胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgM抗体的研究

目的 建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法。方法 采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条。结果 自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标IgM—抗HAV、IgM-抗HEV两法总符合率依次为97．9％、98．4％，检测灵敏度可达2ng／ml。结论 用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备。     

快速检查A群乙链的显色新技术

链球菌感染的早期治疗有赖于早期明确诊断,而常规的细菌学方法最少要18个小时才能出结果.本文报告一种快速检查A群乙链的新技术.本法是在乳胶凝集试验的基础上发展而来的显色乳胶凝集试验,方法是将A群乙链特异性抗体致敏的蓝色乳胶悬液和结合有非特异性兔IgG的红色     

亲和素—生物素乳凝试验检测病毒抗体

被动乳凝是常规检测抗病毒、细菌及其他抗原的抗体简便而快速的方法。但由于配位体(Ligand)连接乳胶颗粒只是加入量的少数,要求很纯的试剂和配位体被动吸附的连接物难于达到均匀而稳定。因而许多病毒抗体检测乳凝试剂尚难建立和标准化。虽可用搭桥化学药品使配位体共价连接于乳胶,但常能灭活有功能的抗原位点。利用亲和素对生物素的高度亲和性,作者建立了一个控制和提高抗原结合乳胶量的方法,从而排除了要求高纯抗原和具破坏性的搭桥化学药品。使用亲和素包被乳胶和生物素标记抗原的亲和素一生     

HIV-Ⅰ/Ⅱ型抗体双抗原夹心乳胶免疫层析测定方法的建立及应用

艾滋病 (AIDS)是由人免疫缺陷病毒 (HIV)引起的一种后天性免疫缺陷性疾病 ,发现于 1 981年。为有效控制 HIV传播 ,必然要求 HIV检测试剂具有较高的灵敏度、特异性和稳定性。本文研究并成功建立了检测 HIV- / 抗体的双抗原夹心乳胶免疫层析法 ,这是一种简便、快速、可靠、经济的HIV抗体检测方法 ,现报告如下。材料与方法1　材料　有色乳胶颗粒、硝酸纤维微孔滤膜 NC(孔径 5μm)、HIV- / 基因重组抗原和兔抗 -HIV由美国 BANGS公司提供。玻璃纤维膜、渗滤装置及吸水滤纸由中外合资艾康生物技术 (杭州 )有限公司生产。2　乳胶标…     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgG抗体的研究

[目的]探索并建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgG抗体的方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记鼠抗人IgG单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性IgG抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgG)结合形成肉眼可见的红色线条。[结果]自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标抗-HAV IgG、抗-HEV IgG两法总符合率分别为98．9％、98．9％，检测灵敏度可达1ng／ml。[结论]用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性IgG抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便、快捷，无需特殊仪器设备，有广泛的应用价值。     

幽门螺杆菌IgG抗体免疫层析分型方法的建立

目的建立1种检测血清中抗幽门螺杆菌(Hp)抗体的胶体金免疫层析(GICA)方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记SPA,将Hp重组抗原VacA、CagA和UreaA、UreaB抗原包被于硝酸纤维素膜NC上,制成免疫层析检测试纸条.血清中的抗Hp抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的酒红色线条。结果用GICA与免疫印迹试剂盒对比检测了180份血清标本中抗Hp抗体,显示本方法检测敏感度、特异度分别为95.4%和96.3%,两法总符合率为96.1%。结论用这种免疫层析GICA分型方法检测血清中抗Hp抗体,灵敏度高、特异性强、简便快速,有着广泛临床应用前景。     

双抗体夹心法微量ELISA测定人血小板因子4

测定血小板因子4(PF_4)有多种方法,但是都有一定的局限性。本文介绍一种敏感性强、特异性高、重复性好的方法,即双抗体夹心微量酶联免疫吸附试验(ELISA)。测定过程如下:(1)包被:聚苯乙烯微板的每个孔加150μl缓冲液稀释的抗人PF_4抗体,置37℃孵育20小时,用PBST(磷酸盐缓冲盐水-吐温20溶液)洗4次。(2)抗原孵育:加200μl/孔含1％牛血清白蛋白的PBS,37℃1小时,板用PBST洗1次,再加入50μl/孔含已知量抗原的抗原标准液及血浆标本,37℃1小时,板用PBST洗3次。(3)标记抗体孵育:加100μl/孔用PBST稀释的辣根过氧化物酶标记     

非离析双固相酶免疫法测定大分子

双固相酶免疫系统(DSPEIA)兼有非均相和均相酶免疫测定之特点,DSPEIA 的依据是酶结台物(生物素—G6PDH—抗体)分子的一端与包被在聚苯乙烯胶乳上的亲和素相连,另一端与包被在聚苯乙烯胶乳上的抗原相接,当酶结合物和胶乳上的抗原结合时,酶的活性不受影响,相反,若和胶乳上的亲和素结合时,则酶活性被抑制,该法利用酶结合物和被测物对胶乳上抗原的竞争作用,随着竞争来标记抗体浓度的增加,由于酶和胶乳上的亲和素相结合,酶活性相应降低。用DSPEIA 方法检测抗体,若各种试剂连续加入,可测到的最低量为     

