Ad-OPG转染脂肪干细胞复合Ⅰ型胶原修饰的PLGA对骨质疏松骨折愈合后生物力学的影响

目的探讨骨质疏松骨折后腺病毒介导的骨保护素(Ad-OPG)转染脂肪干细胞复合Ⅰ型胶原修饰的PLGA对骨折骨愈合过程中生物力学的影响。方法建立大鼠骨质疏松骨折模型,将成功建立模型的27只大鼠分为治疗组和空白对照组,大鼠的左侧股骨骨折肢Ad-OPG转染脂肪干细胞复合I型胶原修饰的PLGA(ADSCs-COL/PLGA)为治疗组A组,右侧为脂肪干细胞与PLGA复合体(ADSCs/PLGA)是治疗组B组,空白对照组(C组)为股骨骨折处注射蒸馏水。治疗后2、4、8周处死大鼠,取股骨测量新生骨痂的大小及相关生物力学指标。结果 Ad-OPG转染ADSCs-COL/PLGA组在骨折后2周骨痂横截面积与ADSCs/PLGA组和空白对照组,比较差异有统计学意义(P<0.01)。骨折后4周3组骨痂比较差异无统计学意义。骨折后4、8周,以Ad-OPG转染ADSCs-COL/PLGA组的剪切强度,弹性模量增高最为显著,与ADSCs/PLGA组和空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);同时该组剪切应变随着时间推移降低最为显著,与ADSCs/PLGA组和空白对照组比较有统计学意义(P<0.01)。Ad-OPG转染ADSCs-COL/PLGA组在骨折后4、8周最大载荷及最大应力均比其它2组增加明显(P<0.01)。骨折后2周,各组应力比较无统计学意义。结论 Ad-OPG转染脂肪干细胞复合I型胶原修饰的PLGA可以促进早期骨痂的形成,增加剪切强度、弹性模量、最大应力及最大载荷、降低剪切应变,改善骨折愈合后的力学强度。     

中药骨康含药血清培养脂肪干细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合的研究

目的探讨中药骨康含药血清培养脂肪干细胞移植促进骨折愈合过程中骨折端骨痂的生长情况。方法制备中药骨康含药血清并进行脂肪干细胞培养,移植脂肪干细胞到骨折部位,用x线观察骨折部位骨痂生长情况。结果第3代脂肪干细胞流式鉴定CD90阳性,CD34、CD49低表达。第1、2周各组骨折愈合情况差异无统计学意义。第4周干预组的骨折已完全愈合,断端边缘消失,骨折线局部密度增高,断端的塑形改造较其他各组明显提前;对照组骨折有较多骨痂形成,但断端边缘仍可见,骨折线局部密度稍淡;空白组骨折线模糊,可见骨痂形成,断端边缘清晰可见,整体愈合情况不如干预组和对照组。干预组、对照组DR片评分与空白组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,干预组与对照组差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论中药骨康含药血清培养脂肪干细胞移植可促进骨质疏松性骨折愈合。     

脂肪干细胞复合PLGA体外诱导成软骨的实验研究

目的 探讨脂肪干细胞接种于PLGA支架复合培养体外诱导成软骨的能力.方法 收集脂肪干细胞,调整细胞悬液密度为4.0×1010>/L,接种在PLGA支架材料上进行复合,在特定培养基条件下,对脂肪干细胞/PLGA进行成软骨诱导,于诱导3周后应用扫描电镜观察,藩红O/固绿染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学检测成软骨表型;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测前Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan和Sox9的mRNA基因表达情况.结果 脂肪干细胞接种子PLGA材料后,复合体表面逐渐光滑润泽,质地逐步增韧,体外诱导后细胞/PLGA支架复合体基本保持原状;3周时取材行扫描电镜观察,可见细胞在材料表面附着生长,基质分泌明显,连串成片;石蜡切片藩红O/固绿染色可见诱导组细胞胞外基质分泌旺盛,和支架材料连接成片,呈强阳性红染;胞外基质Ⅱ型胶原免疫组织化学着色阳性;RT-PCR检测前Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan和Sox9的mRNA基因均阳性表达.结论 脂肪干细胞能够和PLGA复合培养,在特定诱导培养基条件下可以向软骨方向分化,形成类软骨样组织.     

