p16基因突变与子宫内膜癌关系的研究

 目的　研究 p16基因的突变在子宫内膜癌发生、发展中的作用。 方法　应用PCR SSCP及DNA测序对 4 0例子宫内膜癌中 p16基因第二外显子缺失及序列改变进行研究。 结果　 4 0例子宫内膜癌中 12例存在 p16基因的第二外显子 5 2 2bp的纯合缺失 ,10例存在点突变 (突变位点相同 ) ,突变位点之一为第 12 6密码子硷基GTC→AAT(错义突变 ) ,另一突变位点为第 12 7密码子GCA→GCG(同义突变 ) ,缺失及突变共占 5 5 %。结论　p16基因的突变与子宫内膜癌的发生有明显的相关性。     

子宫内膜癌前病变中K-ras与MTS1/p16基因的表达及意义

 目的　探讨K ras激活与MTS1/ p16基因突变 /缺失在子宫内膜癌中的发生发展关系。 方法　对子宫内膜癌及癌前病变组织K ras与MTS1/p16蛋白的免疫组化测定并用PCR技术对MTS1/ p16基因在子宫内膜癌中的纯合性缺失进行检测。结果　K ras、p16蛋白广泛存在于子宫内膜癌和癌前病变组织中 ,癌前病变K ras表达为 11.9% ,癌组为 6 2 .96 % (P <0 .0 5 ) ,而p16表达分别为 76 .5 9%与5 1.85 %。 13例 p16蛋白表达阴性子宫内膜癌PCR扩增 ,7例显示外显子 1缺失。K ras表达与细胞恶性程度呈正相关 ,p16表达则呈负相关。 结论　 (1)K ras基因激活与MTS1/ p16基因突变 /缺失导致细胞周期增殖失控 ,是内膜癌发生发展的一个重要环节 ;(2 )子宫内膜癌中p16基因外显子 1纯合子缺失可能是p16蛋白表达降低的机制之一 ;(3)动态观测内膜增生组织中的p2 1ras表达阳性者 ,对子宫内膜癌的早期发现可能有积极意义     

子宫内膜癌中p16基因缺失及CpG岛甲基化的研究

目的　研究子宫内膜癌中 p16基因缺失及CpG岛甲基化情况。 方法　用PCR技术检测 p16基因在子宫内膜癌中的纯合性缺失及第一外显子异常甲基化。结果　 36例癌组织中 9例发生基因缺失 ,12例发生甲基化 ,未发现基因缺失与甲基化同时存在的病例。结论　 1.p16基因缺失与子宫内膜癌组织学分级严重程度和临床分期呈正相关 ;2 .5’CpG甲基化可能是 p16基因失活的重要机理 ,参与子宫内膜癌发生、发展。     

子宫内膜癌组织中抑癌基因PTEN突变和表达的探讨

目的：研究抑癌基因PTEN在子宫内膜癌组织中的突变频率、分布和表达，探讨其在子宫内膜癌发病中的意义。方法：提取40例新鲜子宫内膜癌及癌周组织的基因组DNA，应用聚合酶键式反应—单链构象多态性分析(PCR—SSCP)方法，研究PTEN基因9个外显子的突变情况，并对突变样本进行测序分析。采用免疫组织化学法进行PTEN蛋白表达研究，并与组织学类型、临床分期、病理分级、淋巴结转移和雌孕激素受体状态的相关性进行分析。结果：40例子宫内膜癌中共检测到突变为18例，占45、0％。18例结果显示，8例为错义突变，10例分别为无意义突变、插入和缺失，形成截短蛋白。异常突变点中44、0％为外显子5，28.0％为外显子8，17．0％为外显子3，外显子1和6各有1例。免疫组化结果显示PTEN主要分布于细胞浆中：23／40例(57．5％)子宫内膜癌中PTEN表达完全缺失，10／40例(25．0％)表达部分缺失。PTEN在子宫内膜癌的表达与组织学类型和临床分期有关，与病理分级、肌层侵润及淋巴结转移无明显相关性。PTEN表达缺失率在雌孕激素受体阳性的癌组织中明显高于雌孕激素受体阴性的癌组织。结论：PTEN可能和子宫内膜癌的发生有关。     

