TGF-β_1、TGF-β_2、TGF-β_3蛋白在人牙胚表达的免疫组化研究

目的 :探讨TGF - β1、TGF - β2 、TGF - β3 在人牙齿发育过程中的作用。方法 :采用SP免疫组化方法 ,检测正常引产的胎龄为 4～ 7个月的胎儿颌骨组织切片中TGF - β1、TGF - β2 、TGF - β3 在牙胚中的分布。结果 :TGF - β1、TGF - β3 主要在成釉细胞及成牙本质细胞表达 ,TGF - β2 主要在内釉细胞及成釉细胞表达 ;TGF- β1、TGF - β2 、TGF - β3 在釉结均呈阳性表达。结论 :TGF - β1、TGF - β2 、TGF - β3 是人牙齿发育过程中重要的调节因子 ,参与牙胚细胞分化、基质形成及牙齿形态形成     

牙本质基质蛋白1在人牙胚发育过程中的表达和意义

目的：观察牙本质基质蛋白1(dental matrix protein，DMP1)在人牙胚发育过程中的表达和分布变化，探讨DMP1在人牙齿发育过程中的作用。方法：制备人牙胚发育各期组织标本，采用免疫组织化学方法观察DMP1在人牙胚不同阶段的表达情况。结果：DMP1主要表达于钟状晚期分泌型成牙本质细胞，在前成牙本质细胞、前成釉细胞和牙乳头细胞中表达弱阳性，在成釉细胞中有一过性表达，即在釉基质开始形成但没有形成硬组织时的分泌型成釉细胞中有表达，但在随后的分泌型成釉细胞中表达渐弱至阴性。结论：观察到DMP1在人牙胚发育不同时期的表达和表达变化，提示其可能参与成牙本质细胞和成釉细胞的分化及牙本质形成过程。     

人牙胚发育过程中Smad3的表达变化及其意义

目的：观察转化生长因子β（TGF-β）特异的细胞内信号转导分子Smad3在人牙胚发育过程中的时空表达,探讨Smad3对牙胚发育的作用。方法：运用免疫组化方法观察Smad3在人牙胚发育各期的表达分布和表达变化情况。结果：Smad3在牙胚发育各期均有表达,但表达模式不尽相同,总的趋势是随着成釉细胞和成牙本质细胞的分化成熟而逐渐增强。结论：观察到Smad3在人牙胚发育不同时期的表达及其表达变化,提示Smad3可能在TGF-β调节成釉细胞和成牙本质细胞分化的信号转导过程中发挥一定的作用。     

Smad4在人牙胚发育各期的表达与分布

目的：观察转化生长因子β超家族（transforming growthfactor-βsuperfamily,TGF-β superfamily)细胞因子细胞内共同的信号转导分子Smad4在人牙胚发育过程中的表达与分布变化,探讨Smad4在牙齿发育过程中的作用。方法：制备人牙胚发育各期标本,免疫组化方法观察。结果：Smad4在牙胚发育的各个时期在特异的时空分布模式。结论：首次观察到Smad4信号分子在人牙胚发育过程中的表达,Smad4作为TGF－β超家族细胞内信号分子,可能参与上皮间充质的相互作用,同时也参与成釉细胞和成牙本质细胞的分化以及牙釉质和牙本质的形成。     

釉质溶解素在人和大鼠牙胚发育过程中的表达

目的：检测釉质溶解素（enamelysin)mRNA在人和大鼠牙胚发育不同时期的表达,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法：采用原位杂交法。结果：人牙胚钟状早期未见釉质溶解素mRNA;钟状晚期,成釉细胞和成牙本质细胞表达阳性。釉质溶解素mRNA在大鼠牙齿发育早期表达阴性,在钟状晚期成釉细胞和成牙本质细胞表达阳性。结论：釉质溶解素m RNA在牙齿发育过程中的表达有时空特异性,提示它可能参与釉质和牙本质的形成。     

