固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定葡萄酒中赭曲霉毒素A和赭曲霉毒素α

目的 建立使用同位素内标法定量测定葡萄酒中赭曲霉毒素A和赭曲霉毒素α的超高效液相色谱-串联质谱法。方法 葡萄酒样品经5%氨水调至pH 9.0后,用MAX固相萃取小柱富集。以乙腈和5 mmol/L乙酸铵溶液为流动相,采用等度洗脱方式在ACQUITY BEH C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱上分离,以电喷雾正离子模式进行质谱检测,内标法定量。结果 赭曲霉毒素A和赭曲霉毒素α在1.0～50.0μg/L范围内,线性关系良好,r分别为0.9996和0.9993,方法的检出限均为0.10μg/kg,定量限均为0.35μg/kg。加标浓度0.35、2.00和10.00μg/kg时,方法的平均回收率为88.6%～108.0%,相对标准偏差为2.1%～9.2%(n=6)。结论该方法前处理简单、灵敏度高、准确、可靠,适用于葡萄酒中赭曲霉毒素A和赭曲霉毒素α的测定。     

HPLC法测定谷类食品中的赭曲霉毒素A

目的:建立谷类食品中赭曲霉毒素A的HPLC检测方法。方法:样品经提取、过免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱-荧光检测器进行分析。结果:赭曲霉毒素A在1~20 ng/m l范围内线性关系良好,r0.999。回收率在80%~110%之间,定量限为1μg/kg,检测限为0.3μg/kg。结论:该方法快速、简便、准确,可作为谷类食品中赭曲霉毒素A定量测定的有效手段。     

赭曲霉毒素A免疫学检测方法的研究

目的 建立敏感、特异和快速针对赭曲霉毒素A的酶联免疫吸附试验检测方法，研制具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 利用B细胞杂交瘤技术，建立能够分泌抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并获得抗赭曲霉毒素A单克隆抗体。结果 建立赭曲霉毒素A的间接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定方法(ELISA)。该方法的最低检出浓度为0.5ng/ml，线性范围2～500ng/ml，线性方程Y=0.272X 1.07(r=0.9978)。方法的加标回收率为79.0％～119.7％。利用该方法对北京市售的大米、小麦样品进行检测。结果表明．小麦样品的污染率为60.71％，最大值为8.26μg/kg；大米样品的污染率为17.86％，最大值为3.44μg/kg。结论 该方法简单、快速、灵敏。完全可以满足实际工作的需要。     

固相萃取-高效液相色谱检测啤酒中赭曲霉毒素A

目的建立一种啤酒中赭曲霉毒素A的分析检测方法.方法使用SPE-C18固相萃取,C18反相柱(250×4.6 mm)分离,乙腈-水-乙酸(99992)为流动相,荧光检测器(激发波长333 nm,发射波长460 nm)检测.结果啤酒不同水平的加标回收率为72.8%～87.0%,RSD均小于8.6%.并用该法测定了市售三种啤酒,均在检出限以下.赭曲霉毒素A标准溶液浓度0～200 ng/ml与峰面积呈良好线性关系,线性相关系数为0.9996.根据三倍噪声法.该法检出限为0.023 ng/ml.结论使用SPE-C18柱极大地简化了样品预处理手续,可建立一种简便、快速、准确、实用的啤酒中赭曲霉毒素A的分析方法.     

用免疫学方法调查分析腊肉制品赭曲霉毒素A及其风险评估

目的:建立腊肉制品中赭曲霉毒素A免疫学检测的前处理方法,在对深圳市民膳食结构调查的基础上,对腊肉制品中的赭曲霉毒素污染进行了风险评估.方法:用免疫学方法检测40份市场腊肉制品.结果:从40份腊肉制品中检测9份含有OTA,平均污染程度为0.2768μg/kg.25份腊猪肉中有8份检出赭曲霉毒素A,污染程度在0～1.07 μg/kg;10份鸭肉中有1份检出赭曲霉毒素A,浓度为0.94 μg/kg;5份鸡肉均未检出赭曲霉毒素A.结论:本次检测的腊肉制品中,赭曲霉毒素A(OTA)含量最高的为1.07 oee'ks,表明市场上腊肉制品中OTA毒素污染水平不高,显示该产品风险较低.     

