两种常用的军团菌凝集试验的比较

微量凝集试验和试管凝集试验是我国军团病实验室检查开展比较广泛的两种血清学检查方法。为了提高军团病血清学诊断水平,我们对这两种方法进行比较,结果如下。材料与方法一、标本的收集:难治性肺炎病人的血清标本。二、试管凝集试验:用0.5ml 无菌生理盐水(第一管加0.9ml 生理盐水+0.1ml 血清),然后倍比稀释病人血清,再每管加0.5ml 军团菌凝集抗原(10亿/ml),混匀以后置于35℃过夜,第2天观测结果。抗体效价≥1:320者为阳性。三、微量凝集试验:按文献方法进行,采用 V 形微量板,抗体效价≥1:32者为阳性。     

酶标固相免疫试验(ELISA)用于包虫病诊断的初步报告

本文使用酶标固相免疫试验(ELISA)法检测包虫病患者的特异性抗体获得较理想的结果:当抗原包被浓度为4μg/ml 时其灵敏度较高,25例包虫病患者血清作1∶200稀释时阳性率为100%,82例正常人血清作1∶100稀释时,没有假阳性,而10例猪囊病患者血清对本试验有交叉反应。     

伤寒血清学诊断的一种简易的杀菌抗体试验

本文报道一种简易杀菌抗体测定法,可用于伤寒血清学诊断.该试验对Kenny(1967)法略加改进.待检血清用pH7.2磷酸盐缓冲盐水作倍量稀释,从1/10至1/2560.取每份稀释血清0.025毫升加入微孔板,加等量1∶10豚鼠补体及10~4个细菌/毫升伤寒沙门氏菌悬液.适当混和后,微孔板用胶布覆盖,置37℃孵育1小时.然后每孔取10微升接种于琼脂平板,经37℃孵育18小时作菌落计数.杀菌活性以杀灭菌液内50%细菌所需血清稀释度的倒数表示.对照孔加补体,不加血清.杀菌抗体血清标本取自24例急性期伤寒病人(其中13例尚取恢复期血清),15例临床可疑病人及23名正常人作为对照,并与肥达氏试验比较.杀菌抗体效价如以≥1∶80作为阳性,则24例急性期血清和13例恢复期血清杀菌抗体均属阳性;15例临床可     

问与答

<正> 问:血清中血型抗体效价的测定,倍比稀释法是否准确?怎样表达效价?答:血清中血型抗体浓度的测定,经典方法是先将被检血清以盐水作倍比稀释,再加等量红细胞悬液作凝集试验.严格说,这种方法只能测得抗体的近似浓度,因为,第一,凝集试验     

抗链球菌溶血素O抗体及类风湿因子试验中液态弱阳性质控血清的研制

目的　研制抗链球菌溶血素 O抗体 ( Antistreptolysin- O antibody,ASO)、类风湿因子 ( Rheuma-toid factor,RF)胶乳凝集试验中液态弱阳性质控血清。方法　根据试验选定 ASO、RF胶乳凝集试验中液态弱阳性质控血清的稀释滴度 ,乙二醇防冻的最终浓度。用统计学处理 ,观察液态弱阳性质控血清的瓶间差。结果　 ASO、RF阳性血清稀释度分别为 1∶ 4和 1∶ 1 6,乙二醇防冻的最终浓度为 2 0 % ( v/v) ;室温、4℃、- 2 0℃存放时间分别为 2 mo、6mo和 1 y;各瓶间测定结果无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。结论　建立了ASO、RF胶乳凝集试验中室内质量控制用液态弱阳性质控血清的制备方法 ,同时按设计的方法制备不同浓度的质控血清可应用到室间质量评价活动 ,具有推广应用的前景。     

盐水法接合柱凝集法在ABO疑难血型检测中的应用

目的解决柱凝集法检测ABO血型抗原减弱或抗体减低所产生的正反定型不一致。方法将疑难血型患者2%红细胞50μl与50μl抗-A、抗-B标准血清反应,或者将患者的血清(血浆)50μl与ABO试剂细胞A1、B各50μl反应,然后把反应液接合到Liss/Coombs(Anti-IgG+C3d)卡上进行测定;同时利用此法进行抗-A、抗-B标准血清最大稀释度的检测。结果盐水法接合柱凝集法检测17例抗原弱化或抗体减低的疑难血型,全部出现明显阳性反应并符合血型鉴定结果,以此法检测抗-A、抗-B标准血清最大稀释度达到1∶4096。结论盐水法接合柱凝集法测定抗原弱化或抗体减低的ABO血型是一种高效、灵敏、简单易行的方法。     