TGF-β1调控小鼠成釉细胞Amelotin基因表达的研究

目的：探讨TGF-β1对Amelotin基因表达的影响及作用机制。方法：通过实时定量RT-PCR法观察TGF-β1对釉成熟蛋白（Amelotin）基因表达的影响;利用TGFBR1小RNA干扰（siRNA）技术阻断TGF-β受体I（TGFBR1）表达,或在成釉细胞中过表达活化型TGF-β受体I（T204D）,观察Amelotin基因表达的改变;利用双荧光素酶基因报告系统观察TGF-β1和T204D对成釉细胞Amelotin启动子转录活性的调控作用。结果：TGF-β1刺激成釉细胞后,Amelotin基因表达显著增强;利用小RNA干扰技术使TGFBR1基因沉默,实时定量RT-PCR显示TGF-β1调控Amelotin基因表达的作用减弱,而pCDNA3.1-T204D转染成釉细胞促进了Amelotin基因表达。将pGL3-Amelotin启动子转染成釉细胞,并用TGF-β1刺激成釉细胞,Amelotin启动子的转录活性明显增强。TGFBR1小RNA干扰阻断了TGF-β1诱导的Amelotin启动子转录活性,而将pGL3-Amelotin与T204D共转染成釉细胞后,促进了Amelotin启动子的转录活性。结论：在牙釉质发育过程中,TGF-β1和活化型TGFBR1信号通路调控成釉细胞Amelotin基因表达。     

细胞外基质磷酸糖蛋白在小鼠牙齿发育过程中的表达

目的:观察细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)在小鼠牙齿发育过程中牙胚和牙周组织中的表达变化,初步探讨MEPE在小鼠牙齿发育过程中可能发生的作用.方法:免疫组织化学染色法观察MEPE在小鼠牙齿发育过程中牙胚和牙周组织的表达变化.结果:牙胚发育早期,MEPE在成釉细胞、成牙本质细胞和牙髓组织中均有表达.随着牙胚的发育,MEPE在上述细胞中的表达逐步减弱,在牙周膜中逐渐表达.在前期牙本质中表达.牙胚发育完成后,MEPE在牙周膜,特别是成熟牙槽骨骨陷窝中的骨细胞中呈现高表达.结论:细胞外基质磷酸糖蛋白可能在牙齿硬组织形成、牙周膜的形成和稳定等方面发挥重要作用.     

Runx2/cbfal在人牙胚发育过程中的表达

观察核心因子Runx2/cbfal在人牙胚发育过程中的表达,探讨cbfal在牙齿发育过程中的作用.方法：制备人牙胚发育各期标本,免疫荧光法观察cbfal在人牙胚发育过程中的表达情况.结果：在牙胚发育的不同时期均可见不同的时空表达模式.蕾状期表达比较广泛;帽状期内外釉上皮细胞和牙囊中呈强阳性表达,中间层也为强阳性,牙乳头为弱阳性;钟状早期,前成牙本质细胞处有强阳性表达;钟状中后期,成釉细胞为强阳性,成牙本质细胞为阴性,而牙囊部位仍为强阳性.结论：Runx2/cbfal转录因子在人牙胚整个发育过程中的表达状况,提示该因子可能在牙胚各期的发育起一定作用,参与了各种成牙相关细胞的分化和硬组织的形成.     

牙本质磷蛋白在人牙胚发育中的原位杂交研究

目的：观察牙本质磷蛋白（DPP）基因在人牙胚组织发育过程中的表达，探讨其在牙齿发育中的作用。方法：采用原位杂交的方法，检测帽状期、钟状期牙胚组织DPPmRNA的表达。结果：人牙胚帽状期、钟状早期均未检测到DPPmRNA的表达，在钟状晚期前期牙本质形成时成牙本质细胞、前成釉细胞中呈阳性表达。结论：牙本质磷蛋白基因的转录具有明显的的时空特异性，它可能在牙体硬组织的形成中起重要的作用。     

Runx2/cbfa1在人牙胚发育过程中的表达

观察核心因子Runx2/cbfa1在人牙胚发育过程中的表达,探讨cbfa1在牙齿发育过程中的作用。方法:制备人牙胚发育各期标本,免疫荧光法观察cbfa1在人牙胚发育过程中的表达情况。结果:在牙胚发育的不同时期均可见不同的时空表达模式。蕾状期表达比较广泛;帽状期内外釉上皮细胞和牙囊中呈强阳性表达,中间层也为强阳性,牙乳头为弱阳性;钟状早期,前成牙本质细胞处有强阳性表达;钟状中后期,成釉细胞为强阳性,成牙本质细胞为阴性,而牙囊部位仍为强阳性。结论:Runx2/cbfa1转录因子在人牙胚整个发育过程中的表达状况,提示该因子可能在牙胚各期的发育起一定作用,参与了各种成牙相关细胞的分化和硬组织的形成。     

