携载PSMA单抗靶向前列腺癌的纳米级脂质微泡的制备及体外寻靶能力

目的制备携载PSMA单抗靶向人前列腺癌的纳米级脂质微泡,并观察其体外寻靶能力。方法利用静电吸附法制备携载PSMA单抗靶向前列腺癌的脂质纳米级微泡,检测其一般特性;免疫荧光法检测抗体与纳米级微泡的结合情况;用细胞免疫荧光分析鉴定PSMA的表达及其在细胞膜上的定位;普通光镜下观察靶向微泡对前列腺癌细胞的寻靶能力,同时以胃癌细胞作对照。结果携载PSMA单抗的靶向纳米级微泡分布均匀,平均粒径为(623.70±66.05)nm,免疫荧光法显示微泡表面可见绿色荧光,细胞免疫荧光检测前列腺癌细胞膜高表达PSMA,体外寻靶实验显示该靶向微泡可与人前列腺癌LNCAP及C4-2细胞牢固结合,而与胃癌MKN45细胞不结合。结论本实验成功制备的携载PSMA单抗靶向人前列腺癌的纳米级脂质微泡具有较强的体外寻靶能力,能特异性地与前列腺癌细胞结合。     

超声微泡-阳离子纳米脂质体复合体制备的实验研究

目的 利用生物素亲和素系统连接超声微泡与阳离子纳米脂质体,制备一种新型的基因载体.方法 机械振荡法制备生物素化超声微泡(Bio-MB).薄膜分散-膜挤压法制备生物素化阳离子纳米脂质体(Bio-CNLP).采用生物素亲和素系统偶联Bio-MB与Bio-CNLP.以非生物素化超声微泡(MB)加非生物素化阳离子纳米脂质体(CNLP)组作为对照,行激光共聚焦显微镜观察复合物形态与连接效果.结果 Bio-CNLP的平均粒径约291.7 nm,平均表面电荷约(21.6±2.1)mV.激光共聚焦显微镜下Bio-MB+Bio-CNLP组可见绿色Bio-MB壁因连接Bio-CNLP而不光滑,周围可见红色小圆形点状Bio-CNLP呈花环状聚集,而MB+CNLP组MB壁光滑,周围未见CNLP聚集.结论 生物素亲和素系统可成功将Bio-CNLP与Bio-MB牢固连接,有望为肿瘤基因治疗提供一种新的手段,为探索基因载体和转染方法提供一种新的思路.     

超声微泡连接特异性抗体的制备方法及靶向化处理因素对超声微泡物理性质的影响

目的 探讨超声微泡连接特异性抗体的制备方法及靶向化处理因素对超声微泡物理性质的影响.方法 应用生物素-链霉亲和素连接系统,使注射用六氟化硫微泡(SonoVue)与特异性抗血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)抗体相连接,用间接免疫荧光法检测抗体与微泡的连接,用马尔文激光粒径分析仪分别测定生物素化处理前后微泡的粒径,采用超声诊断仪评价微泡靶向化构建前后的显像效果.结果 SonoVue与特异性抗体成功连接,间接免疫荧光检测呈阳性.生物素修饰后的微泡粒径分布变窄,与普通微泡的超声显像效果略有差异.结论 通过生物素-链霉亲和素系统可以成功靶向化构建超声微泡,靶向化处理因素对微泡的粒径有一定影响,对微泡的超声显影效果略有影响.     

