一氧化氮合酶及其基因表达与肺动脉高压的关系

肺动脉高压是慢性阻塞性肺疾病(ＣＯＰＤ)并发肺心病的中心环节,阐明其形成机制一直是防治ＣＯＰＤ的重要研究课题。本实验采用慢性低氧高ＣＯ2性肺动脉高压大鼠模型,观察结构型和诱导型一氧化氮合酶及其基因表达的变化,探讨其在肺动脉高压形成中的作用。1材料与方法:(1)动物模型的制备:雄性ＳＤ大鼠(温州医学院实验动物中心提供)20只,体重180～280ｇ,随机分为2组,每组10只。①Ａ组:正常对照组,大鼠常压氧下饲养4周,室温15～20℃,相对湿度50%～70%。②Ｂ组:低氧高ＣＯ2组,大鼠置于常压低氧高ＣＯ2舱中(吸气氧浓度为85%～110%,ＣＯ2浓度为50%…     

老年记忆减退大鼠神经元型一氧化氮合酶基因表达的变化

目的从一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的转录和翻译探讨一氧化氮（ＮＯ）与老年性记忆减退发生的关系,为探讨老年性记忆减退发生的机制及寻找新的治疗方法提供理论依据。方法用Ｍｏｒｉｓ水迷宫将老年大鼠筛选为记忆正常和记忆减退两组,并以青年大鼠为对照。用双波长分光光度法测定ＮＯＳ的活性,半定量反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法测定神经元型ＮＯＳ（ｎＮＯＳ）的ｍＲＮＡ含量。结果海马组织中,老年记忆正常组和记忆减退组较青年组ＮＯＳ活性〔分别为（１７１±２４）、（１２１±１７）及（２６９±６４）ｎｍｏｌ·ｍｉｎ－１·ｍｇ蛋白－１〕和ｎＮＯＳｍＲＮＡ含量〔分别为（６０±１０）、（３６±６）及（１０３±１２）积分吸光度（Ａ）,旧称光密度（ＯＤ）〕均下降（均为Ｐ＜０．０５）,记忆减退组比记忆正常组下降更为显著;小脑组织中,老年记忆正常组和记忆减退组ＮＯＳ活性呈下降趋势;记忆减退组ｎＮＯＳｍＲＮＡ含量显著下降。结论衰老和老年记忆减退时海马等脑区ＮＯ生成在酶蛋白水平和ｍＲＮＡ水平呈现下降趋势;ＮＯＳ酶活性的变化可能系其上游ｍＲＮＡ表达减少所致。提示老年期记忆减退的发生可能与ｎＮＯＳ基因表达下降有关。     

高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白对ECV-304分泌一氧化氮、一氧化氮合酶和内皮素1的影响

为研究高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白对ECV-304分泌一氧化氮，一氧化氮合酶和内皮素1的影响，探讨高密度脂蛋白对内皮细胞保护作用的可能机理，分别用不同浓度的高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白处理培养的人脐-静脉内皮细胞系ECV-304，用比色法和放射免疫法测定一氧化氮，一氧化氮合酶和内皮素1。结果 发现随着高密度脂蛋白浓度的升高，上清液中一氧化氮，一氧化氮合酶含量上升，内皮素1含量下降。随着培养液中氧化型高密度脂蛋白浓度的升高，上清液中一氧化氮，一氧化氮合酶含量下降，内皮素1含量上升。结果提示高密度脂蛋白促使一氧化氮，一氧化氮合酶合成和分泌增加及内皮素1生成减少，可能是其细胞保护作用和抗动脉粥样硬化作用的重要机制之一。而氧化型高密度脂蛋白促使一氧化氮，一氧化氮合酶合成和分泌减少及内皮素1生成增加，可能是其细胞损伤作用和促动脉粥样硬化作用的重要机制之一。     

肝炎患者血清一氧化氮和一氧化氮合酶水平变化及其临床意义

目的 探讨血清一氧化氮水平、总一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶活力与病毒性肝炎的关系.方法 用生化方法 检测对照组、中度慢性乙型肝炎、肝硬化、慢性重症肝炎及乙戊肝重叠感染患者血清一氧化氮、总一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶水平.结果 中度慢性乙型肝炎、肝硬化及乙戊肝重叠感染患者血清一氧化氮水平、总一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶活力与对照组比较明显升高,慢性重症肝炎患者血清一氧化氮水平、总一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶活力与对照组比较明显降低(P＜0.05).结论 一氧化氮、总一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶在病毒性肝炎发病中具有重要作用,并在一定程度上与肝损害程度相关.     

