pcDNA3.0/hTH和 pcDNA3.1/hGDNF共转染SH-SY5Y细胞的克隆筛选和鉴定

我们采用多基因表达技术把携带人胶质细胞源性神经营养因子 (ＧＤＮＦ)和酪氨酸羟化酶 (ＴＨ)基因的重组质粒转入ＳＨ ＳＹ5Ｙ细胞中 ,构建同时分泌人ＴＨ和ＧＤＮＦ的工程细胞 ,为探讨双基因治疗帕金森病 (ＰＤ)提供依据 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.实验材料 :ｐｃＤＮＡ3.0 /ｈＴＨ和ｐｃＤＮＡ3.1/ｈＧＤＮＦ重组质粒 (普林斯顿大学崔振中博士构建 )。真核表达载体ｐｃＤＮＡ3.1:5 .6ｋｂ ,非功能区含ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ酶切位点 ,带有抗潮霉素和氨苄青霉素标记基因 ,含有ＣＭＶ启动子和ＳＶ40增强子。细胞培养液 :采用最低…     

神经生长因子和脑源性神经营养因子基因转入雪旺细胞的实验 …

目的 神经生长因子（ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＮＧＦ）和脑源性神经营养因子（ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ,ＢＤＮＦ）是具有感觉和运动神经元营养活性的因子。为提高雪旺细胞（Ｓｃｈｗａｎｎ ｃｅｌｌ,ＳＣ）分泌ＮＧＦ和ＢＤＮＦ的能力,将ＮＧＦ和ＢＤＮＦ基因转入ＳＣ进行探讨。方法 用消化后的组织块法和差速离心法分离、纯化雪旺细胞。用脂质体转染法将ＮＧＦ     

碱性成纤维细胞生长因子与脊髓损伤

脊髓损伤（ｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ,ＳＣＩ）后,有关其神经再生修复作用的研究较多。近年来,众多研究主要集中在神经营养因子的作用方面,如脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）,而发展较快的碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ...     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤后神经元的保护作用

神经营养因子 (ＮＴＦｓ)在神经再生、突触形成以及神经损伤修复过程中起着重要的作用[1] 。胶质细胞源性神经营养因子 (ＧＤＮＦ)是目前发现的活性最强的运动神经元神经营养因子[2 ] 。本实验旨在观察外源性ＧＤＮＦ对大鼠脊髓急性压迫损伤后神经元的保护作用。一、材料与方法1.重组人ＧＤＮＦ、神经生长因子(ＮＧＦ) :第一军医大学神经生物教研室提供 ,纯度大于质量分数 90 % ,浓度为 1ｇ/Ｌ。2 .实验动物及分组 :体重 2 5 0～ 3 0 0ｇ的雄性Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ大鼠 45只 ,随机分为 3组 :生理盐水 (ＳＡＬ)组、ＧＤＮＦ组和ＮＧ…     

重组抗人结肠癌单链抗体的表达与鉴定

我们在构建了抗人结肠癌单链抗体 (ｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎＦｖ ,ｓｃＦｖ)ＣＬ 3的基础上 ,对ｓｃＦｖＣＬ 3在大肠杆菌中的表达及其复性和纯化进行研究 ,为进一步提高ｓｃＦｖ的表达效率 ,使之能用于肿瘤的放射免疫引导外科手术提供依据[1] 。一、材料与方法1.材料 :大肠杆菌ＢＬ2 1(ＤＥ3)细胞系、质粒 ｐＥＴ 5ａ及重组噬菌粒ＰＣＡＮＴＡＢ 5Ｅ ＣＬ 3由中国科学院微生物研究所闫锡蕴研究员提供 ,酶及其他试剂分别购自Ｐｒｏｍｅｇａ等公司。ｓｃＦｖ基因扩增引物由Ｃｙｂｅｒｓｙｎ公司合成。快速蛋白液相层析 (ＦＰＬＣ)蛋白纯化系统…     

人精液中腺相关病毒的检测:病毒感染在男性不育发病机理中有作用吗?

