c-erbB-2反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC7901的影响

目的　观察c erbB 2反义寡核苷酸 (ASODN)对胃癌细胞株SGC790 1细胞的影响。方法　采用脂质体c erbB 2反义 (ASODN)组及空白对照、错配 (SCODN)组转染SGC790 1细胞 ,采用Westernblot观察c erbB 2蛋白表达的变化 ,采用四氮唑盐 (MTT)比色法测定细胞增殖以及对顺铂细胞毒性的影响。结果　转染ASODN能特异性下调c erbB 2蛋白表达和抑制胃癌细胞增殖。此外 ,顺铂在空白组、ASODN组及SCODN组的抑制率分别为 ( 3 3 .3± 2 .0 ) %、( 4 9.9± 5 .9) %和 ( 3 4.8± 3 .0 ) %。与空白对照组相比 ,ASODN组的抑制率显著增加 (P <0 .0 1)。结论　c erbB 2ASODN能抑制胃癌细胞的增殖并增强顺铂的细胞毒性     

N-乙酰氨基半乳糖转移酶2对胃癌细胞SGC7901黏附迁移能力的影响

目的:探讨N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(Polypeptide:N-acetylgalactosam inytransferases 2,ppGalNAc-T2)对胃癌细胞SGC7901黏附迁移的影响。方法:将ppGalNAc-T2正义载体(pEGFP-C1-T2)、空载体(pEGFP-C1)及干扰载体(pS ilenC irc le)转染SGC7901细胞,采用反转录PCR方法检测其在mRNA水平表达,分别通过细胞黏附实验和穿膜实验检测其黏附力和迁移力变化。结果:转染正义ppGalNAc-T2的SGC7901细胞比转染干扰载体的SGC7901细胞对纤连蛋白、基质胶和透明质酸的黏附能力低,但其侵袭迁移能力没有变化。结论:ppGalNAc-T2低表达可能与肿瘤浸润转移具有相关性。     

SKI-Ⅱ抑制Sphkl的表达对胃癌细胞株SGC7901细胞周期的影响

目的 研究SKI-Ⅱ对胃癌SGC7901细胞周期的阻滞作用,并探讨其相关分子机制.方法 常规培养胃癌SGC7901细胞,SKI-Ⅱ单用或联合顺铂干预,流式细胞术检测细胞周期;免疫细胞化学、Western-blot检测药物作用后细胞中Sphkl、P27的表达.结果 SKI-Ⅱ单用或联合顺铂干预48 h后,各用药组细胞周期停滞在G0/G1期比例增多,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);联合用药组比SKI-Ⅱ单用组作用明显(P＜0.05);SGC7901细胞中P27阳性表达率增加,Sphkl阳性表达率减少,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关分析显示:SGC7901细胞中Sphkl与P27的表达呈负相关.结论 SKI-Ⅱ通过抑制Sphkl的表达进而上调P27的表达诱导肿瘤细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞增殖.     

SKI-Ⅱ抑制Sphk1的表达对胃癌细胞株SGC7901细胞周期的影响

目的研究SKI-Ⅱ对胃癌SGC7901细胞周期的阻滞作用,并探讨其相关分子机制。方法常规培养胃癌SGC7901细胞,SKI-Ⅱ单用或联合顺铂干预,流式细胞术检测细胞周期;免疫细胞化学、Western-blot检测药物作用后细胞中Sphk1、P27的表达。结果 SKI-Ⅱ单用或联合顺铂干预48 h后,各用药组细胞周期停滞在G0/G1期比例增多,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组比SKI-Ⅱ单用组作用明显(P<0.05);SGC7901细胞中P27阳性表达率增加,Sphk1阳性表达率减少,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示:SGC7901细胞中Sphk1与P27的表达呈负相关。结论 SKI-Ⅱ通过抑制Sphk1的表达进而上调P27的表达诱导肿瘤细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞增殖。     

MASPIN真核表达载体的构建及其对胃癌细胞株SGC7901增殖的影响

目的 构建MASPIN真核表达载体,分析MASPIN过表达对胃腺癌细胞株SGC7901的影响.方法 PCR扩增MASPIN基因全长,用载体PCR2.1构建重组质粒,转染至胃癌细胞株SGC7901.RT-PCR、Western blot检测MASPIN基因表达变化,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期,观察过表达MASPIN对SGC7901细胞株的影响.结果 成功构建MASPIN/PCR2.1表达载体并转染至胃癌细胞株SGC7901,转染上调了SGC7901细胞株MASPIN在mRNA、蛋白水平的表达.转染MASPIN的SGC7901细胞增殖率随时间而减慢,第24、48、72小时的细胞增殖率分别为93.07%、81.97%、66.5%,明显低于转染空载体组(95.98%、95.79%、95.59%,P<0.05).与转染空载体组相比,过表达MASPIN的SGC7901细胞株在G0/G1期所占比例明显提高(70.3% vs 55.6%),S期细胞减少(19.8% vs 34.9%,P<0.05).结论 成功构建MASPIN/PCR2.1表达载体,过表达MASPIN 可抑制SGC7901细胞株的增殖.     

