FHIT、Survivin基因在食管癌组织中的表达及相关性研究

目的研究FHIT和Survivin基因在食管癌组织中的表达及其与临床病理指标的关系,并探讨其在食管癌发生、发展中的作用。方法采用逆转录多聚酶链反应技术检测FHIT和Survivin基因在癌组织及相应癌旁组织和正常食管组织中的表达情况并分析它们与食管癌临床病理指标的关系。结果癌组织、癌旁组织及正常对照组中FHIT缺失率分别为82．0％、22．0％、16．7％;Survivin阳性率分别为72．O％、2．O％和0％。随着临床分期越晚,FHIT缺失率、Survivin阳性率呈增高趋势;并且在高分化、中分化和低分化鳞癌中FHIT缺失率、Survivin阳性率也呈逐渐增高趋势。在有淋巴结转移与无淋巴结转移的癌组织中FHIT缺失率、Survivin阳性率的差别有显著意义。结论Survivin和FHIT在食管癌中的表达与食管癌的发生、发展有关,两种基因的表达呈负相关。FHIT和Survivin的表达与食管癌患者的年龄,性别无相关性。     

Survivin和b-FGF在食管癌中的表达及临床意义

目的探讨Survivin与b-FGF在食管癌中的表达度临床意义。方法采用免疫组织化学法检测60例食管癌和30倒食管炎组织中Survivin和b—FGF的表达。结果食管癌中Survivin和b-FGF的阳性表达率分别为78．33％和65．00%。明显高于对照组（食管炎组织）（P〈0．05）；Survivin、b—FGF在中晚期食管癌中的阳性表达比早期显著升高（P〈0．05），而与食管癌的组织学类型、病理分级无关（P〉0．05）；Survivin与b-FGF在食管癌中的表达呈正相关（P〈0．05，f=0．364）。结论Survivin和b-FGF可能在食管癌的发生发展中起关键作用，二者与食管癌的临床病理分期密切相关，二者联合检测对食管癌的诊断有一定价值。     

Survivin和Prohibitin在食管癌中的表达及意义

食管癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一,其发生发展不仅有细胞的过度增值,同时还存在细胞凋亡异常。研究表明,有多种癌基因参与细胞凋亡的调控。     

凋亡抑制蛋白Livin在食管癌表达的实验研究

目的 探讨食管癌发生、发展过程中凋亡抑制蛋白Livin的表达及其与食管癌临床病理特征的关系.方法 采用实时定量PCR法及蛋白免疫印迹法检测Livin在正常食管黏膜(10例)、不典型增生(10例)、原位癌(10例)及浸润癌(10例)组织中mRNA及蛋白的表达强度.结果 Livin mRNA在正常食管黏膜、不典型增生、原位癌及浸润癌组织中呈渐进性高表达[分别为1.00±0.00、2.26±0.79、7.24±1.06、12.21±2.47],原位癌、浸润癌与正常食管黏膜组织比较,差异有统计学意义(P均<0.05).结论 Livin与食管癌的发生、发展密切相关,有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点.     

凋亡抑制蛋白Livin在食管癌表达的实验研究

Objective To detect the expression of apoptotic inhibitor protein Livin in different esophageal epithelial lesions and to analyze the relation between the expression of Livin with pathologic characteristics. Methods The expressions of Livin mRNA and Livin protein were detected by real- time fluorescence quantitative PCR and western blot in 40 patients with different esophageal epithelial lesions including normal, atypical hyperplasia, carcino-ma in stiu and invasive carcinoma. Results The expressions of Livin mRNA were progressively increased from nor-mal to invasive carcinoma( 1.00 ± 0. 00,2.26 ± 0.79,7.24 ± 1.06,12.21 ± 2.47 ). There was statistical signifi-cance in Livin mRNA expression among carcinoma in stiu and invasive carcinoma and normal tissues ( P < 0.05 ). Conclusion The expression of Livin is significantly related to the progression of esophageal cancer,which may be a new target for diagnosis and gene treatment of esophageal carcinoma.     