骨质疏松对大鼠胫骨骨折愈合质量的影响

目的　探讨骨质疏松对大鼠骨折愈合质量的影响。方法　 84只 4月龄雌性SD大鼠随机分成去卵巢骨质疏松 (OP)组和假手术对照 (SO)组 ,两组各 4 2只。去势后 10周骨质疏松模型建立后 ,各大鼠建立胫骨骨折内固定模型。骨折后 2、4、6、12、18周取胫骨标本行骨组织形态学、骨矿物质密度 (BMD)、生物力学等检测 ,比较两组骨折愈合情况。结果　与SO组比较 :( 1)OP组骨折愈合过程中软骨内成骨过程延缓 ,骨小梁结构疏松、排列紊乱 ,可见大量破骨细胞 ;( 2 )骨折后 6、12、18周OP组骨痂BMD比SO组分别小 12 8%、18 0 %、17 0 % ,差异有显著意义 (均P <0 0 5 ) ;( 3)骨折后 4、6、12、18周OP组骨痂最大载荷比SO组分别小 2 4 3%、31 5 %、2 6 6 %、2 8 8% ;最大应力比SO组分别小 2 3 9%、33 6 %、19 1%、2 4 9% ,两指标在各时点差异均有显著意义 (均P <0 0 5 )。结论　骨质疏松影响大鼠胫骨骨折中晚期愈合质量 ,主要表现为软骨内成骨过程缓慢、破骨细胞骨吸收活跃、骨矿物沉积减少和力学强度恢复障碍     

脂肪干细胞复合富血小板血浆对脂肪颗粒移植的影响

目的 探讨运用组织工程技术构建的组织工程脂肪对颗粒脂肪移植的影响。 方法 通过酶消化法获取脂肪干细胞(ASCs),采用两步离心法制备富血小板血浆(PRP),运用组织工程技术构建组织工程脂肪。根据移植物的组成不同分为ASCs+PRP+脂肪颗粒、PRP+脂肪颗粒、ASCs+脂肪颗粒及对照组(PBS+脂肪颗粒),分别移植入裸鼠皮下,并于移植后10 d、30 d、60 d及90 d取出移植物,进行大体观察及体积测量,镜下观察组织结构变化。 结果 90 d后ASCs+PRP+脂肪颗粒组移植物质地柔软、颜色淡黄,较其它组别更接近于正常的脂肪组织,且具有更多的存活体积(P<0.05)及更好的组织学形态。 结论 运用ASCs与PRP复合脂肪颗粒能够成功构建组织工程脂肪,是一种新的安全有效的修复颌面部及全身软组织缺损方法,具有较高的应用前景。     

自体脂肪干细胞移植在创面愈合的研究进展

难愈性和不愈性创面一直是整形科的一大难题.传统的治疗慢性创面的方法的局限性,通常达不到其理想的治疗效果.目前,脂肪干细胞应用于创面愈合,其基础和临床已深入研究,在此就创面愈合机制、脂肪干细胞特性与作用和临床细胞移植的方法等方面的研究进展展开综述.     

棕色脂肪干细胞与白色脂肪干细胞移植对心肌梗死大鼠心功能的影响

目的对比研究棕色脂肪干细胞（BADSCs）与白色脂肪干细胞（ADSCs）治疗急性心肌梗死大鼠的效果。方法采用酶消化法分别分离大鼠腹股沟脂肪组织及肩胛骨下脂肪组织,获得ADSCs与BADSCs,并进行流式分析与多谱系分化鉴定。30只雄性SD大鼠随机分为PBS对照组、ADSCs移植组及BADSCs移植组,建立急性心肌梗死模型,将各组对应细胞直接注入大鼠心肌梗死边缘区。移植后4周进行心功能检测并利用组织学检测移植细胞的体内分化与血管化作用。结果术后4周,与PBS对照组相比,ADSCs以及BADSCs移植组大鼠心功能均显著提高（P〈0.05）,且纤维化程度显著减弱（P〈0.05）。免疫荧光结果表明,移植的BADSCs成心肌分化数量显著高于ADSCs。免疫组化结果显示,ADSCs移植组以及BADSCs移植组大鼠心肌梗死区血管密度均较PBS对照组显著增加（P〈0.05）,ADSCs移植组血管密度显著高于BADSCs移植组（P〈0.05）。结论不同来源脂肪干细胞移植均具有改善心肌梗死患者心功能的作用,虽然BADSCs体内促血管化作用不如ADSCs,但其具有明显的心肌分化能力,可有效改善心脏功能。     

