肠系膜淋巴管结扎对二次打击大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨结扎肠系膜淋巴管对失血／脂多糖（LPS）二次打击致大鼠肾小管上皮细胞凋亡的拮抗作用。方法雄性Wistar大鼠45只，随机均分为结扎组、未结扎组和假手术组。用右侧颈动脉放血及致伤后6h腹腔注射LPS 4mg／kg复制失血／LPS二次打击动物模型，结扎组行肠系膜淋巴管结扎术致肠淋巴液断流。在手术创伤后24h，选取同一部位肾组织制备病理切片，用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测肾小管上皮细胞凋亡率，免疫组化链酶素-亲合素-生物素-过氧化物酶法（SABC）检测凋亡调控基因bcl-2和促凋亡基因bax的蛋白表达。结果二次打击后，与假手术组比较，未结扎组肾小管上皮细胞凋亡率和bax蛋白表达明显增高，bcl-2蛋白表达显著降低（P均〈0．01）；结扎组大鼠肾小管上皮细胞凋亡率、bax蛋白表达显著低于未结扎组，bcl-2蛋白表达显著高于未结扎组（P均〈0．01）。结论肠系膜淋巴管结扎可减轻失血／LPS导致的大鼠肾小管上皮细胞凋亡，其机制可能与肠系膜淋巴管结扎降低促凋亡基因bax表达、提高bcl-2表达有关。     

二羧酸转运蛋白对细胞端粒长度的影响

目的：观察二羧酸转运蛋白对衰老细胞和不老细胞系端粒长度的影响。 方法：实验于2004-06／2005-07在南京大学医学院附属鼓楼医院中心实验室完成。在已构建的反转录病毒载体基础上，使用含有钠依赖二羧酸转运蛋白基因的反转录病毒液将二羧酸转运蛋白基因导入人胚肺二倍体成纤维细胞（WI-38）和肾小管上皮细胞中，并获得表达，①观察WI-38细胞传代数。②WI-38细胞端粒长度，用Southern blot检测端粒末端限制性片段的长度。③人肾小管上皮细胞端粒长度测定，Soutllern Rblot检测端粒末端限制性片段的长度。 结果：钠依赖二羧酸转运蛋白基因导入后，①WI-38细胞形态呈衰老细胞样变化，提前8-12代衰老。②WI-38／钠依赖二羧酸转运蛋白细胞（37代）端粒长度较中年细胞（37代）缩短[（6.08&;#177;0．10），（723&;#177;0．05）kb，P〈0．051。③人肾小管上皮细胞／钠依赖二羧酸转运蛋白细胞端粒平均末端限制性片段长度较人肾小管上皮细胞／neo细胞端粒平均末端限制性片段长度缩短[（4．85&;#177;0．18），（6．32&;#177;0．12）kb，P〈0．05]。 结论：钠依赖二羧酸转运蛋白可促进衰老细胞和不老细胞系端粒长度的缩短。     

黄芪三七合剂对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用及机制研究

目的观察黄芪三七合剂（A＆R）对肾缺血再灌注损伤（IRI）大鼠血液活性氧（ROS）变化的影响,探讨其抗IRI损伤的机制。方法雄性Sprague．Dawley（sD）大鼠30只,随机分为正常组（n=5）、假手术组（SG）（n=5）和IRl24h组（n=10）,A＆R组（n=10）。造模：采用微血管夹夹闭双侧肾蒂,22vain后松开动脉夹,用5／0尼龙缝合线缝合腹部。再灌注24h后将小鼠行麻醉处死。A＆R组给予A＆R（3mL／d）,假手术组及IRI24h组给予同等体积的生理盐水。采用全自动生化分析仪检测各组大鼠的肾功能,苏木精-伊红染色了解肾脏病理损害,流式细胞仪检测红细胞ROS。结果IRI24h组和A＆R组肾小管出现不同程度的管腔扩张、变性与坏死,间质炎性细胞浸润、充血水肿等变化。IRI后24h时,IRI24h组、A＆R组血清尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）均高于假手术组、正常组,差异有统计学意义（P〈0．05）;A＆R组ROS荧光强度阳性率显著低于IRI24h组,差异有统计学意义（P〈O．05）。A＆R组肾小管损伤评分明显低IRI24h组（P〈0．05）。相关性分析发现,红细胞ROS荧光强度阳性率与’肾小管损伤评分、肌酐、尿素氮水平成正相关（r=0．917,P〈0．01;r=0．897,P〈0．01;r=0．896,P〈0．01）。结论A＆R对肾脏缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制可能为抑制血液中ROS的活性,从而抑制氧化应激对肾脏的损伤。     

