三氧化二砷对HL-60细胞凋亡及Survivin和Caspase-3表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导HL-60细胞凋亡过程中Survivin基因表达以及Caspase-3蛋白变化情况。方法:采用7.5μmol/L As2O3和20μmol/LAc-devd-cho单独或联合作用于HL-60细胞,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Survivin mRNA、免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的变化,流式细胞术检测HL-60细胞的凋亡率。结果:7.5μmol/LAs2O3作用HL-60细胞24h和48h后,其凋亡率分别为(31.93±0.34)%和(55.91±0.52)%,Survivin mRNA比值分别为51.42%和22.37%,Caspase-3蛋白激活逐渐增加;20μmol/L Ac-devd-cho对HL-60细胞凋亡和Survivin mRNA表达均无影响;20μmol/L Ac-devd-cho和7.5μmol/L As2O3共同作用HL-60细胞24h和48h,细胞凋亡率分别为(9.61±0.21)%和(13.05±0.35)%,分别与As2O3单独作用组相比有显著性差异(P<0.05),Survivin mRNA比值分别为52.14%和21.08%,分别与As2O3单独作用组相比无显著性差异(P>0.05),Caspase-3蛋白激活被阻断。结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡与抑制Survivin基因表达、激活Caspase-3蛋白的活性有关。     

IA、MA和DA方案治疗急性髓系白血病临床疗效分析

[目的]观察IA、MA和DA方案治疗成人急性髓系白血病（AML）的疗效和不良反应。[方法]105例AML患者随机分为3组,其中IA组35例,MA组34例,DA组36例。以完全缓解率和总有效率作为临床疗效观察指标。[结果]IA、MA和DA组完全缓解率分别为82.9%、76.5%和52.8%,总有效率分别为94.3%、85.3%和61.1%。IA组与DA组、MA组与DA组完全缓解率和总有效率比较均有显著性差异（P〈0.05）。3组不良反应主要表现为骨髓抑制和恶心呕吐。MA组心脏毒性发生率低于IA和DA组（P〈0.05）;各组其它不良反应发生率无显著性差异（P〉0.05）。[结论]IA和MA方案疗效优于DA方案,不良反应可耐受。     

柔红霉素对HL-60细胞凋亡及Fas、FasL表达的影响

目的 :通过测定柔红霉素 (DNR)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60凋亡及Fas/FasL基因表达的变化 ,探讨Fas/FasL系统在细胞凋亡中的作用。方法 :应用荧光显微镜、结合DNA电泳及流式细胞仪分析技术 ,观察柔红霉素对HL 60细胞凋亡的影响及细胞凋亡过程中Fas/FasL基因的表达。结果 :柔红霉素浓度为 0 .1、1 μg/ml时 ,作用 6小时出现典型凋亡细胞 ,荧光显微镜观察HL 60细胞可见凋亡小体、染色质浓缩和胞体出芽改变 ,流式细胞仪分析可见凋亡峰 ,2 4小时达高峰 (45 .2 %± 1 0 .3 % )。 1 0 μg/ml柔红霉素作用 6小时 ,未见凋亡峰。柔红霉素可诱导Fas/FasL基因表达。结论 :柔红霉素诱导细胞凋亡是其治疗白血病的主要机制之一 ,Fas/FasL系统参与柔红霉素诱导的HL 60细胞的凋亡过程     

去甲氧柔红霉素治疗急性白血病临床观察

目的:分析和比较去甲氧柔红霉素(IDA)与柔红霉素(DNR)、米托蒽醌(MTN)治疗急性白血病的疗效和毒副反应。方法:将32例急性白血病患者分为两组,治疗组18例用IDA加阿糖胞苷(Ara蛳C)治疗,对照组14例用DNR或MTN加Ara蛳C治疗,两组均用标准3+7方案。结果:治疗组和对照组完全缓解率(CR)分别为66.7 %和43.8 %,总有效率(RR)分别为83.3 %和64.2 %。两组CR率和RR率差异有显著性(P<0.05)。治疗组骨髓抑制时间较对照组长(P<0.05),心脏毒性较小,其他毒副反应发生率基本相似。结论:去甲氧柔红霉素是效果可靠的抗白血病药物,以IDA组成联合化疗方案治疗急性白血病具有较好的疗效。     

siRNA对HL-60细胞c-myc蛋白表达的影响

 目的　研究小干扰RNA（siRNA）对白血病细胞c-myc蛋白表达的影响,探寻白血病基因治疗的新方法。方法　应用针对c-myc的siRNA转染HL-60细胞,分别收集转染后24、48和72 h细胞及对照组细胞,提取细胞总蛋白,用Western blotting方法检测c-myc蛋白的表达情况。结果　与对照组相比,转染c-myc siRNA后,细胞c-myc蛋白表达水平明显下降,且c-myc蛋白含量随作用时间的延长而逐渐降低,转染24 h后c-myc 蛋白含量下降约42 %,48 h下降66 %,72 h下降78 %;单因素方差分析显示与对照组相比,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论　c-myc siRNA能降低HL-60细胞c-myc蛋白的表达,其作用具有序列特异性和时间依赖性,有望成为白血病靶向基因治疗的新工具。     

