戊四氮点燃大鼠海马脑源性神经营养因子受体TrKB、P75NTR表达的变化

目的:探讨戊四氮点燃大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)受体TrKB、P75NTR表达的变化.方法:40只成年健康雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组采用戊四氮点燃法制备癫(癎)模型,对照组不做处理.第2周及第4周,2组各取10只大鼠,采用免疫组织化学方法观察海马结构内TrKB、P75NTR的表达水平.结果:第2周及第4周,对照组大鼠海马CA1、CA3区锥体细胞层及齿状回和门区可见TrKB阳性神经元和纤维;CA1、CA3 区锥体细胞层、齿状回及门区可见大量P75NTR阳性神经元.与对照组比较,实验组海马相应部位TrKB的表达升高(P<0.05),P75NTR的表达降低(P<0.05).结论:在癫(癎)形成过程中,BDNF的2类受体TrKB 、P75NTR可能参与了癫(癎)后海马异常苔藓纤维出芽及突触重建过程;2类受体可能相互拮抗.     

红藻氨酸诱导癫发作大鼠海马微管相关蛋白Ⅱ、突触素变化的研究

目的：探讨微管相关蛋白Ⅱ（MAP2）及突触素与癫后海马兴奋性神经网络中苔藓纤维发芽和突触重建的关系。方法：KA诱导的成年大鼠MTLE模型用免疫组织化学法检测癫发作1d,1、2、3、4周大鼠海马内MAP2、突触素的表达。结果：癫组MAP2的表达于癫发作后1周在齿状回分子层、CA3区辐射层已有上升,2周达到高峰,4周恢复接近对照组水平;突触素的表达于发作后1周在齿状回分子层和CA3区辐射层开始上升,2周时达高峰并持续至4周。结论：癫发作后海马齿状回、CA3区MAP2、突触素的表达升高,在时间和部位上的动态变化与已知的癫后MFS和突触重建的改变相一致,提示可能与突触重建有关,可作为癫后海马MFS和突触重建的间接观察指征。     

小鼠海马结构和小脑皮质内突触素免疫反应产物的分布和衰老性变化

用免疫组织化学方法结合图象分析观察研究突触素(p38)免疫反应产物在C57BL/6J小鼠海马结构、小脑皮质的分布和衰老性变化。结果显示(1)海马结构和小脑皮质内的突触素免疫反应产物呈板层分布,各层之间反应产物密度差异很大;(2)在三个年龄组,被检各区(海马CA1、CA3区分子层,齿状回分子层中带和小脑I、V叶分子层)突触素免疫反应产物校正光密度(COD)值以青年组最大,成年组次之,老年组最小,各组间差异显著(P<0.01)。和青年组比较,成年组、老年组COD值在海马结构平均降低20.39％、33.29％,在小脑皮质平均降低29.38％、s52.64％。结果表明,突触素在小鼠海马结构和小脑皮质的分布具有区域性,随着年龄的增加,突触素含量逐渐减少。     

红藻氨酸诱导癫(疒间)发作大鼠海马微管相关蛋白Ⅱ、突触素变化的研究

目的:探讨微管相关蛋白Ⅱ(MAP2)及突触素与癫(疒间)后海马兴奋性神经网络中苔藓纤维发芽和突触重建的关系.方法:KA诱导的成年大鼠MTLE模型用免疫组织化学法检测癫(疒间)发作1 d,1、2、3、4周大鼠海马内MAP2、突触素的表达.结果:癫(疒间)组MAP2的表达于癫(疒间)发作后1周在齿状回分子层、CA3区辐射层已有上升,2周达到高峰,4周恢复接近对照组水平;突触素的表达于发作后1周在齿状回分子层和CA3区辐射层开始上升,2周时达高峰并持续至4周.结论:癫(疒间)发作后海马齿状回、CA3区MAP2、突触素的表达升高,在时间和部位上的动态变化与已知的癫痫后MFS和突触重建的改变相一致,提示可能与突触重建有关,可作为癫(疒间)后海马MFS和突触重建的间接观察指征.     