盐酸哌替啶诱发的帕金森病大鼠血清中单胺类神经递质含量分析

目的：利用盐酸哌替啶制备类帕金森病大鼠模型，测定血清中神经生化反应。方法：实验于2000-06／2003-06在辽宁省基础医学研究所（血清分析在中国医科大学科研中心液相色谱室）完成。选用Wistar健康成年大鼠36只，雄雌各半。随机分6组：帕金森病模型组：每日经腹腔内注射盐酸哌替啶20mg／kg，连续用药21d；盐酸哌替啶＋纳络酮组：每日经腹腔注射盐酸哌替啶20mg／kg，再经腹腔注射纳络酮0．05mg／kg，连续用药21d；盐酸哌替啶＋溴隐亭组：每日经腹腔注射盐酸哌替啶20mg／kg，再胃饲溴隐亭20mg／次，连续21d；治疗Ⅰ组：每日经腹腔注射盐酸哌替啶20mg／kg，连用21d后停药每日改用纳络酮0．015mg／kg，连用30d；治疗Ⅱ组：每13经腹腔注射盐酸哌替啶20mg／kg，连用21d后停药改用溴隐亭20mg／次胃饲，连用30d；对照组：经腹腔注射生理盐水与上述同等毫升数，连用21d。吸毒者血清由沈阳戒毒所提供，以健康人血清做对照。用高效液相一电化学检测器检测盐酸哌替啶、纳络酮及溴隐亭对大鼠血清中单胺类神经递质：多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺，高香草酸、5-羟吲哚乙酸含量的变化。’结果：36只大鼠均进入结果分析，无脱落。（里）帕金森病模型组大鼠血中多巴胺含量明显低于对照组（P〈0．05），去甲肾上腺素含量无明显变化（P〉0．05）。②与帕金森病模型组比较，盐酸哌替啶＋纳络酮组多巴胺含量明显升高（P〈0．01），去甲肾上腺素含量亦明显升高（P〈0．01）；盐酸哌替啶＋溴隐亭组多巴胺亦升高但差异不明显（P〉0．05），去甲肾上腺紊含量高于帕金森病模型组（P〈0．05）；治疗Ⅰ、Ⅱ组与帕金森病模型组比较，多巴胺含量明显升高（P〈0．01，P〈0．05），去甲肾上腺素亦明显升高（P〈0．01．P〈0．05）。结论：盐酸哌替啶对多巴胺神经元有选择性破坏作用。     

慢病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统抑制移植物抗宿主病的实验研究

目的研究慢病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶／更昔洛韦（HSV-TK／GCV）系统对小鼠异基因骨髓移植（allo—BMT）后移植物抗宿主病（GVHD）的防治作用。方法将转染HSV-TK基因的慢病毒感染供鼠（C57BL／6小鼠）脾脏淋巴细胞，将感染后的淋巴细胞与供鼠骨髓细胞混合，移植给经。Co1射线照射后的受鼠（BALB／c小鼠）。分别于移植后当天、移植后7天（＋7天）和＋12天腹腔注射GCV25mg／kg×7d，观察受鼠生存期、GVHD发生率及严重程度、T细胞亚群（CD3、CD4、CD8）及异基因嵌合等指标。结果HSV-TK／GCV使用0天、＋7天、＋12天组受鼠生存时间分别为（30．10±5．21）d、（36．40±5．28）d、（28．20±4．82）d，三组生存时间均较移植对照组[（15．10±0．43）d]明显延长（P〈0．05）；HSV-TK／GCV＋7天组小鼠50d存活率达60％，高于HSV-TK／GCV0天（40％）和＋12天组（30％）（P〉0．05）。对照组小鼠全部发生Ⅲ～Ⅳ级GVHD，实验组死亡小鼠有Ⅱ～Ⅲ级GVHD病理学改变，而长期生存小鼠仅出现Ⅰ～Ⅱ级GVHD。在＋5，＋10，＋15d，3个时间点实验组小鼠CD4^＋细胞明显高于对照组（P〈0．05），CD8^＋细胞均低于对照组（P〈0．05）。＋30天受鼠异基因嵌合率为100％。结论慢病毒载体介导的HSV-TK／GCV系统能有效控制小鼠allo—BMT后GVHD；＋7天外周血白细胞数开始回升时用GCV控制GVHD效果最佳。     

