LAK细胞有效制备方法研究

制备大量的具有显著抗肿瘤活性的ＬＡＫ细胞是确保ＩＬ－２／ＬＡＫ疗法发挥抗肿瘤作用的前提。本文介绍增强ＬＡＫ活性和ＬＡＫ数量的有效的制备方法。ＩＬ－２的诱导剂量、不同材料（脾细胞、淋巴结细胞、外周血淋巴细胞、胸腺细胞等）的ＬＡＫ产生的时间动力学及多种ＬＡＫ细胞增强剂的协同应用，从而获得高效价和大数量的ＬＡＫ细胞。     

卡介克蟹对人胎胸腺和脾脏细胞LAK活性的调节作用

卡介克蟹是ＢＣＧ的提取物。应用ＭＴＴ法观察了卡介克蟹对人胎儿胸腺和脾脏细胞ＬＡＫ活性的影响，结果显示：人胎胸腺及脾脏细胞经ＩＬ－２诱导后均能产生明显的ＬＡＫ细胞杀伤活性；卡介克蟹能协同增强ＩＬ－２诱导的胸腺及脾脏细胞ＬＡＫ杀伤活性；且卡介克蟹与ＰＨＡ和ＩＬ－２三者联合诱导的ＬＡＫ细胞杀伤活性不仅高于ＰＨＡ和ＩＬ－２和及ＩＬ－２卡介克蟹联合诱导的ＬＡＫ活性，更明显高于仅用ＩＬ－２单独诱导的胸腺和脾细胞ＬＡＫ杀伤活性。提示卡介克蟹可能成为ＬＡＫ治疗中的生物反应调节剂（ＢＲＭ）。     

肺癌常用化疗药物对IL－2诱导LAK细胞活性的影响

选用３Ｈ－ＴｄＲ释放法及掺入法分别检测ＬＡＫ细胞活性、ＬＡＫ细胞增殖功能及９种临床常用肺癌化疗药物对ＬＡＫ细胞抗肿瘤活性的影响。结果显示，不同化疗药物对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性的影响不同，同种化疗药物不同浓度间的影响也有差异。卡铂（Ｃａｒｂｏ）、足叶乙甙（ＶＰ１６）、５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）有增强作用；环磷酰胺（ＣＴＸ）、顺铂（ＣＤＤＰ）、长春新碱（ＶＣＲ）、甲氨喋呤（ＭＴＸ）对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性无明显影响；阿霉素（ＡＤＭ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）在较高浓度时，抑制ＬＡＫ细胞活性产生。除ＣＴＸ外的８种药物均显著抑制ＬＡＫ细胞增殖功能。实验表明：常规剂量的化疗不会抑制ＬＡＫ细胞活性的产生，５－Ｆｕ、Ｃａｒｂｏ、ＶＰ１６与ＩＬ－２结合抗癌可望产生协同疗效．ＩＬ－２先于化疗给药并维持至化疗后一定时间，其联合抗癌效果可能更佳。     

成纤维细胞介导的白细胞介素2基因疗法的免疫增强作用及其抗肿瘤效果

为了使白细胞介素２（ＩＬ－２）在体内持续有效地发挥生物学效应，作者探讨了成纤维细胞为介导途径的ＩＬ－２基因疗法以及该疗法在小鼠体内的抗肿瘤作用。将基因转染后、高分泌ＩＬ－２的成纤维细胞（ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＬ－２＋）包裹入胶原后移植入小鼠腹腔内，可使小鼠血清中持续性地存在一定水平的ＩＬ－２，并能非常显著地增强小鼠脾细胞的增殖反应、天然杀伤细胞（ＮＫ）活性和淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）活性、分泌细胞因子（ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ、ＩＬ－２）的水平，尤其有意义的是诱导出内源性的ＬＡＫ活性。ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＬ－２＋腹腔内移植后对腹水型肝癌小鼠有较显著的治疗效果，当与ＬＡＫ细胞腹腔内注射联合应用后，治疗效果更佳，表明成纤维细胞介导的ＩＬ－２基因疗法能通过增强机体的免疫功能发挥显著的抗肿瘤作用，而且当其与ＬＡＫ细胞过继回输合用后抗肿瘤作用更强。     