脂泰胶囊对实验性动脉粥样硬化家兔内皮素及一氧化氮合酶基因表达的影响

为在基因水平上探讨痰瘀同治方药脂泰胶囊保护血管内皮、抗动脉粥样硬化形成和发展的机理,采用烟酰胺磷酸腺嘌呤二核苷酸—硫锌酰胺脱氢酶组织化学染色和原位杂交法观察了脂泰胶囊对高脂血症家兔主动脉壁一氧化氮合酶活性及其ｍＲＮＡ表达和内皮素ｍＲＮＡ表达的影响,采用阳性积分法处理数据。结果发现,脂泰胶囊组家兔胸主动脉一氧化氮合酶活性（１．３８±０．６３）明显高于高脂组（０．４０±０．２４）（Ｐ＜０．０１）;脂泰胶囊组家兔胸主动脉一氧化氮合酶ｍＲＮＡ表达（１．３８±０．４８）明显高于高脂组（１．００±０．００）（Ｐ＜０．０５）;脂泰胶囊组家兔胸主动脉内皮素ｍＲＮＡ表达（２．４３±０．５３）明显低于高脂组（３．３３±０．８２）（Ｐ＜０．０５）。此外,脂泰胶囊可以阻止斑块增厚,减少斑块内脂质坏死中心的形成。提示脂泰胶囊能明显升高高脂状态下主动脉血管壁的一氧化氮合酶活性及其ｍＲＮＡ表达,降低内皮素ｍＲＮＡ表达。脂泰胶囊抗动脉粥样硬化形成和发展的作用机制之一可能是通过调控一氧化氮合酶ｍＲＮＡ和内皮素ｍＲＮＡ的表达,从而达到维持一氧化氮合酶的正常活性及一氧化氮的正常水平来实现的。     

肝癌组织中一氧化氮合酶及其基因表达的研究

目的研究肝癌组织中一氧化氮合酶(iNOS)及其基因表达与肝癌发生发展的关系。方法用免疫组化和原位杂交的方法对21例肝癌及癌旁组织中的诱导型一氯化氮合酶(iNOS)及其基因表达进行原位检测和观察。结果:NOS 阳性反应物质呈黄色或棕黄色,位于细胞浆中。非癌殖织(肉眼观距癌组织边缘>1.5)多呈阴性或弥漫弱阳性,但部分非癌组织中可见 iNOS 呈阳性的细胞呈点状分布;癌旁组织多呈阳性,提示 iNOS 表达与肝组织癌变有关。癌组织核心多呈阴性或弥漫弱阳性,但分化中和差的癌组织核心也分别有一例 NOS 呈强阳性;周边癌组织呈局灶阳性,侵入纤维组织中的弥敢癌细胞星强阳性,提示 NOS 的表达与肝癌组织的侵润能力有关。肝癌组织 iNOSmRNA 阳性细胞的分布与 iN-OS 蛋白的表达基本相似。结论 iNOS 蛋白及其基因表达与肝组织癌变及肝癌侵润能力有关。     

诱导型一氧化氮合酶在心肌缺血/再灌注损伤中的研究进展

采用溶栓疗法、动脉搭桥术、冠状动脉血管成形术等技术,使缺血组织和器官重新恢复血流,挽救了众多危急重病人的生命,然而,缺血器官及组织在恢复血流的同时,均伴随着缺血/再灌注损伤,是目前临床上亟待解决的问题。在对心血管疾病的研究过程中,随着心肌保护研究的不断深入,如何减轻心肌缺血/再灌注损伤成为心肌保护问题的关键。越来越多的研究表明,心肌缺血/再灌注损伤与诱导型一氧化氮合酶表达过量一氧化氮紧密相关。研究表明,诱导型一氧化氮合酶既有心肌保护作用,也有促心肌损伤作用,而通过对诱导型一氧化氮合酶抑制剂的应用,有望减轻心肌损伤的进展,保护损伤心肌。     