玉竹多糖对衰老模型鼠细胞及体液免疫功能的影响

目的：观察玉竹多糖对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠免疫功能的影响，分析玉竹多糖抗衰老的可能作用途径。 方法：实验于2004—07／2005—05在锦州医学院免疫实验室完成。取昆明小鼠50只，按随机数字表法分为5组，即正常对照组、衰老模型组和0．5s／kg。1g／kg，2g／kg玉竹多糖组。除正常对照组外，其余各组每只颈背部皮下注射50g／L D-半乳糖0．5mL，连续6周。同时0．5s／kg，1g／kg，2g／kg玉竹多糖组分别腹腔注射0．5g／kg，1g／kg，2g／kg，0．5mL的玉竹多糖给予治疗，正常对照组和衰老模型组腹腔注射生理盐水0．5mL／只。6周后，将小鼠称重并麻醉剖取小鼠胸腺和脾脏，计算脾指数（mg／g）=脾质量（mg）／小鼠体质量（g）。同法计算胸腺指数。应用MTT法测定脾淋巴细胞转化指数。用免疫荧光法测定脾T淋巴细胞亚群细胞数，观察其对免疫功能的影响。 结果：50只小鼠全部进入结果分析，无脱失。①与正常对照组比较，衰老模型组小鼠胸腺指数和脾指数显著下降（P〈0．05-0．01）；脾T，B淋巴细胞转化刺激指数显著降低（P〈0．05-0．01）；CD8^＋细胞数减少（P〈0．01），CD4^＋／CD8^＋比值增加（P〈0．01）。②与衰老模型组比较，0．5g／kg，1g／kg，2g／kg玉竹多糖组小鼠的脾指数、胸腺指数、B淋巴细胞转化指数及CD8^＋细胞数均显著提高（P〈0．05-0．01）。而CD4^＋／CD8^＋比值显著降低（P〈0．01），但3个剂量组之间差异无显著性意义（P〉0．05）。 结论：玉竹多糖可明显改善D-半乳糖致衰老模型小鼠的细胞及体液免疫功能，提高胸腺指数和脾指数，增加脾T．B淋巴细胞转化刺激指数和CD8^＋细胞的数量，恢复CD4^＋／CD8^＋比值的失衡状态。从而延缓机体的免疫衰老。玉竹多糖不同剂量组间无明显的剂量依赖性。     

