用β-escin穿孔膜片技术研究粉防己碱对豚鼠心室肌钙电流的作用

目的用β-escin穿孔膜片(PPR)技术研究粉防己碱(tetrandrine,Tet)对I_Ca,L和I_Ca,T的作用。方法用PPR和全细胞记录(WCR)模式记录心室肌细胞I_Ca,L和I_Ca,T。结果25 μmol·L^-1 β-escin可在心室肌细胞形成稳定的PPR模式,用此模式记录的I_Ca,L衰减明显减慢。在PPR模式下1～300 μmol·L^-1 Tet浓度依赖性地减小I_Ca,L幅值。3,30和300 μmol·L^-1 Tet对I_Ca,T的抑制率分别为(16±5)%,(40±7)%和(75±11)%。结论用25 μmol·L^-1 β-escin在豚鼠心室肌细胞能得到较稳定的PPR模式,在此模式下Tet浓度依赖性地抑制I_Ca,L和I_Ca,T。     

海葵毒素anthopleurin—Q对豚鼠心室肌细胞钠电流的作用

目的:研究从海葵(Anthopleura xanthogrammica)提取的毒素anthopleurin-Q(AP-Q)对豚鼠心室肌钠电流(I_(Na))的作用。方法:用酶消化法分离豚鼠单个心室肌细胞,用全细胞膜片箝技术记录心室肌细胞钠电流。结果:AP-Q 3-30nmol/L浓度依赖性地增大I_(Na),EC_(50)、为104nmol/L(95％可信范围:78-130nmol/L)。AP-Q 300nmol/L使I-V曲线左移,使半数激活电压从(-36.3±2.3)mV变为(-43±23)mV(n=6,P<0.01),半数失活电压从(-75±6)mV变为(-59±5)mV(n=6,P<0.01)。AP-Q 300nmol/L使I_(Na)半数恢复时间从(114±36)ms缩短为(17±2)ms(n=6,P<0.01),并明显减慢I_(Na)的快速失活时间常数(τ_f)。结论:AP-Q对I_(Na)有促进作用并减慢其失活过程。     

双苯氟嗪对豚鼠心室肌细胞L-钙电流的影响

目的:观察双苯氟嗪(Dip)对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(I_(Ca-L))的影响。方法:酶解法制备单个心室肌细胞。应用全细胞膜片箝技术记录豚鼠单个心室肌细胞钙电流。结果:在0.3-30μmol/L范围内,Dip可浓度依赖性地降低电压依赖性激活I_(Ca-L)峰值,被Dip 3μmol/L所抑制的I_(Ca-L)在冲洗5min后可得到部份恢复。但Dip对I_(Ca-L)的电压依赖特征,最大激活电压,以及I_(Ca-L)稳态激活无明显影响。在Dip3μmol/L存在下,半数激活电压(V_(0.5))和斜率参数(к)与对照组相比,差异均无显著性。V_(0.5)分别为(-12.8±1.7)mV和(-13.2±2.4)mV,к分别为(7.1±0.4)mV和(7.5±0.5)mV(P>0.05)。Dip3μmol/L可明显使钙电流稳态失活曲线左移,加速钙通道电压依赖性稳态失活。V_(0.5)分别为(-19.7±2.4)mV和(-31±6)mV,к分别为(3.6±0.3)mV和(1.8±0.2)mV(P<0.05).Dip 3μmol/L还使I_(Ca-L)从失活状态下的恢复明显减慢。结论:Dip主要作用于L-型钙通道的失活状态,加速钙通道失活,并使其从失活状态下恢复减慢,从而抑制I_(Ca-L)。     