骨髓间充质干细胞对大鼠骨质疏松股骨干骨折早期愈合影响的实验研究

目的:探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠骨质疏松股骨干骨折早期愈合的影响.方法:骨质疏松大鼠股骨干骨折模型随机平分为三组,模型组、尼尔雌醇组与BMSCs组.模型组给予灌胃生理盐水,尼尔雌醇组给予灌胃尼尔雌醇,BMSCs组经尾静脉注入第三代BMSCs.两组都治疗观察4周,记录股骨干骨折早期愈合情况.结果:尼尔雌醇组...     

人大网膜间充质干细胞的体外培养、鉴定及诱导化分方法

目的建立人大网膜脂肪问充质干细胞（adiposederivedIIlesechymalSteITIcells,ADSCs）的原代培养及诱导分化为脂肪细胞的方法．方法术中取人大网膜脂肪组织,采用胶原酶消化法原代培养,经流式细胞仪鉴定细胞CD44、CD34、CD90和CD45分子、MTTr法测定细胞生长曲线,取P3细胞以3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素、地塞米松及吲哚美辛诱导该细胞向脂肪细胞分化,油红O脂肪染色法进行脂肪细胞鉴定．结果培养卅的细胞形态均-呈梭形或漩涡状生长,经流式细胞仪鉴定为ADSCs,细胞生长曲线表明P3细胞增值旺盛,用分化培养基诱导后,细胞形态由梭形变为圆形,细胞体积增大,胞浆内聚集脂肪颗粒,油红0染色鉴定为成熟的脂肪细胞．结论该方法能培养出形态均一的人大网膜ADSCs,经诱导后可向成熟脂肪细胞分化．     

兔脂肪基质细胞的分离培养及其成骨活性的研究

目的探讨兔脂肪组织来源脂肪基质细胞的分离培养方法及其成骨活性．方法取成年新西兰大白兔腹股沟皮下脂肪组织1～2mL,采用机械切割及Ⅰ型胶原酶消化法从脂肪组织中分离获得脂肪基质细胞,原代培养及传代以后,以诱导培养基（内含10mmol／Lβ-甘油磷酸钠、10～8mol／L地塞米松、50mg／L维生素C）进行诱导培养．实验评估：应用形态学观察、碱性磷酸酶钙-钴法染色检测碱性磷酸酶,Von Kossa钙化结节染色检测钙化结节的形成等方法来鉴定诱导分化所得细胞的成骨活性．结果行诱导培养的脂肪基质细胞呈多层成长,形态多为梭形,细胞外基质有白色钙化结节形成;细胞增殖速度减慢,生长周期变长．碱性磷酸酶钙钻法染色及Von Kossa钙化结节染色后均表现为阳性,未诱导培养的脂肪基质细胞则表现为阴性．结论初步建立了一套南脂肪组织分离培养脂肪基质细胞的方法,并证明该细胞在体外诱导培养条件下具备向成骨细胞分化的能力．     

外源性NO对脂肪干细胞成软骨分化的影响

目的 通过观察不同浓度外源性一氧化氮（nitric oxide ,NO）供体硝普钠（SNP）对脂肪干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）增殖状况及相关基因表达的影响,探讨外源性NO在ADSCs成软骨分化中的作用。方法 获取并培养ADSCs,分别进行成骨和成脂诱导,采用茜素红染色和油红O染色进行多向分化鉴定。NO检测试剂盒检测ADSCs成软骨分化过程中NO的变化;采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)法检测不同浓度SNP（0.25 mmol/L、1.00 mmol/L、4.00 mmol/L）下ADSCs的增殖情况。以Real time-PCR（RT-PCR）方法检测ADSCs在不同浓度SNP下,表达转化生长因子-β1（TGF-β1）以及成软骨分化特异基因——信号传导蛋白Smad3、 Ⅱ胶原蛋白（Col-Ⅱα1）基因的变化。结果 培养的细胞经成骨和成脂诱导后茜素红染色和油红O染色呈阳性;ADSCs成软骨分化过程中,培养上清液中NO浓度始终比对照组高（P<0.05）;与对照组相比,低浓度SNP（0.25 mmol/L、1.00 mmol/L）对ADSCs的增殖无明显影响（P>0.05）,高浓度SNP（4.00 mmol/L）抑制ADSCs增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测发现SNP能抑制ADSCs自身TGF-β1 mRNA的表达,同时抑制Smad3 mRNA和Col-Ⅱα1 mRNA的表达。结论 在ADSCs成软骨分化过程中,外源性NO可以通过抑制ADSCs自身产生TGF-β1,并且抑制TGF-β下游信号通路,从而抑制成软骨分化。     