糖尿病大鼠肾小球细胞中p27蛋白的表达与细胞增殖和凋亡的相关性

背景：P27是近年来在肾脏疾病研究中受到广泛关注的一种细胞周期激酶抑制剂，它通过影响细胞周期这一细胞生命活动的基本过程来调节细胞的生长。已证实p27蛋白对肾脏细胞增殖、肥大、分化、凋亡等多种生长反应均具有重要的调控作用。 目的：探讨肾组织p27蛋白的表达与糖尿病肾病细胞增殖、凋亡之间的相互关系。 设计：完全随机分组设计，对照动物实验。 单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院肾病实验室。 材料：实验于2004-09／2005-01在华中科技大学同济医学院附属同济医院内科肾病实验室及同济医学院超微病理中心完成。选用清洁级成年雄性SD大鼠48只，随机将大鼠分为2组：实验组和对照组，每组24只。 方法：①建立糖尿病模型：实验组按60mg／kg剂量腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型。48h后，测定血糖和尿糖。将实验组随机血糖≥16．7mmol／L且尿糖为＋＋＋-＋＋ ＋＋者视为模型成功。②模型成功后第3,7，14,28天分别处死实验组和对照组动物各6只。处死前测定血肌酐、尿肌酐，计算内生肌酐清除率；用ELISA法测定尿视黄醇结合蛋白；作十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分析尿蛋白。③肾组织切片，光镜下观察病理学改变。部分皮质作超微结构检查。④用免疫组化染色法检测肾组织切片p27及增殖细胞核抗原蛋白的表达；原位末端标记法检测细胞凋亡。分别用肾小球p27、增殖细胞核抗原、原位末端标记法阳性细胞数／肾小球细胞总数表示肾小球p27、增殖细胞核抗原表达的阳性率及凋亡率。⑤组间差异用未配对资料t检验，数据间相关性处理采用Spearman相关分析。 主要观察指标：实验组大鼠造模后第3，7，14，28天肾功能，尿蛋白，肾小球细胞p27，增殖细胞核抗原表达阳性率和凋亡率与对照组比较结果。 结果：大鼠48只均进入结果分析。①病理学改变：造模后第7天，光镜下开始出现肾小球直径增大，电镜下开始出现脏层上皮细胞足突融合；第14天时电镜下出现肾小球系膜区轻度节段性增宽；第28天时光镜下始见肾小球系膜区轻度节段性增宽。②实验组造模后第7，14，28天内生肌酐清除率及尿视黄醇结合蛋白水平明显高于对照组（t=2．143～3．004，P〈0．05）。尿圆盘电泳提示，从第3天起，每组均有部分标本出现中、低分子蛋白。③实验组造模后第3天大鼠肾小球细胞p27蛋白的表达阳性率明显低于对照组（t=2．536，P〈0．05），第7，14,28天表达阳性率依次增加，明显高于对照组（t=2．704～2．823，P〈0．05）。实验组造模后第3天大鼠肾小球增殖细胞核抗原的表达阳性率最高，第7，14天表达依次减少，但仍明显高于对照组（t=2．681，2．525，P〈0．05），造模后第28天与对照组比较，差异不明显。造模后第3天大鼠肾小球细胞凋亡率明显高于对照组（t=2．764，P〈0．05），第7，14，28天大鼠肾小球细胞凋亡率均明显低于对照组（t=2．096-2．627，P〈0．05）。④肾小球p27蛋白表达阳性率与肾小球增殖细胞核抗原表达阳性率呈显著负相关（r=-0．446，P〈0．05），与凋亡率呈显著负相关（r=-0．517，P〈0．05）。 结论：糖尿病早期肾近曲小管损害引起的重吸收功能障碍和肾小球的高滤过基本同步发生。p27蛋白在糖尿病早期可能通过抑制肾脏细胞增殖和凋亡而参与糖尿病肾病的发生、发展。     

天年饮干预亚急性衰老大鼠模型的性腺功能

背景：随着机体衰老性腺功能逐渐降低，中国传统医学认为精气虚弱是导致机体衰老的主要原因。目的：观察中药天年饮对亚急性衰老大鼠血清睾酮含量、睾丸组织超氧化物歧化酶的活性及睾丸生精细胞凋亡的影响。设计：随机对照实验。单位：承德医学院人体解剖学教研室。材料：实验于2003-04／07在承德医学院基础医学研究所进行。选择成年雄性SD大鼠40只，随机分为4组，每组10只。模型组、用药组、对照组采用D-半乳糖连续腹腔注射200mg／（kg&;#183;d）制备亚急性衰老动物模型，1次／d，共40d，模型组大鼠于造模成功后不再作任何处理。用药组大鼠于造模成功后每天用天年饮灌胃（天年饮由灸何首乌、怀牛膝、肉从蓉、茯苓、丹参、淫羊藿6味中药组成，经熬制后含生药1．5g/mL），1次／d，共30d；对照组大鼠在造模成功后每天灌胃同等剂量的生理盐水，时间同用药组大鼠。方法：各组大鼠血清中睾酮的含量采用酶联免疫吸附方法检测，睾丸组织中超氧化物歧化酶的活性采用黄嘌呤氧化酶法检测，睾丸生精细胞的凋亡情况采用免疫组化法观察。主要观察指标：①各组大鼠血清中睾酮的含量。②睾丸组织中超氧化物歧化酶的活性。③睾丸生精细胞的凋亡情况。结果：40只大鼠均进入结果分析。④血清中睾酮的含量：模型组大鼠血清睾酮含量低于正常组[（0．52&;#177;0．15）μg／L，（1．26&;#177;0．32）μg／L，（t=3．004，P〈0．05）]，用药组高于模型组[（1．16&;#177;0．32）μg／L，（0．52&;#177;0．15）μg／L，（t=2．321，P〈0．05）]。②睾丸组织超氧化物歧化酶的活性：模型组明显低于正常组[（107．22&;#177;9．33）kNU／g,（147．73&;#177;11．9）kNU／g,（t=13．339，P〈0.01）]，用药组明显高于模型组[（141．05&;#177;14．57）kNU／g,（107．22&;#177;9．33）kNU／g,（t=9．970，P〈0.01）]。③生精细胞的凋亡情况：模型组凋亡生精小管百分率、凋亡阳性细胞率均明显高于正常组[（53．95&;#177;2．02）％比（34．21&;#177;2．10）％，（8．67&;#177;0．80）％比（3．86&;#177;0．52）％，（X^2=7．9，P〈0．01，X^2=5．01，P〈0．05）]；用药组明显低于模刑组[（35．33&;#177;2．18）％比（53．95&;#177;2．02）％，（4．68&;#177;0．74）％比（8．67&;#177;0．80）％，（r=7．02，P〈0．01，r=3．96，P〈0．05）]。结论：衰老模型睾丸生精细胞凋亡增多，经天年饮灌胃后可以使凋白细胞阳性率明显下降，说明天年饮可以清除体内过多的氧自由基，减少凋亡发生，改善动物模型的生精功能。     