ＲｏｈｄｅＶ ,ＥｒｌｅｓＫ ,ＳａｔｔｌｅｒＨＰｅｔａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｄｅｎｏ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓｉｎｈｕｍａｎｓｅｍｅｎ :ｄｏｅｓｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｐｌａｙａｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｍａｌｅｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ?ＦｅｒｔｉｌＳｔｅｒｉｌ,1999,72 (5) :814- 816　　为评估不育男子精液中腺相关病毒 (Ａｄｅｎｏ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ ,ＡＡＶ)ＤＮＡ和 /或人乳头状瘤病毒 (ＨＰＶ)ＤＮＡ是否是一种可能的致病因素 ,作者收集了 30份男性不育患者及 8份…     

重组白介素2及重组α肿瘤坏死因子对人胎肾小球系膜细胞产生与表达白介素6的研究

重组白介素２及重组α肿瘤坏死因子对人胎肾小球系膜细胞产生与表达白介素６的研究孙林，易著文，虞佩兰，夏家辉ＥＦＦＥＣＴＳＯＦｒＩＬ－２ＡＮＤｒＴＮＦ－ａＯＮＢＩＯＡＣ－ＴＩＶＩＴＹＡＮＤＧＥＮＥＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＩＬ－６ＯＦＦＥ－ＴＡＬＭＣＳｕｎ...     

两种新型IFNα的克隆、表达及其抗骨肉瘤活性

目的 构建两种新型ＩＦＮ突变株及其母体的原核表达系统,表达后对比检测其抗骨肉瘤活性。方法 以重组噬噬菌体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ－ＩＦＮｓ为模板,ＰＣＲ扩增出两种ＩＦＮα１ｃ／８６Ｄ突变株及其母体的ＤＮＡ序列,插入原核表达载体ｐＢＶ３２０３。表达、纯化后进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测其免疫活性、ＭＴＴ比色法对比检测其抗骨肉瘤细胞（ＯＳ７３２）增殖的活性。结果 酶切及ＰＣＲ鉴定     

胶质细胞源性神经营养因子的研究进展

近二十年的研究证实 ,损伤的神经元具有可塑性 ,也能再生 ,而且在神经营养因子 (ＮｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃＦａｃｔｏｒｓ ,ＮＴＦｓ)作用下再生速度及质量都有显著增强[1,2 ,3] ,因而ＮＴＦｓ与神经系统损伤修复的研究已成为神经科学研究领域的一个“热点”。胶质细胞源性神经营养因子 (ＧｌｉａｌＣｅｌｌＬｉｎｅ ｄｅｒｉｖｅｄＮｅｕ ｒｏｔｒｏｐｈｉｃＦａｃｔｏｒ,ＧＤＮＦ)是近来 (1993)发现并已克隆其基因的一种蛋白质 ,该因子是由两个单体通过糖基化二硫键结合成的二体 ,单体由 134个氨基酸组成。它的 7个半胱氨酸残基在分子中的…     

NF-κB及其与肾脏疾病关系研究进展

Ｎ Ｆ－ κ Ｂ是参与基因转录的蛋白质分子,广泛存在于机体各种组织细胞中。当细胞受到外界因素刺激时,胞质内 Ｎ Ｆ－ κ Ｂ 与抑制蛋白（ Ｉκ Ｂｓ） 分离并活化,进入细胞核内与 Ｄ Ｎ Ａ 结合启动基因转录,调节包括细胞因子和炎症介质（ 如 Ｉ Ｌ－ ２ 、 Ｉ Ｌ－ ２ａ、 Ｉ Ｌ－ ６ 、 Ｉ Ｌ－ ８ , Ｖ Ｃ Ａ Ｍ、 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ、 Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ 、 Ｉ Ｆ Ｎ－ β、 Ｍ Ｃ Ｐ－ １ 、 Ｒ Ａ Ｎ Ｔ Ｅ Ｓ等） 在内的众多蛋白质表达,从而参与调节组织细胞的生理、病理反应。在抑制 Ｎ Ｆ－ κ Ｂ 活化的药物, Ｎ Ｆ－ κ Ｂ、细胞因子与肾脏疾病关系方面研究也有一定的进展。     