胶体金渗滤法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的 建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌(HP)细胞毒素相关蛋白A(CasA)抗体的胶体金免疫渗滤法(DIGFA)。方法 采用枸橼酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记葡萄球菌A蛋白(SPA),将重组的CagA抗原固定于硝酸纤维素膜上。血清中抗CagAIgG与金标记SPA及硝酸纤维素膜上的固相抗原结合后,形成肉眼可见的红色斑点。结果 用DIGFA与酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对比检测了326份血清标本中抗CagA抗体,两法符合率为96．6％。结论 DIGFA检测血清中的抗CasA抗体特异性强,简便快速,无需特殊仪器设备,有实用价值。     

胶体金免疫斑点法检测人巨细胞病毒pp150抗体

目的：建立一种简便、快速的检测血清中人巨细胞病毒（HCMV）抗pp150抗体的胶体金免疫斑点法。方法：采用Frens法制备胶体金颗粒，标记葡萄球菌A蛋白（SPA），将本所利用基因工程技术生产的pp150抗原固定于0．45μm孔径的硝酸纤维素膜上，制成免疫斑点检测装置。血清中抗pp150 IgG与硝酸纤维素膜上的抗原结合，然后滴加胶体金标记的SPA，在膜上可形成肉眼可见的红色斑点。结果：胶体金免疫斑点法与ELISA试剂盒对比检测了200份临床确诊血清标本中抗pp150 IgG抗体，胶体金法的特异性和敏感性分别为92％和90％。结论：胶体金免疫斑点法检测血清中的抗pp150抗体特异性、灵敏度较高，简便快速，不需要昂贵的仪器。     

流式微球分析技术检测人心肌钙蛋白T方法的建立

目的建立流式微球分析技术（cytoometric bead assay,CBA）检测人肌钙蛋白T（cTnT）方法。方法用鼠抗人的cTnT的单克隆抗体包被在已激活的羧基化聚苯乙烯微球上,然后再用包被好的微球与检测标本进行抗原抗体免疫反应,并加入羊抗人cTnT的多克隆抗体和异硫氰酸荧光素（FITC）标记的驴抗羊的IgG,室温避光免疫反应一定时间后洗涤一次,上流式细胞仪检测FITC的荧光强度,以此测定标本中cTnT含量。结果通过正交试验,在100μl反应体系中,微球含量大约为1.25×106,选择10μg的鼠抗人cTnT单克隆抗体为最佳加入量,加入标本和抗体后,选择避光反应时间为120 min,洗涤选择一次,选择8μg/ml羊抗人cTnT多克隆抗体和20μg/ml FITC标记驴抗羊IgG为最佳工作浓度;方法检测灵敏度为16.0 pg/mL,线性范围是16-5 000 pg/mL,批内重复性变异系数为5.2-11.3%,回收率是94.7-111.5%,高浓度的胆红素、胆固醇和甘油三脂无明显干扰,与Roche Elecsys的电化学发光法有较好的相关性。结论自建CBA检测cTnT技术性能较好,可在临床工作中推广使用。     

鼠肝浸液对流免疫电泳法用于SLE的诊断

本文介绍用鼠肝浸液抗原(Mice-Liver Antigen,MLA),检测SLE 的病人血清中相应抗体的简易方法-MLA 对流免疫电泳法.结果12例SLE 病人血清中均含有特异性抗MLA 抗体,在凝胶载体上能与相应抗原(MLA)产生肉眼清晰可见的免疫沉淀线.420例     

抗磷脂抗体的研究进展

近十几年人们对与磷脂结合的一类抗体——抗磷脂抗体(antiphospholipids antibodied,aPLs)及抗磷脂抗体与血栓形成和反复性流产等疾病的关系有了进一步的认识,现将有关该抗体的研究作一简要综述。 抗磷脂抗体的结合特性 抗磷脂抗体与磷脂的结合受磷脂抗原的化学结构、所带电荷和分子构型的影响。通过比较梅毒抗体,抗磷脂抗体综合征患者血清中的各种抗磷脂抗体(抗心磷脂抗体、抗VDRL抗体等)与相应抗原的结合力已证实磷脂抗原     

用国产时间分辨荧光免疫分析仪建立检测抗CCP抗体的TrFIA法

目的用国产时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)仪建立TrFIA法检测IgG类抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP-IgG抗体)。方法以人工合成的环瓜氨酸肽作为抗原包被微孔板,异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合铕(Eu3+-DTTA)标记鼠抗人IgG单克隆抗体,建立TrFIA法,分析CCP抗原包被浓度和Eu3+标记抗体最适用量,测定Eu3+标记抗体的标记率,用国产TrFIA仪进行检测,绘制标准曲线并分析本法的线性范围、精密度、特异性,计算回收率。对比分析建立的TrFIA法和欧蒙公司的ELISA法结果的一致率。结果本法CCP抗原的最适包被浓度为5μg/mL,最适Eu3+标记抗体稀释度为1∶1 000;平均每个鼠抗人IgG分子上连接10.27个Eu3+;标准曲线为Y=1.162X+2.819,相关系数(r2)=0.998;批内和批间CV分别为4.8%～5.6%和5.9%～7.6%;平均回收率为97.4%(96.5%～98.6%);用本法检测抗核抗体和抗CCP抗体无交叉反应;与ELISA比对试验结果,两法一致率为96.8%(90/93),Kappa值=0.95。结论建立的TrFIA法敏感性高、特异性好,可为抗CCP抗体的检测提供一种新的选择。     