牙本质涎磷蛋白在小鼠牙胚表达的原位杂交研究

目的 :探讨牙本质涎磷蛋白 (dentinsialophosphoprotein ,DSPP)mRNA在牙齿发育过程中的作用。方法 :采用原位杂交技术 ,观测小鼠牙齿发育各阶段标本中DSPPmRNA的表达。结果 :DSPP在成牙本质细胞的表达始于钟状中期 ,并贯穿以后的各个时期 ;此阶段 ,它还在前成釉细胞及成釉细胞中具有一过性表达。结论 :DSPP在牙胚发育过程中的表达具有时空特异性 ;它可能在牙齿的形成中具有重要作用     

转化生长因子β(TGF-β)受体在人牙胚中的分布及意义

目的 :探讨TGF - β受体在人牙胚发育过程中的表达和意义。方法 :采用免疫组织化学方法观察TGF - β受体在人牙胚发育过程中的表达情况。结果 :人钟状期TGF - βⅠ型、Ⅱ 型受体在内釉细胞、外釉细胞、牙乳头细胞中染色阳性 ;正在分泌硬组织基质的成牙本质细胞和成釉细胞TGF - βⅠ型、Ⅱ 型受体呈强阳性表达 ;Ⅲ 型受体在前成釉细胞、外釉细胞、牙乳头细胞、成牙本质细胞、成釉细胞以及牙囊中呈弱阳性表达。结论 :TGF - β受体参与了牙胚发育。     

人牙胚发育过程中Smad2分子的表达与分布变化

目的 观察转化生长因子β（transforming growth factor－β，TGF－β）特异的细胞内信号转导分子Smad2在人牙胚发育过程中的表达与分布变化，探讨Smad2在牙发育过程中的作用。方法 制备人牙胚发育各期标本，免疫组化方法检测Smad2分子的表达。结果 Smad2在牙胚发育的各个时期存在特异的时空分布模式，其分布与TGF－β有相似之处。结论 首次观察到Smad2信号分子在人牙胚发育过程中的表达，Smad2作为TGF－β细胞内信号分子，可能参与上皮－间充质的信号诱导，同时也参与成釉细胞和成牙本质细胞的分化本质细胞原分化以及牙釉质和牙本质的形成。     

Notch 1信号蛋白在大鼠牙胚发育中的免疫组化表达研究

目的通过检测大鼠牙胚发育不同阶段Notch1信号的表达情况，探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法采用免疫组织化学染色技术观测大鼠孕期12、14、16、17、18、19d和出生后1、3、5、7、9d牙胚中Notch1的表达。结果Notch1的表达始于钟状中期。在钟状中晚期，Notch1的表达在牙乳头间充质、成牙本质细胞层呈弱阳性。在内釉细胞层呈阳性。牙体组织形成开始，Notch1则在成釉细胞的中间层有反复表达，在成牙本质细胞层中有一过性表达。牙齿萌出后，该信号在成牙本质细胞和成釉细胞表达均为阴性。结论Notch1在牙胚发育过程中与成釉细胞分化有关，它可能在牙齿发育早期基质触发前成釉细胞向成釉细胞分化中起重要作用。     

转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的表达和意义

目的：探讨转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的时空表达和对牙胚发育的影响。方法：建立小鼠牙胚发育模型，用免疫组织化学检测转化生长因子βⅠ型受体（ＴβＲ－Ⅰ）、Ⅱ型受体（ＴβＲ－Ⅱ）、Ⅲ型受体（ＴβＲ－Ⅲ）在牙胚发育中的表达。结果：转化生长因子βⅠ型受体、Ⅱ型受体在牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状期以及硬组织形成期均有表达，且随着成釉细胞和成牙本质细胞的逐渐成熟，表达增加，其中Ⅰ型受体比Ⅱ型受体表达量多，Ⅲ型受体仅在蕾状期的成釉器上皮和钟状期的内外釉上皮、牙囊有弱表达。结论：转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的时空表达与成釉细胞、成牙本质细胞的分化密切相关。     

