人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究

目的:研究人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液,探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值.方法:运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射一胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞受精及发育能力.根据冷冻方法分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,比较各组存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果:程序化冷冻组和玻璃化冷冻组间存活率、卵裂率、囊胚形成率均无显著性差异(P＞0.05),但是受精率存在显著性差异(P＜0.05);程序化组与自配液组、成品液组间存活率、卵裂率均无显著性差异(P＞0.05),但受精率存在显著性差异(P＜0.05).成品液组与自配液组、程序化组间囊胚形成率存在显著性差异(P＜0.05).程序化组移植4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植7例.获得1例生化妊娠.结论:程序化冷冻与玻璃化冷冻法均可应用于人类成熟卵母细胞,冻融后卵母细胞具备正常受精能力及卵裂能力.玻璃化冻存人类卵母细胞具有更大发展趋势.     

人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究

目的:研究人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液,探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值。方法:运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射-胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞受精及发育能力。根据冷冻方法分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,比较各组存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:程序化冷冻组和玻璃化冷冻组间存活率、卵裂率、囊胚形成率均无显著性差异(P>0.05),但是受精率存在显著性差异(P<0.05);程序化组与自配液组、成品液组间存活率、卵裂率均无显著性差异(P>0.05),但受精率存在显著性差异(P<0.05)。成品液组与自配液组、程序化组间囊胚形成率存在显著性差异(P<0.05)。程序化组移植4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植7例,获得1例生化妊娠。结论:程序化冷冻与玻璃化冷冻法均可应用于人类成熟卵母细胞,冻融后卵母细胞具备正常受精能力及卵裂能力。玻璃化冻存人类卵母细胞具有更大发展趋势。     

玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻技术中的应用

目的:探讨玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻方面的应用价值。方法:选取GV期卵母细胞744枚,随机分为5组,A组(128枚),GV期卵子直接进行未成熟卵母细胞体外培养(IVM);B组(220枚),GV期卵子直接行玻璃化冷冻;C组(155枚),GV期卵子直接行IVM,待培养至MⅡ期,再行玻璃化冷冻;D组(112枚),GV期卵子去除冠-丘细胞,行玻璃化冷冻;E组(129枚),GV期卵子保留除冠-丘细胞行玻璃化冷冻。比较各组卵母细胞的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:与A组相比,B组和C组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率均降低(P<0.05);B组与C组间存活率、成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率无差异(P>0.05)。E组的成熟卵子率较D组提高(P<0.05),但两组在解冻卵子存活率、受精率、2细胞数和>2细胞数方面无差异(P>0.05)。结论:未成熟卵子的玻璃化冷冻保留冠-丘细胞可显著提高冻融效果。     

细胞松弛素B在人类体外成熟卵子冷冻中的作用

目的:探讨细胞松弛素B在人类体外成熟卵子玻璃化冷冻中的作用。方法:收集常规胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSI-ET)周期中未成熟卵母细胞234枚(包括生发泡期即GV期和第1次减数分裂中期即MⅠ期),在体外培养24～48 h,181枚卵母细胞成熟(排出第2极体),随机分成3组并行玻璃化冷冻。A组(43枚)用细胞松弛素B(CB)预处理30 min后行玻璃化冷冻;B组(66枚)用CB预处理20 min后行玻璃化冷冻,C组(72枚)未用CB预处理直接行玻璃化冷冻。D组为对照组30枚体内成熟卵子未用CB处理直接玻璃化冷冻。各组卵子冷冻3周后解冻,复苏的卵子行ICSI辅助授精,观察各组成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:冻融后的体外成熟卵子,其成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率均显著低于体内成熟卵子(P<0.05)。A组的成活率显著低于B、C两组(P<0.05),A、B、C 3组间的受精率、卵裂率差异无统计学意义(P>0.05),A、B两组未获囊胚,C组仅有1枚囊胚。结论:冻融体外成熟卵子,成活率、受精率、卵裂率均下降,囊胚形成率低,胚胎后期发育潜能显著降低。CB预处理未能提高卵子冷冻的成活率、受精率、卵裂率及胚胎的发育潜能。     

