骨髓源神经干细胞修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的: 探讨骨髓源神经干细胞用于组织工程化人工神经修复大鼠坐骨神经缺损的治疗效果。方法: 36只Wistar大鼠随机分为3组, 每组12只。A组: 将骨髓源神经干细胞与ECM凝胶混合, 种植于几丁糖神经导管中修复10mm坐骨神经缺损; B组: 仅将ECM凝胶种植于神经导管中; C组: 坐骨神经切下10mm, 翻转180°后缝合。16周后, 行大体观察、神经电生理检测、腓肠肌湿重测定、组织学染色, 免疫组化染色和轴突计数等检查。结果: A组的各项检测指标与C组相近, 明显优于B组, 差异显著(P<0. 05)。结论: 骨髓源神经干细胞可作为周围神经组织工程的种子细胞修复周围神经缺损。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的雪旺细胞对大鼠坐骨神经缺损的修复作用

目的　研究胶质细胞源性神经营养因子 (glialcellline derivesneurotrophicfactor ,GDNF)基因对周围神经断伤后促进轴突再生及神经元的保护作用。方法　应用体外获取的GDNF修饰的雪旺细胞结合细胞外基质凝胶及生物可降解聚乳酸 聚羟基乙酸共聚物管 (polyCDL lactide co glycolide ,PLGA)构建的神经移植复合体 ,修复大鼠坐骨神经的缺损。 2 0只成年Wistar大鼠按桥接物的不同随机分为 4组 ,每组 5只。A组 :细胞外基质凝胶 PLGA管桥接组 ;B组 :雪旺细胞 细胞外基质凝胶 PLGA管桥接组 ;C组 :GDNF基因修饰的雪旺细胞 细胞外基质凝胶 PLGA管桥接组 ;D组 :自体神经桥接组。术后 12周检测运动神经传导速度 ,并进行再生神经的组织形态学观察以及计量学分析。结果　术后 12周 ,坐骨神经的运动神经传导速度 ,轴突数、髓鞘的厚度、神经纤维的直径、神经组织面积的百分比和脊髓前角运动神经元存活率等 ,C组均优于A、B组 (P <0 .0 1) ,而与D组相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论　雪旺细胞的转基因处理可能弥补单纯细胞移植神经营养因子含量的不足 ,而达到与自体神经移植相似的效果。     

雪旺细胞构建人工神经在大鼠长段神经缺损中的修复作用研究

[目的]研究雪旺细胞与PLGA构成的组织工程化人工神经修复大鼠周围神经缺损的效果。[方法]将雪旺细胞接种在内置polyglactin910纤维的PLGA中空管，构建成组织工程人工神经。将60只SD大鼠随机分3组，每组20只，建立大鼠坐骨神经缺损20mm的动物模型。A组用切下的自体神经段原位缝合，B组使用雪旺细胞组织工程人工神经进行修复，C组用未接种雪旺细胞的PLGA中空管进行修复。术后8、12周使用神经电生理和组织学观察分别进行效果评价。[结果]在大体观察、组织学观察中，B组的恢复表现与A组相近。在神经电生理检测、小腿三头肌肌肉重量测定、桥接物横切面神经纤维数量测定的结果分析中B组略低于A组但明显高于C组。B组大鼠桥接段远端辣根过氧化酶示踪后在脊髓前角可以看到被标记的神经元。透射电镜可见B组桥接物中段大量的再生神经纤维。[结论]用雪旺细胞和PLGA构建组织工程人工神经修复大鼠外周神经缺损，可以修复20mm的长段周围神经缺损，并可获得接近于大鼠自体神经修复的效果。     

经诱导的骨髓基质干细胞应用于组织工程化人工神经的实验研究

目的 探讨骨髓基质干细胞应用于组织工程化人工神经修复大鼠10mm长坐骨神经缺损的效果。方法 28只体重在160～200g的雌性F344大鼠随机分成4组，每组7只。A组：种植经诱导5d后的同源骨髓基质干细胞并具有内部支架结构的中空管；B组：种植同源许旺细胞并具有内部支架结构的中空管；C组：无细胞只具有内部支架结构的中空管；D组：自体神经移植组。术后3个月，进行系列神经电生理监测、坐骨神经功能指数测定、神经组织学观察、S—100及神经微丝蛋白兔疫组化染色和轴突计数等检查。结果 术后12周内，实验组(A组)的各项检测指标均优于C组(P＜0．05或0．01)，与B和D组间差异无显著性(P＞0．05)。结论 初步结果显示经诱导的骨髓基质干细胞可作为外周神经组织工程中的种子细胞，并应用于人工神经修复外周神经缺损。     