一起母子同患麻疹病例的调查报告

广西是我国猪种布病重要流行区。自1952年从香港引进未经检疫的盘克小猪传入猪种布病后,在我区持续流行数十年,病区从少数几个发展到53个,几十年来由于采取了综合性防制措施,对查出的病人采用中西医结合治疗,使人畜间感染率大幅度下降。自1999年止已有41个县(市)达到了稳定控制区标准。现将1999年布病血清学检测结果报告如下。血清2250人份,采自象州、宾阳、来宾、南宁、北海、柳州、上林、隆安等10个县(市)的部分兽医、屠宰、饲养等密切接触人群。按试管凝集试验规程和标准进行布氏菌试管凝集试验,抗体滴度1∶100以上为阳性。布氏菌试管凝…     

一种新的布鲁菌抗原试剂的制备及其性能评估

目的研制微柱凝胶为载体(内含抗人球蛋白)的布鲁菌抗原试剂,并对其进行性能评估。方法将布鲁菌抗原加入虎红染色后,用pH=6.5的磷酸盐缓冲液稀释,配制成布鲁菌抗原试剂。将配制好的布鲁菌抗原试剂和待检血清混匀后加入到含有抗人球蛋白血清的微柱凝胶卡中,离心后肉眼观察胶柱中抗原抗体的凝集反应(凝胶法)结果。用凝胶法与虎红平板凝集试验(RBT)对570份血清标本做对比试验。结果 RBT检测阳性38份,阳性率为6.67%。凝胶法检测阳性70份,阳性率为12.28%,凝胶法敏感性和临床诊断符合率均高于虎红平板凝集试验,差异有统计学意义(χ2=10.47,P0.01)。凝胶法批内重复性变异系数(CV)为2.73%,批间重复性CV为2.05%,重复性良好,配制的布鲁菌抗原稳定期约为12个月。结论凝胶法可以同时检测布鲁菌IgM、IgG抗体及不完全抗体,具有敏感度高、特异性好、操作快速简便,有利于布鲁菌病流行病学调查及预防控制,具有较好的推广应用和开发价值。     

布氏菌病患者抗体测定与细菌学检验结果的对比分析

目的 观察布氏菌病抗体测定结果与细菌学检验结果是否存在必然的对应关系。方法抗体测定采用试管凝集试验;细菌学检验采用常规的分离培养方法。结果 54例发病症状基本相符患者中有50例被抗体测定判病,1例被细菌学检验判病,其中6例被抗体测定和细菌学检验同时判病。结论 抗体测定与细菌学检验不一定存在对应关系,无论抗体测定效价高低都有可能分离出布氏菌。     

双抗体夹心法微量ELISA测定人血小板因子4

测定血小板因子4(PF_4)有多种方法,但是都有一定的局限性。本文介绍一种敏感性强、特异性高、重复性好的方法,即双抗体夹心微量酶联免疫吸附试验(ELISA)。测定过程如下:(1)包被:聚苯乙烯微板的每个孔加150μl缓冲液稀释的抗人PF_4抗体,置37℃孵育20小时,用PBST(磷酸盐缓冲盐水-吐温20溶液)洗4次。(2)抗原孵育:加200μl/孔含1％牛血清白蛋白的PBS,37℃1小时,板用PBST洗1次,再加入50μl/孔含已知量抗原的抗原标准液及血浆标本,37℃1小时,板用PBST洗3次。(3)标记抗体孵育:加100μl/孔用PBST稀释的辣根过氧化物酶标记     

钩端螺旋体病MAT检测方法的标准化及结果准确性国际评测

目的对经典的钩端螺旋体病MAT(显微镜凝集试验)方法进行标准化,以提高其检测结果的可靠性、便于今后不同实验室之间MAT检测结果的对比分析。方法参照世界卫生组织/国际钩端螺旋体病协会(WHO/ILS)新近推荐的MAT操作步骤,对我国MAT实验中的各个环节,包括培养基制备、菌体浓度、抗原制备、血清灭活方法、抗原抗体作用时间与温度,以及结果判定标准等进行标准化。结果用标准化MAT方法检测WHO/ILS寄送的考核盲样(编号A、B、C、D、E),每份样本重复检测三次,获得的实验结果完全一致。检测结果报送WHO/ILS后,反馈结果表明:5份样本检测的血清群结果完全准确,抗体滴度与标准结果吻合。结论钩端螺旋体病MAT实验经标准化后,检测结果稳定可靠,在国际性评测中能准确地鉴定出钩端螺旋体血清抗体的血清群及滴度。标准化方法的应用可提高我国钩体病血清学监测水平。     