球囊扩张椎体后凸成形术治疗骨质疏松性椎体压缩骨折

目的 观察和分析球囊扩张椎体后凸成形术的初步临床疗效。方法 自2001年2月-2002年6月，采用球囊扩张椎体后凸成形术治疗12例骨质疏松性椎体压缩骨折，18个患椎，均经两侧椎弓根穿刺灌注骨水泥。结果 所有患者术后疼痛均明显减轻或消失，并于1-10d内出院，无1例出现并发症，椎体高度较术前明显改善。结论 球囊扩张椎体后凸成形术可有效缓解因骨质疏松性椎体压缩骨折所引起的疼痛，恢复椎体高度，只要严格按照规程操作，乃是一种安全，有效，简便的治疗方法。     

脂肪组织分泌物中蛋白浓度对诱导脂肪干细胞成脂的影响

目的 观察胎牛血清(FBS)对体外培养获取的脂肪组织分泌物(ATE)诱导大鼠脂肪干细胞(ADSCs)成脂能力有无影响,并探讨ATE中不同蛋白浓度对诱导大鼠ADSCs成脂、细胞增殖和迁移能力的影响。 方法 培养大鼠ADSCs并传代,对ADSCs成骨和成神经诱导,采用茜素红染色和神经丝蛋白(NF)免疫荧光检测鉴定。含有FBS和无FBS的培养基对脂肪组织块进行培养并收集ATE,对第4代ADSCs进行诱导,第7 d时油红染色鉴定并计算成脂率;收集无FBS培养基获取的ATE,分为不同蛋白质量浓度组(100 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL组),对第4代ADSCs进行成脂诱导,观察各组成脂率;并观察不同蛋白质量浓度组对ADSCs细胞增殖和迁移的影响。 结果 培养的ADSCs成骨和成神经诱导后茜素红染色和NF免疫荧光染色阳性;获取ATE时添加或不添加FBS,在第3 d时均能诱导ADSCs成脂,第7 d时的成脂率差异无统计学意义;ATE 500 μg/mL组较100 μg/mL、250 μg/mL组成脂率高(P均<0.05),细胞培养2 d后,3个不同蛋白质量浓度组均抑制细胞增殖,不同蛋白质量浓度间细胞抑制率差异无统计学意义(P均>0.05);ATE中不同蛋白质量浓度对细胞的迁移无影响。 结论 无FBS的培养基获取的ATE,短期内对ADSCs成脂能力没有影响;ATE蛋白浓度与ADSCs成脂率有关。     

聚焦解决模式用于老年骨质疏松性骨折的效果分析

目的:分析对老年骨质疏松性骨折实施聚焦解决模式的干预效果。方法:选取我院在2018年4月-2019年6月接受的80例老年骨质疏松性骨折患者作为此次研究对象,按照一比一分组的方法将80例患者分为人数相同的2组。将接受常规护理模式的40例患者作为对照组,将接受聚焦解决模式干预的40例患者作为观察组。通过对比2组患者在接受护理前后抑郁情绪和焦虑情绪的评分以及骨折愈合程度进行对比,判断聚焦解决模式的干预效果。结果:观察组在接受护理前抑郁和焦虑情绪评分相差并不明显,P>0.05,在接受护理后观察组抑郁情绪和焦虑情绪评分降低幅度大于对照组。观察组出院后骨折愈合程度好于对照组,观察组治疗效果较好,P<0.05;观察组护理总满意度高于对照组,P<0.05;观察组术后并发症总发生率比对照组低,P<0.05。结论:对于因老年骨质疏松而出现骨折的患者而言,使用聚焦解决模式可以缓解患者的焦虑和抑郁情绪,加快患者髋关节的恢复速度,提高骨折的愈合效果,降低术后并发症发生风险,对患者的术后恢复起到了积极的影响,同时还能增加患者满意度,值得在今后借鉴。     

