Tiam-1反义基因抗肿瘤侵袭转移作用的研究

目的：从基因—蛋白—细胞效应多层次水平，观察Tiam1反义基因下调肿瘤细胞内转移相关基因Tiam1 mRNA和调节细胞骨架结构的Rho蛋白表达水平,探讨遏制肿瘤侵袭转移的作用和机制。方法： 采用反义核酸技术合成Tiam1反义寡核苷酸，硫代化修饰与脂质体形成复合物（Tiam1 ASODNSLf）,转导入人高转移巨细胞肺腺癌 PG细胞。采用 RTPCR技术检测Tiam1的表达水平，流式细胞术检测Rho蛋白表达水平，Matrigel体外转移模型检测PG细胞的侵袭转移力。结果： Tiam1ASODNSLf抑制PG细胞Tiam1 mRNA表达水平，其相对表达值从0.86下降为0.38；显著抑制PG细胞内Tiam1介导的信号传递相关Rho蛋白表达水平，其表达率从27.96%降至16.86%(P<0.001)。显著抑制穿过人工基底膜的侵袭转移PG细胞数，从945±40下降为649±35(P<0.05)。结论：Tiam1反义基因下调PG细胞中侵袭诱导基因mRNA表达及其介导的信号传递蛋白Rho的表达，从而遏制其侵袭和转移能力     

MRE11对食管鳞癌细胞凋亡和增殖的作用研究

目的 探讨MRE11对食管鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 MRE11 siRNA转染食管鳞癌细胞,下调MRE11表达;AKT激动剂SC79（0、0.1、0.5、1、1.5、1.8和2 μg/ml）分别孵育24 h;构建过表达载体pcDNA.3.1-c-myc,与MRE11 siRNA共转染细胞;Western blot法检测食管鳞癌细胞Ec9706和TE-1中MRE11、p-AKT和c-myc的蛋白表达量;Annexin-V FITC/PI试剂盒检测Ec9706和TE-1细胞凋亡;Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性;BrdU方法检测Ec9706和TE-1细胞增殖能力。结果 Ec9706和TE-1细胞中MRE11的蛋白表达较人食管上皮细胞Het-1A明显升高;MRE11 siRNA转染后,Ec9706和TE-1细胞中AKT磷酸化水平及MRE11和c-myc的蛋白表达量显著降低;下调MRE11显著促进Ec9706和TE-1细胞凋亡,提高caspase-3活性,抑制食管鳞癌细胞增殖能力;下调MRE11后,SC79（1.5、1.8和2 μg/ml）显著提高AKT磷酸化水平,同时逆转下调MRE11对c-myc蛋白表达量和细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。过表达c-myc抑制下调MRE11对细胞增殖的抑制作用和对细胞caspase-3活性的促进作用。结论 下调MRE11可通过调控AKT和c-myc抑制食管鳞癌细胞增殖 及促进细胞凋亡。     

薏苡仁酯抑制胃癌BGC-823细胞黏附、侵袭及迁移能力的研究

目的研究不同浓度薏苡仁酯对胃癌BGC-823细胞株侵袭、迁移能力的影响。方法以不同浓度薏苡仁酯作用胃癌BGC-823细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,黏附实验、Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞黏附、侵袭、迁移能力,Western-blot法检测细胞CD44、CD133表达。结果薏苡仁酯可抑制BGC-823细胞增殖,其增殖抑制效应呈剂量-时间依赖性;经薏苡仁酯作用后细胞黏附、侵袭及迁移能力降低;CD44、CD133 mRNA及蛋白水平的表达与薏苡仁酯浓度亦呈负相关。结论薏苡仁酯能降低胃癌黏附、侵袭、迁移能力,其机制可能与通过下调CD44、CD133表达有关。     

叶黄素对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡影响的机制

目的 探究叶黄素对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡影响的作用机制,为前列腺癌预防及治疗提供新的理论依据。方法 不同浓度叶黄素作用于PC3细胞,CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡变化;细胞划痕和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力;RT-PCR和Western blot技术检测细胞中Bax、Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达。结果 叶黄素显著抑制PC3细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性。叶黄素可以将细胞生长阻滞在G0/G1期,抑制细胞迁移和侵袭;还可促进细胞凋亡,使Bcl-2表达下降,Bax表达上升。叶黄素可在转录水平上下调Bcl-2 mRNA和上调BaxmRNA。结论 叶黄素抑制PC3细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与阻滞细胞周期、抑制细胞迁移、侵袭以及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