食管癌组织中Survivin蛋白的表达及临床意义

目的探讨凋亡抑制蛋白Survivin在食管癌中的表达及其与临床病理参数的关系。方法应用免疫组织化学方法检测35例食管癌组织,5例正常食管部组织及12例癌旁组织中Survivin蛋白的表达。结果 35例食管癌标本100%呈现为Survivin阳性表达,而5例正常食管部组织及12例癌旁组织中仅1例Survivin呈弱阳性表达。Survivin阳性表达与食管癌组织学类型无明显相关。癌组织中Survivin细胞平均光密度与正常组织中存在显著性差异（P〈0.05）,正常组织中Survivin细胞平均光密度与癌旁组织无显著性差异（P〉0.05）。结论 Survivin基因在食管癌组织中高表达可能通过抑制细胞凋亡而在食管癌的发生发展中发挥一定作用。     

食管癌组织中Survivin蛋白的表达及其意义

目的 探讨Survivin蛋白在食管癌组织中的表达和,临床意义.方法采用免疫组化方法检测61例食管鳞癌手术切除标本及26例癌旁组织的Survivin蛋白表达情况.结果食管鳞癌组织Survivin阳性表达率为60.7%(37/61);Survivin表达与肿瘤病理分级、浸润深度、临床分期、淋巴结转移和患者生存期有明显相关性(均P<0.01).结论 Survivin的表达可以作为判断食管癌恶性潜能的重要生物学指标,对于临床选择高危复发病例给予积极治疗、提高预后水平具有重要意义.     

Livin和Survivin基因在成人急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

本研究旨在探讨凋亡抑制蛋白家族成员livin和survivin基因在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)中的基因表达及其临床意义。应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测95例成人ALL患者(包括52例初治ALL患者,23例治疗后复发的ALL患者以及20例完全缓解的ALL患者)骨髓中和20例健康者外周血中的livin和survivinmRNA表达情况。结果表明,成人ALL患者初治组、复发组中livin和survivin的表达均明显高于缓解组和正常对照组;初治成人ALL患者中,livin和survivin的表达与否与患者的年龄、性别、分型、初诊时白细胞水平均无明显相关;初治成人ALL患者中,livin、survivin表达阳性的患者缓解率明显低于表达阴性的患者;livin和survivin在成人ALL初治组中的表达无明显相关性。结论:livin和survivin可能参与成人ALL的发生与发展;livin和survivin高表达可能是成人ALL预后不良指标;livin和survivin在成人ALL中可能没有协同表达作用。     

抗凋零基因Bcl-2产物在食管癌中的表达及意义

抗凋零基因Bcl－2可抑制细胞凋零，促进细胞增殖，与肿瘤发生密切相关。作者利用免疫组织化学方法观察了63例食管疾组织中Bcl-2基因产物的表达情况，结果发现Bcl-2的阳性表达率为60．3％，明显高于癌旁组织（P＜0．05），其表达与食管癌淋巴结转移显著相关（P＜0．05），且与肿瘤分化程度有关（P＜0．05）。结果提示Bcl－2基因可能参与食管癌的发生发展过程，其表达可作为检测患者预后的参考指标。     

抗凋零基因Bcl—2产物在食管癌中的表达及意义

抗凋零基因Ｂｃｌ－２可抑制细胞凋零，促进细胞增殖，与肿瘤发生密切相关，作者利用免疫组织化学方法观察了６３例食管癌组织中Ｂｃｌ－２基因产物的表达情况，结果发现Ｂｃｌ－２的阳性表达率为６０．３％，明显高于癌旁组织（Ｐ〈０．０５），其表达与食管癌淋巴结转移显著相关（Ｐ〈０．０５），且与肿瘤分化程度有关（Ｐ〈０．０５）。结果提示Ｂｃｌ－２基因可能参与食管癌的发生发展过程，其表达可作为检测患者预后后的参考指     

大肠癌中Livin和Survivin的表达及相关性研究

目的探讨大肠癌中Livin和Survivin的表达及相关性。方法选择40例经病理检查证实的大肠癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,采用免疫组化sP法检测组织中Livin和Survivin蛋白的表达,并采用Pearson相关分析法分析大肠癌组织中Livin和Survivin的相关性。结果大肠癌组织中Livin蛋白的阳性表达率为75％,Survivin蛋白的阳性表达率为70％,均高于癌旁组织的阳性表达率（分别为20．0％和2．5％）,差异有统计学意义（P〈0．05）;Livin和Survivin在大肠癌组织中的表达有关（P〈0．05）。结论Livin和Survivin在大肠癌中具有协同作用,联合检测Livin及Survivin蛋白具有重要的临床意义。     