胍丁胺对大鼠心室肌细胞L—钙通道电流的影响

目的:观察胍丁胺(Agm)对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(I_(Ca-L))的影响.方法:以酶解法制备单个心室肌细胞.应用全细胞膜片箝技术记录大鼠单个心室肌细胞钙通道电流.结果:(1)Agm(0.5,1,2mmol/L)可浓度依赖性地降低电压依赖性激活I_(Ca-L)(pA)峰值,其值从1451±236 (对照组)到937±105(n=8,P<0.05),585±74(n=8,P<0.01),和301±156(n=8,P<0.01).(2)Agm 1 mmol/L使用依赖性地阻滞I_(Ca-L)·1 Hz时抑制率为53％±12％(P<0.05),3Hz时为69％±11％(P<0.01).(3)Agm使I-V曲线上移,但对I_(Ca-L)的电压依赖特征、最大激活电压以及I_(Ca-L)稳态激活无明显影响.在Agm 1 mmol/L作用下,半数激活电压(V_(0.5)和斜率参数(k)与对照组相比均无显著性差异.V_(0.5)分别为(-20.2±2.5)mV和(-20.5±2.7)mV,k分别为(3.2±0.4)mV和(3.0±0.5)mV.(4)Agm 1 mmol/L可明显使钙电流稳态失活曲线左移,加速钙通道电压依赖性稳态失活.V_(0.5)分别为(-32±6)mV和(-40±5)mV,k分别为(7.6±O.9)mV和(12.5±1.1)mV(P<0.05).(5)Agm 1mmol/L还使I_(Ca)从失活状态下恢复明显减慢.结论:Agm抑制I_(Ca-L),并主要作用于L-型钙通道的失活状态,表现为钙通道失活加速和从失活状态下恢复减慢.     

大豆苷元对大鼠心室肌细胞I_(Na)的影响

目的观察大豆苷元对大鼠心室肌细胞钠通道电流(I_(Na))的影响,探讨其抗心律失常的机制。方法 MTT比色法检测大豆苷元对心室肌细胞活力的影响;单酶解法分离大鼠单个心室肌细胞;全细胞膜片钳技术观察、记录、分析大豆苷元给药前后大鼠心室肌细胞I_(Na)及其动力学特征的变化。结果 MTT实验表明,大豆苷元的IC_(50) 30～100μmol·L~(-1),由此选定用于后续实验的药物浓度为0.3～10μmol·L~(-1)。膜片钳实验结果表明,当给予终浓度为0.3、1、3、10μmol·L~(-1)大豆苷元后,药物对I_(Na)呈浓度依赖性抑制现象;大豆苷元0.3μmol·L~(-1)时对I_(Na)作用的时间过程也具有一定影响,随时间推移缓慢减小;1、3、10μmol·L~(-1)大豆苷元使I-U曲线上移;在此同等条件下,激活曲线向去极化方向移动、稳态失活曲线向超极化方向移动和失活后恢复曲线的τ值延长。结论大豆苷元对大鼠心室肌Na~+通道有明显的抑制作用,这可能是其抗心律失常的机制之一。     

苄基四氢巴马汀对豚鼠和大鼠心室肌细胞钾电流的作用

目的:研究苄基四氢巴马汀(BTHP)对心室肌细胞快激活(I_(Kr))和慢激活(I_(Ks))延迟整流钾电流、内向整流钾电流(I_(Kl))和瞬时外向钾电流(I_(to))的作用.方法:采用全细胞膜片箝技术记录豚鼠及大鼠心室肌细胞钾电流.结果:BTHP在 1-100 μmol/L的范围内以浓度依赖性方式阻滞I_(Kr)和I_(Ks),其中对I_(Kr)的IC_(50)为 13.5 μmol/L(95％可信限:11.2-15.8 μmol/L)而对 I_(Ks)的 IC_(50)则为 9.3 μmol/L(95％可信限:7.8-11.8 μmol/L).BTHP 30μmol/L时可使 I_(Kr)及I_(Kr,tail)分别降低31％±4％和36％±5％(n=6,P<0.01);使I_(Ks)及I_(Ks,tail)分别降低40％±6％和45％±15％(n=7,P<0.01);BTHP 5μmol/L可抑制大鼠心室肌细胞I_(to)电流,使电流幅值降低63％±6％(n=6,P<0.01),BTHP1-100μmol/L以浓度依赖性方式阻滞入I_(to),其 IC_(50)为 3.6 μmol/L(95％可信限:2.9-4.3μmol/L).但BTHP 200 μpmol/L对I_(Kl)基本无影响.结论:BTHP对I_(Kr)、I_(Ks)、I_(to)均有抑制作用,且其阻滞作用呈现出浓度依赖性特征.     