靶向siRNA对人直肠癌Colo320细胞的抑制作用

目的:利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制人直肠癌Colo320细胞c-my基因的表达,探讨c-myc基因在人直肠癌Colo320细胞中的作用.方法 :设计人直肠癌Colo320细胞基因特异性小分子干扰RNA,用体外转录方法合成人直肠癌Colo320细胞的小分子干扰RNA并转染该细胞,培养48～96 h后,收集细胞RNA,应用实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中c-myc基因mRNA水平变化,Western blotting检测c-myc表达的蛋白,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成试验检测细胞增殖活性.结果:转染siRNA后,与对照组相比,实验组pGensil-c-myc-1、2、3、4的c-myc基因mRNA水平明显降低,c-myc的蛋白表达也明显降低.MTT法和集落形成试验检测表明,实验组的细胞增殖速率明显低于对照组.结论:在人直肠癌Colo320 细胞中存在RNA干扰的机制,特异性siRNA能够有效地抑制c-myc基因的表达,从而抑制Colo320 细胞的增殖.     

hPTTG1基因沉默下调bFGF表达并抑制A2780细胞侵袭的研究

目的:探讨RNAi技术沉默卵巢癌细胞A2780细胞内hPTTG1表达对其侵袭性的影响及调控机制。方法:利用阳离子转染试剂将hPTTG1 siRNA转染A2780细胞,荧光实时定量PCR检测hPTTG1及bFGF表达水平;MTT基质黏附实验检测细胞黏附能力;细胞侵袭重建基底膜实验测定细胞体外侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测bFGF蛋白表达水平。结果:hPTTG1siRNA转染组hPTTG1mRNA表达下降,抑制率为(76.8±4.1)%;转染hPTTG1siRNA后细胞黏附、侵袭和迁移能力降低;hPTTG1干扰后bFGFmRNA及蛋白表达下降。结论:hPTTG1siRNA能够抑制A2780细胞侵袭,可能是通过下调bFGF表达实现的。     

三氧化二砷抑制肝癌Hep G2 细胞侵袭转移 及对RhoC 基因表达的影响

 目的　了解三氧化二砷(As2 O3 ) 对肝癌Hep G2 细胞体外黏附、侵袭和迁移的抑制作用及对转 移基因RhoC 表达的影响,探讨As2O3 抑制肝癌细胞转移的机制。方法　分别采用MTT 法、Transwell 检测As2O3 对Hep G2 细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响; 采用RT2PCR、Western blot 方法检测As2O3 作 用前后Hep G2 细胞中RhoC 基因的表达及变化。结果　As2O3 作用后Hep G2 细胞黏附率、侵袭及侵袭 细胞数较对照组明显下降( P < 0. 05) 。As2O3 作用4 、6 、8 天后RhoC2mRNA 及蛋白表达水平逐渐下降 ( P < 0. 05) 。Hep G2 细胞中RhoC2mRNA 表达和蛋白表达具有相关性( r = 0. 92 , P = 0. 046) 。结论　 As2O3 可明显抑制Hep G2 细胞细胞黏附、迁移和侵袭的能力;并可通过下调RhoC 基因的表达而抑制其 侵袭转移。     

Bmi-1基因RNAi对胃癌细胞SGC7901及AGS作用的初步研究

目的:构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,观察其对胃癌细胞SGC7901与AGS增殖、侵袭能力的影响.方法:利用慢病毒表达体系pHelper1.0/pHelper2.0/pGCL-GFP,构建Bmi-1基因的RNAi重组质粒vshRNA-Bmi-1.适时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测稳定转染vshRNA-Bmi-1后胃癌细胞中Bmi-1 mRNA及蛋白的表达;MTT法及小室侵袭实验检测胃癌细胞增殖和侵袭能力的变化.结果:稳定转染vshRNA-Bmi-1后SGC7901及AGS细胞Bmi-1 mRNA表达均明显下降,抑制率分别为85%及80%.SGC7901细胞中Bmi-1蛋白表达无明显变化,而在AGS细胞中明显下降.Bmi-1干扰后SGC7901细胞的生长及侵袭能力无明显变化,而AGS细胞增殖减慢、侵袭能力减弱.结论:成功构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,vshRNA-Bmi-1重组质粒明显下调Bmi-1 mRNA 在胃癌细胞SGC7901和AGS中的表达.Bmi-1基因的RNAi能抑制胃癌细胞AGS的增殖和侵袭能力.     