凋亡抑制因子Livin和Survivin在大肠癌组织中的表达及预后判断价值

目的分析凋亡抑制因子Livin和Survivin在大肠癌组织中的表达及其判断预后的价值。方法选取我院2003年1月～12月手术切除并经病理证实、资料完整的61例大肠癌、17例癌旁组织及32例良性肿瘤标本的存档蜡块,应用免疫组化Elivision法检测Livin和Survivin的基因表达,分析两者与大肠癌患者生存率的关系。结果 Livin和Survivin在大肠癌组织中的阳性率明显高于癌旁组织和良性肿瘤(P<0.01,P<0.05);在复发或转移的大肠癌病例标本中Livin阳性表达率高于无复发或转移者(P<0.05)。Livin和Survivin在大肠癌组织中的表达不具有相关性(P>0.05)。Livin阳性者5年生存率低于Livin阴性者(P<0.05);Survivin阳性者5年生存率低于Survivin阴性者(P<0.05)。大肠癌患者生存率与Livin和Survivin的阳性表达呈负相关(P<0.05)。结论 Livin和Survivin均高表达于大肠癌组织中,可能对大肠癌的发生、发展有促进作用,有望作为肿瘤标记物用于判断大肠癌的预后;Livin与患者术后的复发、转移及预后关系更为密切。     

Expression of livin in gastric cancer and induction of apoptosis in SGC-7901 cells by shRNA-mediated silencing of livin gene

Background

Because of increased resistance to apoptosis in tumor cells, inhibition of specific anti-apoptotic factors may provide a rational approach for the development of novel therapeutic strategies. Livin, a novel inhibitor of apoptosis protein family, has been found to be expressed in various malignancies and is suggested to have poorly prognostic significance. However, no data are available concerning the significance of livin in gastric cancer. In this study, we detected the expression of livin in human gastric carcinoma and investigated the apoptotic susceptibility of SGC – 7901 cell by shRNA-mediated silencing of the livin gene.

Methods

The mRNA and protein expression of livin were analyzed by RT-PCR and western blot assay. The relationship between livin expression and clinical pathologic parameters was investigated. The small interfering RNA eukaryotic expression vector specific to livin was constructed by gene recombination, and the nucleic acid was sequenced. Then it was transfected into SGC-7901 cells by Lipofectamin 2000. RT-PCR and Western blot assay were used to validate gene-silencing efficiency of livin in SGC-7901 cells. Stable clones were obtained by G418 screening. The cell apoptosis was assessed by flow cytometry (FCM). Cell growth state and 50 % inhibition concentration (IC50) of 5-FU and cisplatin was determined by MTT method.

Results

The expression of livin mRNA and protein were detected in 19 of 40 gastric carcinoma cases (47.5%) and SGC-7901 cells. No expression of livin was detected in tumor adjacent tissues and benign gastric lesion. The positive correlation was found between livin expression and poor differentiation of tumors as well as lymph node metastases (P < 0.05). Four small interfering RNA eukaryotic expression vector specific to livin were constructed by gene recombination. And one of them can efficiently decrease the expression of livin, the inhibition of the gene was not less than 70% (P < 0.01). The recombinated plasmids were extracted and transfected gastric cancer cells. The stable clones were obtained by G418 screening, and were amplified and cultured. When livin gene was silenced, the reproductive activity of the gastric cancer cells was significantly lower than the control groups(P < 0.05). The study also showed that IC50 of 5-Fu and cisplatin on gastric cancer cells treated by shRNA was decreased and the cells were more susceptible to proapoptotic stimuli (5-Fu and cisplatin) (P < 0.01).

Conclusions

Livin is overexpressed in gastric carcinoma with a relationship to tumor differentiation and lymph node metastases, which is suggested to be one of the molecular prognostic factors for some cases of gastric cancer. ShRNA can inhibit livin expression in SGC-7901 cells and induce cell apoptosis. Livin may serve as a new target for apoptosis-inducing therapy of gastric cancer.     

HIF-lα、Caspase-3、Survivin蛋白的表达与食管鳞癌发生关系的研究

目的 研究缺氧诱导因子-lα(HIF-la),Caspase-3,Survivin在食管癌的发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测49例食管鳞癌中HIF-lα、Caspase-3、Survivin蛋白的表达.结果 HIF-lα蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为51.0%(25/49),显著高于正常食管黏膜0(0/32)(P＜0.05);Caspase-3蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为34.7%(17/49),显著低于癌旁正常黏膜100%(32/32)(P＜0.05);Survivin蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为57.1%(28/49),显著高于癌旁正常黏膜6.3%(2/32)(P＜0.05).结论 HIF-lα蛋白Survivin蛋白的高表达和Caspase-3蛋白的低表达,在食管鳞癌发生、发展中起重要作用,HIF-lα蛋白的阳性表达可能下调下Caspase-3蛋白的表达,使Survivin蛋白的表达增加.联合检测HIF-lα、Caspase-3与Survivin可作为判断食管癌生物学行为的客观指标,对判断食管癌的预后具有重要意义.     

