白藜芦醇对脊髓损伤后继发性脊髓水肿,乳酸脱氢酶及ATP酶活性的影响

目的　探讨脊髓损伤 (SCI)后使用白藜芦醇 (resvera trol,Res)对继发性脊髓水肿及受损脊髓组织中乳酸脱氢酶(LDH)与Na+ ,K+ ATP酶活性的影响。方法　采用重物下落撞击法制备成年大鼠的脊髓损伤模型 ,于损伤后即刻腹腔注射给予Res 5 0mg·kg-1,10 0mg·kg-1或甲基强的松龙(MPSS) 10 0mg·kg-1,观察给药后 1、2 4、4 8h时Res组受损脊髓组织含水量、LDH及Na+ ,K+ ATP酶活性的变化 ,并与MPSS组进行疗效对比。结果　Res能够明显抑制SCI后继发性水肿 ,以 4 8h为最明显 ,抑制率为 11 5 % ;明显降低LDH活性 ,以 2 4h最大 ,抑制率大于 4 0 % ;明显改善Na+ ,K+ ATP酶活性 ,以 4 8h最显著 ,最大改善率在 6 0 %以上 ,上述作用均与强的松龙相当或更优。结论　Res可以有效抑制脊髓损伤后的水肿及改善能量代谢系统 ,对脊髓损伤有潜在的治疗作用     

白藜芦醇对急性脊髓损伤早期脂质过氧化反应和活性氧水平的抑制作用

目的 :探讨脊髓损伤后使用白藜芦醇 (resvera trol,Res)对脊髓损伤 (SCI)早期脂质过氧化反应和活性氧水平的抑制作用。方法 :采用重物下落撞击法制备成年大鼠的SCI模型 ,于损伤后即刻腹腔注射给予Res 5 0 ,1 0 0mg·kg-1和甲基强的松龙 (MPSS)1 0 0mg·kg-1,测定SCI后 1 ,2 4,48h时Res组受损脊髓组织超氧化物歧化酶 (SOD)和脂质过氧化反应产物丙二醛 (MDA)及活性氧 (ROS)水平 ,并与MPSS组进行疗效对比。结果 :Res 5 0mg·kg-1与 1 0 0mg·kg-1均能够显著提高SCI后损伤部位SOD水平和抑制MDA产生 (P <0 .0 1 ) ,以 48h为最明显 ;显著降低ROS水平 (P <0 .0 1 ) ,也以 48h最大 ,抑制率大于40 % ;且有明显剂量依赖性 ,作用与MPSS相当或更优。结论 :Res可以有效抑制脊髓损伤后早期受损局部脂质过氧化反应和活性氧水平 ,对脊髓损伤有潜在的保护与治疗作用     

依达拉奉对急性脊髓损伤后保护机制的研究

目的探讨依达拉奉对急性脊髓损伤后保护机制。方法成年清洁级SD大鼠96只,分为假手术组A组,脊髓打击损伤组B组、甲基强的松龙组C组、依达拉奉组D组,每组24只。采用改良重物撞击装置制备脊髓急性打击损伤。A组仅切除椎板,不做打击脊髓处理,缝合后即刻给予生理盐水腹腔注射;B组急性脊髓损伤造模成功后即刻给予生理盐水腹腔注射;C组造模成功后即刻给予甲基强的松龙腹腔注射;D是造模成功后即刻给予依达拉奉腹腔注射。分别于1h、24h以及48h测定脊髓组织中LD含量、LDH活性以及Na~+/K~+-ATP酶活性。结果伤后1h,24h以及48h四组、LDH活性、Na~+/K~+-ATP比较差异有统计学意义(P0.05)。结论依达拉奉能够减少局部组织水肿,保护Na~+/K~+-ATP酶活性,改善局部能量代谢,减少损伤后的继发性损伤,改善神经功能恢复。     