生物素-链霉亲和素酶免疫法PSA测定的评价

目的 评价生物素-链霉亲和素酶免疫分析法(BSA-ELISA)测定前列腺特异性抗原(PSA)并与化学，发光法(CLIA)进行比较。方法根据EP9-A文件要求采集数据，并以相应软件分析这两种方法的相关性；同时对BSA-ELISA的测定范围，变异系数(CV)，最小检测限进行测定。结果两种方法测定的结果具有较好的相关性。回归方程Y=0．985X-0．131，相关系数(r)=0．997。PSA的批内平均CV为2．21％，批间平均CV为3．08％。测定范围为1．50～85．00μg／L。最小检测限为0．30μg／L。结论采用全自动酶免疫分析仪的BSA-ELISA与CLIA自动分析仪测定PSA的相关性好，结果稳定，偏差小，可以在临床上常规应用。     

LHRHa靶向微泡造影剂的制备及体外寻靶实验

目的 制备人卵巢癌靶向超声造影剂,观察其体外寻靶能力。方法 采用生物素-链霉亲和素法制备促黄体生成素释放激素类似物(LHRHa)靶向脂质微泡,以免疫荧光染色验证LHRHa与脂质微泡的结合情况,并以普通脂质微泡作为对照,在倒置显微镜下观察LHRHa靶向脂质微泡对人卵巢癌A2780/DDP的体外寻靶能力。结果 LHRHa靶向脂质微泡免疫荧光阳性;体外寻靶实验显示LHRHa靶向脂质微泡能够与表面存在LHRH受体的A2780/DDP细胞特异性结合,而普通脂质微泡则不能结合。结论 利用生物素-链霉亲和素方法可成功制备LHRHa靶向脂质微泡造影剂,该靶向造影剂具有体外寻靶能力。     

亲和素桥连构建携抗P选择素单抗靶向超声微泡及体外荧光鉴定

目的 体外荧光方法鉴定生物素-亲和素-生物素(BSB)桥连技术构建携带抗P-选择素单抗靶向超声微泡(MB-BSBp)的町靠性.方法 不同荧光标记物分别标记MB-BSBp的不同部位,观测微泡荧光强度(0、1、2和3级),以普通脂质超声微泡(MB)作对照.结果 加入FITC荧光亲和素孵育,生物紊化脂质微泡(MB-B)呈现明亮的绿色荧光(3级),而MB无荧光显示(0级).以两个浓度梯度(1:4和1:16)的DTAF荧光二抗(抗抗P-选择素单抗抗体)标记MB、MB-B、MB-BS和MB-BSBp,MB-BSBp在两个浓度梯度下均发出明亮的绿色荧光(3级);而MB-B、MB-BS仅在1:4时显示微弱的绿色荧光(1级),MB在两个浓度梯度下均无荧光显示(0级).结论 抗P-选择素单抗通过亲和素桥连有效装配在MB-B表面,体外荧光法是鉴定靶向微泡配体连接可靠性的简便方法.     

L-S靶向超声造影微泡的制备及声学性质的实验研究

目的探讨将淋巴细胞选择素(Lymph-Selectin,L-S)链接到脂质超声造影微泡膜表面的可行性,并体外验证其声学性质,为淋巴结特异靶向超声造影制备靶向微泡。方法采用静电吸附法将L-S链接到普通脂质超声微泡膜表面制备成L-S靶向超声造影微泡,荧光免疫染色实验验证L-S与脂质微泡膜的结合;流式细胞仪检测不同浓度L-S与微泡的结合率;超声体外验证L-S靶向微泡声学性质。结果 L-S靶向微泡的免疫荧光染色实验为阳性;L-S抗体浓度为5、15、35 μg/ml时L-S与脂质微泡的平均结合率分别为(9.88±1.49)%、(29.59±2.23)%、(86.66±4.71)%,两两比较均有统计学意义(P0.01);体外声学造影实验中,普通微泡组(UCM)和L S靶向微泡组(TUCM)平均灰度值分别为:(75.77±7.08)dB和(73.72±8.19)dB(P0.05)。结论采用静电吸附法可将L-S链接到脂质超声微泡膜表面制备成L-S靶向超声微泡,其结合率与加入的L-S抗体浓度有关。L-S的链接不会破坏靶向微泡的声学特性。     