人卵母细胞解冻后培养时间不同对妊娠结局的影响

目的探讨卵母细胞玻璃化冷冻复苏后行ICSI授精前培养最佳的时间。方法回顾分析行卵母细胞解冻患者32例共33周期,根据卵母细胞解冻后不同培养时间将33周期分两组：A组卵母细胞解冻后培养4h行ICSI20周期,解冻卵母细胞202枚,20周期均移植;B组3h≤卵母细胞解冻后培养时间〈4h行ICSI13周期,解冻卵母细胞109枚,其中11周期移植,另外2周期因受精后胚胎质量差未移植。比较两组卵母细胞存活率、受精率、卵裂率、可利用胚胎率、种植率以及临床妊娠率。结果A、B两组患者平均年龄、平均移植胚胎数差异无统计学意义（P〉0．05）;A、B两组卵母细胞存活率分别为94．6％、93．6％,受精率和2PN受精率分别为95．3％、90．1％和89．2％、78．4％,卵裂率和2PN卵裂率分别为95．1％、90．7％和94．5％、82．4％,可利用胚胎率分别为55．2％、51．3％,种植率分别为27．3％、40．9％,解冻周期临床妊娠率分别为55．0％、46．2％,移植周期妊娠率分别为55．0％、54．5％;A、B两组卵母细胞存活率、受精率、卵裂率、可利用胚胎率、种植率、解冻周期临床妊娠率以及移植周期临床妊娠率差异均无统计学意义（P〉0．05）,但两组2PN受精率、2PN卵裂率A组高于B组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论①卵母细胞解冻后培养3～4h行ICSI授精可以获得较好的妊娠结局。②A组2PN受精率、2PN卵裂率高于B组且解冻周期临床妊娠率有增高的趋势,是否卵母细胞解冻后培养时间接近4h即3．5—4h行ICSI有更好的妊娠结局需要以后加大样本量进一步证实。     

卵子玻璃化冷冻保存生育力的研究进展

随着人类辅助生殖技术的发展,卵子冷冻技术已经成为人们关注的课题,在拓宽目前辅助生殖技术服务的范围和保存女性生育能力方面有重要的价值.近年来玻璃化冷冻被认为是深低温保藏卵母细胞很有前途的选择.玻璃化冷冻卵母细胞冻融后存活率、受精率、卵裂率及移植妊娠活婴率较前有所提高,但迄今为止,人们仍缺少标准的玻璃化冷冻方案,对保护剂和载体的选择及冷冻程序等仍未达成共识.该文就玻璃化冷冻人类卵母细胞意义、卵子玻璃化冷冻的应用现状及冷冻保护剂、低温冷冻复苏对卵子的潜在危害及应用前景等研究作以综述.     

人未成熟卵玻璃化冷冻初步实验探讨

目的:对人未成熟卵母细胞玻璃化冷存保存技术进行初步实验探讨。方法:采用OPS玻璃化冷冻方法,对未成熟的卵子进行冷冻,解冻后体外成熟培养,ICSI受精,观察胚胎培养情况,并对某些影响因素进行探讨。结果:冷冻了GV期卵62个,M I期卵40个。两期卵细胞复苏后存活率、成熟率、受精率和卵裂率分别为:80.65%、77.50%,52.00%、41.94%,57.69%、61.54%,60.00%、62.50%,两组间比较无统计学差异(P>0.05);采用HTF或G-Mops两种缓冲液配制玻璃化冷冻液冷冻解冻未成熟卵效果无统计学差异(P>0.05);未成熟卵解冻后置于含性激素的TCM199与单纯IVF30中成熟培养效果无统计学差异(P>0.05)。结论:应用OPS玻璃化冷冻方法能够有效冻存未成熟卵母细胞。     

不同方法冻融小鼠未成熟与成熟卵母细胞的研究

目的:探讨不同冷冻方法对小鼠生殖泡(GV)期与成熟期(MⅡ)卵母细胞体外成熟、体外受精及胚胎发育能力的影响。方法:收集ICR小鼠GV期与MⅡ期卵母细胞,分别行程序化冷冻(慢速冷冻-快速解冻)与玻璃化冷冻。解冻后比较各组成熟率、受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率。结果:采用玻璃化冷冻法冷冻GV期卵母细胞(Ⅰ组),解冻后存活率达84.2%,显著高于MⅡ期卵母细胞(Ⅱ组)60.5%及程序化冷冻组(Ⅲ组)56.9%、(Ⅳ组)55.7%(均P<0.01)。各组成熟率、受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在进行卵母细胞冷冻保存时,宜选择玻璃化冷冻法,且GV期卵母细胞冷冻效果好于MⅡ期卵母细胞。     

OPS法玻璃化冷冻未成熟卵母细胞的效果观察

目的:探讨OPS(open pu lled straw,开放式拉细麦管)法玻璃化冷冻技术冻存未成熟卵母细胞的效果。方法:小鼠GV期卵母细胞用OPS法玻璃化冷冻复苏后行体外成熟培养(in-vitro m aturation,IVM)或直接行IVM,所获成熟卵行体外受精(IVF)和胚胎的体外培养(IVC)。以体内成熟卵行IVF/IVC作为in-vivo对照组。结果:GV期卵冻融后65.11%存活,IVM后成熟率为52.86%,其成熟率显著低于IVM对照组。冻融卵成熟后受精、卵裂率(33.78%、76.00%)低于IVM对照组和in-vivo对照组,培养后未见囊胚形成。结论:OPS法玻璃化冷冻技术可有效冻存GV期卵母细胞,复苏后可发育成熟,但卵的受精和继续发育能力欠佳。     