苦参碱对胃腺癌细胞SGC7901黏附和移动的影响

目的:探讨不同浓度苦参碱对SGC7901细胞黏附和移动能力的影响。方法:5,50,100,250和500 mg/L苦参碱作用SGC7901细胞24 h后,黏附实验检测细胞黏附率,划痕损伤实验(Wound healing assay)检测迁移速度,在Transwell培养体系中,观察苦参碱对SGC7901细胞的抑制作用,PKA试剂盒检测PKA活性。结果:5,50,100,250和500 mg/L苦参碱处理24 h后,SGC7901细胞黏附率分别为78.56%,44.28%,42.48%,39.75%和31.54%,总体呈下降趋势,50 mg/L组与5 mg/L和500 mg/L组比较差异有显著性(P<0.01);与100 mg/L和250 mg/L组比较差异无显著性(P>0.05)。50 mg/L苦参碱作用24 h后SGC7901细胞迁移速度显著降低(P<0.01),Transwell培养体系中,苦参碱组上层迁移到下层的细胞明显少于不加苦参碱组(P<0.01),且PKA活性明显降低(P<0.01)。结论:苦参碱能抑制SGC7901细胞黏附和运动。     

依维莫司联合顺铂对胃癌细胞株SGC7901细胞周期的影响

目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白特异性抑制剂依维莫司（everolimus,RAD001）对胃癌细胞株SGC7901细胞周期的影响、作用机制及其联合顺铂对SGC7901细胞抑制是否具有协同作用。方法体外培养SGC7901细胞,依维莫司单独及联合顺铂作用后,通过HE染色检测各组SGC7901细胞的形态学改变;流式细胞术检...     

芍药苷对人胃癌SGC7901/VCR细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的:探索芍药苷(paeoniflorin)对人胃癌SGC7901/VCR细胞增殖抑制及凋亡的影响,并研究其可能的分子机制。方法:应用不同浓度芍药苷作用SGC7901/VCR细胞48h后,采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;免疫蛋白印迹技术(Western blot)分析Bcl-2、Bax及细胞核内NF-κBp65蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)进一步确定核内NF-κB的转录活性。结果:芍药苷对SGC7901/VCR细胞生长有明显的抑制作用并促进其凋亡,这种作用呈现剂量依赖性;Westernblot和ELISA均证实芍药苷对NF-κB有明确抑制作用;随着芍药苷浓度增加NF-κB和Bcl-2表达水平逐渐下调(P<0.01),但对Bax没有明显影响。结论:芍药苷可明显抑制SGC7901/VCR细胞的增殖,诱导其凋亡;其机制部分可能与阻断NF-κB通路所介导的Bcl-2分子上调有关。     

SGC7901和SGC7901/ADR细胞中S100A6蛋白及mRNA的表达

目的：探讨S100A6与胃癌多药耐药的关系。方法：常规培养人胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞株SGC7901/ADR,在SGC7901/ADR细胞培养基中加入阿霉素（0.375mg/L）维持耐药。取对数生长期的SGC7901和SGC7901/ADR细胞,分别采用免疫细胞化学方法、Westernblot方法和RT-PCR检测S100A6蛋白及mRNA的表达情况。结果：免疫细胞化学染色结果显示S100A6在SGC7901细胞中的阳性染色强度高于SGC7901/ADR细胞;Westernblot结果显示SGC7901细胞中S100A6蛋白的相对表达量（4.356±0.759）高于SGC7901/ADR细胞的（2.243±0.089）（t=4.788,P=0.039）;RT-PCR结果显示SGC7901细胞中S100A6mRNA的相对表达量（0.659±0.017）与SGC7901/ADR的（0.582±0.060）相比,差异无统计学意义（t=2.125,P=0.150）。结论：S100A6蛋白在SGC7901和SGC7901/ADR细胞中的差异性表达可能与细胞多药耐药有关;这种差异表达是翻译后事件。     