马桑内酯致痫大鼠海马结构内SYN和GFAP的表达及其意义

目的:研究马桑内酯所致癫痫持续状态下海马结构内突触体素(SYN)及胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化规律,探讨癫痫的发生机制。方法:成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为模型组及对照组,采用马桑内酯(50μg/kg)侧脑室注射法建立急性癫痫动物模型,应用免疫组织化学方法观察癫痫持续状态下SYN和GFAP的表达。结果:①模型组海马结构各区突触体素阳性免疫反应产物的密度较对照组普遍增加,尤以CA3区苔藓纤维层和齿状回分子层内带为甚(P<0.05)。②模型组海马结构内GFAP免疫反应阳性的胶质细胞与对照组相比,其平均光密度、胞体截面积和周长均显著增强或增大(P<0.05),GFAP免疫反应性增强。结论:突触体素表达的增强可能易化了神经递质的装载和释放,与癫痫持续状态的维持和加重相关。活化的星形胶质细胞在癫痫持续状态中可能主要起保护作用。     

戊四氮点燃大鼠海马水通道蛋白4 和水通道蛋白9的表达

目的:观察戊四氮点燃癫(癎)大鼠海马中水通道蛋白4 (AQP4)和水通道蛋白9 (AQP9)表达的变化,探讨它们在癫(癎)发生发展中的作用.方法:SD大鼠35只,随机分为对照组5只、生理盐水组5只及实验组25只.实验组大鼠腹腔注射戊四氮,制备戊四氮点燃癫(癎)大鼠模型;生理盐水组腹腔注射相应剂量生理盐水;对照组未做处理.实验组大鼠分别于癫(癎)持续发作后3 h、6 h、12 h、24 h和3 d,各取5只大鼠脑组织,免疫组织化学SP法进行AQP4、AQP9检测.结果:实验组大鼠AQP4和AQP9蛋白主要分布于海马CA1、CA3区的锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层和多形细胞层;癫(癎)持续状态3 h时,实验组大鼠海马AQP4和AQP9蛋白表达降低,6 h时增大至正常水平,而后逐渐增强,至24 h达高峰,再逐渐降低,至3 d时恢复至正常水平.结论:AQP4和AQP9与癫(癎)的发生发展关系密切.     

p38MAPK信号通路在癫痫大鼠海马结构中的激活

目的 探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)在癫痫持续状态(SE)大鼠海马结构的活性变化规律及其意义.方法 建立氯化锂-匹罗卡品(LiCL-PILO)癫痫持续状态模型,在不同时间点用免疫组化法检测海马结构p38的磷酸化状态(P-p38),并观察组织病理学改变.结果 SE 30min P-p38在各区活化程度均增高,6h后P-p38表达减弱.在所有时间点,齿状回免疫组化阳性的神经元均显著高于CA1区和CA3区,海马结构各区可见到许多神经元发生变性和坏死.结论 p38MAPK信号转导途径在匹罗卡品致痫过程中被激活,并可能参与了CA1区、CA3区癫痫后神经神经元易损性的形成.     