胶质细胞源性神经营养因子在神经系统损伤后表达变化意义

近二十年的研究表明 ,中枢神经损伤后具有可塑性 ,也能再生 ;并且在神经营养因子 (ＮＴＦｓ)作用下再生速度及质量都有显著增强[1～ 3] ,因而ＮＴＦｓ与神经系统损伤修复的研究已成为神经科学研究领域的一个“热点”。胶质细胞源性神经营养因子 (Ｇｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＧＤＮＦ)是新近 ( 1993)发现并已克隆其基因的一种蛋白质 ,由于它的氨基酸残基的构象与转化生长因子 (ＴＧＦ β)超家族成员相同 ,而且其序列中有近 2 0 %的同源性 ,从结构上看属于ＴＧＦ β超家族远亲[4 ] 。通过…     

前列腺增生组织中血管形成的研究

目的探讨血管形成在良性前列腺增生（ＢＰＨ）发病中作用及其与ｂＦＧＦ、ＰＣＮＡ之间的相关关系。方法应用免疫组化结合计算机图像分析方法检测第Ⅷ因子相关抗原、ｂＦＧＦ和ＰＣＮＡ在１８例正常前列腺（ＮＰ）和６２例ＢＰＨ中的表达及其相关关系。结果ＢＰＨ组织中微血管密度（ＭＶＤ）、ｂＦＧＦ和ＰＣＮＡ指数均显著高于ＮＰ;ＢＰＨ的ＭＶＤ与间质的面积百分比、ｂＦＧＦ表达和ＰＣＮＡ指数均呈正相关,而与上皮面积百分比负相关;ＮＰ的ＭＶＤ仅与间质的ＰＣＮＡ指数正相关。结论血管形成增多与ＢＰＨ的发生、发展有密切关系,尤其对间质细胞增殖、增生的作用更为显著,而ｂＦＧＦ异常表达可能是血管形成增多的主要原因之一。     

GDNF及其对脊髓损伤修复的前景

胶质细胞源性神经营养因子 (Ｇｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ ｄｅｒｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＧＤＮＦ)是近年来发现并已克隆其基因的一种蛋白质 ,最初是由小鼠胶质细胞株Ｂ4 9细胞分离出来 ,在体外能激活鼠胚中脑腹侧多巴胺 (ＤＡ)能神经元摄取ＤＡ ,并能促进神经元存活。该因子是由两个单体通过糖基化二硫键结合成的二体 ,单体由 134个氨基酸组成。它的 7个半胱氨酸残基在分子中的构象与转化生长因子 (ＴＧＦ β)超家族成员相同 ,而且其序列中有近 2 0 %的同源性 ,从结构上看属于ＴＧＦ β超家族远亲[1] 。近来发现其对损…     

肝癌和肝硬化组织中凋亡信号蛋白的表达

凋亡信号蛋白表达异常 ,往往会影响肝细胞凋亡 ,从而引起肝癌。众所周知 :肝硬化同肝癌关系密切。我们采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ免疫印迹法检测凋亡信号蛋白 :Ｆａｓ相关死亡区域蛋白 (ＦＡＤＤ)、肿瘤坏死因子受体相关死亡区域蛋白(ＴＲＡＤＤ)、ＦａｓＬ、Ｆａｓ和核因子 κＢ (ＮＦ κＢ)在肝癌 (ＨＣＣ)和肝硬化 (ＬＣ)组织中的表达 ,探讨它们的表达同ＨＣＣ和ＬＣ的关系。一、对象和方法1.标本 :本院 2 0 0 0年 1月～ 2 0 0 1年4月间 35例原发性肝癌手术切除标本 ,病理诊断均为肝细胞性肝癌。 35例门静脉高压症患者术中肝硬化活检标…     