高氧致新生大鼠肺损伤中氧化应激与基质金属蛋白酶的关系

目的探讨氧化应激和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）／基质金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）在高氧肺损伤新生大鼠的肺组织中动态变化以及两者的相互关系。方法将足月新生大鼠在出生后，分别持续吸人90％～95％高氧或空气，于1、3、7、14、21d取肺组织进行HE染色，应用分光光度计比色法检测肺组织丙二醛（MDA）含量、免疫组化技术检测MMP-9和TIMP-1动态表达。结果病理观察高氧3d时出现炎症反应，7d时出现肺泡发育阻滞，最终纤维化；高氧3、7、14d后MDA含量高于空气组（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．05）；MMP-9表达主要在上皮细胞胞浆，高氧3d时较空气组增强（P〈0．05）；TIMP-1表达主要在上皮细胞、内皮细胞和肺泡巨噬细胞胞浆，3d后各时间点的表达均高于空气组（P〈0．05，P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01）；MDA含量与MMP-9、TIMP-1蛋白表达呈正相关（P〈0．05，P〈0．01）。结论高氧暴露后可能通过氧化应激上调MMP-9和TIMP-1表达引起基膜的破坏，从而导致毛细血管通透性的增加和以后呼吸道重塑的发生。     

大鼠小肠缺血再灌注后的肾损伤和肾脏Bcl-2，Bax的表达

目的：观察大鼠小肠缺血再灌注后肾结构和功能的变化，以及肾组织中Bel-2,Bax蛋白的表达水平，探讨小肠缺血再灌注后肾损伤的特点。方法：实验于2004—12／2005-03在武汉大学人民医院麻醉科实验室完成。将48只SD大鼠随机分配入假手术组，缺血再灌注0，30，60min，2h，1．4，7d组，每组6只。夹闭大鼠肠系膜上动脉60min后松开建立小肠缺血再灌注模型，假手术组穿线环绕肠系膜上动脉但不结扎。光镜下观察肾组织结构，自动分析仪检测血清尿素及电解质含量，免疫组化方法检测肾组织中Bel-2，Bax蛋白的表达。结果：48只大鼠均进入结果分析。①光镜下观察，可见假手术组肾小球、肾小管结构正常，间质无充血、水肿。再灌注组在30min时即可见肾小球囊轻度扩张，肾小球皱缩，肾小管上皮细胞水肿，管腔变小，偶见管型，肾间质充血。随着时间的推移，可见部分肾小球代偿性增大，间质出现较多炎性细胞浸润，肾小管扩张，部分肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落，较多管型形成。7d时，肾组织结构基本恢复正常。②假手术组的血清尿素为（5．72&;#177;0．51）mmoL／L。血清K^＋为（4．17&;#177;0．19）mmoL／L，再灌注后大鼠血清尿素和K^＋水平逐渐升高，血清尿素在1d时达到峰值（25．28&;#177;1．19）mmol／L（P〈0．01），血清K^＋水平在2h时达到峰值（7．50&;#177;0．24）mmol／L（P〈0．01）。随后两者均下降，7d时血清尿素、K^＋水平均恢复正常[血清尿素为（6．12&;#177;0．26）mmol／L，血清K^＋为（4．32&;#177;0．19）mmol／L]。③Bcl-2，Bax蛋白主要在近曲小管上皮细胞的胞浆和胞膜表达。bcl-2在30min时阳性细胞率为（7．17&;#177;2．14）％，明显高于假手术组[（1．33&;#177;1．21）％]（P〈0．01），在1d时阳性细胞率达到峰值（41．33&;#177;4．55）％（P〈0．01），Bax在0min时阳性细胞率为（2．93&;#177;0．70）％，明显高于假手术组[（1．17&;#177;0．75）％]（P〈0．01），7d时阳性细胞率达到峰值（48．83&;#177;4．17）％（P〈0．01）。结论：小肠缺血再灌注可以造成肾组织结构和功能的损伤，并且使肾组织Bax和Bcl-2蛋白的表达发生改变，使肾组织细胞呈现凋亡的趋势。     