组织工程化人工神经修复周围神经缺损的实验研究

目的　研究雪旺细胞和生物降解支架材料复合后构建成的组织工程化人工神经修复神经缺损的效果。方法　将雪旺细胞制成 1× 1 0 8/ml的ECM (extracellularmatrix,ECM)凝胶 ,与PLA无纺纤维布复合培养 7d ,置入PLA中空纤维管中 ,构建成组织工程化人工神经。建立大鼠坐骨神经缺损 1 0mm的动物模型 ,A组为人工神经组 ;B组为雪旺细胞复合ECM凝胶组 ;C组为单纯ECM凝胶组 ;D组为自体神经移植组。术后 8周、1 2周 ,行神经电生理和组织学检测评价疗效。结果　术后 1 2周A组的再生神经纤维已越过远端缝合口 ,有髓神经纤维数和神经纤维密度稍差于D组 ,但再生神经组织的面积显著高于后者 ;A、D组的髓鞘厚度和dLAT、NCV、AMP、AREA均无显著差别 ,但明显高于B、C组。结论　雪旺细胞、ECM凝胶和PLA多孔材料与PLA中空纤维管组合后构建成的组织工程化人工神经 ,修复周围神经缺损的效果接近于自体神经移植     

人工神经的研究进展

目的 探讨组织工程化周围神经研制工作中神经导管材料和雪旺细胞移植的有关问题。方法 广泛查阅近年有关人工神经研究方面的文献,重点叙述在桥接神经缺损的移植体和雪旺细胞移植方面的研究进展。结果 硅胶、涤纶、聚四氟乙烯、聚交酯及几丁质等生物材料均可作为桥接神经缺损的神经导管,以可降解的生物材料较为。在神经导管内放置丝状内支架可增加再生轴突通过的距离。雪旺细胞经体外纯化和培养后仍具有生物活性,将雪旺细胞植入     

新型纤维素导管桥接周围神经缺损的研究

目的运用一种新型纤维素材料导管桥接周围神经缺损。方法将原代培养、纯化的Schwann细胞种植入新型复合纤维素导管作为移植物，于大鼠模型上桥接1．0cm坐骨神经缺损。术后1周，扫描电镜观察Schwann细胞在导管内壁的生长情况；术后12周，取桥接物中段,行半薄切片光镜观察及超薄切片电镜观察神经纤维再生状况。结果桥接物植入后1周,Schwann细胞贴附于导管内壁良好生长。植入后12周，管内有大量排列整齐、结构成熟的再生神经纤维。结论新型纤维素组织工程化神经可有效桥接周围神经缺损，该导管材料在医疗中具有广阔的应用前景。     

异体和自体骨髓源神经干细胞周围神经移植实验研究

[目的]研究异体和自体骨髓源性神经十细胞移植于周围神经后神经修复情况，以及所移植神经干细胞能否以分化神经元的形式存活。[方法]取新西兰人白兔骨髓基质细胞(BMSCS)体外培养及诱导分化为神经干细胞，采用Brdu标记细胞和免疫细胞化学SABC法检测观察培养细胞：随机选择同种异体BMSCS移植、自体BMSCS移植和未移植组。[结果]异体和处自体移植区生K的神经纤维均显波纹状排列，神经纤维密度比正常神经低但形态近似，可见有髓神经纤维的郎飞氏结，可见到神经纤维间隙的黏液基质及少量成纤维细胞，但均未见分化神经元样的细胞存在；未移植侧生K的神经纤维稀疏，可见到比较多的断裂和不连续，基质黏液变明显；异体移植组神经纤维生K的走行序列比自体移植组神经纤维紊乱，可见到反应性增生。[结论]异体和白体骨髓源性神经干细胞周围神经缺损区移植均有利于神经纤维的修复，异体比自体移植后神经纤生长较差但差别较小；本方法神经干细胞朱见以分化神经元的形式存活。     

人脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管修复大鼠坐骨神经缺损

目的 探讨诱导后的脐带间充质干细胞作为组织工程种子细胞修复大鼠坐骨神经缺损的可行性.方法 从正常足月新生儿脐带中分离培养间充质干细胞并诱导分化为神经样细胞,与去细胞神经基膜管共培养以构建组织工程神经;用30只健康成年雄性SD大鼠建立坐骨神经缺损(10 mm)的动物模型并随机分成3组:A组为脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管组,B组为单纯去细胞神经基膜管组,C组为自体神经桥接组.术后10周通过神经电生理检测、组织学观察等评测效果.结果 在局部观察和肌肉测量、神经电生理检测、组织学观察等方面,脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管组(A组)神经再生及肢体功能情况良好,效果接近于自体神经桥接组(C组),明显优于单纯去细胞神经基膜管组(B组).结论 脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管构建的组织工程神经可有效促进大鼠坐骨神经缺损(10 mm)的修复.     