发育期癫痫持续状态大鼠海马Semaphorins-3A与突触素P38的表达变化

目的 观察发育期大鼠癫痫持续状态后海马内Semaphorins-3A、突触素P38的表达变化.方法 生后7d(P7)、14d(P14)、21d(P21)、28d(P28)四个日龄组SD幼鼠共320只,每个日龄组大鼠按随机数字法分模型组(SE组)和生理盐水对照组(NS组).用戊四氮(PTZ)诱导SE,免疫组化法观察SE发作后1d、7d、14d、21d、28d五个时间点海马CA1区Semaphorins-3A及突触素P38的表达.结果 Semaphorins-3A阳性细胞在海马颗粒细胞层表达最明显,阳性表达量随大鼠生理日龄的增加呈减少趋势,尤以P7组表达最明显(如91 552.68 ±4664.69);不管大鼠日龄如何,SE发作后大鼠海马结构内Semaphorins-3A免疫反应产物的分布特征及表达与NS组无明显变化,但是Semaphorins-3A表达量在SE后7d减少最明显(如56938.84±5688.47).生理状态下P7组日龄大鼠P38表达在1～ 14 d(5413.18 ±48.77,6223.40±29.19,6902.94 ±78.51)内存在逐渐增加的趋势,并在21 d (7523.42±62.94)逐渐稳定.其他日龄组大鼠生理状态下P38表达相对平稳在同一水平上.P7、P14、P21和P28等各日龄组SE发作后1～28d的时间点上海马CA1区P38免疫反应产物的IOD值较NS组增加(P＜0.05),其中均以SE发作后14d(如8408.35±55.73)增加达最高峰.结论 Semaphorins-3A和突触素P38参与了发育期及癫痫持续状态下大鼠海马突触可塑性变化.     

致癫痫大鼠海马中JNK/p38信号转导通路的激活及其作用

目的 探讨c-Jun氨基末端激酶通路(JNK)和p38通路在癫痫持续状态(SE)大鼠海马中的活性变化规律及其意义.方法 建立氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型,在不同时间点用免疫组化法检测海马结构JNK和p38磷酸化状态,并观察组织病理学改变.结果 对照组P-JNK极少活化而p38在海马各结构广泛活化.SE 30 min后JNK和p38在海马神经元强烈激活,2 h时达到高峰,6 h后各区均明显减少,12 h后降至基础水平,在所有时间点,JNK和p38在齿状回的活化程度均显著高于CA1和CA3区.海马结构各区可见到许多神经元发生变性和坏死.结论 JNK和p38信号转导通路在氯化锂-匹罗卡品致痫过程中被激活,并可能在发作后参与海马神经元损伤的病理生理过程.     

氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠苔藓纤维发芽的不同时点研究

目的探讨匹罗卡品致痫大鼠海马结构齿状回苔藓纤维发芽(MFS)各时间点的变化。方法采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射制成大鼠癫痫持续状态(SE)及颞叶癫痫模型,利用Timm组化染色法进行MFS观察研究。结果Timm染色可见到实验组大鼠SE24h时齿状回内分子层及CA3区下锥体层即有MFS现象;实验组不同时点与对照组大鼠CA3区和齿状回内分子层MSF评分间差异均有统计学意义(P<0·05)。结论匹罗卡品模型基本复制了人类颞叶癫痫的临床病理特征;诱导的SE可造成大鼠海马结构易损区的MFS增加,从SE后24h即开始出现MFS现象,且随时间的延长其程度加重。     

Eph在颞叶癫痫大鼠齿状回苔藓纤维出芽机制中的作用

目的:探讨匹罗卡品致痫大鼠Eph A5和ephrin A3在海马齿状回的表达变化与苔藓纤维出芽和突触重建的关系.方法:急性诱导癫痫持续状态及慢性颞叶癫痫形成后,采用Neo-Timm银染观察苔藓纤维出芽及突触重建,并用原位杂交方法检测ephrin A3基因的动态变化,用免疫组织化学方法检测Eph A5蛋白的动态变化.结果:在内嗅皮质区(EC)仅有Eph A5的表达,致痫后第7天,Eph A5的表达下调,降至最低点(P＜0.01),此后逐渐回升,但第15天时仍低于对照组(P＜0.05),第30天时回归至对照组水平(P＞0.05).在齿状回(DG),Eph A5及ephrin A3在致痫后第7天明显较对照组降低(P＜0.01),此后逐渐回升,但第15天时仍低于对照组,在第30天和第60天与对照组相比无统计学差异(P＞0.05).结论:内嗅皮质区EphA5和齿状回Eph A5及ephrin A3的表达下调可能是癫痫持续状态(SE)后苔藓纤维出芽至齿状回内分子层的分子学机制之一.     