子宫内膜癌中p16基因状态对端粒酶活性的影响

目的探讨子宫内膜癌中p16基因状态对端粒酶活性的影响。方法用PCR技术检测癌组织中p16基因的纯合性缺失及第一外显子异常甲基化,用原位杂交法检测端粒酶的表达。结果36例癌组织中,9例发生p16基因缺失,12例发生甲基化,未发现基因缺失与甲基化同时存在的病例;29例内膜癌端粒酶表达阳性,阳性率为80.56%。9例基因缺失标本中均有端粒酶的阳性表达,p16甲基化与否对端粒酶的表达影响无差异,但端粒酶阳性率在p16基因失活组明显高于p16基因未失活组。结论p16基因失活可以导致激活端粒酶端粒,p16基因失活的不同状态端粒酶激活的影响存在差异。     

PTEN基因在子宫内膜癌中的突变表达及其临床意义

目的:探讨子宫内膜癌组织中PTEN抑癌基因突变、蛋白表达异常及其与子宫内膜癌发生发展的关系。方法:采用聚合酶链反应—单链构象多态性分析方法和DNA测序技术,检测52例子宫内膜癌组织中PTEN基因突变高发区外显子5、8的突变情况,同时应用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶免疫组织化学方法检测PTEN蛋白的表达。结果:1)52例组织中PTEN外显子5突变率为17.31%,外显子8突变率为7.69%,总突变率为25.00%。统计分析表明,PTEN基因突变与子宫内膜癌的组织学分级、组织病理类型和肌层浸润深度密切相关(P<0.05)。2)52例组织中PTEN蛋白表达缺失率为59.62%,蛋白表达缺失率与组织学分级和组织学分类密切相关(P<0.05)。3)52例中21例PTEN蛋白表达阳性,31例表达阴性,表达缺失组织中13例发生PTEN基因突变。结论:1)PTEN蛋白表达异常与PTEN基因突变有关,基因突变是基因失活的重要机制之一。2)PTEN蛋白表达缺失、PTEN基因突变与子宫内膜癌的发生和发展密切相关。     

揭阳市食管癌p16基因表达与缺失的研究

 目的　了解食管癌高发区揭阳市食管癌患者 p16基因的表达与缺失情况。方法　采用免疫组化、PCR及原位杂交技术检测 6 0例食管癌标本中 p16蛋白表达、基因纯合性缺失及其mRNA信号表达情况。结果　 (1)有 2 6例 (43.3% ) p16蛋白表达阳性 ,且有淋巴结转移与无转移之间蛋白表达差别显著 (P =0 .0 4 3) ;(2 )PCR检测外显子 2缺失有 2 7例 (45 % ) ,外显子 1缺失有 15例 (2 5 % ) ;(3)原位杂交检测 10 / 13例与免疫组化结果一致。结论　p16基因表达缺失与该组食管癌的浸润、转移有相关 ;外显子 2的缺失可能是 p16基因产物丢失的主要机制。     

胃癌中 p16基因表达、缺失及突变的检测

目的研究p16基因表达与胃癌发生发展、侵袭、转移的关系及p16基因外显子2缺失、突变在胃癌发生中的地位。方法运用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(S-P)免疫组织化学方法检测胃癌及癌前病变组织中p16蛋白的表达;采用聚合酶链反应(PCR)、聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析方法检测胃癌中p16基因外显子2的缺失、突变。结果(1)p16蛋白表达阳性率①正常胃粘膜96.25％(77／80),不典型增生92.00％(45／50),胃癌47.54％(58／122),胃癌组中p16蛋白表达低于正常胃粘膜及不典型增生（P<0.05）;②粘液腺癌(10.00％,1／10)低于低分化腺癌(51.22％,21／41)、未分化癌(57.69％,15／26)和印戒细胞癌(62.50％,10／16)（P<0.05）;③30例原发癌和淋巴结转移癌配对标本中p16蛋白表达阳性率原发癌46.67％（14/30）,淋巴结转移癌16.67％(5／30),淋巴结转移癌低于原发癌(P<0.05);(2)p16基因缺失与突变分析25例胃癌中检测出缺失5例,但未发现突变。结论①p16蛋白表达缺失与胃癌的发生、组织学类型及淋巴结转移有关。②p16基因外显子2缺失可能与胃癌发生有关;而p16基因突变可能与胃癌发生无关。     

p16基因与肺癌关系研究进展

肿瘤抑癌基因p16对于肺癌的早期诊断非常重要,启动子的异常甲基化、第二号外显子的纯合子缺失、基因点突变、蛋白及mRNA的缺失表达都与肺癌的发生关系密切,且与肺癌的基因治疗、药物靶向治疗有关.     

