扇贝多肽对紫外线B辐射人真皮成纤维细胞线粒体的保护作用

目的:研究扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐射人真皮成纤维细胞线粒体的影响。方法:检测丙二醛(MDA)含量以及细胞内抗氧化酶(SOD、GSH-PX)的活性;流式细胞术测定线粒体膜电位;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:UVB(1.176×10~(-4)J·cm~(-2))导致真皮成纤维细胞线粒体损伤,PCF(0.25％-1％)剂量依赖性地减轻UVB对线粒体的损伤;而且,PCF也可剂量依赖性地维持线粒体膜电位的相对稳定,PCF能够减少MDA的生成量,提高SOD及GSH-PX的活性,PCF各组与UVB模型组相比差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:PCF保护成纤维细胞的线粒体免受UVB的损伤。     

脂多糖对离体大鼠胰腺腺泡细胞钙稳态的影响

目的:研究脂多糖(LPS)对胰腺腺泡细胞钙稳态的影响,及胞浆内钙超载时钙离子的来源,以探讨LPS致胰腺腺泡细胞损伤的机制。方法:胶原酶法分离胰腺腺泡细胞,Fluo-3/AM负载后,在无钙或含生理钙离子浓度的培养液中加入不同浓度LPS,采用激光共聚焦显微镜观察单个胰腺腺泡细胞[Ca~(2+)]_i。另外采用MTT法检测LPS作用的不同时间点胰腺腺泡细胞的活性。结果:LPS可致胰腺腺泡细胞损伤、细胞内[Ca~(2+)]_i显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05):在含1mmol/L依他酸的培养液中,LPS致腺泡细胞损伤程度明显减轻(P<0.05)、仅引起胰腺腺泡细胞[Ca~(2+)]_i缓慢、微弱的升高,而再次恢复培养液中Ca~(2+)至生理浓度,引发快速、幅度更高而持久的[Ca~(2+)]_i变化。腺泡细胞内[Ca~(2+)]_i的变化明显先于腺泡细胞的损伤。结论:LPS导致胰腺腺泡细胞内钙超载,主要源于胞外Ca~(2+)内流。钙超载作为早期的病理事件参与腺泡细胞损伤的发生,钙稳态失衡是LPS致胰腺细胞损伤的主要因素之一。     

扇贝多肽对UVB辐射诱导HaCat细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的建立中波紫外线对体外培养的HaCat细胞辐射损伤病理模型,探讨扇贝多肽(PCF)对HaCat细胞辐射损伤的保护作用及机制。方法将培养的HaCat细胞分组并给予相应的药物,经UVB照射后,琼脂糖凝胶电泳观察各组的DNA ladder;流式细胞仪检测细胞内Caspase-3的含量;Western-blot检测ERKs,JNKs和p38的水平。结果PCF能减少UVB所致的HaCat细胞DNA片段的出现,减少UVB诱导的HaCat细胞内的Caspase-3的含量,还能提高ERKs的水平,但降低JNKs及p38的水平。结论PCF能抑制UVB辐射诱导的细胞凋亡,对UVB辐射损伤的细胞具有保护作用。其作用机制可能是通过调节MAPKs的信号通路和Caspase级联实现。     

扇贝多肽保护Hela细胞免受紫外线UVA氧化损伤

目的:建立紫外线UVA(辐照强度为3650μJ·cm~(-2)对Hela细胞氧化损伤模型.探究扇贝多肽(PCF)对Hela细胞紫外线UVA氧化损伤的保护作用.方法:MTT法测定细胞活性;酶法测定抗氧化酶(GSH-Px、CAT、SOD)活性;流式细胞仪AnnexinV法测定细胞的凋亡率和死亡率;Fluo-3 AM为荧光染料,流式细胞仪测定细胞内游离Ca~(2 )的含量.结果:PCF(0.5％-2％)能明显增加 Hela细胞的增殖活性和细胞内游离Ca~(2 )的浓度.显著提高Hela细胞GSH-Px、CAT、SOD活性,且呈量效关系.同时降低Hela细胞的凋亡率和死亡率.PCF组与模型对照组比较各项指标均有统计学意义(P< 0.0 5,P<0.01).结论:扇贝多肽具有抗紫外线UVA对Hela细胞氧化损伤的作用.其机制与扇贝多肽提高抗氧化酶含量,抑制脂质过氧化有关.     

