中国人早发及多发糖尿病家系中筛查葡萄糖激酶基因突变

目的探讨葡萄糖激酶(GCK)基因在中国人早发和(或)多发糖尿病家系发病中的参与情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性分析(SSCP)及序列分析的方法对154例早发和(或)多发糖尿病家系先证者进行GCK基因扫查。对发现的突变／变异在家系其他成员及93名正常对照者中进一步检测和分析。结果共见到6种碱基改变。其中IVS 1-28 G→A见于1例糖尿病家系先证者,在正常对照者中未见,且未见于以往报道。另有2个多态位点IVS 1c-62 G→A、IVS 5 29 G→T为尚未报道的新位点。对IVS 9 8 C→T在正常对照者中进行数量性状分析后发现,正常对照者中T等位基因携带者的空腹血糖和三酰甘油水平显著高于非T等位基因携带者(P值分别=0．033 3和0．006 5)。结论GCK基因突变不是中国人早发和(或)多发糖尿病的主要致病因素,但发现常见型变异IVS 9 8 C→T可能与糖尿病部分临床性状相关。     

中国人早发及多发糖尿病家系中筛查胰岛素启动因子1基因突变

目的 观察中国人早发及多发糖尿病家系胰岛素启动因子1(IPFl)基因的变异情况。方法 采用PCR-SSCP方法筛查154例早发及多发糖尿病家系先证者IPFl基因突变。采用PCR-RFLP方法检测突变家系其他成员及两组正常对照的该突变位点。结果 在多发糖尿病家系先证者中发现1例P239Q错义突变，该家系另有6人携带此突变，且口服葡萄糖耐量试验均在正常范围。P239Q突变未与糖尿病表型共分离。非糖尿病突变携带者餐后2h血糖水平明显高于非突变携带者(P=0．0249)。在“超正常”对照中亦检出1例P239Q突变，中国人糖尿病家系组和正常对照组突变频率分别为0．6％及0．5％。此频率与斯堪的纳维亚人群相似。结论 尽管IPF1基因突变不是中国人早发及多发糖尿病的主要致病基因，但IPF1基因P239Q突变可致轻度糖代谢紊乱，在其他遗传或环境因素的共同作用下参与糖尿病的发生。     

中国早发2型糖尿病家系MODY 1-5基因测定

 【目的】 通过对早发2型糖尿病家系先证者进行直接测序,寻找中国人群中可能存在的青少年的成人发病型糖尿病(MODY) 1-5基因突变｡【方法】 对19个早发2型糖尿病家系的先证者进行MODY 1-5基因扩增和DNA直接测序｡【结果】 19个先证者未发现MODY基因突变,但发现MODY 1-5基因分别存在6､5､15､1､1种多态性｡【结论】 MODY相关基因突变具有种族异质性,MODY 1-5基因突变不是该19个早发糖尿病家系的致病因素｡     

A Case Report of MODY3 Combined with Intestinal Neuroendocrine Tumor

Maturity-onset diabetes of the young 3 (MODY₃) is an autosomal dominant monogenic diabetes mellitus characterized by defective β-cell function and non-insulin-dependent early-onset diabetes mellitus. The facts that patients with MODY₃ are often misdiagnosed as type 1 and type 2 diabetes mellitus and genetic diagnosis is expensive, make its diagnosis very challenging. In this study, we reported a case of MODY₃, which was verified to be caused by a mutation in hepatocyte nuclear factor 1α gene (c.598C>T, p.Arg200Trp). In addition, the patient had a neuroendocrine tumor simultaneously, and a KMT2D gene mutation (c.5587C>G, p.Pro1863Ala) might be associated with this leson.     