西格列汀对人主动脉内皮细胞内皮素1及一氧化氮合酶的影响及其机制

目的探讨在高糖培养环境下西格列汀对人主动脉内皮细胞(HAEC)内皮素1及一氧化氮合酶的影响及其可能机制。方法高糖环境下(25 mmol/L葡萄糖)培养人主动脉内皮细胞,并分别给予0、5、10及20μmol/L西格列汀干预,检测HAEC内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、内皮素1(ET-1)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)以及核因子κB p65(NF-κB p65)的mRNA和蛋白表达水平;应用肿瘤坏死因子α(TNF-α)处理西格列汀干预后的HAEC,观察e NOS、ET-1、i NOS、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平的变化。结果与普通培养环境(7 mmol/L葡萄糖)相比,高糖环境下HAEC的e NOS mRNA和蛋白表达降低,ET-1、i NOS mRNA和蛋白表达及p-NF-κB p65蛋白表达增高(P0.05)。与0μmol/L组相比,20μmol/L西格列汀组HAEC的e NOS mRNA、蛋白表达上调,ET-1、i NOS mRNA和蛋白表达以及p-NF-κB p65蛋白表达下调(P0.05)。与单独使用西格列汀组相比,TNF-α联合西格列汀组HAEC的e NOS mRNA和蛋白表达下调,ET-1、i NOS mRNA和蛋白表达及p-NF-κB p65蛋白表达上调(P0.05)。结论西格列汀在转录和翻译水平上增加e NOS表达、降低ET-1、i NOS的表达,该作用通过其抑制p-NF-κB p65表达而实现。提示西格列汀可能改善内皮功能,从而预防糖尿病动脉粥样硬化的形成。     

内皮素和一氧化氮合成酶在家兔动脉粥样硬化斑块中的表达

用免疫组织化学和原位杂交等方法观察了内皮素和一氧化氮合成酶在家兔动脉粥样硬化斑块中的合成和表达，结果是，在动脉粥样硬化斑块内增生的平滑肌细胞和巨噬细胞中，内皮素合成较正常者增多，而一氧化氮合成酶的合成却明显减少，内皮素mRNA转录显著增加，而一氧化氮合成酶mRNA转录明显减少或消失，提示在动脉血管平滑肌细胞中，二者的平衡失调可能参与了动脉弱样硬化的发生和发展过程。     

内皮素和一氧化氮合成酶在家兔动脉粥样硬化斑块中的表达

用免疫组织化学和原位杂交等方法观察了内皮素和一氧化氮合成酶在家兔动脉粥样硬化斑块中的合成和表达。结果是，在动脉粥样硬化斑块内增生的平滑肌细胞和巨噬细胞中，内皮素合成较正常者增多，而一氧化氨合成酶的合成却明显减少；内皮素ｍＲＮＡ转录显著增加，而一氧化氮合成酶ｍＲＮＡ转录明显减少或消失。提示在动脉血管平滑肌细胞中，二者的平衡失调可能参与了动脉粥样硬化的发生和发展过程。     

缺血期补充硝酸甘油对离体大鼠心脏心肌缺血再灌注损伤的作用

目的：观察离体大鼠心脏缺血期补充一氧化氮（ＮＯ）供体对缺血再灌注损伤的影响。　　方法：将２６只离体大鼠心脏缺血３０分，再灌注６０分。分为两组，用药组（１５只）及对照组（１１ 只）。用药组于缺血期给予４．４×１０－ ３ ｍｍ ｏｌ／Ｌ硝酸甘油（ｎｉｔｒｏｇｌｙｃｅｒｉｎ，ＮＴＧ，一种ＮＯ供体），碳酸氢盐缓冲液灌注。对照组仅给予碳酸氢盐缓冲液灌注。全部心脏均测定ＮＯ释放量、肌酸激酶漏出量及（或）心脏功能。　　结果：用药组大鼠心脏，使用ＮＴＧ表现为两种效应。其中部分大鼠心脏（非心室颤动组，ｎ＝ ７），ＮＴＧ增加肌酸激酶漏出量，减弱再灌注期心脏功能的恢复，伴随缺血期ＮＯ释放量的增加。对另一部分大鼠心脏（心室颤动组，ｎ＝ ８），ＮＴＧ减少肌酸激酶的释放，但心脏于再灌注期持续心室颤动，缺血期ＮＯ释放量无明显增加。　　结论：缺血期给予同一剂量ＮＴＧ对心肌缺血再灌注损伤产生双重效应，既可增加心肌损伤，又可减轻心肌损伤。     

原发性高血压病人颈动脉重构与内皮素、一氧化氮及二者比例变化关系的探讨

目的 :评估原发性高血压病人内皮素 (ET)、一氧化氮 (NO)、ET/NO值的变化以及ET、NO二者比例的变化与颈动脉重构间的相互关系。方法 :选取原发性高血压病人 43例 (原发性高血压组 ) ,健康自愿者 40例 (正常对照组 )作为观察对象。应用二维超声测定颈动脉结构与功能改变 ,应用放射免疫法测定ET ,应用Griess法测定NO含量。　　结果 :原发性高血压组NO较正常对照组显著降低 ,而ET、ET/NO值均较正常对照组显著升高 ,有显著性差异 (P均 <0 .0 5 )。NO与原发性高血压组颈动脉内膜—中层厚度 (IMT)呈负相关 (γ =-0 .2 6 7,P <0 .0 5 ) ,与颈动脉扩张性呈正相关 (γ =0 2 97,P <0 .0 1)。ET、ET/NO值与原发性高血压组颈动脉IMT呈正相关 (γ =0 .2 98、γ =0 .2 0 3,P均 <0 .0 1) ,与颈动脉扩张性呈负相关 (γ =-0 .30 3、γ =-0 .172 ,P均 <0 .0 5 )。　　结论 :原发性高血压病人ET水平较健康人增加 ,而NO较健康人降低 ,二者存在比例失衡。ET、NO及二者间的比例失衡与原发性高血压病人颈动脉重构密切相关     