Pkd1 regulates immortalized proliferation of renal tubular epithelial cells through p53 induction and JNK activation

Autosomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) is the most common human monogenic genetic disorder and is characterized by progressive bilateral renal cysts and the development of renal insufficiency. The cystogenesis of ADPKD is believed to be a monoclonal proliferation of PKD-deficient (PKD(-/-)) renal tubular epithelial cells. To define the function of Pkd1, we generated chimeric mice by aggregation of Pkd1(-/-) ES cells and Pkd1(+/+) morulae from ROSA26 mice. As occurs in humans with ADPKD, these mice developed cysts in the kidney, liver, and pancreas. Surprisingly, the cyst epithelia of the kidney were composed of both Pkd1(-/-) and Pkd1(+/+) renal tubular epithelial cells in the early stages of cystogenesis. Pkd1(-/-) cyst epithelial cells changed in shape from cuboidal to flat and replaced Pkd1(+/+) cyst epithelial cells lost by JNK-mediated apoptosis in intermediate stages. In late-stage cysts, Pkd1(-/-) cells continued immortalized proliferation with downregulation of p53. These results provide a novel understanding of the cystogenesis of ADPKD patients. Furthermore, immortalized proliferation without induction of p53 was frequently observed in 3T3-type culture of mouse embryonic fibroblasts from Pkd1(-/-) mice. Thus, Pkd1 plays a role in preventing immortalized proliferation of renal tubular epithelial cells through the induction of p53 and activation of JNK.     

TLR4 activation mediates kidney ischemia/reperfusion injury

Ischemia/reperfusion injury (IRI) may activate innate immunity through the engagement of TLRs by endogenous ligands. TLR4 expressed within the kidney is a potential mediator of innate activation and inflammation. Using a mouse model of kidney IRI, we demonstrated a significant increase in TLR4 expression by tubular epithelial cells (TECs) and infiltrating leukocytes within the kidney following ischemia. TLR4 signaling through the MyD88-dependent pathway was required for the full development of kidney IRI, as both TLR4(-/-) and MyD88(-/-) mice were protected against kidney dysfunction, tubular damage, neutrophil and macrophage accumulation, and expression of proinflammatory cytokines and chemokines. In vitro, WT kidney TECs produced proinflammatory cytokines and chemokines and underwent apoptosis after ischemia. These effects were attenuated in TLR4(-/-) and MyD88(-/-) TECs. In addition, we demonstrated upregulation of the endogenous ligands high-mobility group box 1 (HMGB1), hyaluronan, and biglycan, providing circumstantial evidence that one or more of these ligands may be the source of TLR4 activation. To determine the relative contribution of TLR4 expression by parenchymal cells or leukocytes to kidney damage during IRI, we generated chimeric mice. TLR4(-/-) mice engrafted with WT hematopoietic cells had significantly lower serum creatinine and less tubular damage than WT mice reconstituted with TLR4(-/-) BM, suggesting that TLR4 signaling in intrinsic kidney cells plays the dominant role in mediating kidney damage.     