新双色乳胶凝集试验诊断肝阿米巴病

肠外阿米巴病的诊断主要依据临床症状和血清学试验,主要有间接血凝补体结合、免疫电泳或对流免疫电泳、免疫荧光和酶联免疫试验。除间接血凝外,各试验均较复杂并需昂贵仪器。作者等应用双色乳胶凝集试验(BLA)检测抗阿米巴抗体较为简便。溶组织阿米巴抗原致敏红色乳胶颗粒,混悬于含0.3%牛血清白蛋白并加呈绿色染液的pH7.2,0.15MPBS中。取1/3稀释的患者血清20μl 加致敏颗粒17μl(1滴)充分混匀,振摇5分钟,肉眼观察结果,凡边缘部有红色凝集颗粒而留有绿色背景者为阳性;无凝集颗粒而仍呈暗棕色者为阴性。作者等同时应用本法与IFA,CIE,IHA 法共测348份标本,第一组为确诊的阿米巴肝脓疡,第2组为肠阿米巴病,第3组为非阿米巴性的各种肝病,第4组为健康人,结果如下表:     

人-鼠嵌合抗人组织蛋白酶B抗体体外抑制组织蛋白酶B活性的试验

目的　体外试验人 鼠嵌合抗人组织蛋白酶B(抗CatB)抗体对CatB的抑制作用。方法　培养 1株分泌人 鼠嵌合抗人CatB抗体细胞 ,收集细胞培养上清 ,分离纯化人 鼠嵌合抗人CatB抗体 ,用于体外抑制CatB活性试验。结果　该抗体在体外能抑制CatB活性。结论　抗CatB抗体能特异结合CatB并抑制其酶活性 ,将可能用于CatB过度表达的癌症治疗。     

盐水法接合柱凝集法在ABO疑难血型检测中的应用

目的解决柱凝集法检测ABO血型抗原减弱或抗体减低所产生的正反定型不一致。方法将疑难血型患者2%红细胞50μl与50μl抗-A、抗-B标准血清反应,或者将患者的血清(血浆)50μl与ABO试剂细胞A1、B各50μl反应,然后把反应液接合到Liss/Coombs(Anti-IgG+C3d)卡上进行测定;同时利用此法进行抗-A、抗-B标准血清最大稀释度的检测。结果盐水法接合柱凝集法检测17例抗原弱化或抗体减低的疑难血型,全部出现明显阳性反应并符合血型鉴定结果,以此法检测抗-A、抗-B标准血清最大稀释度达到1∶4096。结论盐水法接合柱凝集法测定抗原弱化或抗体减低的ABO血型是一种高效、灵敏、简单易行的方法。     

新生儿溶血病的防治

HDN=新生儿溶血病TPH=胎儿红细胞经胎盘进入母体血液循环Rh阳性=具有D抗原Rh阴性=缺乏D抗原Rh同种免疫=被一和或多种Rh抗原免疫Rh抗体=抗Rh抗原的抗体抗-DIg=抗D免疫球蛋白,用于对D抗原同种免疫的被动预防.剂量以μg特异抗体表示,1μg=5国际活性单位.     

采用MAIEA试验及免疫印迹法分析CR1(CD35)上的Knops血型抗原

位于补体受体1(CR1,CD 35)上的Kna、McCa、Sla及Yka是红细胞高频抗原,针对Knops系统抗原的抗体并不少见。Kna、McCa、Sla及Yka是非溶血抗体,不降低所输入的不相合红细胞的存活率,由于它们可引起交叉配血不相合,是输血试验中的一大难题,应予以鉴别,因其无临床意义。通过鼠单克隆抗CR1进行单克隆-抗体-特异性红细胞抗原     

慢性ITP患者抗血小板GPⅡb/Ⅲa自身抗体识别不同的抗原位点

慢性免疫性血小板减少性紫癜(CITP)是由于患者体内存在自身的抗血小板抗体与血小板相关抗原结合而引起的一种综合征,已经证实一些CITP患者的自身抗体是抗GPⅡb/Ⅲa复合体和GPⅠb,为了确定其中抗GPⅡb/Ⅲa复合体的自身抗体所识别的抗原位点,作者用四种识别GPⅡb/Ⅲa复合体上不同抗原位点的抗GPⅡb/Ⅲa单克隆抗体,通过放射免疫测定法,观察了这四种单克隆抗体对9例CITP患者自身抗体与血小板抗原结合的封闭能力,从而确定这些CITP患者自身抗体所识别的抗原位点。结果表明这些单克隆抗体对自身抗体与血小板抗原结合有着程度不同的封闭作用,从无作用到完全封闭,提示,