自制靶向脂质微泡与普通脂质微泡超声显影的对比实验研究

目的探讨自制的靶向脂质微泡超声造影剂在正常兔肝脏与VX2兔肿瘤模型的超声成像特点,对比研究其与普通脂质做泡超声造影剂超声成像的异同。方法分别从正常兔及VX2肿瘤兔耳缘静脉团注普通脂质微泡超声造影剂与自制靶向脂质微泡超声造影剂,使用飞利浦iU22超声诊断仪的造影模式,实时监控2种不同造影剂各自的超声显影特点。DFY定量分析诊断仪分析图像的达峰时间、峰值回声强度、清除时间并对各组参数进行比较。结果在正常兔肝实质,普通脂质微泡超声造影剂(MB)达峰时间明显早于自制的靶向脂质微泡超声造影剂(MB’)达峰时间,峰值回声强度前者高于后者,清除时间前者显著短于后者。在VX2肿瘤区,MB达峰时间明显早于MB’,峰值回声强度前者明显高于后者,清除时间前者显著短于后者。结论自制靶向脂质微泡超声造影剂有其自身独特的超声显像过程和特点,呈"负向显影"模式。     

CA125的生物素-亲和素酶联免疫检测方法的建立

目的:建立CA125的生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法,进行方法学评价.方法:纯化卵巢癌患者腹水得到CA125抗原,制备生物素化CA125抗体,酶标板包被生物素化BSA,建立BA-ELISA反应系统.观察本方法的灵敏度、回收率、特异度、稳定性等指标.测定卵巢癌患者以及卵巢良性肿瘤患者血清CA125水平,与化学发光免疫检测结果对比.结果:BA-ELISA方法灵敏度为3.18 U/L,与CEA、PSA等交叉反应率低;高低浓度样品平均回收率分别为107.11%、99.96%,批内和批间变异分别为7.97%、8.04%,稳定性好.本研究与化学发光免疫检测检出结果差异无统计学意义,检测卵巢癌患者血清CA125水平,回归方程为y＝-6.830 + 1.014x,r＝0.993.检测卵巢良性肿瘤患者血清CA125水平,回归方程为y＝1.936 + 0.937x,r＝0.986.结论:BA-ELISA检测方法的建立在诊断卵巢癌等方面灵敏度高、特异性强,操作简便,无需昂贵仪器,适合广泛应用.     

靶向BST2微泡造影剂的制备及其与肿瘤细胞的体外结合能力

目的 制备骨髓基质抗原蛋白(BST2)靶向微泡造影剂,观察其与小鼠前列腺癌细胞(RM-1)和小鼠乳腺癌细胞(4T1)的体外结合能力,探讨BST2作为前列腺癌潜在靶点的可行性.方法 通过免疫荧光染色和蛋白质印迹法对BST2在两种细胞中的表达进行对比分析.采用生物素-亲和素桥连技术制备BST2靶向脂质微泡,普通光镜下观察BST2靶向微泡造影剂,并采用Accu Sizer 780A粒度仪进行表征,以非靶向微泡作为对照,比较其与RM-1和4T1两种肿瘤细胞系的结合特性及结合率.结果 BST2在RM-1细胞中的表达高于在4T1细胞中的表达;BST2靶向微泡与RM-1细胞的黏附率明显高于其与4T1细胞的黏附率,并远远高于非靶向微泡的黏附率.结论 BST2靶向微泡造影剂可与RM-1细胞特异性结合,有望作为前列腺癌的特异性超声分子探针用于前列腺癌的靶向分子成像.     