地卓西平对局灶性脑缺血大鼠海马N-甲基-D-天门冬氨酸受体的影响

目的　探讨地卓西平 (Dizocilpine ,MK 80 1)对局灶性脑缺血大鼠海马N 甲基 D 天门冬氨酸 (N methyl D asparticacid ,NM DA)受体的影响。方法　线栓法研制大脑中动脉阻断 (MCAO)大鼠模型 ,观察MK 80 1对局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损评分、梗死体积以及脑海马NMDA受体结合位点数的影响。结果　MK 80 1组缺血 1、6、2 4小时各时相NMDA受体数量明显低于模型组 ;缺血 2 4小时MK 80 1组神经功能缺损评分及梗死体积明显低于模型组 (P <0 .0 1)。结论　MK 80 1对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用可能与下调脑缺血后兴奋性氨基酸受体结合位点数的上调有关。     

丙泊酚对癫痫持续状态大鼠抑制作用的NMDA受体机制研究

目的观察丙泊酚对癫痫持续状态（SE）大鼠皮层NMDA受体亚型（2A,2B）表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为空白对照组（BLK组）、SE组、丙泊酚50mg／kg组（PPF组）、安定10mg／kg组（DZP组）、东莨菪碱10mg／kg组（SCOP组）及MK-801（2mg／kg）组。匹鲁卡品30mg／kg诱发SE模型,待SE出现后30min,各实验组分别腹腔注射丙泊酚等药物,BLK组和SE组腹腔注射等容量0．9％氯化钠注射液。24h后每组取4只断头取脑,快速剥离皮层提取组织蛋白。采用Western Blot法观察丙泊酚对SE大鼠发作24h后皮层NR2A、NR2B亚型表达的影响。结果SE发作后24h,SE组大鼠皮层NR2A、NR2B亚型表达与BLK组相比显著增加fP〈0．05）;PPF组NR2B表达显著降低（与SE组相比,P〈0．05）;NR2A亚型表达无明显变化。MK-801（2mg／kg）可显著降低皮层NR2A、2B亚型的表达（与SE组相比,P〈0．05）,但安定（10mg／kg）和东莨菪碱（10mg／kg）对NR2A和NR2B亚型表达无明显影响。结论丙泊酚可显著降低大鼠SE发作后皮层NR2B亚型表达。     

大鼠孤束核内谷氨酸受体亚型对心脏伤害性感受信息的调控作用

目的：探讨大鼠孤束核(NTS)内谷氨酸受体亚型对心包内注射辣椒素诱发的心脏-躯体运动反射(CMR)的影响,阐明NTS对心脏伤害性信息调控的作用机制。方法：SD大鼠60只随机分为鹅膏蕈氨酸(IBO)组、谷氨酸组、5-甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸（MK-801）组、α-甲基,4-羧基苯丙氨酸（MCPG）组、MCPG联合MK-801组和6,7-二硝基喹喔啉-2,3-二酮（DNQX）组;各组大鼠孤束核内分别微量注射13 mmol•L^-1 IBO　100 nL,100、200、500 mmol•L^-1谷氨酸100 nL,NMDA受体拮抗剂 40和60 mmol•100•^-1 MK-801 100　nL,代谢型谷氨酸受体拮抗剂 25 和50 mmol•L^-1 MCPG 100 nL,25 mmol•L^-1MCPG 50 nL联合40 mmol•L^-1MK-801 50 nL,非NMDA受体拮抗剂20和50 mmol•L^-1 DNQX 100 nL;观察各组大鼠CMR的变化。结果：与对照组比较, IBO组大鼠CMR减少(P<0.05);谷氨酸组随着谷氨酸浓度的增加,大鼠CMR不断增加(P<0.05); MK-801和MCPG组CMR均减少(P<0.05); MCPG联合MK-801组CMR减少(P<0.05); DNQX组CMR无明显变化(P>0.05)。结论：NTS对心脏伤害性感受信息有易化调控作用,这种易化调节作用主要由NMDA和mGluRs受体介导。     