Identification of seven novel mutations in the factor VIII gene in 18 unrelated Chinese patients with hemophilia A

Background  Hemophilia A (HA) is an X-linked inherited bleeding disorder caused by decreased activity of factor VIII (FVIII) due to heterogenous mutations in the FVIII coding gene (F8). The type of mutation plays an important role in the FVIII inhibitor formation. To date, several studies on the spectra of F8 defects have been performed in Western populations, but similar studies in Asian races are scarce. Here, we reported the distribution of the F8 gene mutations in 18 unrelated Chinese patients with HA.
Methods  Intron 22 and intron 1 inversions in the F8 gene were screened in 158 unrelated patients with HA using a long-distance PCR and multiplex PCR method. Direct sequencing of the coding region of the F8 gene was used to identify the mutations responsible for HA in 18 unrelated Chinese HA patients who were negative for intron 22 and intron 1 inversions; sequences were compared with the HAMSTeRS database. A clotting method was used to assay the FVIII activity level and the Bethesda assay was used to detect the FVIII inhibitor.
Results  A total of 18 different HA F8 mutations were identified, seven of which were described for the first time. These novel mutations included five small deletions, one point mutation and one small insertion. One novel mutation (4382-3 AC deletion) was associated with inhibitor development.
Conclusion  These data extend our insight into the mechanisms by which novel amino acid mutations may lead to HA and how the HA patient genotypes influence the risk of FVIII inhibitor.

     

单基因突变型2型糖尿病与中国人的研究现状和任务

糖尿病遗传异质性研究结果表明,2型糖尿病(T2DM)分为单基因突变型和多基因易感型两大类,前者又分为严重的胰岛素分泌受损型和显著的胰岛素抵抗型两种。文章概述、分析胰岛素分泌受损为主的单基因突变型即青少年成人起病型糖尿病(MODY)和线粒体基因突变型糖尿病(MDM)的遗传学、病理生理学、临床表型及防治特点,介绍中国人最新的研究进展,并提出今后的研究趋势和任务。     

上海地区早发2型糖尿病Isl-1基因突变筛查及患者临床特征

目的 筛查上海地区早发2型糖尿病Isl-1基因突变的发生情况并分析患者的临床特点.方法 选择上海地区96例早发2型糖尿病患者作为研究对象,以100名健康志愿者作为正常对照.收集受试者年龄、性别、血压等一般资料以及糖、脂代谢等实验室检查资料,并进行组间比较.应用PCR直接测序法,对两组受试者Isl-1基因突变情况进行筛查,观察突变基因位点、基因型分布频率、等位基因频率以及携带突变基因者的临床特点.结果 与正常对照组比较,早发2型糖尿病组患者年龄较轻,空腹血糖、空腹胰岛素及三酰甘油水平均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）;空腹血浆C肽水平虽高于正常对照组,但差异无统计学意义（P＞0.05）.PCR直接测序筛查结果显示,正常对照组未见Isl-1基因突变;早发2型糖尿病组筛查发现2例患者携带Isl-1外显子5的E283D错义突变基因（A→T）,其中T等位基因频率为1.0%,AT基因型分布频率为2.1%;两突变基因携带者空腹血浆C肽分别为0.6 ng/mL和0.2 ng/mL,均低于其0.82 ng/mL的正常值下限（P＜0.05）.结论 上海地区早发2型糖尿病患者中筛查出Isl-1基因外显子5的E283D突变,且突变基因携带者的空腹血浆C肽水平均低于正常值下限.     

北京市100个早发糖尿病家系MODY1基因突变的筛查

目的早发2型糖尿病家系中可能存在MDOY1基因的致病突变，本研究旨在了解MDOY1基因（HNF-4α）在早发家族性2型糖尿病发病中的作用。方法收集100个2型糖尿病家系，先证者均在40岁前被诊断为糖尿病，且至少还有一个一级亲属在45岁之前被诊断糖尿病。提取先证者血DNA，用PCR产物扩增MDOY1基因的所有外显子和外显子／内含子拼接区．将PCR产物直接进行测序。SPSS进行统计分析。结果在MDOY1基因的筛查中，我们发现3个编码区的变异Exonlc M49V、Exon4 T130I、Exon10 S462S及二个非编码区的DNA变异ⅣS1C＋44A〉T、IVS．5C〉T。结论肘DOY1基因内或附近的基因变异不是早发2型糖尿病家系的主要致病原因。     