低浓度毒毛旋花子苷元的强心作用及其与心肌细胞膜Na~＋，K~＋-ATP酶的关系

目的:观察低浓度的毒毛旋花子苷原(Strophanthidin,Str)对离体豚鼠心脏是否有强心作用,及其与心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶活性的关系。方法:采用Langendorff离体灌流装置经主动脉逆行灌流心脏;八道生理记录仪记录心率(HR),左室内压(LVP)及其最大变化速率(±dP/dt_(max));无机磷法测定心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶活性。结果:Str 0.1nmol/L可兴奋Na~+,K~+-ATP酶活性(P<0.05)但不影响心脏的收缩功能,Str 1nmol/L仅能升高+dP/dt_(max)(P<0.05)并兴奋Na~+,K~+-ATP酶活性(P<0.01),Str 10和100 nmol/L可升高LVP和+dP/dt_(max)(P<0.05或P<0.01),对Na~+,K~+-ATP酶活性无明显作用,Str 1-100μmol/L虽能短暂升高LVP和±dp/dt_(max)(P<0.01),但随后出现不规则收缩并使LVP和±dP/dt_(max)降低,其对Na~+,K~+-ATP酶活性则表现为剂量依赖性抑制作用(P<0.01)。结论:高浓度Str的正性肌力作用是通过抑制Na~+,K~+-ATP酶活性实现的,而低浓度Str的强心作用似与Na~+,K~+-ATP酶抑制作用无关。     

人参皂甙对犬心肌Na~+、K~+-ATP酶活力的影响

人参茎叶总皂甙(GNS)和人参根总皂甙(GRS)10、20和40mg/kg,显著抑制犬心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶的活力;人参茎叶二醇组皂甙(PDS)和三醇组皂甙(PTS)5、10和20mg/kg,也显著抑制Na~+,K~+-ATP酶的活力。离体实验表明:GNS、GRS、PDS和PTS在0.01、0.10和1.00g/L,对犬心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶的活力均具有抑制作用。提示人参的正性肌力作用可能与其对心肌Na~+,K~+-ATP酶的抑制有关。     

基于cAMP/PKA通路研究当归芍药散提取液对阿霉素诱导IMCD3细胞损伤的保护作用

目的观察当归芍药散(Danggui-Shaoyao-San,DSS)提取液对阿霉素(adramycin,ADR)诱导损伤的内髓集合管(inner medullary collecting duct cell,IMCD3)细胞Na~+,K~+-ATP酶、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)及水通道蛋白-2 (aquaporin 2,AQP2)的影响,从水液平衡的角度探讨其相关的保护机制。方法以IMCD3细胞为研究对象,MTT法观察不同浓度ADR对IMCD3细胞增殖的影响;将细胞分为正常组、模型组、DSS提取液低、中、高剂量组(0.8、1.6、3.2 g·L~(-1))、H-89抑制剂组;ELISA法检测细胞cAMP含量;试剂盒检测Na~+,K~+-ATP酶活性变化;Real-time PCR法检测PKA、CREB、水通道蛋白2(AQP2)mRNA表达;Western blot法检测Na~+,K~+-ATP酶、PKA、CREB、AQP2蛋白表达。结果 ADR对IMCD3细胞的损伤最适浓度为1×10~(-8) mol·L~(-1);不同浓度的DSS提取液均可有效抑制ADR诱导IMCD3细胞损伤,提高Na~+,K~+-ATP酶活性及细胞上清cAMP含量(P<0.05),DSS(1.6、3.2 g·L~(-1))可上调PKA、CREB、AQP2 mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 DSS提取液对ADR诱导IMCD3细胞损伤模型具有一定的保护作用,与提高Na~+,K~+-ATP酶活性、激活cAMP-PKA-CREB通路有关。     

酸性成纤维细胞生长因子对庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素引起的体外培养的大鼠肾小管上皮细胞损害的保护作用。方法大鼠肾皮质经研磨、过网、胰蛋白酶消化,进行肾小管上皮细胞的体外培养。用庆大霉素建立损伤模型,观察aFGF对损伤的肾小管上皮细胞的保护作用。结果①经形态学观察、GM组与对照组比较,CAT、SOD、Na~+,K~+-ATP酶活性下降,而NAG活性和MDA升高(P<0.01),提示肾小管上皮细胞的培养和庆大霉素损伤的建模成功。②aFGF+GM组与GM组比较,各生化和酶学指标差异均有显著性(P<0.01);而aFGF+GM组与对照组比较,CAT、NAG、Na~+,K~+-ATP酶活性差异无显著性,但SOD活性下降、MDA升高差异仍有显著性(P<0.05)。结论aFGF对庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞损伤有明显的保护作用。     