外周炎症性疼痛诱导下丘脑弓状核c-fos表达及其机制

目的观察下丘脑弓状核（ARC）神经元在炎症性痛觉过敏中的激活状态,分析NMDA受体在ARC神经元活动与痛觉过敏中的作用。方法用完全弗氏佐剂建立大鼠炎症性痛觉过敏模型,用辐射热-缩腿法测定痛阈,用c-fos检测神经元激活状态,用体视学无偏差测量系统计数免疫阳性细胞,用MK801观测NMDA受体的作用。结果佐剂组的痛阈均有明显下降（P〈0.05）,ARC中Fos蛋白阳性细胞计数明显上调（P〈0.05）;在侧脑室微量注射MK801后痛阈可恢复至正常水平,ARC中Fos蛋白阳性细胞计数回落接近正常水平。生理盐水组在这两方面都无明显变化。结论 ARC神经元的激活对炎症性痛觉过敏的产生和维持有重要作用,该作用主要通过NMDA受体介导。中枢敏感化也可发生在脊髓以上的高位痛觉调节中枢。     

大鼠肠道神经元NR1表达与急性束缚应激所致内脏高敏感的关系

目的 研究急性束缚应激所致内脏高敏感大鼠肠道神经元N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NRI亚基的表达变化.方法 30只雄性SD大鼠按照随机表分为3组:对照组、急性应激组和急性应激+MK-801组各10只.以急性束缚应激的方法建立内脏高敏感模型,以NMDA受体拮抗剂MK-801干预.记录大鼠结直肠扩张压力下腹外斜肌肌电图以评估内脏感觉功能,比较不同组问的差异.采用RT-PCR和Western印迹法检测回盲部、近端结肠和远端结肠NR1的mRNA和蛋白质水平的表达.结果 (1)急性应激组在40、60、80 men Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)压力下行直、结肠扩张时,腹外斜肌放电次数均多于对照组(次:925±217比188±31、1480±347比510±68、1732±344比765±103,均P<0.01)和急性应激+MK-801组(次:210±47、525±97、841±156,均P<0.05);后2组差异均无统计学意义(均P>0.05).(2)急性应激组回盲部、近端结肠和远端结肠NRI的mRNA表达水平均高于对照组(A值:1.57±0.20比0.68±0.10、2.00±0.20比0.87±0.19、1.36±0.17比0.74±0.15,均P<0.01)和急性应激+MK-801组(A值:0.84±0.13、0.91±0.16、0.79±0.13,均P<0.05);后2组差异均无统计学意义(均P>0.05).(3)急性应激组回盲部、近端结肠和远端结肠NRI的蛋白表达水平均高于对照组(A值:1.69±0.20比0.54±0.11、1.41±0.12比0.71士0.06、1.63±0.15比0.71±0.07,均P=0.000)和急性应激+MK-801组(A值0.75±0.09、0.70±0.11、0.63±0.11,均P=0.000);后2组差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 NMDA受体介导了急性束缚应激导致的内脏敏感性增高.     