X综合征患者血浆内皮素、一氧化氮浓度变化及其临床意义

目的：本研究以生化指标观察并探讨血管内皮功能与Ｘ综合征的联系。方法：采用放射免疫法、酶联免疫吸附法和分光光度法检测Ｘ综合征患者血浆内皮素、氧化型低密度脂蛋白和一氧化氮（以亚硝酸盐表示）水平，同时与冠心病患者和（或）健康人作对照分析。结果：Ｘ综合征患者血浆内皮素、一氧化氮水平较健康人升高，血浆内皮素／一氧化氮比值亦增大，而血浆氧化型低密度脂蛋白水平在正常范围。结论：Ｘ综合征患者血浆内皮素增高，血浆内皮素／一氧化氮比例可能失衡，从而导致血管舒缩状态异常。     

地塞米松对血管平滑肌细胞增殖及一氧化氮合成酶基因表达的影响

用＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入实验及细胞计数检查地塞米松对体外培养的大鼠血管滑肌细胞ＤＮＡ合成细胞增殖的影响；经Ｎｒｏｔｈｅｒｎ迹分析和亚硝酸盐含量测量观察一氧化氮合成酶基因表达及一氧化氮合成酶活性的变化。     

实验性肝硬化血浆内毒素、一氧化氮与内皮素的含量变化及其意义

目的：通过观察实验性肝硬化形成过程内毒素,一氧化氮（ＮＯ）与内皮素（ＥＴ）与内皮素（ＥＴ）的动态变化,探讨其与肝硬化高动力循环状态的关系。方法：采用鲎试剂基质显色法,镉还原比色法和放射免疫分析法测定了四氯化碳（ＣＣＩ＾４）诱发大鼠肝硬变形过程中血浆内毒素,ＮＯ,ＥＴ含量变化。结果：在肝硬化进程中血浆内毒素,ＮＯ含量呈上升趋势且明显高于正常对照组（Ｐ〈０．０１）,血浆ＥＴ含量呈下降趋势且明显低于正常     

选择性逆向冠状静脉搭桥术后一氧化氮和内皮素的变化

目的探讨选择性逆向冠状静脉搭桥术对犬心肌缺血模型一氧化氮和内皮素的影响及其意义。方法16只健康成年杂种犬,随机分成缺血组(n=8)和选择性逆向冠状静脉搭桥组(n=8),观察不同时段两组血浆一氧化氮和内皮素含量的变化。并在选择性逆向冠状静脉搭桥组经静脉桥在体灌注墨汁,石蜡包埋后切片观察。结果后降支结扎前,两组血浆一氧化氮和内皮素含量无显著性差异(P>0.05),但结扎后两组血浆一氧化氮和内皮素含量在不同时段比较差异有统计学意义(P<0.01)。显微镜下,经静脉桥灌注的墨汁能在心肌组织间均匀分布。结论选择性逆向冠状静脉搭桥能使心肌得到有效灌注,通过维持犬心肌缺血模型血浆一氧化氮及内皮素水平,从而减轻心肌内皮细胞损害,保护心脏功能。     

大鼠肠缺血后回肠组织内一氧化氮代谢的变化

目的：研究缺血及缺血再灌注后肠组织内NO代谢产物的变化。方法：建立大白鼠肠系膜上动脉阻断模型，采用荧光法测定回肠组织内NO2^-含量，结果：缺血后30min，肠组织NO2^-上升，2h达高峰，缺血再灌注组，在复灌30min,60min,120min,180min时NO2^-含量均明显高于单纯缺血组，缺血前腹腔给予iNOS抑制剂氨基胍（AG）可明显降低缺血及缺血再灌时肠组织NO2^-含量。结论：肠缺血及缺血再灌注后肠组织内NO2^-含量发生明显改变，iNOS抑制剂AG对缺血及缺血再灌所致iNOS活性增高有明显抑制作用。NO参与了肠缺血再灌注的损伤过程。