犬自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经荧光金逆行示踪标记实验

目的采用荧光金逆行示踪方法来评价自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经修复狗坐骨神经缺损,再生神经的物质运输功能。方法在自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经桥接狗坐骨神经5cm缺损,术后6个月,将5%荧光金(Fluoro-Gold,FG)注射入桥接侧的远段坐骨神经干内,2周后取相应的脊髓节段和背根节进行冰冻切片,并在激光共聚焦显微镜下观察结果,并进行了计量分析。结果桥接侧相应脊髓灰质前角和背根神经节切片中观察到被FG逆行标记的神经元。结论再生神经修复了缺损,恢复了神经干的连续性,再生神经具有良好的物质运输功能。     

亲和素-生物素黏附系统修饰纳米纤维构建组织工程神经的实验研究

目的 观察亲和素-生物素黏附系统(avidin-biotin binding system,ABBS)快速黏附雪旺细胞(SCs)对组织工程神经促进神经再生的影响.方法 以坐骨神经缺损10 mm作为实验模型.取40只Wistar大鼠分成A、B、C、D4组,每组10只.A组:自体神经移植修复组;B组:空白对照组,用聚乳酸己内酮共聚物[ Poly(L-lactic acid-co-epsilon-caprolactone),P(LLA-CL)]支架修复神经缺损;C组:P(LLA-CL)支架上用普通方法黏附雪旺细胞修复神经缺损;D组:P(ILA-CL)支架上用ABBS法黏附雪旺细胞修复神经缺损.术后3个月,检测坐骨神经功能指数、神经传导速度、再生神经轴突及髓鞘厚度,评估ABBS对于促进神经再生的影响.结果 C组与D组的神经修复效果无差别.虽然修复效果不及A组,但是均明显好于没有雪旺细胞的B组.结论 ABBS在动物体内实验中未对组织工程神经促进神经再生造成不利影响,是一种可靠的细胞快速黏附方法.     

三种脱细胞神经修复大鼠坐骨神经缺损效果的比较

目的 比较三种去细胞神经支架修复大鼠坐骨神经缺损效果差异.方法 取大鼠坐骨神经39条,分别用甘油(A组)、叠氮钠(B组)、三硝基甲苯(C组)萃取,每组13条.观察萃取神经结构.用A、B、C三组神经支架修复1.5 cm长的SD大鼠坐骨神经缺损,另设自体神经移植组(D组)和空白对照组(E组),每组10只,术后12周比较五者的修复效果.结果 萃取后A组90%细胞、B、C100%细胞消失,纤维性支架结构A组95%完整;而B、C组仅30%.修复后小腿三头肌湿重、神经电生理A、B、C三组修复大鼠坐骨神经缺损效果相当(P＞0.05),与D、E组比较(P＜0.05)、差异有统计学意义.结论 甘油、叠氮钠、三硝基甲苯等萃取神经可较好地修复坐骨神经缺损,但甘油处理神经最为简单.     

组织工程化人工神经实验研究

目的 研究组织工程化人工神经修复大鼠2.5cm长坐骨神经缺损的效果。方法 21只2月龄Lewis lw雌性大鼠随机分成三个神经移植组,每组7只。A组:种植同源雪旺细胞并具有内部支架结构的胶原神经管,即组织工程化人工神经。B组:无雪旺细胞但具有内部支架结构的胶原神经管。C组:自体神经移植组。术后六个月,进行系列神经电生理监测,神经肌肉组织学观察,S-100和神经微丝蛋白(Neurofilament)免疫组化染色,轴突计数等检查。结果 在A组和C组移植神经上均能诱发出波幅明显的神经肌肉复合动作电位(CMAP),再生轴突已通过移植神经全长,远端肌肉轻度萎缩。而B组中没有或仅记录到极小波幅的CMAP,移植神经远端结缔纤维组织增生,再生轴突罕见,所支配肌肉明显萎缩。结论 初步结果显示:组织工程化人工神经可用来修复大鼠长段神经缺损。     