新疆维吾尔族早发2型糖尿病GCK基因多态性分析

目的:研究新疆维吾尔族早发2型糖尿病葡萄糖激酶(GCK)基因多态性,并获得GCK基因频率在新疆维吾尔族人群中的分布规律。方法:运用聚合酶链反应—短串联重复序列(STR)的方法,检测新疆和田地区维吾尔族早发2型糖尿病家系成员49例和同一地区无血缘关系的正常对照组人群88例的GCK基因型。结果:①88例正常对照组人群中共检测出4种GCK基因9509/9510遗传标志多态性位点,分别为203bp2、01bp、199bp、197bp,等位基因的频率分别为0.18、0.43、0.24、0.15,其杂合度H为0.7026,多态信息含量PIC为0.667。②新疆和田地区维吾尔族早发2型糖尿病家系成员49例GCK基因9509/9510多态性位点分析表明,199bp等位基因是该家系的主要遗传等位片段。③比较GCK基因座在新疆维吾尔族人群与黑人、欧洲人、北美人群的分布,发现存在明显的种族差异。结论:新疆维吾尔族人群GCK基因9509/9510遗传标志位点存在多态性,其杂合性较高,是一种高度多态性的较理想的DNA多态性遗传性标记;199bp等位基因是新疆和田地区维吾尔族早发2型糖尿病家系的主要遗传等位片段。     

CTLA-4 gene A/G polymorphism associated with diabetes mellitus in Han Chinese

目的　探讨细胞毒T细胞相关抗原 4 (CTLA 4 )基因A/G多态性与汉族人糖尿病易感性的关系。方法　采用PCR RFLP技术对 1、2型糖尿病患者各 31例及健康对照 36例进行CTLA 4基因A/G多态性检测。结果　 1型糖尿病患者较健康对照等位基因G频率明显增加 (6 6 1%vs 34 7% ;P <0 0 0 0 5 ;OR =3 6 70 ) ,表现为GG纯合子增多 (48 4 %vs 2 2 2 % ;P =0 0 2 5 ;OR =3 2 81) ,AA纯合子减少 (16 1%vs 5 2 8% ;P =0 0 0 2 )。 2型糖尿病患者等位基因A/G的频率虽与健康人相似 (5 0 0 / 5 0 0 %vs 6 5 3/ 34 7% ;P =n s ) ,但基因型频率却不同 :AG杂合子增多 (5 4 8%vs 2 5 0 % ;P =0 0 12 ;OR =3 6 43) ,AA纯合子减少 (2 2 6 %vs 5 2 8% ;P =0 0 11结论　CTLA 4 49位点AA纯合子对糖尿病具有一定保护性。而编码Ala的等位基因G(无论是GG纯合子还是AG杂合子 )增加了糖尿病的易感性     

PAX4基因A1168C多态性与中国汉族人1型糖尿病的相关性

目的 探讨中国汉族人群PAX4基因A1168C多态性与1型糖尿病的相关性。方法 随机选取无亲缘关系的中国汉族人360例,其中1型糖尿病患者109例,无糖尿病及糖尿病家族史且空腹葡萄糖〈5．60mmol/L的对照组251名。采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术（PCR—RFLP）检测A1168C多态性,SPSS软件分析A1168C多态性的基因型频率和等位基因频率及其组间差异。结果 对照组和1型糖尿病组基因型频率分布均符合Hardy—Weinberg平衡定律。1型糖尿病患者基因型频率及等位基因频率与对照组相比差异均无显著性（P〉0．05）。将1型糖尿病组按性别和发病年龄分层,各组基因型频率和等位基因频率与对照组相比差异仍无显著性（P〉0．05）。结论 PAX4基因A1168C多态性可能与中国汉族1型糖尿病的发生无关。     

常染色体隐性遗传早发型帕金森病家系的DJ-1基因研究

目的：探讨DJ-1基因与中国人常染色体隐性遗传早发型帕金森病（AREP）家系的关系.方法：对3个AREP家系的6位患者和23位成员进行系统的临床检查并进行DJ-1基因PCR扩增,标本进行基因测序.结果：所有研究对象的DJ-1基因外显子均扩增成功.3个家系中6位患者的DJ-1基因所有外显子测序均未发现突变.结论：DJ-1基因突变在中国人AREP家系中发生率较低,不是常见致病因素.     

丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏组织中TNF-α和HNF-4α表达的影响

目的: 通过观察丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和肝细胞核因子4α(HNF-4α)表达的影响,探讨丝胶治疗糖尿病的可能机制。方法: 36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组,每组12只。链脲佐菌素(STZ)连续腹腔注射法制作2型糖尿病大鼠模型。待模型成功建立后,模型组大鼠不做任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶(2.4 g·kg^-1·d^-1)灌胃35 d。采用免疫组织化学SP法染色、蛋白免疫印迹法和RT-PCR法检测大鼠肝脏组织中TNF-α和HNF-4α的表达。结果: TNF-α蛋白免疫产物为棕黄色和棕褐色颗粒状,位于肝细胞的细胞浆;HNF-4α免疫阳性产物为棕褐色,位于肝细胞的细胞核。与正常对照组比较,糖尿病模型组大鼠肝脏组织中TNF-α、HNF-4α蛋白和mRNA的表达水平明显升高(P<0.01);与糖尿病模型组比较,丝胶治疗组大鼠肝脏TNF-α、HNF-4α蛋白和mRNA的表达水平明显降低(P<0.01)。结论: 丝胶可能通过下调肝脏组织中TNF-α和HNF-4α的表达保护糖尿病时肝脏损伤。     

Mitochondrial gene mutations and type 2 diabetes in Chinese families

Background Numerous mitochondrial DNA mutations are significantly correlated with development of diabetes. This study investigated mitochondrial gene, point mutations in patients with type 2 diabetes and their families.
Methods Unrelated patients with type 2 diabetes （n=826） were randomly recruited; unrelated and nondiabetic subjects （n=637） served as controls. The clinical and biochemical data of the participants were collected. Total genome was extracted from peripheral leucocytes. Polymerase chain reaction, restriction fragment length poiymorphism （PCR-RFLP） and cloning techniques were used to screen mitochondrial genes including np3316, np3394 and np3426 in the ND1 region and np3243 in the tRNA^Leu（UUR）.
Results In 39 diabetics with one or more mitochondrial gene point mutations, the prevalence （4.7%, 39/826） of mtDNA mutations was higher than that （0.7%, 5/637） in the controls. The identical mutation was found in 23 of 43 tested members from three pedigrees. Affected family members presented with variable clinical features ranging from normal glucose tolerance to impaired glucose tolerance （IGT） （n=2）, impaired fasting glucose （IFG） （n=1） to type 2 diabetes （n=13） with 3 family members suffering from hearing loss.
Conclusions Type 2 diabetes in China is associated with several mitochondrial gene mutations. Aged patients with diabetic family history had a higher prevalence of mutation and various clinical pictures. Mitochondrial gene mutation might be one of the genetic factors contributing to diabetic familial clustering.     