过氧化氢对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的:研究过氧化氢(H2O2)对单个大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(Ica,L)的影响。方法:用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞;用标准的全细胞膜片钳技术记录钙通道电流,观察5mmol·L-1H2O2引起单个大鼠心室肌细胞Ica,L改变。结果:在5mmol·L-1H2O2作用下,大鼠心室肌细胞Ica,L峰值电流密度从4.89±0.52pA/pF增加至9.80±0.65pA/pF(P<0.05,n=10),电流-电压曲线下移,但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变;H2O2对Ica,L激活时间常数-电压曲线无明显影响,但可使其灭活时间常数-电压曲线明显向上移;H2O2对Ica,L稳态激活曲线无明显改变,但可使其稳态失活曲线明显左移,V0.5从(-26.85±5.3)mV左移至(-37.20±4.5)mV(P<0.05,n=5)。结论:H2O2可以增加大鼠心肌细胞Ica,L,且使其失活明显减慢。     

5—羟色胺增强去甲肾上腺素诱导的肥厚心肌L—型钙电流

目的:研究5-羟色胺(5-HT)对去甲肾上腺素(NE)诱导的大鼠肥厚心肌L-型钙电流(I_(Ca))的影响.方法:大鼠腹腔注射NE建立心肌肥厚模型;酶解分离单个心室肌细胞;全细胞膜片箝记录I_(Ca).结果:(1)腹腔注射NE第15天,大鼠左心室与体重比增加31.8％(2)肥厚心肌细胞I_(Ca)与正常心肌细胞相比,明显增加0mV时分别为4.5pA/pF±0.5pA/pF和3.5pA/pF±0.3pA/pF(P<0.01).(3)5-HT可显著增加肥厚和正常心肌细胞I_(Ca),并使最大激活电流从0mV降低至-10mV;此外,5-HT增加I_(Ca)作用在肥厚心肌细胞更为显著.(4)稳态激活和失活实验发现,5-HT对稳态激活曲线无显著影响,而影响稳态失活曲线,使半失活电压从-39.5mV±1.8mV升高至-27.8mV±1.7mV(P<0.05),而不改变钙通道电压依赖性(斜率因子k无显著变化).结论:5-HT通过改变L-型钙通道稳态失活特征而显著增加I_(Ca),此作用在肥厚心肌细胞更显著,提示在肥厚心肌5-HT更易于诱导心律失常发生.     

白花前胡甲素对豚鼠心肌细胞钙电流的影响(英文)

利用膜片钳制技术全细胞记录观察了白花前胡根中成分甲素对豚鼠单一心室肌细胞I_(Ca)的作用。表明;1,10,100μmol·L~(-1)的甲素使I_(Ca)的峰值变小,具有剂量依赖关系。给药前后I_(Ca)的翻转电位均为 60mV,实验结果提示甲素对Ca~(2 )通道有阻滞作用。     

DDPH对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流两种成分的抑制作用

目的:研究1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙氨基)丙烷盐酸盐(DDPH)对豚鼠心室肌细胞快激活(I_(Kr))和慢激活(I_(Ks))延迟整流钾电流的作用.方法:全细胞膜片箝技术.结果:DDPH 0.1-100μmol/L浓度依赖性抑制I_(Kr),I_Kr-tail[IC_(50)(μmol/L)为6.1,95％可信限为(2.8—13.5)].DDPH同时浓度依赖性抑制 I_(Ks),I_(Ks-tail[IC_(50)(μmol/L)为12.5,95％可信限为(4.8-32.2)].DDPH(10 μmol/L)不影响I_(Kr)和I_(Ks)的电压依赖性激活过程,给药前I_(Kr)的半激活电压(V_(1/2),mV)和斜率因子(k,mV)分别为(-21.7±0.8)和(5.9±0.8),给药后分别为(-23.5±2.4)和(8.1±2.2),无统计学意义(P>0.05).用药前后I_(Ks)的半激活电压和斜率因子的差异亦无统计学意义(P>0.05),用药前分别为(27.0±0.8)和(14.9± 0.9),用药后分别为(27.1±0.7)和(16.6±0.8).DDPH(<10μmol/L)可抑制 I_(Kr)和 I_(Ks)的去激活过程,并且加快I_(Kr)的失活.结论:DDPH抑制I_(Kr)和I_(Ks)无选择性.且主要作用于其去激活过程,而非激活过程.DDPH进一步通过加速其失活过程抑制I_(Kr).     