特异性单克隆抗体对地高辛抑制家兔红细胞膜Na~+,K~+-ATP酶活性的拮抗作用

本文研究结果表明抗地高辛特异性MAb可有效地拮抗地高辛引起的RRBC膜Na~+,K~+-ATP酶活性抑制。1.8×10~4倍稀释的FD8 MAb腹水,在试管内可使4ng/ml浓度地高辛引起的酶活性抑制恢复达50％。给地高辛中毒兔iv FD8 MAb 腹水后,被抑制的RRBC膜Na~+,K~+-ATP酶活性迅速恢复,酶抑制造成的RRBC内Na~+,K~+浓度异常也随之得到恢复。本研究从受体水平证实了特异性MAb解除地高辛毒性的作用机理     

苦参碱对阿霉素诱导大鼠心肌损伤的保护作用及其机制研究

目的研究苦参碱对阿霉素诱导大鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组和苦参碱25、50、100 mg/kg组,每组各20只。模型组大鼠ip注射用阿霉素2.5 mg/kg,1次/周,连续给药6周,累积剂量15 mg/kg,建立心肌损伤模型。对照组ip等量生理盐水。苦参碱组造模前2 d ip注射用苦参碱25、50、100 mg/kg,连续给药5 d。观察大鼠心肌细胞病理学,采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清线粒体偶联因子CF6水平,应用分光光度法测定Na~+-K~+-ATP酶、Ca2~+-ATP酶活力,采用试剂盒检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、总超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果苦参碱各组心肌组织肿胀,肌束间、间质有灶性出血现象显著减轻。与模型组比较,苦参碱各组血清CF6水平显著降低(P0.05);线粒体Na~+-K~+-ATP酶、Ca2~+-ATP酶活性显著升高(P0.05);心肌组织GSH-px活性及SOD活力升高,MDA含量显著降低(P0.05)。结论苦参碱能保护阿霉素引起的大鼠心肌损伤,其作用机制与改善线粒体ATP酶活性、降低线粒体偶联因子6水平、减轻氧化应激水平有关。     

依布硒啉对大鼠急性脊髓损伤后线粒体的保护作用

【摘要】目的 探讨依布硒啉对大鼠急性脊髓损伤后线粒体氧化损伤、细胞色素C释放及神经细胞凋亡的影响。方法 将60只健康SD大鼠随机分为5组,每组12只。采取用Allen’s法制脊髓损伤（SCI）模型,假手术组仅行椎板切除,SCI模型组行椎板切除+打击,甲基泼尼松龙组打击后给予甲基泼尼松龙腹腔注射处理（30 mg/kg）,依布硒啉组打击后给予依布硒啉腹腔注射处理（10 mg/kg）,生理盐水组打击后给予等体积0.1%二甲基亚砜的生理盐水溶液腹腔注射处理。术后24 h取受损脊髓,检测丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量、细胞色素C表达及神经细胞凋亡情况。结果 依布硒啉组较SCI模型组脊髓组织线粒体中MDA含量明显降低,GSH明显增高,Western blot检测细胞色素C的释放量减少,TUNEL法检测神经细胞凋亡数目明显减少（均P<0.01）。结论 依布硒啉能够改善SCI后线粒体氧化损伤,减少线粒体细胞色素C释放,抑制神经细胞凋亡,对脊髓损伤起到保护作用。      

心肌Na^＋，K^＋-ATP酶在抑郁症时的活性及mRNA表达

目的 探讨Na+,K+-ATP酶在抑郁症发病中的作用及其和单胺类神经递质之间的关系.方法 对SD大鼠进行慢性随机刺激建立抑郁症模型,检测大鼠心肌Na+,K+-ATP酶的活性及mRNA表达,海马组织及血液中去甲肾上腺素(NA)和5-羟色胺代谢物5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)水平.结果 抑郁症大鼠心肌Na+,K+-ATP酶的转录水平下调(P＜0.01);酶的活性明显降低(P＜0.01);海马及血浆中的NA及5-HIAA水平显著下降(P＜0.01).结论 推测抑郁症时神经体液因素的变化可能是引起心肌细胞Na+,K+-ATP酶分子变化的原因之一,该酶在抑郁症的发病机制中有一定的生理和病理意义.     