LAK细胞在单克隆抗体介导下的抗癌作用

探讨增强ＬＡＫ细胞抗肿瘤作用的新方法，用健康人外周血经密度梯度离心法分离出单个核细胞，再加入白细胞介素２（ＩＬ－２）后诱导的ＬＡＫ细胞为效应细胞，采用４－ｈ＾５１Ｃｒ释放法检测了其对胃癌细胞ＫＡＴＯⅢ的杀伤作用及加入有癌单克隆抗体ＭＧｂ２后的影响。结论：利用单抗ＭＧｂ２和ＬＡＫ细胞产生的ＡＤＣＣ效应可以明显增强ＬＡＫ细胞的抗胃癌作用。     

肿瘤化疗药物对人LAK细胞活性的影响

用四氮唑（ＭＴＴ）法分别检测顺氨氯铂（ＰＤＤ），丝裂霉素－Ｃ（ＭＭＣ）、阿霉素（ＡＭＤ）、氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ），长春新碱（ＶＣＲ）对ＩＬ－２诱导人外周血ＬＡＫ细胞活性的影响，及其与ＬＡＫ细胞对胃癌细胞的相加杀伤作用。①ＭＭＣ、ＡＤＭ、５－Ｆｕ、ＶＣＲ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性稍有下降，Ａｒａ－Ｃ能抑制ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性，ＰＤＤ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性明显提高。     

LAK细胞联合复方白细胞介素2疗法及其抗肿瘤治疗

用低剂量ＩＬ－２，同时加入人ＲＢＣ诱导制备同种异体ＬＡＫ细胞，可见ＬＡＫ细胞的增殖明显和杀伤活性显著提高。用自制的复方白细胞介素２及ＬＡＫ细胞组成ＬＡＫ细胞联合复方白细胞介素２（ＬＡＫ／ＩＬ－２Ｃｏ．）过继免疫疗法和联合放疗、化疗的综合疗法，共治疗中、晚期恶性肿瘤１３８例，疗效结果判定，单纯免疫疗法治疗组，无ＣＲ，ＰＲ３０．３％，综合疗法治疗组ＣＲ＋ＰＲ为５８％，且副反应均较轻，本项应用研究结果是安全有效的，能作为抗肿瘤优选的治疗方案     

正常鼠和免疫鼠CD3AK细胞和LAK细胞杀伤活性的比较研究

实验取正常鼠和Ｐ８１５肿瘤细胞致敏的免疫鼠脾细胞，经抗ＣＤ３抗体与低剂量ＩＬ－２或高剂量ＩＬ－２分别诱生为ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞，用改良的乳酸脱氢酶释放法以Ｐ８１５细胞和ＹＡＣ－１细胞为靶细胞，测定ＣＤ３ＡＫ和ＬＡＫ细胞的杀伤活性。结果表明：正常鼠ＣＤ３ＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性高于ＬＡＫ细胞，对ＹＡＣ－１细胞的杀伤活性低于ＬＡＫ细胞。免疫鼠ＬＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性明显增高，高     

瘤体内注射OK－432和白细胞介素2治疗原发性肝癌的实验研究

本实验分组观测了不同给药方法时，ＯＫ－４３２和白细胞介素２（１Ｌ－２）对荷瘤鼠外周血ＮＫ细胞和ＬＡＫ细胞活性的影响。结果表明：ＯＫ－４３２和ＩＬ－２单独瘤体内注射对ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性均有明显增强作用；联合给药时，ＯＫ－４３２和ＩＬ－２可产生明显的协同作用，这种协同作用以先注射ＯＫ－４３２接着注射ＩＬ－２或ＯＫ－４３２、ＩＬ－２同时注射时最强。     