含氯消毒剂两种不同配制方法的对比研究

目的探讨含氯消毒剂的快速配制方法,为临床消毒工作提供指导。方法随机选择2007年6月我院经常使用含氯消毒剂的卫生保洁人员60人,对同一种剂型的含氯消毒剂用常规配制法和快速配制法进行配制,对配制所用时间、准确性、能否口算、对配制方法的满意度等方面进行对比研究。结果快速配制法配制含氯消毒剂所用时间短,准确程度高,计算方便。结论含氯消毒剂的快速配制方法适合保洁员、卫生员等各文化层次人员应用,不仅可以确保消毒效果,而且可以大大提高临床消毒工作效率。     

Prostate-specific antigen detection by using a reusable amperometric immunosensor based on reversible binding and leasing of HRP-anti-PSA from phenylboronic acid modified electrode

BACKGROUND: In recent years, many automated immunoassay analyzers have been developed for accurate diagnosis of various disease states and to improve effective drug administration. Amperometric immunoassay has been increasingly applied to laboratory medicine due to its ease in automation, rapid speed and low detection limits. It is important to develop reusable immunologically-sensitive elements for prostate-specific antigen (PSA) detection. METHODS: The strategy for the immunosensor construction is based on the enzyme-conjugated prostate-specific antibody (HRP-anti-PSA) reversible binding with a self-assembled phenylboronic acid monolayer on gold. RESULTS: After incubating an HRP-anti-PSA modified electrode in a PSA solution, a decrease in the electrocatalytic response of the HRP-anti-PSA modified electrode to the reduction of H(2)O(2) is observed. The photometric activity assays show that this decrease of the electrocatalytic response arises from the formation of immunocomplexes of HRP-conjugated anti-PSA and its antigen, not from the loss of bound HRP-anti-PSA from the electrode surface. Analytical performances and optimal conditions of the described immunosensor are also investigated. Under the optimal conditions, the amperometric immunosensor shows a linear increase of the relative intensity in 2 PSA concentration range from 2 to 15 ng/ml and 15 to 120 ng/ml, respectively. CONCLUSION: This method could be used for rapid analysis of PSA and potentially other antigens.     

不同吸附剂对肝衰竭患者血浆总胆红素、血氨及胆汁酸的吸附作用对比研究

目的比较几种吸附剂对肝衰竭患者血浆总胆红素、胆汁酸及血氨的吸附作用。方法收集4名肝衰竭患者血浆，将每位患者血浆分为6份，分别用以下6种吸附材料进行血浆灌注：丽珠HA330吸附树脂（HA330组）；用人血白蛋白包被的活性炭（活性炭＋HSA组）；AB-8大孔吸附树脂（AB8组）；用人血白蛋白包被经化学处理的AB-8大孔吸附树脂（化学处理的AB-8＋HSA组）；人血白蛋白包被乙基纤维素（EC＋HSA组）；用人血白蛋白包被经化学处理的乙基纤维素（化学处理的EC＋HSA组）。观察各组吸附剂对总胆红血素、胆汁酸和血氨的吸附效果并进行比较。结果除EC＋HSA组外其余各组对总胆红素、胆汁酸的吸附均有效（P〈0．05），其中化学处理的EC＋HSA组对总胆红素的吸附率最高（10．82±1．24）％，活性炭＋HSA组对胆汁酸吸附率最高（9．85±1．50）％；各组对血氨的吸附均有效（P〈0．05），化学处理的EC＋HGA组的吸附率最高（33．83±2．51）％。结论化学处理的EC＋HSA组对总胆红素、血氨、胆汁酸有较好的吸附效果。     