奥沙利铂对肝癌细胞HepG 2生物学行为的影响

目的:探讨奥沙利铂(oxaliplatin, L-OHP)对肝癌细胞HepG 2增殖、黏附、迁移和侵袭等生物学行为的影响.方法:应用MTT法、Transwell、RT-PCR及Western印迹法检测L-OHP 作用后,HepG 2细胞增殖、黏附、迁移、侵袭能力及RhoC mRNA和蛋白表达的变化. 结果:L-OHP可显著抑制HepG 2细胞的增殖,同一时间不同浓度各组细胞的生长抑制率有明显差异(P＜0.01),相同浓度下作用48和72 h组细胞的生长抑制率明显高于24 h组(P＜0.01).低毒剂量(2.5 mg/L)L-OHP作用HepG 2细胞30、60、90和120 min时,细胞的黏附能力明显降低(P＜0.01),各时间点细胞的黏附抑制率分别为29.21%、27.27%、26.62% 和24.76%.2.5 mg/L L-OHP作用HepG 2细胞24 h后,迁移和侵袭的细胞数明显减少(P＜0.01),细胞的迁移和侵袭抑制率分别为53.68% 和54.38%.2.5 mg/L L-OHP作用HepG 2细胞4、6和8 d后, 细胞RhoC mRNA和蛋白的表达水平逐渐下降(P＜0.05).结论:L-OHP能抑制肝癌细胞HepG 2的增殖,低毒剂量的L-OHP具有抑制肝癌细胞HepG 2黏附、迁移和侵袭的能力,其抗侵袭和转移的作用可能与下调细胞RhoC的表达有关.     

脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)经脂质体LipfectAMINETM(LR)介导转染对MCF-7细胞中c-myc蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响。方法用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价脂质体介导c-myc ASODN对细胞增殖的影响;免疫细胞化学ABC方法检测转染前后c-myc蛋白表达;流式细胞仪(FCM)定量分析细胞凋亡。结果ASODN/LR转染与正义、错义寡核苷酸相比,显著抑制MCF-7细胞增殖(P<0.01)。FCM分析结果显示,转染后可见明显细胞凋亡峰,72h相点细胞凋亡率达(28.76±2.09)%。免疫细胞化学显示c-myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为(21.40±1.16)%。结论LR介导c-myc ASODN能明显抑制MCF-7细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。     

砷化物治疗肿瘤的研究近况

近年来临床研究表明 ,三氧化二砷 (As2 O3 )和四硫化四砷 (As4S4)对急性早幼粒细胞白血病有显著的疗效 ;有机砷美拉砷醇也试用于治疗难治或耐药的白血病患者。大量研究资料表明 ,As2 O3 、美拉砷醇、二硫化二砷 (As2 S2 )和As4S4等砷化物对各种血液肿瘤细胞和许多实体瘤细胞均有诱导凋亡和 或抑制其生长作用。As2 O3 治疗多发性骨髓瘤、慢性粒细胞白血病、骨髓增生异常综合征、原发性肝癌等某些实体瘤Ⅱ期临床研究均获得一定疗效。     

肿瘤表观遗传学研究热点的聚类分析

[目的]以Web of Science中的SCIE数据库为数据来源,分析肿瘤表观遗传学热点研究问题以及研究趋势.[方法]从SCIE数据库收录的肿瘤表观遗传学研究文献提取了相关的题录信息和研究关键词,利用SPSS18.0软件进行共词聚类分析,提取高频主题词,生成共现矩阵、共词聚类.[结果] 2003～2007年的聚类前5类类团分别为肿瘤表观遗传、继承、DAN甲基化、表观遗传过程和组蛋白修饰;而2008～2012年的聚类前7类类团分别肿瘤表观遗传、非编码RNA、DAN甲基化、组蛋白修饰、低甲基化、表观遗传过程和组蛋白乙方酰化,说明表观遗传、低甲基化与肿瘤表观遗传、肿瘤表观遗传过程以及组蛋白修饰与肿瘤表观遗传已经成为肿瘤表观遗传学研究领域的研究热点,也是肿瘤表观遗传学研究学者比较关注的内容.[结论]肿瘤表观遗传学的研究目前除了对肿瘤表观遗传过程、印记丢失等方面进行分析之外,主要侧重于肿瘤表观遗传学的形成原因分析,具体包括低甲基化与肿瘤的发生、组蛋白修饰与肿瘤的发生以及非编码RNA与肿瘤的发生研究.肿瘤表观遗传学的研究正由原来单一化、表面化的研究逐渐转向深层次、复杂化的研究.     