两种激素启动方案对多囊卵巢综合征患者行卵母细胞体外成熟周期治疗效果的比较

目的比较两种激素启动方案对多囊卵巢综合征（PCOS）患者行未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）的治疗效果。方法将2010年4月至2010年8月在本院行IVM周期治疗的PCOS患者随机分为短期FSH刺激组（A组）,共20个周期;及HCG刺激组（B组）,共31个周期。比较两组患者的获卵数、卵子成熟率、受精率、卵裂率、优胚率、着床率、取卵妊娠率、移植妊娠率和流产率有无差异6结果两组的获卵数、卵子成熟率、卵裂率、流产率比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。短期FSH刺激组受精率为73．9％,优胚率为35．4％,着床率为12．5％,取卵妊娠率为25．0％,移植妊娠率为25．O％;HCG刺激组受精率为80．3％,优胚率为49．8％,着床率为31．5％,取卵妊娠率为54．8％,移植妊娠率为63．O％,其差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论行IVM周期治疗的PCOS不育患者,采用HCG刺激的方案优于短期FSH刺激的方案,其疗效更好,具有较好的应用前景。     

Hemi-straw玻璃化与程序化冷冻小鼠不同发育阶段胚胎的效果

目的:探讨半细管(Hem i-straw)玻璃化方法与程序化方法冷冻不同发育阶段小鼠胚胎的效果。方法:采用慢速程序化方法与玻璃化方法冷冻小鼠原核期胚胎、卵裂期及早期囊胚期胚胎。解冻后观察存活率、囊胚形成率。结果:采用玻璃化方法冷冻小鼠卵裂期与早期囊胚期胚胎的存活率为92.7%与95.5%,显著高于玻璃化冷冻原核期胚胎的存活率79.8%与程序化冷冻的各组(均P<0.01)。程序化冷冻早期囊胚的存活率仅为50.2%,显著低于其他组(均P<0.01)。经培养后囊胚的形成率比较,程序化冷冻组内无显著性差异(P>0.05),但均显著低于玻璃化冷冻组(均P<0.01)。玻璃化冷冻卵裂期与早期囊胚组的囊胚形成率高达90.1%与92.2%,显著高于原核期胚胎玻璃化冷冻组69.5%(均P<0.01)。结论:胚胎行冷冻保存时,玻璃化冷冻效果较程序化冷冻好,且选择早期囊胚可获最佳冷冻效果。     

卵母细胞玻璃化冷冻对胚胎发育及移植结局的影响

目的探讨玻璃化冷冻卵母细胞行卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)对胚胎发育及妊娠结局的影响。方法回顾性队列研究分析郑州大学第三附属医院生殖医学科2015年10月至2022年12月期间行ICSI助孕周期患者的临床资料。纳入玻璃化冷冻卵母细胞解冻行ICSI助孕的周期95个(记为冷冻卵子组)和同期新鲜卵母细胞行ICSI助孕周期5 830个(记为新鲜卵子组), 冷冻卵子组按照冷冻方法分为二步法亚组与桥接法亚组。利用1∶3倾向性评分匹配(propensity score matching, PSM)后得到冷冻卵子组94个周期, 新鲜卵子组282个周期, 比较两组ICSI后受精、胚胎发育情况及移植后临床妊娠结局。采用多重线性回归分析影响卵子存活率的相关因素。结果 PSM匹配后, 冷冻卵子组的正常受精率[69.59%(572/822)]、正常卵裂率[95.63%(547/572)]、可利用胚胎率[74.41%(407/547)]、优质胚胎率[36.38%(199/547)]、可利用囊胚形成率[37.08%(89/240)]及卵子利用率[3...     

影响冻融胚胎存活的相关因素分析

目的:探讨年龄、受精方式、胚胎冷冻方法及胚胎冻存时间对冻融胚胎存活的影响.方法:回顾分析冻融胚胎移植(FET) 1255个周期,根据年龄、受精方式、胚胎冷冻方法及胚胎冻存时间进行分组,比较各组的冻融胚胎存活率、完全存活率及临床妊娠率.结果:玻璃化冷冻组冻融胚胎存活率、完全胚胎存活率及临床妊娠率分别为93.4％、95.9％、48.8％,程序化冷冻组冻融胚胎存活率、完全胚胎存活率及临床妊娠率分别为81.2％、54.9％、30.1％,两组差异有统计学意义(P＜0.05);年龄、受精方式、胚胎冻存时间对冻融胚胎存活率及完全胚胎存活率无明显影响(P＞0.05).结论:玻璃化冷冻胚胎技术比程序化冷冻胚胎技术能获得更高的冻融胚胎存活率、完全胚胎存活率及临床妊娠率,3年内的冻融胚胎可不考虑冻存时间对胚胎存活的影响.     