Intrarenal cells, not bone marrow-derived cells, are the major source for regeneration in postischemic kidney

Ischemic injury to the kidney produces acute tubular necrosis and apoptosis followed by tubular regeneration and recovery of renal function. Although mitotic cells are present in the tubules of postischemic kidneys, the origins of the proliferating cells are not known. Bone marrow cells (BMCs) can differentiate across lineages to repair injured organs, including the kidney. However, the relative contribution of intrarenal cells and extrarenal cells to kidney regeneration is not clear. We produced transgenic mice that expressed enhanced GFP (EGFP) specifically and permanently in mature renal tubular epithelial cells. Following ischemia/reperfusion injury (IRI), EGFP-positive cells showed incorporation of BrdU and expression of vimentin, which provides direct evidence that the cells composing regenerating tubules are derived from renal tubular epithelial cells. In BMC-transplanted mice, 89% of proliferating epithelial cells originated from host cells, and 11% originated from donor BMCs. Twenty-eight days after IRI, the kidneys contained 8% donor-derived cells, of which 8.4% were epithelial cells, 10.6% were glomerular cells, and 81% were interstitial cells. No renal functional improvement was observed in mice that were transplanted with exogenous BMCs. These results show that intrarenal cells are the main source of renal repair, and a single injection of BMCs does not make a significant contribution to renal functional or structural recovery.     

利用扩散加权成像评估MitoQ对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨扩散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)评估线粒体靶向抗氧化剂Mito Q对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)保护作用的可行性。材料与方法暂时夹闭大鼠左侧肾动脉45 min以建立IRI模型。10只雄性SD大鼠随机分为Mito Q组(5只,IRI+Mito Q)和对照组(5只,IRI+生理盐水)。在术前(第0天)和术后不同时间(第2、5、7和14天)对大鼠进行DWI扫描,并测量双侧肾外髓外带(the outer stripe of the outer medulla,OSOM)的ADC值。最后一次MRI检查结束后对肾脏组织病理学损伤程度进行评分。采用最小显著差法比较不同时间点组间及组内ADC值的差异。借助Kruskal-Wallis H检验和Mann-Whitney U检验比较不同肾脏组织病理学评分之间的差异。结果术前两组大鼠双肾ADC值无明显差异。术后两组大鼠右肾ADC值无明显差异,在术后各时间点,每组大鼠左肾OSOM的ADC值均低于右肾(P0.01),对照组左肾ADC值于各时间点均低于Mito Q组。第2天Mito Q组和对照组左肾分别为(3.66±0.29)×10-4 mm2/s、(3.09±0.39)×10-4 mm2/s,P0.05;第5天Mito Q组和对照组左肾分别为(3.75±0.32)×10-4 mm2/s、(2.95±0.79)×10-4 mm2/s,P0.05;第7天Mito Q组和对照组左肾分别为(3.77±0.42)×10-4 mm2/s、(2.98±0.49)×10-4 mm2/s,P0.05;第14天Mito Q组和对照组左肾分别为(3.93±0.23)×10-4 mm2/s、(3.05±0.20)×10-4 mm2/s,P0.05。肾脏组织病理学分析表明肾损伤最严重的区域发生在对照组IRI肾脏OSOM,其组织病理学损伤评分高于Mito Q组IRI肾脏(P0.01)。结论肾脏扩散加权成像可无创评价Mito Q减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用。     

Induction of p21WAF1/CIP1/SDI1 in kidney tubule cells affects the course of cisplatin-induced acute renal failure.

The p21 protein is found in the nucleus of most cells at low levels and is induced to elevated levels after DNA damage, causing cell-cycle arrest. We have reported that p21 mRNA is rapidly induced to high levels in murine kidney after acute renal failure. The function(s) in the kidney of p21 induction in cisplatin-induced acute renal failure was studied with mice that are homozygous for a p21 gene deletion. After drug administration, as compared with their wild-type littermates, p21(-/-) mice display a more rapid onset of the physiologic signs of acute renal failure, develop more severe morphologic damage, and have a higher mortality. Therefore, the induction of p21 after cisplatin administration is a protective event for kidney cells. Using both bromodeoxyuridine incorporation and nuclear proliferating cell nuclear antigen detection, we found that cisplatin administration caused kidney cells to start entering the cell-cycle. However, cell-cycle progression is inhibited in wild-type mice, whereas kidney cells in the p21(-/-) mice progress into S-phase. We propose that p21 protects kidneys damaged by cisplatin by preventing DNA-damaged cells from entering the cell-cycle, which would otherwise result in death from either apoptosis or necrosis.     

BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立与评价

背景：对于一些药物研究,小鼠是理想的造模工具,但由于小鼠耐受性相对较差,肾脏及肾蒂小且难于寻找,容易增加实验误差,导致造模失败。目的：探讨BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立方法,评价肾脏缺血时间对肾缺血再灌注损伤的影响。方法：采用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂的方法建立雄性BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型,根据肾缺血时间不同分为0min组（对照组）、30min组、35min组、45min组,肾再灌注后24h观察肾功能和肾脏病理组织学的变化,比较不同的肾脏缺血时间对上述指标的影响;观察45min组小鼠肾缺血再灌注损伤后的生存率。结果与结论：模型成功率95.9%,与对照组相比,肾缺血30min组、35min组和45min组再灌注后24h血清肌酐、尿素氮和肾脏病理组织学评分均升高,肾缺血45min组生存率明显下降,差异均有显著性意义（P〈0.05）。结果提示,应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂的方法可制备稳定肾缺血再灌注损伤模型,雄性小鼠肾缺血35～45min是造模较为理想的肾缺血时间,所得模型效果满意。     

Dendritic cells tolerized with adenosine A2AR agonist attenuate acute kidney injury

DC-mediated NKT cell activation is critical in initiating the immune response following kidney ischemia/reperfusion injury (IRI), which mimics human acute kidney injury (AKI). Adenosine is an important antiinflammatory molecule in tissue inflammation, and adenosine 2A receptor (A_2AR) agonists protect kidneys from IRI through their actions on leukocytes. In this study, we showed that mice with A_2AR-deficient DCs are more susceptible to kidney IRI and are not protected from injury by A_2AR agonists. In addition, administration of DCs treated ex vivo with an A_2AR agonist protected the kidneys of WT mice from IRI by suppressing NKT production of IFN-γ and by regulating DC costimulatory molecules that are important for NKT cell activation. A_2AR agonists had no effect on DC antigen presentation or on Tregs. We conclude that ex vivo A_2AR–induced tolerized DCs suppress NKT cell activation in vivo and provide a unique and potent cell-based strategy to attenuate organ IRI.     

己酮可可碱对大鼠肾缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制

目的 探讨己酮可可碱(PTX)预处理对大鼠肾缺血-再灌注损伤(IRJ)的保护作用及其具体保护机制.方法 75只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(SO组)、缺血.再灌注组(IRI组)、FTX治疗组(PTX组).每组25只.SO组:单纯剖腹术,游离双侧肾蒂血管后不作结扎,等待45 min后关闭腹腔.通过无损伤动脉夹阻断双肾血流45 min建立大鼠的肾IRI模型.FTX组术前0.5 h予FTX 20rng/kg静脉注射,术中PTX 6 mg/(kg·h)微泵维持.SO组、IRI组术前0.5 h予等量生理盐水静脉注射及微泵维持.3组分别于缺血前、缺血-再灌注即刻、再灌注后1 h、4 h、24 h 5个时间点监测肾功能、肾脏病理及肾组织匀浆的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞问黏附分子-1(ICAM-1)变化情况.采用单因素方差分析,组间两两比较采用q检验,并对部分数据行相关性分析.结果 肾IRI后,表现为肾小管上皮细胞不同程度的肿胀、变性、坏死,炎性细胞浸润,给予PTX预处理后肾脏病理改变明显减轻,炎性细胞浸润减少.与SO组相比,IRI组在再灌注后各时间点血清肌酐水平,肾小管损伤评分,.肾组织匀浆的TNF-α水平、ICAM-1水平显著升高(P<0.01),肾组织匀浆的SOD水平显著下降(P<0.01);与IRI组相比,FTX组在相应时间点的血清肌酐水平、肾小管损伤评分显著下降(P<0.05);在再灌注即刻、1 h、4 h、24 h肾组织匀浆的TNF-α水平明显下降(P<0.05),肾组织匀浆的MDA、ICAM-1水平在再灌注后4 h,24 h显著下降(P<0.01),肾组织匀浆的SOD水平在再灌注后4 h、24 h显著升高(P<0.05).相关性分析显示,TNF-α与MDA、SOD、ICAM-1之间的相关系数分别为0.801、-0.895、0.838,(P<0.01)结论 FTX对肾IRI有保护作用,该作用可能与FTX直接抑制肾组织中TNF-α的表达有关,从而减轻了氧化应激、抑制了ICAM-1的表达,减轻炎性细胞肾内浸润而发挥保护作用.