瘤体内注射OK—432和白细胞介素2治疗原发性肝癌的实验研究

本实验分组观察了不同给药方法时，ＯＫ－４３２和白细胞介素２（ＩＬ－２）对荷瘤鼠外周血ＮＫ细胞和ＬＡＫ细胞活性的影响。结果表明：ＯＫ－４３２和ＩＬ－２单独瘤体内注射对ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性均有明显增强作用；联合给药时，ＯＫ－４３２和ＩＬ－２可产生明显的协同作用，这种协同作用以先注射ＯＫ－４３２接着注射ＩＬ－２或ＯＫ－４３２、ＩＬ－２同时注射时最强。     

维甲酸和丁酸钠对体外LAK细胞活性的影响

维甲酸、丁酸钠具有促进肿瘤细胞分化，抑制肿瘤细胞生长及其他多种生物学效应。本研究从肿瘤生物治疗的角度，探讨了这两种诱导剂在体外对ＬＡＫ细胞活性的影响，发现丁酸钠或维甲酸单独不能诱导ＬＡＫ细胞活性，也不能增强ＮＫ细胞活性，但可调节ＩＬ－２对ＬＡＫ细胞活性的诱导。低浓度可增强ＬＡＫ细胞活性，其最适浓度丁酸钠为１×１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ，二可分别提高ＬＡＫ细胞杀伤活性１５０％及１００％。结果表明，丁酸钠     

大鼠树突状细胞在抗肿瘤中作用的初步研究

本文采用大鼠脾脏细胞分离获得的树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓＤＣｓ）联合ＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞进行体内、外抗肿瘤试验，结果发现ＤＣｓ能明显促进ＬＡＫ的抗肿瘤作用     

妇科恶性肿瘤患者CD3AK细胞与LAK细胞体外增殖能力动态观察

采用ＣＤ３ＭＡｎ＋ＩＬ－２联合刺激泊制备妇科恶性肿瘤患者ＣＤ３ＡＫ细胞，体外动态观察ＣＤ３ＡＫ细胞的形态特征及增死去工与ＬＡＫ细胞进行比较。结果显示：１．ＣＤ３ＡＫ细胞与ＬＡＫ细胞在体外分别经ＣＤ３ＭＡｂ＋ＩＬ－２和ＩＬ－２刺激后，细胞体积增大，继之变为不规则形；２．ＣＤ３ＡＫ细胞培养第１周增殖倍数为２．８９，至第４周增殖倍数达１０９．３７倍，均显著高于同期培养的ＬＡＫ细胞的增殖倍数３．ＣＤ３ＡＫ     

脐血LAK细胞的制备及其生物活性的测定

目的 寻找新的高效杀伤活性的细胞,探讨脐血单个核细胞作为ＬＡＫ细胞前体细胞的可行性和意义。方法 分离的脐血单个核细胞,分别用ＩＬ－２和ＩＬ－２＋ＩＮＦα诱导ＬＡＫ细胞,并于培养后ｄ２,４,７,１１,１４分别测其细胞扩增数量和对Ｋ５６２细胞的杀伤活性。结果 于培养后ｄ１１时,脐血单个核细胞的扩增倍数最高,两组分别为培养前的２０倍和２５倍。其对Ｋ５６２的杀伤活性分别对对照培养前的２．７倍和３．５倍。结     

CD3AK细胞的培养与抗肿瘤活性研究

目的 体外扩增经ＣＤ３单抗（ＣＤ３ＭｃＡｂ）活化的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ），并测定其抗肿瘤细胞作用和表型变化。方法 取１３例肺癌和２例肝癌病人外周血，经密度梯度离心获取淋巴细胞，以ＣＤ３ＭｃＡｂ和ＩＬ－２作为诱导剂，采用液相三步扩增方法扩增培养，并分别用ＭＴＴ和ＩＦＡ法与自体ＬＡＫ对照细胞比较细胞动力学、细胞毒作用和表型变化。结果 ＣＤ３ＡＫ细胞扩增速度、数量和抗肿瘤活性均优于自体ＬＡＫ细胞，其表型     