组织工程化人工神经修复犬盆腔内脏运动神经缺损

目的探讨组织工程化人工神经修复盆腔内脏运动神经缺损的效果,为解决直肠癌手术盆腔植物神经损伤所致性功能障碍的治疗提供新思路和实验依据。方法以密度梯度离心法分离比格犬骨髓间充质干细胞（BMSCs）,体外培养和扩增后备用。制作比格犬盆腔内脏运动神经10mm缺损模型,分3组予以修复。A组：将BMSCs与胶原蛋白海绵混合移植于聚羟基乙酸和聚乳酸共聚物（PLGA）导管中构建组织工程化人工神经桥接盆腔内脏运动神经缺损段;B组：仅将胶原蛋白海绵移植于PLGA导管中桥接神经缺损段;C组：自体神经移植。术后12周移植段神经通过大体观察和免疫组织化学观察及电镜扫描、轴突计数等方法评价各组神经缺损修复的效果。结果术后12周,PLGA导管基本吸收,各组再生神经均能通过缺损区长至神经远端,A组再生神经纤维密度和神经结构与C组相近,均优于B组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论BMSCs与PLGA导管构建组织工程化人工神经用于修复盆腔内脏运动神经缺损效果好,与自体神经移植效果相当。     

组织工程化人工神经修复长段神经缺损实验的初步报告

目的 研究组织化人工神经修复大鼠2．5cm长坐骨神经缺损的效果。方法 90只2个月月龄的Lewis1W雌性大鼠,按手术先后顺序随机分成3个神经移植组,每组30只。A组：用种植同源雪旺细胞并具有内部支架结构的胶原神经管桥接,即组织工程化人工神经组。B组：用无雪旺细胞但具有内部支架结构的胶原神经管桥接,即对照组。C组：自体神经移植组。术后6月,进行神经电生理监测,神经肌肉组织学观察;用S－100和神经微丝蛋白免疫组化染色后,行轴突计数等检测。结果 完成对21只大鼠（每组7只）的实验评估。从A组和C组的胫前肌中均能诱发出波幅明显的神经肌肉复合动作电位（CMAP）,再生轴突已通过移植段神经全长,远端肌肉轻度萎缩。B组中则没有或仅记录到波幅很低的CMAP,移植神经远端结缔纤维组织增生,再生轴突罕见,所支配肌肉明显萎缩。结论 组织工程化人工神经可用来修复大鼠长段神经缺损。     

碱性成纤维细胞生长因子对组织工程化外周神经的影响

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和肝素与乳兔许旺细胞、去细胞基膜管、构成的复合型组织工程化外周神经桥接体修复兔正中神经缺损的效果。　方法　新西兰兔 48只 ,建立左侧上臂正中神经 3 0mm缺损模型 ,随机分为 4组 ,分别用去细胞基膜管种植许旺细胞并复合bFGF及肝素 (Hep)的桥接体 (A组 )、去细胞基膜管种植许旺细胞的桥接体 (B组 )、去细胞基膜管复合bFGF及Hep桥接体 (C组 )、自体神经 (D组 )修复神经缺损 ,于术后 1、3个月分别进行大体观察 ,Masson三色染色光镜观察神经再生、神经内胶原纤维形成及血管形成 ,3个月检测各组桥接体运动神经传导速度 ,并行透射电镜检查 ,称量指浅屈肌肌肉湿重 ,观察神经功能恢复。　结果　去细胞基膜管种植许旺细胞并复合bFGF及Hep的桥接体组 (A组 )神经再生及功能指标 (再生有髓神经纤维密度、平均髓鞘厚度、有髓纤维直径、运动神经传导速度、肌肉湿重恢复率 )与自体神经移植 (D组 )比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。　结论　bFGF及肝素与许旺细胞、去细胞神经基膜管构成的复合型组织工程神经桥接体修复神经缺损能提高神经再生质量。     

Experimental study on the adhesion, migration and three-dimensional growth of Schwann cells on absorbable biological materials

Objective: To study the adhesion, migration and three-dimentional growth of Schwann cells on PLA(polylactic acid) nonspinning fibre cloth and polyglycolic/polylactic acid (PLGA) fibres. Methods: Schwann cells/ECM gel solution and PLA nonspinning fibre cloth and PLGA fibres pretreated by collagen, polylysine and ECM were co-cultured. Then the migration and three-dimensional growth of Schwann cells on the fibres were observed under phase contrast microscope and laser scanning confocal microscope. Results : Schwann cell/ECM solution was compounded with PLA nonspinning fibre cloth. With formation of gel, most Schwann cells resided in the fibre net holes, and adhered to the fibres to form a multiplayerarranged Schwann cell column like Biingner band.Schwann cells could adhere to PLGA fibres and grew and migrated along the fibres. ECM gel could significantly increase the adhering and migrating cell number. Conclusions: ECM gel can facilitate the adhesion,growth and migration of Schwann cells on the seteroframe.It is a good integrating material for tissue engineering bioartificial nerve.     