罗哌卡因对豚鼠心室肌细胞钠电流、钙电流和钾电流的影响

目的:研究罗哌卡因(Rop)对豚鼠心室肌细胞钠电流(Ⅰ_(Na))、L-型钙电流(Ⅰ_(Ca-L)、内向整流钾电流(Ⅰ_(Kl)及延迟整流钾电流(I_K)的影响.方法:全细胞膜片箝技术.结果:罗哌卡因10,50与100μmol/L使Ⅰ_(Na)的峰电流分别减小8.3％、33.3 ％和62.5％(P<0.01),使失活时间常数分别延长8.2％、24.7％和64.1％(P<0.05);罗哌卡因50与100μmol/L使Ⅰ_(Ca-L)的峰电流分别减小7.6％和22.5％(P<0.05),使慢失活时间常数分别延长15.5％和33.0％(P<0.01);罗哌卡因50与100μmol/L对Ⅰ_(Kl)和Ⅰ_K的峰电流无明显影响.结论:罗哌卡因抑制Ⅰ_(Na)和Ⅰ_(Ca-L),可能与其心脏毒性作用有关.     

牛磺酸镁配合物对乌头碱诱发心律失常大鼠心肌细胞钙通道的影响

目的研究牛磺酸镁配合物(TMCC)对乌头碱诱发心律失常大鼠心肌细胞L型钙电流(I_(Ca,L))的影响。方法酶解法分离大鼠单个心室肌细胞,乌头碱诱导大鼠心律失常模型,胺碘酮作为阳性对照,100、200和400μmol·L~(-1)TMCC作用于心肌细胞。应用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞I_(Ca,L)的变化。结果 400μmol·L~(-1)TMCC显著增加大鼠正常心肌细胞I_(Ca,L),胺碘酮则使之减小。1μmol·L~(-1)乌头碱使I_(Ca,L)电流密度由(4.3±1.6)pA·pF~(-1)增加到(6.4±1.9)pA·pF~(-1)(p<0.01),400μmol·L~(-1)TMCC能显著降低乌头碱诱导的I_(Ca,L)增加。胺碘酮则能使之恢复为(3.7±1.4)pA·pF~(-1)。结论 400μmol·L~(-1)TMCC能增加正常细胞的I_(Ca,L),对钙内流有促进作用,并可减少乌头碱诱导的心律失常大鼠心肌细胞异常增加的电流。     

蝙蝠葛碱对豚鼠心室肌细胞钾电流的阻断作用(英文)

目的:研究蝙蝠葛碱对豚鼠心室肌细胞快激活(I_(Kr))和慢激活(I_(Ks))延迟整流钾电流及内向整流钾电流(I_(K1))的作用。方法:酶解法制备单个心室肌细胞。电压箝制方式下全细胞记录豚鼠单个心室肌细胞钾通道电流。结果:蝙蝠葛碱1-100μmol·L~(-1)浓度依赖性阻断I_(Ks),I_(Ks-tail)[IC_(50)=33(95 ％可信限:24-46)μmol·L~(-1)]及I_(Kr),I_(Kr-tail)[IC_(50))=16 (95％可信限:13-22)μmol·L~(-1)]。对I_(Ks-tail),I_(Kr-tail)的去激活过程无明显影响,给药前的时间常数分别为(92±18)ms和(140±38)ms,给药后分别为(84±16)ms和(130±26)ms(P>0.05)。蝙蝠葛碱对I_(Ks)的抑制作用具有电压依赖性。 蝙蝠葛碱20μmol·L~(-1)对I_(K1)的内向部分具有阻断作用。结论:蝙蝠葛碱对I_(Kr)和I_(Ks)具有阻断作用,但不影响此两种成分的去激活过程. 蝙蝠葛碱同时具有阻断I_(K1)的作用。     

RP58866对哺乳动物心室肌细胞跨膜钾电流的作用(英文)