重组白细胞介素－2治疗晚期肺癌和肺转移癌

观察了应用小剂量重组白细胞介素－２（ＩＬ－２）静脉点滴治疗晚期肺癌，胸腔内注射治疗肺转移癌。在治疗前后分别测定其自然杀伤细胞（ＮＫ）和淋巴因子活化杀伤细胞（ＬＡＫ）活性。结果显示小剂量ＩＬ－２静脉点滴治疗晚期肺癌有一定疗效，治疗后ＮＫ活性和ＬＡＫ活性显著升高。     

IL—2／LAK与放,化疗联合治疗晚期恶性肿瘤

目的：探讨ＩＬ－／ＬＡＫ细胞与放疗和／或化疗联合治疗晚期恶性肿瘤的价值。方法：本组共３０例,其中单纯ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗５例（包括２例ＴＩＬ细胞胸腹腔灌注）,ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞联合放疗１８例（包括１例动脉灌注）,ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞联合化疗４例）包括１例动态灌注）,ＩＫ－２／ＬＡＫ细胞联合放疗和化疗３例。结果：完全缓解率２０．０％（６／３０）,总有效率５０．０％（１５／３９）,其中单纯ＩＬ－     

四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用的比较

比较四种不同组织来源ＬＡＫ细胞折体外扩增及抗肿瘤作用。方法：选用脐带血制备ＬＡＫ细胞，并与临床常用的外周血，胎脾及胸腺ＬＡＫ细胞在体外扩增及抗肿瘤作用方面比较。结果；脐带血的扩增能力显高于其余３种ＬＡＫ细胞，每份脐带血ＬＡＫ细胞总数可增殖至２．５×１０＾１０，抗肿瘤活性以脐带血ＬＡＫ对ＳＭＭＣ－７２２１肝癌细胞出现最早，活性最强，明显强于其余三；对Ｋ５６２的１样伤作用仍属脐带血ＬＡＫ阳强；而胸     

CD3AK细胞的生物学特性及其抗肿瘤作用

用人的外周血单核（ＰＢＭＣ）与抗ＣＤ３单克隆抗体和基因重组的人ＩＬ－２共同培养制备ＣＤ３ＡＫ细胞（ＣＤ３ＭｃＡｂ ａｃｔｉｖａｔｉｖｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ），并系统地研究ＣＤ３ＡＫ细胞的生物学特性及其体外抗肿瘤作用。结果表明，ＣＤ３ＡＫ细胞是异质细胞群，前体细胞来源丰富，主要是Ｔ细胞；经期内大量扩增，体外可长期存活，广谱杀瘤活性较低的ＩＬ－２依赖性。ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖机制与其表面高表达Ｉ     

LAK细胞治疗慢性活动型乙型肝炎的疗效与机理研究

目的观察淋巴因子激活杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）治疗慢性活动型乙型肝炎（ＣＡＨ）的疗效，探讨治疗机理。方法ＬＡＫ细胞治疗４０例患者，治疗前、疗程结束时，分别检测ＨＢＶＭ，ＡＬＴ，Ｔ细胞亚群，Ｂ细胞，ＩＬ－２，ｍＩＬ－２Ｒ，ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性。疗程结束１ａ复查ＨＢＶＭ。对照组４０例。结果ＬＡＫ治疗组疗程结束时，ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ转阴率分别为２２．５％和４０．０％，与对照组相比差异显著（Ｐ均＜０．００１）。疗程结束１ａ复查ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ转阴率分别达４０．０％和６８．６％。治疗后患者ＣＤ＋４细胞数及ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值，ＩＬ－２水平及ｍＩＬ－２Ｒ表达，ＮＫ细胞及ＬＡＫ细胞活性均较治疗前明显升高（Ｐ均＜０．０１）。尤以ＨＢｅＡｇ转阴者，ＩＬ－２升高更显著（Ｐ均＜０．００５）。结论ＬＡＫ细胞疗法有增强免疫功能、调节免疫紊乱和清除乙肝病毒的效用，但主要不是ＬＡＫ细胞的溶细胞作用。