活性炭与树脂对尿毒症患者中分子物质、甲状旁腺素的体外吸附研究

目的分析探讨活性炭和树脂对尿毒症患者体内的中分子物质总量(middle molecular substances,MMS)及甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)的清除性能差异。方法取维持性透析患者的血液,随机分为4组,分别用AC活性炭、MR1、MR2、MR3树脂4种吸附剂进行体外吸附,检测吸附前后血液中的MMS和PTH,结合吸附剂的孔结构检测,分析活性炭与树脂对MMS、PTH的清除性能差异。结果同组内吸附前后比较,4组血样的MMS、PTH水平均显著降低(P<0.01;MMS指标P值分别为0.006、0.001、0.001、0.000,PTH指标P值均为0.000)。对MMS清除水平,AC组最高(32.73%±3.29%),MR1组(22.96%±7.18%)最低,且2组比较有统计学意义(P<0.05;P=0.027),而3种树脂间MMS清除水平差异无统计学意义。对PTH清除水平,MR1组最高(90.52%±4.05%),MR2组次之(77.43%±3.65%),MR3组较小(63.71%±1.49%),AC组最低(36.53%±4.95%),且4组差异显著(P<0.01;P值均为0.000)。结论活性炭由于孔径分布范围广,能吸附的毒素分子量范围更广,对中分子物质总量清除更有利;大孔吸附树脂具有较为集中的孔径分布,对以PTH为目标的单一中分子毒素清除更有利。     

血浆透析滤过与双重血浆分子吸附系统治疗肝衰竭患者的效果及对肝功能、炎症细胞因子和凝血功能的影响

目的 探讨血浆透析滤过(PDF)与双重血浆分子吸附系统(DPMAS)治疗肝衰竭患者疗效及对肝功能、炎症细胞因子和凝血功能指标的影响.方法 选取2017年5月至2020年5月在山东省立第三医院诊治的100例肝衰竭患者,按照随机数字法分为对照组(50例)和观察组(50例).对照组给予PDF治疗,观察组给予DPMAS治疗,比...     

Theoretical study of the H/D isotope effect of CH4/CD4 adsorption on a Rh(111) surface using a combined plane wave and localized basis sets method

We analysed the H/D isotope effect of CH₄/CD₄ adsorption on a Rh(111) surface using our combined plane wave and localized basis sets method, that we proposed for the consideration of delocalized electrons on a surface and the quantum effect of protons (deuterons) in metal–molecule interactions. We observed that the adsorption distance and energy of CD₄ were larger and lower than those of CH₄, respectively. This is in reasonable agreement with the corresponding experimental results of cyclohexane adsorption. We clearly found that the trend of the H/D isotope effect in the geometrical and energetic difference was similar to that of the hydrogen-bonded systems.

Using our CPLB method, we elucidate that the adsorption distance and adsorption energy of CH₄ on the Rh(111) surface are shorter and larger than those of CD₄, which is in reasonable agreement with the corresponding H/D isotope trend in experiments.     

大鼠正常脑组织伽玛刀照射后MRI表现及GFAP表达的实验研究

目的研究伽玛刀(Gamma knife)照射大鼠尾状核后胶原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达随时间的变化,探讨星形胶质细胞的增殖与放射损伤的关系以及放射性损伤的影像学表现。方法40只成年雌性Wistar大鼠,10只大鼠作为对照组。30只大鼠接受MASEP-SRRS型伽玛刀8mm准直器以50Gy(50%等剂量线)照射大鼠右侧尾状核。照射后的30只大鼠随机分为3组,每组10只。不同组别的大鼠分别在照射后第1,4,12周深度麻醉下断头取出脑组织,行免疫组织化学染色观察GFAP的表达,并使用梯度柱法测量脑组织的比重。大鼠处死前接受1.5TMRI轴位平扫和增强扫描。结果MRI提示照射后第12周可发现受照大鼠尾状核T2相可见受照区信号增高,增强T1相可见受照区强化明显。对照组大鼠脑组织内均匀散在分布少数GFAP阳性细胞,轮廓清楚,星形突起纤细。照射后4周靶区内GFAP阳性细胞数目开始增多,细胞形态变得不规则。至12周时GFAP阳性细胞进一步增多,胞体变大,细胞突起粗大不规则,胞浆染色呈深棕色。照射后第4周和第12周检测到照射侧脑组织比重与对侧相比显著减轻。结论GFAP可作为衡量脑放射性损伤的指标。照射后早期即出现脑水肿反应和血脑屏障破坏。在不同时间点的病理变化可以通过MRI信号观察不同时间点的病理变化。