目的:研究RP58866对于豚鼠或犬分离心室肌细胞I_K,I_(to),和I_(Kl)的影响。方法:采用全细胞膜片箝技术。结果:在-100 mV时,RP58866以浓度依赖方式明显减少了豚鼠心室肌细胞I_(kl),其IC_(50)为(3.4±0.8)μmol·L~(-1)(n=6)。在犬心室肌细胞,RP58866可明显抑制I_(to),其IC_(50)为(2.3±0.5)μmol·L~(-1)。RP58866 100μmol·L~(-1)阻断豚鼠的心室肌细胞I_K,在 40mv时使I_(Kstep)减少(58±13)％,其IC_(50)为(7.5±0.8)μmol·L~(-1),I_(Ktail)减少(86±17)％,其IC_(50)为(3.5±0.9)μmol·L~(-1)。尾电流分析表明,RP58866对I_(Kr)和I_(Ks)均有阻断作用。结论:RP58866对心肌细胞的I_(Kl)和I_(to),I_K均有抑制作用,而不是一种特殊的I_(Kl)抑制剂。     

槟榔碱对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流的影响

目的：研究槟榔碱(Are)对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(I_(to))的影响。方法：利用全细胞膜片钳技术测定大鼠心室肌细胞的I_(to)。结果：10.0μmol·L~(-1) Are可以降低I_(to),使I_(to)幅值从(10.6±s 1.2)pA·pF~(-1)降至(6.2±0.9)pA·pF~(-1)(P＜0.01,n=20)。在1～100μmol·L~(-1)范围内Are的作用呈浓度依赖性,IC_(50)为8.2μmol·L~(-1)。10.0μmol·L~(-1)Are使稳态激活曲线右移,半激活电压(V_(1/2))从(-11.6±0.6)mV移至(-2.3±0.1)mV,但曲线斜率基本不变。Are对失活曲线影响不大,但10.0μmol·L~(-1)Are使通道失活后恢复时间常数从(88±16)ms延长为(152±24)ms(P＜0.01,n=18)。结论：Are浓度依赖地阻滞大鼠心室肌细胞的I_(to)。     

N-正丁基氟哌啶醇碘化物对大鼠心肌缺血再灌注损伤及L-型钙电流的影响

目的:观察N-正丁基氟哌啶醇碘化物(F_2)对大鼠心肌缺血再灌注损伤及大鼠心室肌细胞L-型钙电流(I_(Ca))的影响。方法:大鼠冠脉左前降支结扎30 min后恢复灌注30 min,于缺血前分别静脉注射F_2(1,2,和4 mg/kg)。测定血浆CK、CK-MB、LDH、HBDH、GOT、MDA的含量及SOD活性;观察心肌的形态学改变。采用酶急性分离的大鼠单个心室肌细胞,应用膜片箝全细胞记录技术,观察F_2对I_(Ca)的影响。结果:F_2呈量效依赖地降低缺血再灌注心肌酶CK、CK-MB、LDH、HBDH、GOT的释放,保护SOD的活性,降低MDA的产生;电镜下可见F_2减轻心肌的形态学改变。F_2 1 μmol/L明显抑制I_(Ca),使峰电流从(1775±360)pA减少至(464±129)pA(n=8,P<0.01),并使得I_(Ca)的I-V曲线上移,但不改变其电压依赖特征。结论:F_2对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有拮抗作用,并可抑制大鼠心室肌细胞L-型钙电流。F_2对心肌缺血再灌注损伤的拮抗作用及其扩张血管的机制可能与其阻断L-型钙通道有关。     

六肽FRCRSFa对大鼠心室肌Na~ /Ca~(2 )交换的抑制(英文)

目的:研究六肽FRCRSFa对大鼠心室肌细胞Na~ /Ca~(2 )交换的作用及其特异性.方法:用膜片箝全细胞记录法测定Na~ /Ca~(2 )交换电流(I_(Na Ca~(2 ))及其它离子通道电流.结果:六肽FRCRSFa对大鼠心室肌细胞Na~ /Ca~(2 )交换呈剂量依赖性抑制,内向和外向I_(Na~ Ca~(2 ))的IC_(50)分别是2μmol/L和4μmol/L.FRCRSFa 5μmol/L对L型钙电流,门控钠电流、瞬时外向钾电流和内向整流钾电流均无显著抑制作用.结论:FRCRSFa是一个对Na~ /Ca~(2 )交换选择性较高的抑制剂,对研究心肌细胞Na~ /Ca~(2 )交换具有较高价值.     