三氧化二砷作用机制研究进展

砷化合物在我国作为药物应用已有2400多年的历史了。自从20世纪90年代,我国学者应用三氧化二砷（As2O3）治疗急性早幼粒细胞性白血病并获得成功以来,人们对砷化合物进行了深入的研究,发现As2O3不仅对各型白血病有效,对其他多种恶性肿瘤也有良好的治疗效果。As2O3主要是通过抑制肿瘤细胞生长和肿瘤新生血管形成、诱导肿瘤细胞部分分化和凋亡等发挥抗肿瘤作用的。本文不仅对上述问题进行总结,还展望了新发展起来的基因表达谱分析技术--基因芯片技术在研究As2O3作用机制方面的应用前景。     

开展以遗传学类型分类骨髓增生异常综合征的针对性治疗研究

 骨髓增生异常综合征（MDS）是一组起源于造血干（祖）细胞的克隆性异质性疾患,其异质性不仅表现在外周血和骨髓象上,也表现在细胞遗传学、病程、转归和对治疗的反应上。MDS遗传学分型应是一种能反映疾病本质的分型方法。国内应开展MDS遗传学分型的生物学特征研究,以MDS遗传学分型指导MDS的临床分型治疗,提高其临床疗效。     

高级别脑胶质瘤放疗剂量分割研究现状及进展

高级别脑胶质瘤恶性度高,手术加术后常规放疗及化疗综合治疗是目前标准治疗方案,但疗效仍未见明显改善。研究显示高级别脑胶质瘤对放疗敏感度差,这就需要探索不同放疗分割模式的获益可能,为改善高级别脑胶质瘤患者的预后,近年来不少学者在放射治疗分割方式方面做了大量研究。本文就脑胶质瘤放疗剂量分割现状及其疗效作一总结。     

Glycosylation interference on RhoA activation: Focus on G-CSF

Glycosylation of cytokines appears to be responsible for several differences in their activity, and focusing on G-CSF, several divergences between the non-glycosylated G-CSF, Filgrastim, and the glycosylated G-CSF, Lenograstim, have been reported. To verify the role of G-CSF glycosylation in mediating these differences we tested in vitro the effects on the RhoA activation of the different G-CSFs, including deglycosylated Lenograstim. The results showed that Filgrastim induced sustained-RhoA activation while Lenograstim did not do so. Deglycosylated Lenograstim mimicked Filgrastim, resulting in RhoA hyper-activation. These in vitro findings demonstrate that the glycosylation of G-CSF plays a crucial role in RhoA activation.     

盼生安体外对肝癌细胞株的作用研究

目的 :研究盼生安对BEL 740 2肝癌细胞的抗肿瘤作用。方法 :以 5 -氟尿嘧啶 ( 5 FU)作为阳性对照药物观察盼生安对BEL 740 2肝癌细胞存活曲线、生长曲线和有丝分裂指数的影响 ,应用FACS观察该药物对细胞周期的影响。应用FADU法测定该药对DNA的损伤作用。结果 :盼生安对肝癌细胞 5 0 %的抑制浓度 (IC50 )为 40μg /mL,可明显抑制人肝癌细胞生长 ,其细胞毒作用为 5 FU的 1/67,对肝癌细胞的有丝分裂指数有明显抑制作用 ,可将细胞阻滞于细胞周期的G1/G0 期 ,持续用药 2 0h后出现G1/G0 期的积聚 ,到 2 4h可高达82 9%。盼生安各剂量组间Qd值差异均无统计学意义 ,P >0 0 5 ,故认为不造成DNA损伤。结论 :盼生安是周期特异性药物 ,通过将细胞阻滞于G1/G0 期而抑制其增殖。其抗增殖作用与DNA损伤无关