扇贝多肽对抗UVB辐照所致小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的研究

目的研究扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐照损伤小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用。方法以UVB辐照制备损伤模型,预先给予PCF,应用透视电镜观察细胞超微结构的变化;免疫细胞化学检测细胞p53,Bcl-2,Bax基因蛋白的表达;原位杂交检测细胞P38mRNA的基因表达。结果UVB辐照引起小鼠胸腺淋巴细胞凋亡,PCF能明显减轻UVB辐射损伤引起的细胞超微结构改变。PCF还能抑制突变型p53蛋白和促凋亡蛋白Bax的表达,增强凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达以及抑制P38 mRNA基因的表达。结论PCF对UVB辐照的体外小鼠胸腺淋巴细胞具有明显的保护作用。     

五味子乙素对UVB辐射诱导HaCat细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的研究五味子乙素(SchB)对中波紫外线(ultraviolet radiation b,UVB)辐射诱导人表皮角质永生化细胞(HaCat)凋亡的抑制及其作用。方法 MTT法检测五味子乙素(SchB)对UVB辐射诱导HaCat细胞凋亡的抑制作用;Hoechst染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测SchB对HaCaT基因表达的影响。结果 SchB对HaCaT细胞生长未显示出抑制作用,且可以抑制由UVB辐射引起的细胞凋亡,并降低了UVB诱导的p53、p21、Caspase-3等与凋亡有关基因的表达。结论 SchB可通过降低紫外线辐射后细胞的凋亡基因的表达从而抑制UVB对皮肤细胞的损伤,发挥其抗光老化作用。     

扇贝多肽对UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞PI3K/Akt和ASK1-JNK信号通路的影响

目的 研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)对紫外线B(UVB)辐射损伤小鼠胸腺淋巴细胞后P13K/Akt和ASK1-JNK信号通路的影响.方法 UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞,用比色法测定胸腺淋巴细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;western-blot检测Akt的活性,预先加入或不加入P13K/Akt通路特异性抑制剂LY294002检测细胞凋亡信号调节激酶Ⅰ(apoptosis signal regulating kinase-1,ASK1)、JNK的活性、线粒体膜电位(ACM)和DNA ladder.结果 PCF能激活AKT的活性,抑制UVB对小鼠胸腺淋巴细胞ASK1凋亡通路的活化.结论 PCF通过降低细胞内活性氧的含量,提高AKT的活性,引起ASK1的降解,导致ASK1-JNK诱导的细胞凋亡抑制.     

扇贝多肽对UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用

目的：研究扇贝多肽(polypeptide ftom Chlamys，farreri)对中波紫外线(UVB)辐射损伤小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用。方法：UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞，MTT法检测胸腺淋巴细胞的活性；酶生化法检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性；流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)的产生量以及细胞凋亡率。结果：PCF能明显减轻UVB辐射对小鼠胸腺淋巴细胞的损伤；提高细胞GSH-Px、SOD和CAT活性；降低细胞中ROS的产生量和细胞凋亡率。结论：PCF对小鼠胸腺淋巴细胞具有明显的辐射保护作用。     

扇贝多肽在中波紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡中对p38MAPK-HSP27通路的影响

目的从p38MAPK-HSP27通路方面研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制中波紫外线(UVB)诱导的HaCaT细胞凋亡的作用机制。方法复制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.69mmol.L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69mmol.L-1PCF组、UVB+2.84mmol.L-1PCF组、UVB+1.42mmol.L-1PCF组。PCF预处理30min,荧光染色(Hoechst33258)结合琼脂糖凝胶电泳分析PCF在p38抑制剂(SB203580)存在和不存在两种条件下对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK、HSP27的表达及磷酸化水平的改变,同时分析HSP27在细胞内定位的改变。结果PCF可明显抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡;PCF在1.42~5.69mmol.L-1范围内,可剂量依赖性抑制p38MAPK和HSP27的磷酸化水平,并抑制HSP27由胞质向胞核中的移位。结论PCF通过阻断p38MAPK-HSP27通路来抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK的活化从而阻止HSP27的磷酸化及其细胞内移位有关。     

扇贝多肽经由死亡受体和线粒体通路抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡

目的从凋亡相关分子Fas(CD95)、半胱天冬酶-3(caspase-3)和活性氧(ROS)、细胞色素C的角度,研究扇贝多肽(polypeptide fromChlamys farreri,PCF)抑制UVB引起的人角质HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验设计为5组:对照组、UVB模型组、UVB+5.69mmol.L-1PCF组、UVB+2.84mmol.L-1PCF组、UVB+1.42mmol·L-1PCF组。应用小干扰RNA(siRNA)干扰UVB辐射的HaCaT细胞的Fas表达;琼脂糖凝胶电泳分析Fas siRNA及ROS清除剂NAC对细胞凋亡的影响;以DCFH-DA为荧光探针,检测细胞内ROS的含量;免疫印迹法检测细胞色素C及用RNAi干扰降低Fas表达后caspase-3的表达。结果干扰Fas后,UVB辐射的HaCaT细胞凋亡受到明显抑制及caspase-3的表达降低;NAC对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42~5.69mmol.L-1剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的ROS的生成及细胞色素C的释放。结论PCF可抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas-caspase-3及ROS-细胞色素C通路有关。     