熊果酸体外抗胃癌细胞SGC7901机制的研究

目的探讨熊果酸(urso lic ac id,UA)体外抑制胃癌细胞SGC 7901生长的作用机制。方法体外培养人胃癌细胞株SGC 7901,M TT法观察不同浓度UA作用不同时间对细胞生长的影响;不同浓度UA(0~40μm o l/L)处理SGC 7901细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;荧光染料Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;W estern B lotting法检测凋亡相关蛋白B cl-2和B ax的表达。结果20~40μm o l/L UA可抑制SGC 7901的生长,并呈浓度和时间依赖性,其作用12、24、36、48 h的IC50分别为(57.50±1.18)、(34.28±2.05)、(27.54±1.11)、(24.83±1.02)μm o l/L。20~40μm o l/L UA作用24 h后,SGC 7901细胞变圆,出现不同程度的漂浮;同时细胞被阻滞于G0/G1期并发生凋亡,随药物浓度升高,凋亡率增加,凋亡相关蛋白B cl-2表达减少,B ax无明显变化。结论熊果酸对SGC 7901细胞具有较强的抗肿瘤活性,其机制可能与细胞毒作用、增殖抑制作用以及下调凋亡相关蛋白B cl-2表达而促进凋亡有关。     

ppGalNAcT2反义RNA对胃癌细胞SGC7901生物学特性的影响

目的:研究人胃癌细胞SGC7901中多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)基因表达与肿瘤转移相关基因MMP2,TGF-β1表达的相关性,以及对细胞增殖和形态生物学特性的影响。方法:用两个已构建好的反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆。通过共聚焦显微镜,RT-PCR检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后,胃癌细胞SGC7901中TGF-β1,MMP2表达水平,细胞增殖以及形态的变化。结果:反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞的形态发生改变,分裂增殖减慢。结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1,MMP2基因在mRNA表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响。结论:pp-GalNAc-T2可能在肿瘤的增殖、浸润和转移中发挥作用。     

沙培林诱导SGC7901胃癌细胞凋亡及机制的研究

目的:观察沙培林在体外诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的作用,并探讨其分子机制. 方法:分别以不同浓度(0、0.001、0.01、0.1和0.5 KE/ml)的沙培林干预SGC7901细胞6、12、24和48h后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测SGC7901细胞的生长情况;用膜连蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)加碘化丙啶(PI)双染法观察沙培林作用后SGC7901细胞的凋亡情况;用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测沙培林干预后细胞survivin、caspase-3 的mRNA表达变化情况. 结果:沙培林处理后,胃癌SGC7901细胞生长受到抑制,抑制率在一定范围内呈剂量、时间相关性.沙培林作用48h后,流式细胞仪检测SGC7901细胞凋亡显示:随着沙培林浓度的提高,细胞的凋亡率也增加.半定量RT-PCR检测发现:沙培林可以使SGC7901细胞survivin mRNA表达减少,caspase-3 mRNA表达上升(P<0.05). 结论:沙培林在体外可抑制SGC7901细胞增殖,并诱导其发生凋亡,提示该药有治疗胃癌的潜在价值.沙培林诱导SGC7901细胞发生凋亡的生物学效应可能与survivin mRNA表达下调,caspase-3 mRNA表达上升有关.     

端粒酶反义寡核苷酸对SGC-7901胃癌细胞生长的作用

目的 探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸（PS－ASODN）对胃癌细胞生长的作用。方法 脂质体介导的PS－ASODN作用于SGC－7901细胞后，MTT法计算细胞生长抑制率，流式细胞学观察细胞周期及细胞凋亡率变化。结果 终浓度为3、2及1μM的PS－ASODN对SGC－7901细胞均有抑制作用，抑制率与对照组相比差异有显著性意义（P＜0．01）；流式细胞学检测到凋亡峰，细胞阻滞于G0／G1期。对照寡核苷酸无上述作用。结论 以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸不但明显抑制胃癌细胞的增殖，而且具有促凋亡作用，对胃癌具有重要治疗价值。     

ACTN4对胃癌细胞侵袭转移的影响

目的 研究α-辅肌动蛋白（alpha-actinin-4,ACTN4）在胃癌SGC7901细胞及正常胃黏膜上皮RGM-1细胞中的表达及对胃癌SGC7901细胞侵袭和转移的影响。方法 通过qRT-PCR技术及蛋白印迹技术检测ACTN4在胃癌SGC7901细胞及RGM-1正常胃黏膜上皮细胞中的表达;利用RNAi技术敲低SGC7901细胞中的ACTN4表达,并应用qRT-PCR及蛋白印迹技术检测SGC7901细胞中ACTN4的沉默效果;通过Transwell实验检测细胞侵袭及转移能力的变化。结果 ACTN4在胃癌SGC7901细胞中明显高表达;ACTN4-siRNA可有效敲低SGC7901细胞中ACTN4的表达,敲低ACTN4的表达可以明显降低胃癌SGC7901细胞的侵袭转移能力。结论 ACTN4在胃癌细胞发生侵袭转移中发挥着重要作用。     