华蟾素对HL-60细胞凋亡诱导作用及与三氧化二砷的协同作用

[目的]观察华蟾素对白血病细胞的凋亡诱导作用及其与三氧化二砷（As2O3)的协同作用。[方法]通过形态学方法、DNA电泳、Annexin V标记法检测华蟾素或（和）As2O3作用后HL-60细胞的凋亡发生情况。[结果]0.0625μg/ml-0.5μg/ml的华蟾素作用48h后，HL－60细胞发生凋亡，并具有一定的量效关系；华蟾素与As2O3合用后对HL－60细胞的凋亡诱导作用明显增强。[结论]华蟾素对白血病细胞具有凋亡诱导作用，并且与As2O3具有协同作用。     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡效应及抑制细胞ERK的活性

目的：初步探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）促进HL-60细胞凋亡及其可能机制。方法：不同浓度的As2O3（0、2.5、5、10μmol/L）作用于HL-60细胞24h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3活化、ERK活性和cyclinD1蛋白的表达,RT-PCR法检测cyclinD1mRNA的表达。结果：As2O3可抑制HL-60细胞增殖,诱导HL-60细胞的凋亡,并呈浓度依赖性（P〈0.05）;As2 O3可使HL-60细胞Caspase-3激活,并抑制ERK活性,但不能下调cyclinD1的表达（P〉0.05）。结论：As2 O3能抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,其效应可能与As2 O3抑制HL-60细胞ERK活性有关。     

3种化疗药物诱导HL-60细胞凋亡及Fas FasL的表达

目的:观察阿糖胞苷(Ara-c)、柔红霉素(DNR)及长春新碱(VCR)诱导HL-60细胞株凋亡的规律及细胞凋亡中Fas、FasL抗原的变化,探讨凋亡基因在细胞凋亡中的作用。方法:应用流式细胞仪及吖啶橙染色荧光显微镜观察3种化疗药物对HL-60细胞凋亡的影响,及细胞Fas、FasL的表达情况。结果:DNR和Ara-C能诱导HL-60细胞发生凋亡,荧光显微镜观察HL-60细胞可见凋亡小体、核染色质聚集、胞体出芽改变。流式细胞仪检测在G1期前出现sub-G1峰,随着化疗药物浓度的增加及共培养作用时间的延长,HL-60细胞凋亡率逐渐增加。每个实验组细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。VCR每个实验组细胞凋亡率与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。DNR作用HL-60细胞可使Fas、FasL表达增加;Ara-C可使FasL表达增加,而Fas表达无变化;VCR作用后Fas表达增加,而对FasL表达无影响。结论:DNR和Ara-C可诱导HL-60细胞凋亡,VCR诱导调亡作用不明显。DNR可上调HL-60细胞Fas/FasL表达,Fas/FasL系统参与DNR诱导的细胞凋亡过程。     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡效应及抑制细胞ERK的活性

目的:初步探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)促进HL-60细胞凋亡及其可能机制.方法:不同浓度的As2O3(0、2.5、5、10 μmol/L)作用于HL-60细胞24h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3活化、ERK活性和cyclinD1蛋白的表达,RT-PCR法检测cyclinD1 mRNA的表达.结果:As2O3可抑制HL-60细胞增殖,诱导HL-60细胞的凋亡,并呈浓度依赖性 (P<0.05);As2O3可使HL-60细胞Caspase-3激活,并抑制ERK活性,但不能下调cyclinD1的表达(P>0.05).结论:As2O3能抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,其效应可能与As2O3抑制HL-60细胞ERK活性有关.     