依布利特对兔左心室肌细胞钠离子通道跨壁异质性的影响

目的探讨依布利特抗室性心律失常作用的离子机制。方法利用酶解的方法分离出新西兰纯种大耳白兔(体重2.0～2.5kg)心外膜、心内膜和中层心室肌细胞。将各层细胞按处理试剂分为正常对照组、依布利特A(10-7mol/L)组、依布利特B(10-6mol/L)组。应用膜片钳全细胞记录方法,记录各层心室肌细胞钠通道电流(INa)活性的变化,并与正常对照组心肌细胞进行比较分析。结果3组间的中层心肌细胞INa电流I-V曲线差异有统计学意义(P<0.05);对照组与依布利特组的心内膜下细胞INaI-V差异有统计学意义(P<0.01),依布利特A、B组间无显著差异(P>0.05);对照组与依布利特两组心外膜下细胞INaI-V差异有统计学意义(P<0.05),依布利特A、B组间无差异(P>0.05)。依布利特两组与对照组中层心室肌细胞ⅠNa稳态失活曲线比较差异有统计学意义(P<0.05),依布利特A、B组间无显著差异(P>0.05);3组间心内膜下细胞ⅠNa稳态失活曲线差异有统计学意义(P<0.05);对照组与依布利特两组间的心外膜下细胞ⅠNa稳态失活曲线差异有统计学意义(P<0.01),依布利特两组间无显著差异(P>0.05)。...     

赛庚啶对豚鼠心室肌细胞钙电流的影响

应用全细胞记录式膜片钳技术研究了赛庚啶(Cyp)对豚鼠心室肌细胞慢钙电流(I_(Ca))的影响,Cyp 3和8μmol·L~1对I_(Ca)的电流-电压关系曲线(I-V曲线)之各电流均有降低作用,使I-V曲线上抬;在指令电位0 mV时,I_(Ca)为次最大值,Cyp 0.3～10μmol·L~1使该I_(Ca)呈浓度依赖性降低,IC_(50)值为1.98μmol·L~1,还观察到Cyp 1μmol·L~1明显增加外向电流(I_(out)),且四乙基铵(TEA)1 mmol·L~1对其有显著的拮抗作用,但对控制电位从80 mV跃升至-40 mV时所出现的瞬时快内向电流,无明显影响.以上结果直接证明了Cyp对心室肌细胞钙跨膜转运有明显降低作用,还可能增加钾外流。     

充血性心衰病人心房肌细胞瞬间外向钾电流和超快延迟整流钾电流的特征

目的:研究充血性心衰病人心房肌细胞瞬间外向钾电流(I_(to))和超快延迟整流钾电流(I_(Kur))的特征.方法:全细胞膜片箝技术.结果:心衰病人心房肌细胞上的I_(to)的激活和失活具有电压依赖性及时间依赖性.其半数最大激活电位(V_(1/2))和半数最大失活电位(V_(1/2))分别为(15±12)mV和(-45±4)mV.当膜电位从-40mV升至 60mV时,激活时间常数均值从(6.9±2.3)ms降至(1.40±0.20)ms,失活时间常数均值从(69±17)ms降至(21±14)ms,两者均随着膜电位的增加而减小.此外,该通道从失活状态下的恢复也很快.当保持电位为-80mV时,其恢复时间常数为(125±65)ms,但在此条件下通道的恢复不完全.当测试脉冲频率为0.2-2 Hz时,此通道电流未表现出明显的频率依赖性.与I_(to)相比,I_(Kur)的激活只具有电压依赖性但无时间依赖性.当测试电位为 60mV时,其电流密度平均为(3.4±0.7)pA/pF.半数最大激活电位(V_(1/2))为(23±14)mV.在测试脉冲频率为0.2-2Hz的范围内,通道电流也无明显的频率依赖性.结论:I_(to)和I_(Kur)是充血性心衰病人心房肌细胞上主要的外向电流,其大小和动力学特征可显著地影响心房肌细胞的电生理特性.