RGD多肽接枝聚复合导管桥接神经缺损的实验研究

目的 探讨RGD多肽接枝聚/β-TCP/PLA复合神经导管桥接周围神经缺损的治疗效果.方法 45只雄性成年Wister大鼠,随机分为3组,每组15只.切断右侧坐骨神经形成10 mm缺损,A组采用单纯PLA神经导管桥接缺损,B组采用RGD多肽接枝聚/β-TCP/PLA复合神经导管桥接缺损,C组采用自体神经移植.术后12周进行大体观察、电生理、小腿三头肌恢复率、组织学、超微结构等测定.结果 B组运动神经传导速度和肌肉湿重恢复率明显优于A组,差异有统计学意义(P<0.05);B组与C组相近,差异无统计学意义(P>0.05).组织学、超微结构测定发现B、C组神经再生情况明显优于A组.结论 在坐骨神经损伤修复中,RGD多肽接枝聚/β-TCP/PLA复合神经导管桥接修复效果与自体神经移植相近,可作为一种较理想的神经缺损修复材料.     

周围神经组织工程材料的预构

目的　研究具有雪旺细胞 (SC)活性的组织工程周围神经修复材料的构建方法。方法　 1采用干 /湿相转化纺丝法 ,将分子量为 730 k D的聚乳酸 (PL A)制成外径为 2 .3m m、内径为 1.9m m、壁厚 0 .4mm、长4cm、孔隙率为 70 %、孔径为 2 0～ 40 μm的中空纤维管和孔径为 10 0～ 2 0 0 μm、孔隙率为 85 %的 PL A无纺纤维布。2将 SC置入细胞外基质 (ECM)凝胶中 ,观察 SC在 ECM凝胶中的生长。 3SC/ ECM悬液浸入 PL A无纺纤维布中 ,观察 SC在 PL A支架材料中的生长。 4将 SC、SC/ ECM和 SC/ ECM/ PL A置入 PL A中空纤维管中 ,桥接大鼠坐骨神经长 10 mm缺损 ,观察 SC移植后存活情况。结果　 1SC在 ECM凝胶中 ,细胞生长良好 ,1天后开始有细胞伸出两极 ,形态开始展开 ,3天后几乎全部细胞恢复成双极梭形状细胞 ,并开始分裂、增殖 ,直到 14天后随着凝胶的溃解 ,SC开始死亡 ,降解成碎片 ;当 ECM凝胶溃解后 ,加入 DMEM培养基 ,SC游出 ,贴壁生长。2 SC/ ECM悬液浸入 PL A无纺纤维布后 ,大部分细胞随 ECM凝胶状态的形成 ,滞留于 PL A纤维网孔中 ,1天后开始伸出两极 ,3天后可见网孔中大量双极梭形细胞 ,部分细胞沿着纤维生长 ,仅少数细胞脱落于培养瓶底贴壁生长。 3SC移植术后2 1天 ,Brd U免疫组织化学染色发现大量 SC细胞     

构建猕猴组织工程化周围神经的实验研究

目的评价组织工程化周围神经修复猕猴4cm尺神经缺损的实验效果,为临床研究提供资料。方法分别用6种移植物桥接4cm尺神经缺损。A组:自体BMSCs 去细胞同种异体神经支架;B组:自体SCs 去细胞同种异体神经支架;C组:自体BMSCs PLGA支架导管;D组:去细胞同种异体神经支架;E组:PLGA支架导管;F组:自体神经。通过功能学、神经电生理学及组织学研究评价各自的实验效果。结果A、B、C三种组织工程化神经实验组,术后6个月神经电生理和组织学检查,能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组(F组)相比差异无显著性意义(P>0.05),但分别大于未加细胞的支架组(D、E组),差异有显著意义(P<0.05)。结论用自体源SCs或BMSCs作种子细胞与去细胞同种异体神经支架,或自体源BMSCs与PLGA支架导管构建不同的组织工程化周围神经,修复猕猴4cm尺神经缺损均取得较好的效果。