人参二醇皂甙和三醇皂甙对兔纹状体ATP酶的影响

本文报道用体外给药法,观察了PDS和PTS对纹状体ATP酶(Na⁺、K⁺-ATP酶,Ca²⁺-ATP酶及M²⁺-ATP酶)的影响。结果发现PDS和PTS对Na⁺,K⁺-ATP酶都有明显的抑制作用,且随PDS和PTS浓度的高低,其抑制作用增强或减弱;对Ca²⁺-ATP酶,PDS在10^-5g/ml时有激活作用,当浓度增高到10^-3g/mL时则转为抑制,而PTS仅为抑制效应;对于Mg²⁺-ATP酶能被PDS所兴奋,而被PTS所抑制。此结果表明PDS和PTS对中枢神经系统的作用,可能与其影响脑内ATP酶有密切的内在联系。     

AIT-082 and methylprednisolone singly, but not in combination, enhance functional and histological improvement after acute spinal cord injury in rats

Extracellular non-adenine based purines are neuroprotective. Preliminary studies indicate that administration of the synthetic purine 4-[[3-(1,6 dihydro-6-oxo-9-purine-9-yl)-1-oxypropyl] amino] benzoic acid (AIT-082, leteprinim potassium) to rats immediately after acute spinal cord injury (SCI), improves functional outcome. The effects of potential new agents are often compared to methylprednisolone (MPSS). We evaluated the effects of AIT-082 and MPSS, separately and in combination, on the functional and morphological outcome of acute SCI in adult rats. After standardized T11-12 spinal cord compression rats were given intraperitoneally one of the following: vehicle (saline); MPSS (30 mg/kg or 60 mg/kg body weight, first dose 15 min after crush); AIT-082 (60 mg/kg body weight daily, first dose 15 min after crush); or AIT-082 plus MPSS. After 1, 3, or 21 days, the rats were perfused for histological analysis. AIT-082 administrations significantly reduced locomotor impairment from 121 days post-operatively. At 1 and 3 days post injury, AIT-082-treatment reduced tissue swelling, tissue loss and astrogliosis at the injured cords but did not alter the extent of hemorrhage and the number of macrophages and/or microglia. MPSS reduced hemorrhage and the number of macrophages and/or microglia, but did not alter astrogliosis. At 21 days, either AIT-082 or MPSS administration improved function and morphology similarly (less tissue loss and astrogliosis). In contrast, administration of AIT-082 and MPSS together abolished the beneficial effects observed when either drug was given individually. These results suggest that MPSS and AIT-082 may exert their beneficial effects through different and potentially antagonistic pathways.     

慢性吗啡引起的抑制海马神经元Na~+,K~+-ATPase活性和降低能量代谢酶的表达可能参与小鼠吗啡依赖的形成

海马是与阿片类物质依赖发生密切相关的脑组织之一。目前对海马组织参与阿片类物质依赖产生的机理仍缺乏认识。我们的研究发现,吗啡处理可通过改变cAMP/PKA信号通路调节海马神经元Na+,K+-ATPase活性,慢性暴露小鼠于吗啡可导致海马神经元Na+,K+-ATPase活性显著降低。以前的研究表明,Na+,K+-ATPase活性下降引起的神经元去极化参与了吗啡耐受和依赖作用的形成。另一方面,我们的研究也发现慢性吗啡处理可引起小鼠海马组织中与能量代谢相关的酶或辅酶表达显著降低,导致海马组织糖代谢功能的削弱。深入的研究表明海马组织糖代谢功能障碍参与了吗啡依赖的形成。因此,抑制海马神经元Na+,K+-ATPase活性和降低海马组织中与能量代谢相关的酶或辅酶表达可能与慢性吗啡处理引起的小鼠吗啡依赖的形成有关。     