KCNQ1 及 SLC30A8 基因多态性与2型糖尿病患者相关性研究

目的分析KCNQ1及SLC30A8基因多态性与2型糖尿病(T2DM)患者的相关性。方法选取2015年9月~2017年9月间在本院确诊并接受治疗的T2DM患者100例作为观察组,选取同期在本院进行体检健康者100例作为对照组,收集两组对象早晨空腹静脉血5 m L,全自动生化分析仪检测糖化血红蛋白、空腹血糖水平、胰岛素和血脂的水平,基因型检测使用单碱基延伸法,分析不同基因位点和T2DM相关性状况。结果 SLC30A8基因对照组TT、CT及CC基因型的频率依次为16%、52%及32%,观察组依次为13%、49%、38%,差异无统计学意义(χ~2=1.290,P0.05);对照组T、C等位的基因频率依次为61%、39%,观察组依次为73%、27%,差异有统计学意义(95%CI=0.795~1.684,OR=1.205,χ~2=11.553,P0.05)。观察组TT基因型血清FINS及HOMA-B高于CT基因型和CC基因型,观察组TT基因型血清TC、TG和FPG低于CT基因型和CC基因型,差异均有统计学意义(P0.05);KCNQ1基因对照组TT、CT及CC基因型的频率依次为27%、41%及32%,观察组依次为24%、45%、31%,差异无统计学意义(χ~2=2.006,P0.05);对照组T、C等位的基因频率依次为53%、47%,观察组依次为64%、36%,差异有统计学意义(95%CI=0.863-2.104,OR=1.171,χ~2=12.995,P0.05),CC基因型血清TC、TG、FPG及Hb A1c低于CT、TT基因型,血清FINS高于CT、TT基因型,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 SLC30A8基因多态性rs13266634位点和KCNQ1基因多态性rs2237892位点和T2DM发病及血管并发症有一定相关性。     

Wolfram综合征一例中国患者WFS1基因的两个新突变

目的 研究1例中国人Wolfram综合征患者家系中的WFS1基因突变情况.方法 应用聚合酶链反应-脱氧核糖核酸(PCR-DNA)直接测序对1例Wolfram综合征患者及其家系成员的WFS1基因8个外显子及其侧翼内含子进行突变筛查.结果 发现外显子8第434位密码子发生缺失突变(V434del)及第666位密码子突变为终止子(W666X).先证者存在这两个位点的复合突变,家族其他成员中,3人是V434del突变的杂合子,另有3人是W666X突变的杂合子.结论 本研究发现的V434del及W666X突变均为尚未报道过的Wolfram综合征的新突变.     

目标基因捕获结合第2代测序技术检测原发性高血压致病基因突变

目的建立目标基因捕获结合第2代测序技术,对原发性高血压(EH)患者的13个已知致病基因进行突变筛查,探讨EH与致病基因突变的关系。方法提取5例EH患者外周血全基因组DNA,利用GenCap目标基因捕获技术,设计内皮素转化酶1(ECE1)、G蛋白调节信号5(RGS5)、钠钾三磷腺苷酶通道β1多肽(ATP1β1)、选择素E(SELE)、血管紧张素原(AGT)、血管紧张素受体1(AGTR1)、α-内收蛋白(ADD1)、细胞色素P450 3A亚家族多肽5(CYP3A5)、一氧化氮合酶3(NOS3)、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β3(GNβ3)、一氧化氮合酶2A(NOS2A)、苯基乙醇胺N-甲基转移酶(PNMT)和前列腺素I2合成酶(PTGIS)基因外显子区域特异性捕获探针,与基因组DNA文库进行杂交,将目标基因组区域的DNA片段进行富集后,再利用Illumina HiSeq 2000第2代测序仪进行测序,通过数据分析,确定突变位点,对选定的突变位点用Sanger测序法验证。结果设计合成的目标基因特异性捕获探针可有效捕捉并富集基因组DNA的目标靶片段。目标区域平均测序深度为301.12⁴31.92,99.30%431.92,99.30%⁹9.70%目标区域覆盖度。5例患者中ADD1基因发现3个错义突变;AGT基因发现1个错义突变;SELE基因发现2个错义突变;PNMT基因发现1个剪切位点突变;PTGIS基因发现1个错义突变。结论 GenCap目标基因捕获技术结合Illumina HiSeq 2000第2代测序技术成功发现了EH患者的致病基因突变。该方法快速有效,对深入研究EH的分子病因学有重要意义。     