双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌烯醇化酶抗体

目的建立检测抗念珠菌烯醇化酶(Eno)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并进行临床应用评价。方法用基因工程制备的重组Eno作为包被抗原和酶标抗原,通过棋盘滴定法对双抗原夹心ELISA法的反应条件进行优化,对方法的敏感性、特异性和精密度进行考察。用双抗原夹心ELISA法测定291例住院患者(侵袭性念珠菌病114例,念珠菌定植82例,细菌感染患者95例)以及200名健康人血清,并与本实验室前期自建的间接ELISA法检测抗Eno抗体的结果进行比较。结果双抗原夹心ELISA法工作条件为:Eno抗原包被浓度为0.5μg/m L,酶标抗原1∶4 000稀释;封闭液为含50 g/L脱脂奶粉的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100。患者血清检测结果显示,批内变异系数(CV)分别为6.8%、7.4%和5.9%;不同批次重复测定15次,其批间CV分别为10.1%、9.6%和12.4%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为92.2%。通过ROC曲线确定cut off值吸光度(A)为0.209。检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的敏感性和特异性分别为81.6%(93/114)和94.4%(356/377),敏感性高于检测抗Eno抗体的间接ELISA法(81.6%vs 76.1%)。结论建立了双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌Eno特异性抗体,可提高IC的诊断率,具有临床应用价值。     

7410例不孕不育患者血清抗精子抗体检测分析

目的探讨不孕不育患者血清抗精子抗体(AsAb)的检测及临床应用。方法采用浅盘凝集试验(TAT)检测7 410例不孕不育患者血清AsAb。结果 7 410例不育患者血清样本中,AsAb阳性1 966例,总阳性率为26.5%。其中男性患者AsAb阳性率为23.4%,女性患者阳性率为28.3%。女性AsAb阳性率显著高于男性。凝集抗体阳性滴度大于或等于1∶16的强阳性标本1 339例,占阳性标本的68.1%。结论 AsAb检测对不孕不育患者的临床诊断与治疗具有重要意义,TAT作为AsAb的检测方法具有良好的应用价值。     

间接酶联免疫吸附试验检测血清抗凝血酶原抗体

目的 建立人抗凝血酶原抗体IgG、IgM的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法.方法 纯化人凝血酶原浓度10 μg/ml包被于高吸附活性的聚氯乙烯微孔中,用山羊血清封闭,血清在Tirs盐酸缓冲生理盐水并含有1%牛血清清蛋白的溶液中按1∶100稀释,第2抗体为辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG或IgM,稀释度为1∶10 000,以四甲基联苯胺为底物,1 mmol/L HCl为终止液建立的ELISA反应体系检测血清中的抗凝血酶原抗体(aPT)-IgG与IgM.结果 本实验建立检测血清中aPT-IgG、IgM的ELISA法,稳定性、特异性及重复性佳,与国外商品试剂盒有很好的相关性,有较好的准确度及精密度.结论 本实验应用的间接ELISA半定量检测aPT,适合于实验研究及临床应用.     

儿童血清肺炎支原体感染情况调查

目的了解本地区儿童肺炎支原体(MP)的感染与流行情况。方法采集301例患儿静脉血,按试剂盒要求血清倍比稀释作颗粒凝集试验,测定血清MP抗体滴度,滴度超过1∶40判为阳性。将患儿按年龄分为<3岁(50例)、3～6岁(179例)、>6岁(72例)。对测定结果进行统计分析。结果 301例患儿血清MP抗体阳性139例,阳性率为46.2%。<3岁组阳性率为34.0%,抗体滴度较低,以1∶80多见;3～6岁组阳性率为53.1%,>6岁阳性率为37.5%,且抗体滴度较高,多超过1∶160。冬、春两季MP抗体阳性率明显高于夏、秋季(P<0.05、P<0.01)。结论 MP感染以3～6岁儿童居多,冬、春两季流行较严重。     