亚砷酸联合阿米福汀对HL-60细胞中Survivin表达的影响

 目的　探讨亚砷酸（As2O3）联合阿米福汀（AMI）诱导人髓系白血病细胞HL-60凋亡的可能机制。方法　不同浓度As2O3单用和联合AMI对HL-60细胞进行不同时间干预,用MTT比色法检测细胞的生长抑制作用,用半定量RT-PCR法检测抑凋亡基因Survivin mRNA的表达水平。结果　As2O3组和联合组均可显著抑制HL-60细胞的增生,呈浓度依赖性,联合组对其抑制作用明显大于As2O3组。联合组降低Survivin的表达作用比As2O3组更明显。结论　As2O3通过下调抑凋亡基因Survivin的表达诱导HL-60凋亡;AMI可增强As2O3对Survivin的下调作用,增强HL-60细胞对As2O3的敏感性,发挥促凋亡效应。     

以Bcl-2为靶标siRNA提高HL-60细胞对三氧化二砷敏感性的探讨

Objective To study whether the small-interference RNA (siRNA) targeting against Bcl-2 gene can enhance sensitivity of HL-60 cell to arsenic trioxide. Methods SiRNA was transferred into the HL-60 cells. At 6 h after transfection, the cells were cultured with arsenic trioxide. The cell growth of the HL-60 cells was detected using MTT at 24, 48 and 72 h, respectively.The levels of the Bcl-2 protein and reactive oxygen species (ROS), as well as of the membrane potential of the mitochondrion were determined by flow cytometry. Results The Bcl-2 siRNA significantly increased the inhibitory action of arsenic trioxide on growth of HL-60 cells. The combination of siRNA with arsenic trioxide resulted in decrease of the Bcl-2 protein level and increase of the ROS level, as well as significant descending of the membrane potential of mitochondrion of HL-60 (P ＜ 0.05).Conclusion The siRNAtargeting Bcl-2 can increase the sensitivity of the HL-60 leukemia cells to arsenic trioxide by inhibiting the expression of Bcl-2 protein.     

短发夹状RNA介导的RNAi对白血病细胞株HL-60的抑制作用

目的 为探讨RNA干扰对HL-60细胞的抑制作用,构建survivin的短发夹状RNA真核表达载体并将其导入白血病细胞株HL-60细胞.方法 设计、合成两对针对survivin的短发夹状RNA序列,连接到带有人U6启动子的载体质粒pSINsi-hU6中,将构建重组质粒命名为pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2.pSIN/shRNA1转染HL-60细胞,应用四唑盐(MTT)比色法观察细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 酶切分析和测序证实pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2构建成功.MTT测定显示转染重组质粒pSIN/shRNA1进入HL-60细胞48、72、96 h后细胞增殖明显受到抑制,分别与阴性对照组、空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞仪分析pSIN/shRNA1细胞凋亡率达(20.21±0.75)%,明显高于阴性对照组的(2.58±0.48)%和空白对照组的(1.26±0.30)%(P＜0.05).结论 构建survivin基因RNAi真核表达载体成功;pSIN/shRNA1序列可特异性地抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡.     

凋亡抑制蛋白Survivin在前列腺癌细胞系中的表达

目的：研究凋亡抑制蛋白survivin在前列腺癌细胞系PC-3、PC-3M、DU145、LNCaP和22RV1中的表达水平.方法：应用免疫细胞化学技术,免疫印迹技术及RT-PCR技术检测5种前列腺癌细胞系中凋亡抑制蛋白survivin的表达.结果：免疫细胞化学染色结果显示,各前列腺癌细胞系survivin阳性细胞百分率,PC-3为23%,DU145为18%,LNCaP为15%,22RV1、PC-3M分别为11%和12%.免疫细胞化学染色阳性分值,PC-3为49.42＋4.71,PC-3M为28.45＋6.82,DU145为34.27＋6.08,LNCaP为34.09＋5.22,22RV1为31.66＋7.13.与其他细胞系相比以PC-3细胞系中survivin的表达量最高（F=22.84,P＜0.01）.Westernblot结果显示,PC-3、LNCaP、DU145细胞系中的survivin蛋白总量相对较高,而22RV1、PC-3M中的survivin蛋白总量相对较低,RT-PCR结果显示,PC-3、LNCaP细胞中的survivinmRNA水平相对较高.结论：5种前列腺癌细胞系中均有survivin的表达但表达水平略有差别.研究前列腺癌细胞系中凋亡抑制蛋白survivin的表达对研究前列腺癌的发生、抗药性机制及新药物靶位的筛选具有重要意义.     