mPEG-CS纳米粒介导livinshRNA基因纳米复合物的制备及转染效率

背景:作为非病毒基因转染载体,由可降解的高聚物形成的纳米载体目前被广泛由于基因转染,因为他们具有良好的缓释性,靶向性和生物相容性。目的:制备mPEG-CS纳米粒,探讨mPEG-CS作为Livin shRNA基因转染载体的可行性。方法:通过离子交联法制备mPEG-CS纳米粒,利用聚乙二醇对壳聚糖进行改性,通过静电吸附法制备载livin shRNA的基因纳米复合物。Zeta-size分析仪和透射电镜检测空白纳米粒和载livin shRNA的基因纳米复合物的形态、粒径和zeta电位,测定基因纳米复合物的包封率,凝胶电泳阻滞实验和DNase I酶消化实验验证纳米粒对基因的保护作用。利用最佳条件下制备的基因纳米复合物,转染大肠癌HT-29细胞,考察转染效率。结果及结论:成功制备出约60nm的mPEG-CS纳米粒,当纳米粒与基因体积比为3∶1时,得到的基因纳米复合物形较规则,粒径100nm左右;其包封率为(94.32±0.35)%。凝胶电泳阻滞实验表明纳米粒能够紧密结合DNA,对基因具有良好的基因保护作用。该基因纳米复合物转染大肠癌细胞的转染效率高,持续作用时间长。mPEG-CS纳米粒作为基因转染载体,对基因具有保护作用,能够将livin shRNA重组质粒高效转染入大肠癌细胞,能够在大肠癌细胞内长时间表达,克服了RNA干扰在基因治疗肿瘤中基因作用时间较短的缺点。     

Survivin和Caspase-3在人类大肠腺瘤及大肠癌中的表达以及与凋亡的关系

目的 评价大肠腺瘤及大肠癌组织中Survivin和Caspase-3的表达情况以及与细胞凋亡的关系。方法 采用免疫组化二步法，对48例无术前放、化疗史的大肠癌患者的手术标本，20例正常大肠黏膜和25例腺瘤标本。进行Survivin和Caspase-3检测，并用TUNEL法检测凋亡细胞。结果 Survivin在正常大肠黏膜中无表达，在管状腺瘤、绒毛状和混合型腺瘤及腺癌中的阳性表达分别为10％、33．3％、70．8％。Caspase-3在正常粘膜、管状腺熘、绒毛状和混合型腺瘤及腺癌中的阳性表达分别为95％、60％、53．3％、45．8％。正常黏膜组织Caspase-3的表达高于大肠腺瘤和大肠癌（P〈0．05）。Survivin和Caspaso-3在大肠癌中的表达强度随组织分化程度增高而增强；而在不同的Dukes分期间无显著差异（P〉0．05）。大肠癌组织中Survivin与Caspase-3的表达无直线相关关系，Survivin阳性组凋亡指数明显低于阴性组（P〈0．005）。结论 Survivin在大肠癌发生早期过程中表达上调，有望成为大肠癌新的早期诊断标志物。Survivin作为凋亡抑制蛋白显著抑制癌组织的细胞凋亡，但不能完全抑制Caspase-3的表达。     

Survivin在大肠癌中的表达及其与血管生长因子的相关性研究

目的　检测大肠癌中凋亡抑制基因Survivin的表达,研究其与大肠癌临床特征和血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的相关性,探讨Survivin在大肠癌发生、发展及转移中的作用及机制。方法　收集6 2例大肠癌标本及其病例资料,应用免疫组织化学方法检测Survivin、VEGF、bFGF在大肠癌标本中的表达情况。结果　Survivin、VEGF、bFGF基因在癌旁正常大肠组织中均不表达,在6 2例大肠癌组织中,30例Survivin表达阳性,阳性率为4 8. 39% ,Survivin与大肠癌的Ducks分期密切相关(P <0 .0 0 1)但与病理分化无关(P >0 .0 5 )。2 9例VEGF表达阳性,阳性率4 6 . 18% ,4 5例bFGF表达阳性,阳性率75 . 5 8%。肿瘤局限于黏膜层及黏膜下层和肌层、浆膜层时,VEGF、bFGF表达无明显差异(P >0 . 0 5 ) ,但当肿瘤侵犯到浆膜层和浆膜外时,VEGF、bFGF蛋白表达阳性率明显增高(P<0 . 0 0 1)。淋巴转移组的VEGF、bFGF阳性表达显著高于未发生淋巴转移组(P <0. 0 0 0 1)。结论　Survivin基因、VEGF、bFGF与大肠癌的Ducks分期有密切关系但与病理分化无关,检测Survivin更有意义。