胆系恶性肿瘤VEGFmRNA、bFGFmRNA、PDGFmRNA表达及意义

肿瘤的生长和转移均需血管生成 ,主要的促血管生成因子有血管内皮生长因子 (ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｏｔｒ ,ＶＥＧＦ)、碱性成纤维细胞生长因子 (ｂａ ｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ ,ｂＦＧＦ)和血小板衍生生长因子 (ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ ,ＰＤＧＦ)。近年研究发现ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ及其ｍＲＮＡ表达与一些恶性肿瘤生物学行为、转移发生及其预后有密切关系〔13〕。作者应用原位杂交染色技术研究胆囊癌和肝外胆管癌组织中ＶＥＧＦ…     

与妇科有关的心身障碍

与妇科有关的心身障碍ＰｓｙｃｈｏｓｏｍａｔｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙＦＡＢＩＯＦＡＣＣＨＩＮＥＴＴＩ，ＫＯＥＮＤＥＭＹＴＴＥＮＡＥＲＥ，ＬＯＲＥＤＡＮＡＦＩＯＲＯＮＩ，ＩＳＡＢＥＬＬＡＮＥＲＩ，ＡＮＤＲＥＡＲ．ＧＥＮ...     

核因子－κB活化在急性胰腺炎发病中的作用

核因子 κＢ(ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ ,ＮＦκＢ)是一类普遍存在、能与多种基因的启动子或增强子κＢ位点发生特异性结合并启动基因转录的蛋白质的总称。现已发现与炎症和免疫反应有关的许多细胞因子、粘附分子基因含κＢ位点 ,ＮＦ κＢ能根据所在细胞的不同 ,通过不同的机制 ,参与这些基因的转录调节[1,2 ] 。急性胰腺炎 (ａｃｕｔｅｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ,ＡＰ)的治疗仍是外科一大难题 ,因其发病机理不甚清楚 ,不能进行针对性治疗 ,所以临床治疗一直无突破性进展。重症ＡＰ有较高的病死率 ,在 2 0 %左右 ,ＡＲＤＳ及…     

核因子—KB在重症感染中的作用及其研究新进展

核因子 ｋＢ(ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ ,ＮＦ ｋＢ)是细胞中一个重要的转录因子 ,它属于转录调控蛋白 (Ｒｅｌ,ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ)家族的一员 (见表 1) [1] 。细胞在静息状态下 ,ＮＦ ｋＢ以一种无活性的杂二聚体形式 (两个亚单位是ｐ6 5亦即ＲｅｌＡ及ｐ50 )与其抑制因子即ｋＢ抑制蛋白 (ＩｋＢｓ)结合形成三聚体存在于细胞浆中 ;而当细胞受到外界因素刺激时 ,ＮＦ ｋＢ与ＩｋＢｓ分离 ,ＮＦ ｋＢ进入细胞核内 ,其亚基形成环状结构与ＤＮＡ接触 ,启动基因转录。ＮＦ ｋＢ的两个亚单位ｐ6 5及ｐ50都可与ＤＮＡ连接 ,但只…     

大鼠胚胎脊髓移植后对损伤脊髓神经营养因子表达的影响

目的：研究大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓神经营养因子表达的影响。方法：将孕１４ｄ大鼠胚胎脊髓组织移植到成鼠半切洞损伤的脊髓中,手术后采用免疫组织化学技术,对损伤脊髓组织中神经生长因子（ＮＧＦ）、脑源性神经生长因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子３（ＮＴ－３）、睫状神经生长因子（ＣＮＴＦ）进行定量分析。结果：移植组神经营养因子１周、２周、４周、都明显高于单纯损伤组,４周时移植组ＢＤＮＦ表达高于其它各组（Ｐ〈０     

携带HSV-TK基因的人肝癌特异性EB病毒表达载体的构建及临床意义

构建人肝癌组织特异性的基因治疗载体并探讨其临床意义。方法利用重组ＤＮＡ技术将ＨＳＶ－ＴＫ基因插入到含有及不含有α－ＦＰ启动子的ＥＢ病毒表达载体ＰＥＢＡＦ５．１、ｐＤＲ２中，并通过限制性内切酶分析鉴定重组质粒。结果ＴＫ基因成功地克隆入ＰＥＢＡＦ５．１及ｐＤＲ２中。结论含有α－ＦＰ启动子的ＥＢ病毒表达载体是原发性肝癌基因治疗中新型、理想的候选载体之一。