多种肿瘤抑制基因在视网膜母细胞瘤中存在状态的研究

目的 深入研究视网膜母细胞瘤（ＲＢ）内多种肿瘤抑制基因的存在状态。方法 综合利用ＳＳＣＰ分析、ＤＮＡ序列测定以及多重ＰＣＲ等技术,检测分析ＲＢ肿瘤内Ｒｂ、ｐ５３,ｐ１６,ｐ１５及ｐ１２等肿瘤抑制基因是存在缺失与点突变。结果 约７４％的ＲＢ肿瘤有Ｒｂ基因点突变,１６％显示,ｐ１６基因缺失,但ｐ５３及ｐ２１基因除多态性外未检测到真正的点突变。结论 ＲＢ的发病和病变的进展主要是由于以Ｒｂ基因为核心的代谢     

亚硒酸钠抗氧化作用与抑瘤效应的实验观察

人ｐ１６基因是最近发现的一种肿瘤抑制基因。ｐ１６蛋白作为一种细胞增殖的负调控因子，在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。为了进一步探讨ｐ１６基因的抗肿瘤特性，我们通过运用分子克隆技术构建重组人ｐ１６基因表达载体（ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６），并通过电穿孔方法将ｐ１６基因导入到人肺腺癌ＮＣＩ－Ｈ４６０细胞中，经Ｃ４１８筛选获得可稳定表达ｐ１６的人肺腺癌细胞，观察ｐ１６基因对人肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的作用     

探讨HBV X、TGF-alpha,c-myc及beta-catenin基因与高发区肝癌的相关性

目的　研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法　以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR及DNA测序分析方法确定HBVX基因在细胞DNA水平的整合。以RT PCR及Western blot检测HBVX基因的转录与表达。用PCR RFLP方法确定 p5 3基因 2 49密码子的错义突变。应用免疫组织化学法分析TGF alhpa ,c myc ,beta catenin的表达。结果　 2株细胞在DNA水平都存在HBVX基因片断的整合 ,但未见完整的转录和蛋白水平表达。序列分析显示 2株细胞的HBVX基因的序列各有特异性 ,并存在 13 0、13 1密码子的热点突变。PCR RFLP分析说明 2个细胞株中p5 3基因 2 49密码子均属野生型。免疫组化显示 2株细胞中TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白均有显著的积累。 结论　本实验的结果显示HBVX基因对这 2株细胞恶性表型的维持并不存在必然的关联 ,而是 1种HBV感染的遗传标志。未见HBVX基因蛋白表达 ,可能由于X基因 3′端缺失变异所致。免疫组化的结果显示TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白的显著积累 ,说明多种癌基因的相互协同 ,可能与肝癌的发生、发展及恶性表型的维持相关联     

Mechanisms by which eucaryotic genes evolve

Summary This paper reviews our current efforts to understand the evolutionary origin of the ovomucoid gene. Sequence analyses have suggested that introns were present in the primordial ovomucoid gene before birds and mammals diverged, about three hundred million years ago. Our work suggests that the present ovomucoid gene has evolved from a primordial ovomucoid gene by two separate intragenic duplications followed by the addition of a final segment which codes for a secretory signal sequence. The three domains of the secreted peptide and also the signal sequence, are constructed by an apparent assembly of exons which code for individual peptide segments. The exact position of introns within the ovomucoid gene has been defined and the results support the theory that introns separate gene segments that code for functional domains of proteins and provide insight into the manner by which eucaryotic genes were constructed during the process of evolution.     