性激素对豚鼠心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶活力的影响

采用Matsui and Schwartz方法制备Na~+,K~+—ATP酶液,Harry法测定无机磷含量,间接测定心肌细胞膜Na~+,K~+—ATP酶活力,实验结果表明,丙酸睾丸素、已烯雌酚对心肌细胞膜Na~+,K~+—ATP酶活性均有明显的抑制作用。但丙酸睾丸素呈正相关,已烯雌酚呈负相关,说明性腺激素可以使心肌细胞膜上的Na~+,K~+—ATP酶活性降低。     

大鼠缺血性全脑损伤Na~+,K~+-ATP酶活性及其α亚基表达的变化

目的研究大鼠全脑缺血后,脑组织Na+,K+-ATPase活性及其α亚基的变化。方法采用大鼠双侧颈总动脉结扎全脑缺血模型,测定缺血后脑组织H2O,Na+和K+含量及Na+,K+-ATPase的活性,采用免疫组织化学的方法观察Na+,K+-ATPaseα亚基的改变。结果全脑缺血后,脑组织的H2O和Na+的含量明显增加,K+含量及Na+,K+-AT-Pase活性明显降低,正常大鼠海马和皮层神经元上主要分布α1和α3亚基,而α2表达较少,脑缺血后,α1和α3亚基的表达明显减少。结论Na+,K+-ATPaseα1和α3亚基参与了缺血性脑损伤。     

选择性线粒体分裂抑制剂对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞的保护作用及其机制

【摘要】目的 检测选择性线粒体分裂抑制剂-1（Mdivi-1）对大鼠急性脊髓损伤（ASCI）后神经细胞线粒体中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、细胞色素C（Cyt-C）及神经细胞凋亡的影响。方法成年雌性SD大鼠36只,体质量 250~300g,随机分为假手术组（Sham组）、单纯脊髓损伤组（SCI组）、Mdivi-1预处理组（1.20mg/kg,Mdivi-1组）,各12 只。Sham组只暴露脊髓,不打击。SCI组和Mdivi-1组采用Allen’s方法制备脊髓损伤模型。Mdivi-1组在脊髓打击之前15min尾静脉给予Mdivi-1,而SCI组给予等量二甲基亚砜（DMSO）。Sham组在暴露脊髓8h后立即处死,SCI组和Mdivi-1组均于脊髓损伤后8h处死;然后取出脊髓节段T9~T11,用分光光度计检测各组脊髓组织线粒体中MDA 和GSH的含量,Western Blot法检测线粒体及胞浆内Cyt-C表达情况,荧光TUNEL法观察神经细胞凋亡情况。结果与Sham组相比,SCI组线粒体中Cyt-C和GSH明显减少,但线粒体中的MDA,胞浆中Cyt-C及神经细胞凋亡数目明显增多（P<0.01）;与SCI组相比,Mdivi-1组线粒体中Cyt-C和GSH明显增多,但线粒体中MDA,胞浆中Cyt-C以及神经细胞凋亡数目明显减少（P<0.01）。结论Mdivi-1具有减轻ASCI后神经细胞线粒体氧化损伤,抑制线粒体中Cyt-C 的释放及神经细胞凋亡的作用,促进了脊髓功能恢复。     

Localized delivery of methylprednisolone sodium succinate with polymeric nanoparticles in experimental injured spinal cord model

With important social and economic consequences, spinal cord injuries (SCIs) still exist among major health problems. Although many therapeutic agents and methods investigated for the treatment of acute SCI, only high dose methylprednisolone (MP) is being used currently in practice. Due to the serious side effects, high dose systemic MP administration after SCI is a critical issue that is mostly considered controversial. In our study, it is aimed to develop a nanoparticle-gel combined drug delivery system for localization of MP on trauma site and eliminating dose-dependent side effects by lowering the administered dose. For this purpose, methyl prednisolone sodium succinate (MPSS) loaded polycaprolactone based nanoparticles were developed and embedded in an implantable fibrin gel. The effects of MPSS delivery system are evaluated on an acute SCI rat model, by quantification the levels of three inflammatory cytokines (interleukin-1β, interleukin-6 and caspase-3) and assessment of the damage on ultrastructural level by transmission electron microscopy. Developed NP-gel system showed very similar results with systemic high dose of MPSS. It is believed that developed system may be used as a tool for the safe and effective localized delivery of several other therapeutic molecules on injured spinal cord cases.