶和底物作用浓度、反应时间及检测波长等对酶促反应的影响程度,确定酶与底物反应的最佳条件。结果确定的最优反应条件为:HLE(0.2 U/ml)30μl,底物(50 mmol/L)100μl,含1.0 mol/L NaCl的Tris缓冲液(pH 7.5),反应温度37℃,反应时间24 h,检测波长为545 nm。结论建立了一种稳定的HLE抑制剂体外筛选模型,该模型灵敏度高、准确性和重复性强,可用作筛选HLE抑制剂的平台。