含小鼠糖皮质激素受体第二外显子基因片段的克隆和结构分析

克隆适于构建可调控基因打靶载体的小鼠糖皮质激素受体（ＧＲ）基因片段,为建立糖皮质激素受体基因缺陷型小鼠模型奠定基础。和ＰＣＲ扩增小鼠ＧＲ基因第二外显子上５６２ｂｐ的核酸片段作为探针,筛选小鼠基因组文库,共获得６个阳性克隆。对Ｃ１０克隆进行详细的测序和酶切图谱和Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析事一６．５ｋｂ的基因片段。该片段含完整的ＧＲ基因第二外显子,基或分别有３．９ｋｂ和１．４ｋｂ的ＤＮＡ片段可作为下一步构     

RFP标记的 YCD 基因在 HeLa 细胞中的表达及其介导的细胞毒性

背景与目的 :探讨红色荧光蛋白标记的酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶(YCD)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能。材料与方法 :采用基因重组技术构建含有CMV启动子和RFP、YCD基因开放阅读框(ORF)的真核表达载体pIRES_YCD ,脂质体法转染HeLa细胞。荧光显微镜下观察转染细胞中红色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率及荧光强度并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa_Y。以不同浓度的前药5_FC处理HeLa_Y细胞 ,MTT法检测细胞存活率。 结果 :荧光显微镜下可见红色荧光蛋白在HeLa_Y细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa_Y细胞。前药5_FC能明显杀伤HeLa_Y细胞 ,5_FC浓度与HeLa_Y之间存在对数曲线关系。结论 :RFP可作为报告基因快速筛选YCD表达载体转染的细胞 ,YCD/5_FC自杀基因系统可以进一步用于肿瘤的基因治疗研究     

肿瘤基因治疗阳离子载体应用中的问题与策略

采用阳离子载体将肿瘤治疗基因送入靶细胞中表达 ,须经历体内传递、穿过细胞膜、细胞内传递、细胞内表达等多个步骤。当前研究表明 ,阳离子载体在此过程中面临一系列独特的问题 ,对这些问题的研究与解决大大推动了对阳离子载体的认识与应用。     

MTX耐药基因在骨髓干细胞中的高效表达

以脂质体为载体，把突变的抗ＭＴＸ的耐药基因转染到小鼠的造血干细胞中，用不同浓度的ＭＴＸ对细胞进行筛选。结果发现同一浓度下已转染基因组的细胞接种率大于未转染基因组的细胞接种率，未转染组对ＭＴＸ耐受性差，克隆形成率低。行卡方检验，同一浓度下的组间差异显著（Ｐ〈０．００１）。ＰＣＲ分析证实抗ＭＴＸ的耐药基因在造血干细胞中有效表达，该实验为进一步研究ＭＴＸ治疗的肿瘤患者减少骨髓毒性，提供了有参考价值的资料     

bcl-2、bax和mdrl基因表达与急性白血病的治疗及预后

目的 :研究探讨 bcl- 2基因、bax基因和 m drl基因表达与急性白血病的治疗及预后的关系。方法 :用链亲和素—胶体金原位杂交检测了 5 6例 AL 患者的 bcl- 2、bax和 mdrl基因表达。结果 :bcl- 2和 mdrl基因低表达及 bax基因高表达患者的完全缓解率 (CR)高 ,bcl- 2 /bax比值 <0 .6患者的 CR率更明显高于 >1.2者 (P<0 .0 0 1)。结论 :bcl- 2、m dr1及 bax基因表达是 AL 相对预后不良因素 ,bcl/bax比值更是决定 AL 预后好坏的关键指标。     

Stathmin 基因在非小细胞肺癌中的表达

目的：检测 Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达,探讨其与临床病理因素的关系。方法：用免疫组织化学 SP 法检测135例非小细胞肺癌及20例癌旁肺组织中 Stathmin 蛋白的表达,分析其与患者年龄、性别、肿瘤分化程度等临床病理特征之间的相关性。结果：小细胞肺癌组织中 Stathmin 基因蛋白的表达水平明显高于癌旁肺组织（P ＜0．05）,Stathmin 的表达与淋巴结转移有关（P ＜0．05）。结论：Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达显著上调;Stathmin 基因的表达与淋巴结转移有关,而与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、组织类型无关。