肺炎衣原体抗体酶免疫诊断试剂盒的研制及应用

目的建立酶免(间接)法检测人血清中肺炎衣原体抗体。方法用HEP-2细胞培养肺炎衣原体AR-39株,获得肺炎衣原体抗原后,利用该抗原与人血清中特异性抗体发生反应及辣根过氧化物酶标记的抗抗体催化TM B显色来指示人血清中抗肺炎衣原体抗体的存在。结果抗原稀释度1μg/m l,血清稀释度为1∶50,目测效果较好。门诊随机血清阳性检出率高达8.78%,此法特异性94.70%,灵敏度90.50%,试剂盒批内差CV=8.87%,批间差CV=6.92%。结论该方法简便快捷,特异性、灵敏度、准确度较好,可以在医院大力推广。     

布鲁氏菌血清 IgM,IgG 抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及初步临床应用

目的　应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测布鲁氏菌 IgM,IgG 抗体的方法,并进行初步的性能验证。方法　采用枸椽酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗重组布鲁氏菌抗原,将鼠抗人 IgG 抗体、鼠抗人 IgM 抗体和兔抗布鲁氏菌抗体喷在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,对 pH 值和抗体浓度等条件优化;评估试剂盒灵敏度、特异度、交叉反应、准确度、精密度和干扰实验;用该方法对临床的 400 份血清进行检测,试管凝集试验验证其准确性。结果　该试纸条最佳胶体金标记的 pH 值为 7.5,标记重组抗原质量浓度为 30?g/ml。方法的灵敏度和稳定性较好且与其他病原菌无交叉反应。血清总胆红素、血脂和血红蛋白浓度的增高会使试纸条显色结果减弱。对400份临床样本进行检测,其结果与试管凝集试验的符合率为 93.75%。结论　该试验建立的布鲁氏菌 IgM/IgG 抗体的胶体金免疫层析检测方法具有较好的特异度和稳定性,整个检测过程可在 15min 内完成,能够快速检测样品血清,适用于现场快速检测。     

北京市崇文区从业人员军团菌感染及菌型分布

近年来 ,军团菌病国内一些地区通过血清学调查及病原分离 ,相继发现了人群感染且有局部暴发的报告。为了解我区军团菌感染情况及菌型分布 ,于 1 998年 1～ 1 0月以试管凝集法测定了 30 0人军团菌抗体及菌型 ,并进行了流行病学调查。材料与方法1 检测对象 :本市户口的崇文区农贸市场、加工厂、饮食、服务人员 30 0人。2 方法 :采用试管凝集法 ,血清最大稀释度 为血清效价 ,单份血清抗体效价达 1∶32 0有诊断意义。凝集抗原ＬＰ1～ 14 型及相应阳性血清由中国预防医学科学院流研所提供 ,批号 -980 0 5。3 流行病学调查 :统一登记逐一询问生…     

《医学技术学的综合复习》(连载四)

82.答案d.交叉反应在做玻片凝集试验时是经常发生的,因此在解释结果时必须考虑到.立克次氏体抗原同变形杆菌ox-19,土拉菌和布氏杆菌的交叉反应就是典型的例子.83.答案e.补体是一组可以增强抗体防御机能的糖蛋白.它存在于新鲜血清中,由C_1～C_99个成份组成.补体的经典激活途径为抗原抗体复合     

白细胞粘附抑制试验的小玻片法

白细胞粘附抑制试验(LAI)是具有抗原特异性、方法简便而快速的一种免疫反应,并在肿瘤免疫学领域内得到广泛应用。抗原的制备将手术切除的新鲜肺癌组织以及同一患者的正常肺组织切细后,用0.01M pH7.2的磷酸盐缓冲盐水洗净,分别制成匀浆。注入5倍量的磷酸盐缓冲盐水,在4℃用磁力搅拌器搅拌24小时后,以40,0000×g离心60分钟,取上清液再用10倍量的磷酸盐缓冲液透析两次,再用40,000×g离心15分钟,其上清液即为肺癌相关抗原(LCAA)。以同法制备的正常肺组织的上清液作为对照。抗原可保存于-90℃备用。以Lowry法测定LCAA中的蛋白浓度。使用时将浓度调为300μg/ml。