Survivin在多发性骨髓瘤患者骨髓细胞中的表达及其临床意义

背景与目的:Survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一,在多种恶性肿瘤中高表达,但在正常成人分化组织无表达。其表达与多种肿瘤的预后及肿瘤对放、化疗的耐受有关。本研究旨在通过检测Survivin在正常人、初治及复发/难治多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)患者骨髓细胞及骨髓瘤细胞系KM3中的表达,以揭示Survivin在骨髓瘤中的表达与耐药及疗效的关系。方法:RT-PCR和Westernblot法检测29例MM患者(其中初治17例,复发/难治12例)、9例正常人骨髓标本及KM3细胞系中SurvivinmRNA和蛋白质水平表达。结果:骨髓瘤细胞系KM3高表达Survivin。SurvivinmRNA在正常人、初治和难治/复发MM患者骨髓细胞中阳性率分别为22.2%、70.5%和83.3%,表达水平(Survivin/β-actin比值)分别为0.06±0.04、0.31±0.14和0.69±0.24,骨髓瘤患者表达率和表达水平显著高于正常人(P<0.01),而难治/复发MM组表达水平高于初治组(P<0.05)。所有的正常人标本中均未检测到Survivin蛋白,在初治和难治/复发MM组Survivin蛋白阳性率分别为41.1%和58.3%(P>0.05),表达水平(Survivin/α-tubulin半定量比值)分别为0.11±0.07和0.21±0.12,难治/复发MM组明显为高(P<0.05)。17例初治患者中,7例Survivin阳性者4例部分缓解(partialresponse,PR),1例微小反应(minorresponse,MR),2例无变化(nochange,NC),有效率[完全缓解(completeresponse,CR) PR MR]71.4%;10例Survivin阴性者中2例CR,4例PR,2例MR,2例NC,有效率80%,略高于阳性组。但统计学分析未发现两组有效率存在显著性差异。结论:Survivin在骨髓瘤患者中的高表达可能是部分患者对化疗不敏感的原因之一,由于Survivin仅特异性表达于骨髓瘤细胞,Survivin可作为逆转骨髓瘤细胞耐药治疗中的潜在靶点。     

宫颈鳞癌survivin与VEGF表达的相关性研究

 目的　探讨宫颈鳞癌发生发展中survivin表达及其与VEGF表达的相关意义。方法　采用免疫组化SP法检测 4 6例宫颈鳞癌 ,17例宫颈上皮内瘤样病变 (CIN)和 2 1例慢性宫颈炎组织中survivin、VEGF的表达水平。结果　从慢性宫颈炎组到宫颈癌组 ,survivin、VEGF表达率逐渐升高。宫颈癌组的survivin、VEGF阳性表达显著高于慢性宫颈炎组及CIN组 (P <0 .0 5 )。survivin表达与VEGF表达呈显著正相关 (r=0 .35 8,P <0 .0 5 )。结论　survivin在宫颈鳞癌组织中表达上调 ,与VEGF在宫颈癌的发生中可能存在协同作用。     

可溶性CD40配体对HL-60细胞增殖影响及其机制探讨

目的 Survivin和IL-8在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)等多种恶性肿瘤中高表达,与白血病的治疗效果及预后密切相关.本研究分析可溶性CD40配体(soluble CD40L,sCD40L)对人白血病HL-60细胞增殖的影响,探讨其可能作用机制.方法 2、4和6 μg/mL 3组不同浓度的sCD40L作用HL-60细胞24、48和72 h,采用MTT法检测sCD40L孵育HL-60细胞体外增殖的影响;通过RT-PCR检测sCD40L对HL-60细胞Survivin mRNA表达的影响;采用ELISA测定sCD40L对HL-60细胞分泌IL-8的影响.结果 sCD40L 3组不同浓度(2、4和6μg/mL)均能显著抑制HL-60细胞增殖,并呈剂量依赖关系,不同浓度之间差异有统计学意义,F＝ 150.076,P＜0.05;不同时间之间差异有统计学意义,F＝ 358.969,P＜0.05.在24、48和72 h,以作用48 h时抑制效果最明显.RT-PCR检测结果显示,以6.00 μg/mL的sCD40L作用时SurvivinmRNA表达量最低,时间以作用48 h时HL-60细胞中SurvivinmRNA表达量最低,其表达量为89.7±6.2,与As2 O3阳性对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.05.ELISA检测结果显示,以6.00 μg/mL的sCD40L作用时IL-8表达量最低,时间以作用48 h时HL-60细胞中IL-8表达量最低,其表达量为380.2±29.5,与As2 O3阳性对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.05.结论 sCD40L在体外能够明显抑制HL-60细胞增殖,具有浓度依赖性,且与作用时间有关.sCD40L抑制HL-60细胞增殖与Survivin及IL-8表达相关,并可能与其下调有关.