应用脂肪干细胞构建小口径组织工程血管平滑肌层的实验研究

目的 探索利用脂肪干细胞在生物反应器内构建组织工程血管平滑肌层的可行性.方法 用抽吸的脂肪获取脂肪干细胞,在生长因子TGF-β1和BMP4作用下诱导成平滑肌细胞,然后将诱导的平滑肌细胞接种于生物材料PGA上形成细胞-材料复合物,将该复合物置于生物反应器内进行培养,在模拟胚胎发育血流动力学的刺激下(搏动频率75次/min,扩展量<5%)构建小口径的血管平滑肌组织.培养8周后,取材做组织学和生物力学检测并与正常血管对比.结果 脂肪干细胞在TGF-β1和BMP4的诱导下,细胞具有平滑肌细胞特有的"波峰-波谷"样生长特点,并表达平滑肌细胞的特异性标记物:α-SMA、SM22α、calponin、SM-MHC;反应器内培养8周后,构建管样组织胶原分泌旺盛,具有一定的力学强度和弹性.结论 利用脂肪干细胞可在体外生物反应器内构建组织工程化小口径血管,为临床上小血管病变的修复提供了一种新的、有效的途径.     

SPK1基因转染脂肪间充质干细胞对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的治疗效果及对辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的考察SPK1基因转染脂肪间充质干细胞(ADMSC)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗效果及对辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡的影响。方法采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白_35-55对小鼠进行EAE诱导,将44只小鼠随机分为4组:空白对照组(NC组)、模型组(EAE组)、ADMSC组和ADMSC-鞘氨醇激酶1(SPK1)组。在免疫后40 d时,对小鼠进行脑与脊髓的病理学观察、脑组织Th17/Treg相关炎症指标检测、脑和脊髓组织中白细胞介素17和叉头框蛋白P3蛋白表达检测以及脾脏免疫细胞的流式细胞术分析。结果免疫后40 d时,EAE组小鼠脑和脊髓组织发生严重炎性细胞浸润髓鞘脱失严重,ADMSC组与ADMSC-SPK1组脱髓鞘和轴突损伤得到改善;与EAE组比较,ADMSC组和ADMSC-SPK1组的脑组织IL-17A(Z=1.021,P=0.017;Z=1.193,P=0.009)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(Z=2.540,P=0.004;Z=3.005,P=0.006),与ADMSC组比较,ADMSC-SPK1组的脑组织IL-1...     

大鼠脂肪基质干细胞的体外培养及其成骨细胞分化特性的研究

目的研究脂肪基质干细胞（ADSCs）分离培养的方法,探讨大鼠ADSCs在体外向成骨细胞分化的能力。方法从成年SD大鼠腹股沟处获取脂肪组织后进行体外培养,并通过骨诱导培养基使其分化成成骨细胞,通过碱性磷酸酶（ALP）v、on Kossa染色鉴定向成骨细胞分化能力。采取逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测成骨细胞的标志基因。结果大鼠脂肪组织能够分离培养出ADSCs;向成骨细胞诱导,ALP、von Kossa染色阳性,RT-PCR检测有ALP、osteocalcin及osteopontin表达。结论成功从大鼠脂肪组织分离培养出ADSCs,其生物学特性与骨髓基质干细胞（MSCs）相似,能够向成骨细胞分化,有希望成为组织工程理想的种子细胞来源。     

无名异冲剂促进去卵巢大鼠骨质疏松性骨折愈合的机制研究

为探讨无名异冲剂促进去卵巢 SD大鼠骨质疏松性骨折愈合的机制 ,用 48只 6月龄雄性 SD大鼠建立骨质疏松性骨折模型 ,随机分为模型组、跳骨片组、仙灵骨葆组、无名异冲剂组 ,于灌胃后 2周、4周取材 ,观察 X线片、骨密度、光镜 ,骨痂钙、磷、胶原含量 ,结果显示灌胃第 2周时 ,各组动物各项指标均无显著性差异 ;第4周时 ,无名异冲剂组的骨密度 ,骨痂钙、磷、胶原含量的检测结果与模型组有显著性差异 ( P<0 .0 5 ) ,X线及光镜观察骨痂的生长情况 ,无名异冲剂组也优于模型组 ,说明无名异冲剂能够通过提高骨密度 ,改善骨骼钙、磷、胶原的代谢 ,促进骨折端骨痂的生长 ,达到治疗骨质疏松性骨折的目的。