NMDA受体和IP3受体介导NMDA诱导的小脑颗粒神经元内Ca2＋超载

目的探讨N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）诱导的小脑颗粒神经元（CGNs）钙超载与NMDA受体（NMDAR）及细胞内钙库受体三磷酸肌醇受体（IRR）和兰尼定受体（RyR）之间的关系。方法取出生后8dSD大鼠小脑进行颗粒神经元体外培养。用NMDA（100μmol／L）急性损伤神经元,在激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）扫描开始前30min,或扫描开始后4,9,14min分别加入NMDAR、IRR、RyR拮抗剂MK．80l、2-APB和DAN,检测神经元内Ca^2＋浓度的动态变化。结果MK-801预孵育神经元经NMDA急性刺激后,神经元内ca2’的荧光强度不再升高,NMDA刺激后加入MK-801,上升的ca^2＋水平立即下降,最终下降至基线水平;NMDA急性刺激2-APB预孵育神经元,神经元内ca^2＋的荧光强度升高,但升高幅度明显低于未经NMDA刺激组,NMDA刺激后加入2-APB,细胞内升高的Ca^2＋水平急剧下降,最终下降至接近基线水平;DAN预孵育的神经元经NMDA急性刺激后,胞内ca^2＋的荧光强度急剧升高,达到NMDA刺激组水平,NMDA刺激后加入DAN,神经元内ca^2＋水平无明显下降。结论NMDA诱导的神经元ca^2＋超载,主要由细胞膜钙通道NMDAR和细胞内钙释放通道IP3R介导,而细胞内钙释放通道RyR不起主导作用．     

银杏叶提取物抗N-甲基-D-天冬氨酸受体介导兴奋毒性作用及机制研究

目的 观察银杏叶提取物(GBE)对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体过度激活导致海马神经元和脑损伤作用的影响并探讨其可能机制.方法 用锥虫蓝染色和乳酸脱氢酶(LDH)测定等方法评估GBE对海马神经元兴奋毒性损伤的影响,并运用全细胞膜片钳记录观察GBE对大鼠海马急性分离神经元NMDA受体激活电流的调制作用;以Longa评分、红四氮唑、神经元核蛋白和微管相关蛋白-2免疫组化染色等方法评估GBE对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用.以上GBE干预作用均与NMDA受体特异性拮抗剂MK-801作比较.结果 150μg/ml GBE预处理可有效地保护暴露于NMDA+甘氨酸的海马神经元,使细胞生存率提高到85.2%±5.2%,LDH漏出减少到87 U/L±8U/L,但此效应弱于MK-801(P＜0.05);预加0.1 mg/ml GBE可明显抑制由NMDA和甘氨酸共同作用能引起的内向电流(INMDA),抑制率为40%±17%,50 μmol/L MK-801的抑制率为78%±18%,两组差异有统计学意义(P＜0.01);用标准细胞外液进行冲洗后,GBE组INMDA可恢复至91%±8%,而MK-801组不能(P＜0.05).GBE预处理可有效缓解大鼠局灶性脑缺血损伤,其保护作用弱于MK-801(P＜0.05),但没有MK-801所引起大鼠严重的行为学毒性反应.结论 GBE预处理能对抗NMDA受体过度激活所致海马神经元毒性损伤和大鼠局灶性脑缺血损伤,可能与通过拮抗NMDA受体有关,此保护作用及其与NMDA受体结合力均弱于MK-801,无行为学毒性反应,使抗兴奋毒性临床干预成为可能.     

拉莫三嗪对发育期大鼠学习记忆及海马NMDA受体表达的影响

目的:研究拉莫三嗪(LTG)对戊四氮(PTZ)致痫发育期大鼠学习记忆及海马组织N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体表达的影响。方法:6周龄健康雄性SD大鼠80只,随机抽取16只为正常组,64只以PTZ腹腔注射诱发癫痫持续状态(SE)模型后随机分为模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组16只,LTG腹腔注射,2周后使用Morris水迷宫、Y迷宫评价大鼠的学习记忆功能,应用免疫组化方法检测大鼠海马组织NMDA受体表达变化。结果:发育期癫痫大鼠的学习记忆功能较正常大鼠明显下降(P<0.05),海马组织NMDA受体相对吸光度值降低(P<0.05);癫痫大鼠学习记忆功能经小剂量LTG干预后未发生明显变化,海马组织NMDA受体相对吸光度值无明显差异;经中、大剂量LTG干预后学习记忆功能则明显上升(P<0.05),海马组织NMDA受体相对吸光度值上升(P<0.05)。结论:SE后发育期大鼠的学习记忆功能受损,应用LTG可改善这一损害,可能与其可调节海马NMDA受体表达有关。