噬菌体展示肽库筛选赭曲霉毒素A模拟表位的研究

目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序确定插入七肽的氨基酸序列。结果经过4轮淘选,共筛选到11株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合能被赭曲霉毒素A阻断,模拟表位的共有序列为IRPMVXX,X为任意氨基酸。以其中的P2号克隆建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～8000pgml,检测下限为150pgml。结论噬菌体展示技术可成功筛选到赭曲霉毒素A模拟表位,筛选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学分析方法。     

随机肽库筛选赭曲霉毒素A模拟表位及其应用

目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序确定插入七肽的氨基酸序列。结果经过4轮淘选,共筛选到11株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合能被赭曲霉毒素A阴断,模拟表位的共有序列为:异亮氨酸—精氨酸—脯氨酸—蛋氨酸—缬氨酸—X—X,X为任意氨基酸。以其中阻亲和力最强的克隆(P2)建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200~8000pg/ml,检测下限为150pg/ml。结论噬菌体展示技术可成功筛选到赭曲霉毒素A模拟表位,筛选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学分析方法。     

测定花生及花生制品中黄曲霉毒素:免疫亲和柱净化·光化学在线衍生·高效液相色谱-荧光

〔目的〕建立免疫亲和柱净化、柱后光化学在线衍生、高效液相色谱-荧光法测定花生及花生制品中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的检测方法。〔方法〕样品粉碎、由甲醇/水提取、Afla-P黄曲霉毒素免疫亲和柱净化、光化学衍生器在线衍生、高效液相色谱-荧光法检测。〔结果〕黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的检出限分别为0.5、0.15、0.5、0.15μg/kg,相对标准偏差低于15%,回收率为64%～97%。〔结论〕该方法简便快速、灵敏准确、重现性好,能够满足出入境检验检疫工作的需要。     

玉米中黄曲霉毒素B1等3种真菌毒素的高效液相色谱测定法

目的建立玉米中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的高效液相色谱测定法。方法玉米样品经甲醇水溶液(V/V=80∶20)提取后,以提取液为分散剂,三氯甲烷为萃取剂,黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素经液液分散式微萃取富集净化,以C18色谱柱为分离柱,以乙腈和1%乙酸水溶液为流动相梯度洗脱分离后,采用变波长的方法对三种毒素进行检测。结果黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的线性范围分别为:1.00~100 ng/ml(r=0.998 5)、5.00~1 000 ng/ml(r=0.999 6)和1.00~100 ng/ml(r=0.999 3),检出限分别为:0.1、1.0和0.3μg/kg,平均加标回收率范围:82.5%~99.3%,RSD10%(n=6)。结论该方法快速、灵敏、准确可靠,适用于玉米样品中黄曲霉毒素B1,玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的同时检测。     

LC-MS/MS法测定酸枣仁中赭曲霉毒素A

目的建立酸枣仁中赭曲霉毒素A的LC-MS/MS测定方法,着重于方法的提取与净化、质谱参数的分析等过程。方法以酸枣仁为研究基质,采用改良Qu ECh ERS法,均质样品经水浸泡后,加入10%甲酸-乙腈溶液进行提取,同时加入莠去津作为内标;乙腈溶液经分散固相萃取技术净化后,用高效液相色谱-串联质谱法进行分析测定。结果赭曲霉毒素A在0.05 ng/ml~5 ng/ml时进样量与峰面积呈良好的线性关系,加样回收率为72.11%~85.00%。方法的重复性及稳定性均良好;检出限为0.1μg/kg。改良Qu ECh ERS法既省时又经济有效。结论本法简便快速、灵敏度高、结果准确,可用于酸枣仁中赭曲霉毒素A的测定分析。