维拉帕米对去甲肾上腺素诱导的培养大鼠心肌细胞β受体下调的影响

目的：研究维拉帕米（Ｖｅｒ）是否能抑制去甲能上腺素（ＮＥ）诱导的培养大鼠心肌细胞β受体下调配可能机制。方法：β受体密度用［＾３Ｈ］－ＤＮＡ放射配基标记法，细胞内游离钙用钙离子荧光探针Ｆｕｒａ２－ＡＭ法测定。结果：Ｖｅｒ以明显降低培养大鼠心肌细胞内游离钙水平，增加β受体密度；ＮＥ增加细胞内游离钙水平，降低β受体密度；Ｖｅｒ能明显抑制ＮＥ引起的细胞内游离钙增加和β受体密度的降低。结论：Ｖｅｒ能增加正常     

马桑内酯对培养大鼠大脑皮质神经元胞内游离钙的作用

AIM: To study the effect of Coriaria lactone (CL) on cytosolic free calcium ([Ca2+]i) of cultured neurons from cerebral cortex. METHODS: Primary neuron culture (14d) and AR-CM-MIC cation measurement system were used, the [Ca2+]i were measured. CL effect was observed by loading egtazic acid. RESULTS: The [Ca2+]i of cultured neurons (99.4-103.4) nmol.L-1 was elevated concentration-dependently by CL (25-500) mumol.L-1 (P < 0.01). This effect disappeared after loading egtazic acid 5 mmol.L-1, but reappeared after adding CaCl2 to 1 mmol.L-1. CONCLUSION: The [Ca2+]i of cultured neurons was elevated by CL, depending on extracellular Ca2+.     

细胞内游离钙与柯萨奇病毒B3诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡

目的 探讨（Ｃａ＾２＋）ｉ在柯萨奇病毒（ＣＶ）Ｂ３诱导心肌培养细胞凋亡中的作用。方法 ＤＮＡ裂点检测法（３′－末端标记）及扫描电镜检测细胞凋亡。Ｆｌｕｏ３－ＡＭ负载心肌细胞,共聚劁业微镜观察（Ｃａ＾２＋）ｉ荧光强度变化。结果：感染２４ｈ,心肌细胞内ＣＶＢ３的浓度达峰值,感染１０ｈ未见凋亡的心肌细胞,１７,２４和３６ｈ凋亡细胞分别为５％,６０％和９０％,感染１７ｈ心肌（Ｃａ＾２＋）ｉ浓度达峰值,电镜     

Effect of Ca2+ antagonists on high-K+ evoked increase in [Ca2+]i in rat cerebral synaptosomes and hippocampal neurons.

By fura-2 fluorometry, we investigated the direct effects of Ca2+ antagonists including a new benzothiazepine, clentiazem, on the high-K(+)-evoked increase in the concentration of cytosolic free Ca2+ ([Ca2+]i) in rat cerebral synaptosomes and cultured hippocampal neurons. In both preparations, metal ions inhibited the high-K(+)-induced increase in [Ca2+]i, in the following order: La3+ greater than Cd2+ much greater than Ni2+. Although flunarizine and nicardipine inhibited the K(+)-induced increase in [Ca2+]i in synaptosomes, other Ca2+ antagonists, including clentiazem and nitrendipine, had little effect at 10 microM. In hippocampal neurons, clentiazem inhibited the K(+)-induced increase in [Ca2+]i at 10 microM, as did flunarizine and nicardipine. However, nifedipine and nitrendipine had little effect in either cultured neurons or in synaptosomes.     

Purinoceptor-mediated calcium mobilization and cellular proliferation in cultured bovine corneal endothelial cells

In the present study, we investigated the effect of adenosine triphosphate (ATP) on cytosolic free calcium mobilization and mitogenic activity in cultured bovine corneal endothelial cells (BCEC). The [Ca2+]i was determined using a Ca2+ sensitive indicator, Fura-2/AM, and cell proliferation was evaluated by counting the cell number. ATP, its metabolites and analogs caused transient increase in [Ca2+]i in a concentration-dependent manner (10(-7) M-10(-3) M) and the potency of agonists was ordered as follows: 2-methylthio-ATP > uridine triphosphate > ATP > adenosine diphosphate. Adenosine monophosphate and adenosine did not affect [Ca2+]i. ATP (10(-4) M) also promoted the accumulation of inositol trisphosphate (IP3). The ATP-induced transient [Ca2+]i increase and IP3 accumulation were attenuated by pretreatment with a phospholipase C inhibitor, U-73122 (5 microM), for 30 min. ATP (10(-5) M) significantly enhanced the proliferation of BCEC. ATP-induced [Ca2+]i increase and cell proliferation were inhibited by a purinoceptor antagonist, suramin (10(-4) M). Thus, the present study indicates that BCEC contain P2 purinoceptors that regulate their proliferation.