水飞蓟素对人胃癌SGC 7901细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及其机制

目的：探讨水飞蓟素对人胃癌SGC 7901细胞增殖、迁移及侵袭的影响和促凋亡作用,阐明其可能机制。方法：选取对数生长期的人胃癌SGC 7901细胞,分为对照组和不同浓度水蓟素组（分别给予15、30和60 mg·L^-1水飞蓟素）,倒置显微镜观察各组细胞形态表现,MTT法检测细胞周期和细胞凋亡率,流式细胞术检测细胞增殖抑制率,划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力。结果：水飞蓟素作用SGC 7901细胞24 h后,与对照组比较,30和60mg·L^-1水飞蓟素组细胞贴壁密度变小,细胞形态不规则、体积变小,产生大量细胞碎片。与对照组比较,不同浓度水飞蓟素组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05）,G₁期细胞百分率和细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,细胞迁移距离明显缩短（P<0.05）,穿膜细胞数量明显降低（P<0.05）。结论：水飞蓟素对人胃癌SGC 7901细胞的增殖抑制作用可能是通过诱导G₁期细胞阻滞和早期凋亡引起的。     

RAD001对胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用及分子机制

目的:研究mTOR特异性抑制剂RAD001对胃癌SGC7901细胞增殖的影响,并探讨survivin在其中的作用.方法:常规培养胃癌SGC7901细胞,RAD001单独或联合顺铂干预,MTT法测定RAD001对胃癌SGC7901细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率.免疫细胞化学和Western-blot检测药物作用...     

蝙蝠葛酚性碱对胃癌细胞株 SGC -7901 Fas 基因表达的影响

目的：探讨蝙蝠葛酚性碱（PAMD）抗胃癌的作用机理。方法：通过实时定量PCR的方法观察PAMD对胃癌细胞株SGC-7901FasmRNA表达的影响,以此探讨PAMD抗肿瘤作用机理。结果：PAMD各剂量组均能上调FasmRNA的表达,较阳性对照组明显,但差异与空白组比较均不具有统计学意义（P〉0．05）。结论：PAMD抗胃癌的作用机理可能与其上调Fas基因表达有关。     

甘草次酸对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响及机制

目的探讨甘草次酸(GA)对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响及其可能机制。方法常规培养人胃癌SGC7901细胞,分为实验组1~7组和阴性对照组,实验组1~7组为培养SGC7901细胞加入GA的二甲基亚砜(DMSO)溶液,使GA的终浓度分别为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、200.00μmol·L~(-1),阴性对照组加入和终浓度GA相同体积的DMSO。GA作用48 h,采用四甲基偶唑蓝(MTT)法检测GA对人胃癌SGC7901细胞的增殖作用,用流式细胞仪检测碘化丙啶单染细胞的DNA含量。结果 MTT法测定结果显示,终浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、200.00μmol·L~(-1)的GA对人胃癌SGC7901细胞抑制率分别为(8.27±1.80)%、(13.74±3.16)%、(25.85±4.35)%、(46.03±5.88)%、(97.78±1.10)%、(99.56±0.21)%、(98.86±0.35)%;GA终浓度低于100.00μmol·L~(-1)时,人胃癌SGC7901细胞抑制率随GA浓度的增加而逐渐增加,呈明显的剂量依赖关系(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,终浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、200.00μmol·L~(-1)的GA作用人胃癌SGC7901细胞48 h后,DNA处于亚二倍体、二倍体、四倍体、介于二倍体和四倍体之间的细胞数量差异有统计学意义(P<0.001);浓度低于150.00μmol·L~(-1)时,亚二倍体的细胞数量逐渐增加,且呈浓度依赖性(P<0.05);浓度高于150.00μmol·L~(-1)后,亚二倍体的细胞数量逐渐减少;浓度低于100.00μmol·L~(-1)时,二倍体的细胞数量逐渐增加,介于二倍体与四倍体之间、四倍体的细胞数量则逐渐减少;当浓度超过100.00μmol·L~(-1)时,二倍体的细胞数量逐渐减少,四倍体的细胞数量逐渐增加,介于二倍体与四倍体之间的细胞数量变化不大。结论 GA对人胃癌SGC7901细胞的生长有抑制作用,其抑制过程可能有细胞凋亡的参与,也有周期的改变。     

涤痰化瘀汤对人胃癌SGC—7901细胞生长影响的研究

目的 研究涤痰化瘀汤及其药物血清（剂量为临床等效果 量）对体外培养的人胃癌SGC－7901细胞株的抑制作用。方法 采用MTT法,观察细胞抑制率,结果 涤痰化瘀汤大、中、小剂量组及其药物血清组对人胃癌SGC－7901细胞的抑制率分别为78.5％、41.4％、27.8％和23.9%。结论 涤痰化瘀汤及其药物血清对人胃癌SGC－7901细胞生长均有明显的抑制作用。