小鼠牙胚发育过程中PHEX基因的时空表达模式研究

目的:研究PHEX在Balb/c小鼠牙胚发育过程中的时空表达模式,探讨其在牙齿发育过程中的作用.方法:采用免疫组织化学方法检测小鼠牙胚发育各时期中PHEX蛋白的表达.结果:PHEX在蕾状期无表达;帽状期的内、外釉上皮细胞和牙囊细胞中,PHEX有零星的弱阳性表达;钟状早期,PHEX主要表达在内釉上皮细胞和牙囊细胞,外釉上皮层、中间层细胞和靠近基底膜的牙乳头细胞中也有少量表达.钟状晚期,PHEX在成釉细胞和成牙本质细胞中的表达随着牙胚的发育而增强.釉结中成釉细胞的阳性表达程度比其他部位的成釉细胞更强.颈环处的内釉上皮细胞有PHEX的表达,而邻近的牙乳头细胞和外釉上皮细胞中无表达.结论:PHEX在牙胚的发育中有特定的时空表达模式,提示其参与了牙胚的形成发生和矿化.     

转化生长因子β1 mRNA在鼠磨牙形态发生过程中表达的研究

目的 探讨转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）mRNA在鼠磨牙形态发生过程中的表达及其意义。方法 制备鼠磨牙各发育阶段标本,用原位杂交法分析TGF-β1mRNA在牙胚中的表达与分布。结果 TGF-β1 mRNA在鼠磨牙形态发生过程中以时间和空间上特异的模式来表达。TGF-β1 mRNA在成釉细胞层和牙乳头细胞中很丰富,TGF-β1在成牙本质细胞和成釉细胞层的表达随这些细胞的分化程度而增高。结论 TGF-β1在牙形成过程中通过旁分泌和自分泌机制发挥重要作用。     

氟对体外培养人牙胚TGF-β1表达影响的实验研究

目的研究氟对牙胚发育早期TGF-β1表达的影响。方法应用牙胚体外培养模型,观察低剂量(20mg/L)和中剂量(50mg/L)的氟作用于分泌前期牙胚后,TGF-β1表达情况的变化。采用图像分析仪对免疫组化染色结果进行灰度分析,并对灰度值进行统计学检验。结果在分泌前期TGF-β1的表达主要在造釉器,在20mg/L、50mg/L的氟条件下从培养第4天开始TGF-β1的表达显著降低。结论在牙胚发育早期,TGF-β1主要在上皮表达,TGF-β1可能通过旁分泌和自分泌来调节内釉上皮细胞、牙乳头细胞的分化及基质的合成与分泌,低剂量和中剂量的氟显著抑制TGF-β1的表达,提示氟可能通过抑制TGF-β1的表达而抑制了内釉上皮细胞和牙乳头细胞的分化及随后的基质合成与分泌。     

成釉蛋白在小鼠牙胚发育不同时期的免疫组化定位

目的：观察成釉蛋白（ameloblastin,AMBN)在小鼠牙胚发育不同时期的表达和分布情况。方法：采用免疫组化的方法观察AMBN在小鼠牙胚不同时期的表达和定位。结果：蕾状期、帽状期和钟状早期牙胚中未见AMBN的表达；出生后1d钟状期，在成釉细胞和釉基质中呈强阳性表达，成牙本质细胞和牙本质基质中呈弱阳性表达；出生后3d，在成釉细胞胞浆中呈弱阳性表达，在成牙本质细胞中表达阳性，着色较成釉细胞深；出生后7d，AMBN在成釉细胞托姆氏突呈弱阳性表达，其余部位呈阴性表达。在牙胚发育的各个时期，AMBN在外釉细胞、星网层细胞、牙乳头细胞均呈阴性表达。结论：AMBN参与釉基质的形成，可能与牙胚发育中基质形成的信息传递有关。     

氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚中的表达

目的:研究氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚发育过程中的表达及分布,探讨其在牙齿发育过程中的作用.方法:提取小鼠牙胚中的总RNA并制备不同发育阶段的小鼠牙胚标本,应用RT-PCR和免疫荧光染色方法检测CLC-7在小鼠牙胚中的表达及分布.结果:RT-PCR检测发现新生小鼠牙胚有Clcn7 mRNA的表达.免疫荧光染色发现E18小鼠牙胚开始有CLC-7的表达,CLC-7存在于牙胚多种细胞,如内釉上皮层细胞、中间层细胞、星网状层细胞、牙乳头细胞、成釉细胞、成牙本质细胞.结论:CLC-7在小鼠牙胚中呈特异性空间分布,可能参与牙胚发育过程的调节.