2009年新型甲型H1N1流感病毒血凝素基因进化分析

目的:探讨2009年新型甲（A）型H1N1流感病毒血凝素（HA）基因与世界各地不同年代分离的A/H1N1代表株HA基因的进化关系。方法:从NCBI数据库下载2009年新型A/H1N1亚型流感病毒的HA基因序列以及以往流行的人、猪和禽的A/H1N1亚型流感病毒参考序列,采用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0（MEGA4.0）软件进行序列比对和构建系统进化树,并分别比较2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因与北美地区、欧洲地区、亚洲地区A/H1N1流感病毒HA基因编码蛋白的氨基酸序列。结果:不同时期人A/H1N1亚型流感病毒代表株HA基因进化分析显示：2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因与1976~2007年北美地区分离的7株人A/H1N1亚型流感病毒具有较高的同源性,与欧洲和亚洲地区的同源性较低。不同种属间A/H1N1亚型流感病毒HA基因进化分析显示：2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因与1998和2007年北美地区分离的A/H1N1猪流感病毒的HA基因进化关系较近,与欧洲及亚洲地区分离的A/H1N1猪流感病毒及A/H1N1禽流感病毒进化关系较远。氨基酸比对结果显示2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因的重要抗原位点与北美地区分离的A/H1N1猪流感病毒相近,与欧洲和亚洲地区分离的A/H1N1猪流感病毒及人类流感病毒疫苗株相比变化较大。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因可能是北美地区甲型H1N1猪流感病毒长期进化并与该地区人A/H1N1流感病毒部分基因片段重排的结果,对人H1N1甲型流感病毒疫苗可能并不敏感。     

Systematic review of TCF2 anomalies in renal cysts and diabetes syndrome/maturity onset diabetes of the young type 5

Objective There is a paucity of published works that systematically evaluate gene anomalies or clinical features of patients with renal cysts and diabetes syndrome （RCAD）/maturity onset diabetes of the young type 5 （MODY5）. The purpose of this review was to systematically assess the detection rate, genetic and phenotypic implications of heterozygous autosomal dominant TCF2 anomalies. Data sources MEDLINE database was searched to select articles recorded in English from 1997 to 2008. The focus was monoallelic germline TCF2 gene mutations/deletions. Biallelic inactivation, polymorphisms, DNA modification （hypomethylation and hypermethylation）, loci associated with cancer risk, and somatic TCF2 anomalies were all excluded. Study selection After searching the literature, 50 articles were selected. Results The detection rate of TCF2anomalies was 9.7% and varied considerably among MODY （1.4%）, renal structure anomalies （RSA） （21.4%） and RSA with MODY （41.2%） subgroups. Mutations were strikingly located within the DNA binding domain and varied among exons of the DNA binding domain： exons 2 and 4 were the hottest spots, while mutations were sporadically distributed in exon 3. The consistent phenotypes were RSA （89.6%） and diabetes mellitus （DM） （45.0%）. However, the concurrence of RSA and DM was relatively low （27.5%）, which hinders the optimal performance of genetic testing and obtainment of timely diagnosis. Other organ involvements were complementary and necessary for the early identification of patients with TCF2 anomalies. Analysis of phenotypes of TCF2 point mutations showed significant differences in the detection rates of RSA, impaired renal function （IRF） and DM according to mutation type but not mutation location. Conclusion These valuable features of TCF2 anomalies that previously did not receive sufficient attention should not be neglected.     

SCN1A基因突变阴性热性惊厥患者SCN3A 基因突变的特点

对SCN1A 基因突变阴性的热性惊厥（FS）患者进行3 基因突变筛查,并分析其突变特点。方法应用聚合酶链反应扩增和Sanger 测序方法对38 例入组患者筛查SCN3A 基因突变,采用生物软件分析突变特点。结果2 例错义突变（c.956T>C/p.I319T,c.5179G>A/p.D1727N）;同源性比对分析提示2 例突变均高度保守,在千人基因组计划数据库和100 例正常人中未发现相应的位点改变。结论在SCN1A 基因突变阴性的FS 患者中,发现2 例SCN3A基因突变错义突变,该突变可能具有致病性。