部分卵裂球损伤对冻融后胚胎发育潜能的影响

目的了解部分卵裂球损伤对冻融后优质胚胎发育能力的影响，为解冻周期移植胚胎的挑选提供依据。方法对502例解冻移植周期进行回顾性分析。所有移植胚胎分为两类，胚胎冻融后所有卵裂球均无损伤，卵裂球数〉6，碎片〈10％（A型）；冻融后胚胎有1～2个卵裂球损伤，但仍有至少6个完整无损伤卵裂球，碎片〈10％（B型）。无损伤组移植的所有胚胎均为A型（n=294周期），部分损伤组移植胚胎中至少包含1个B型胚胎（n=208周期）。比较2组临床妊娠率和着床率。结果无损伤组临床妊娠率为36．73％（108／294），着床率19．42％（153／788），部分损伤组为38．46％（80／208）和19．43％（110／566），2组临床妊娠率和着床率比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。而且含1枚B型胚胎组（163周期）和2枚B型胚胎组（42周期）的临床妊娠率和着床率比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论少量卵裂球损伤的冻融后优质胚胎，其发育潜能与无损伤优质胚胎相同。     

胞浆中央颗粒化卵细胞来源的胚胎经玻璃化冻融后发育潜能的研究

目的：探讨玻璃化冻融对胞浆中央颗粒化人卵母细胞（CLGC）来源的胚胎发育潜能的影响。方法回顾性分析卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植（ICSI-ET）治疗且获卵均为 CLGC 卵的106周期。其中研究组58周期,D3胚胎行玻璃化全胚冷冻,三个月后行玻璃化解冻胚胎移植。对照组48周期,D3胚胎行新鲜胚胎移植。计算研究组胚胎复苏存活率、完整胚胎率、卵裂球部分退化率,并比较两组的临床妊娠率、种植率、及流产率。结果研究组与对照组之间的年龄、基础 FSH、促排方案均无统计学差异。研究组玻璃化冷冻复苏58个周期,胚胎复苏存活率为80.3％,完整胚胎率为61.8％,卵裂球部分退化率为18.5％;研究组移植54周期,临床妊娠率29.6％,种植率18.3％,流产率25.0％。对照组移植48周期,临床妊娠率为35.4％,种植率29.4％,流产率11.8％。研究组的种植率低于对照组,差异有统计学意义,两组的临床妊娠率、流产率无统计学差异。结论CLGC 胚胎经玻璃化冻融后发育潜能明显下降,对 CLGC 胚胎的移植应尽可能地采取新鲜胚胎移植策略或探索损伤更小更合适的冻融方法。     

程序化和玻璃化冻融人卵裂期胚胎的临床应用效果比较

目的:探讨程序化和玻璃化冻融卵裂期胚胎的效果及临床结局。方法:结果:玻璃化组的胚胎复苏存活率高于程序化组,而周期取消率较低。在临床结局上,玻璃化组的胚胎植入率与程序化组无显著差异,而临床妊娠率相比较高。结论:玻璃化法冻融卵裂期胚胎优于程序化法,可获得更高的临床妊娠率。     

不同冷冻方案对人早期胚胎发育潜能的影响

目的:比较开放式、封闭式玻璃化冷冻技术及程序化慢速冷冻法对辅助生殖技术人早期胚胎冷冻复苏的效果.方法:回顾性分析622例胚胎冷冻复苏资料,将体外受精-胚胎移植(ⅣF-ET)患者第3天需要冷冻的胚胎,分别采用开放式、封闭式麦管玻璃化法及程序化慢速冷冻法冷冻,比较3组胚胎复苏率、空泡出现率、胚胎完整率、植入率、临床妊娠率、周期取消率、胚胎丢失率及流产率.结果:开放式冻存组共复苏280个周期、627个胚胎,胚胎复苏率、胚胎完整率、植入率和临床妊娠率分别为97.13％、94.89％、28.90％、52.61％,与程序化冷冻组(复苏165个周期、477个胚胎)胚胎复苏率(73.79％)、胚胎完整率(70.02％)、植入率(16.75％)和临床妊娠率(35.44％)相比差异有统计学意义(P＜0.05),与封闭式冻存组(复苏177个周期、400个胚胎)相比差异均无统计学意义(P＞0.05),3种冷冻组空泡出现率、周期取消率、胚胎丢失率及流产率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:两种玻璃化冷冻法能获得同样的冷冻效率,且均优于程序化冷冻法;封闭式麦管玻璃化法能更好地保存胚胎复苏后的发育潜能,是冻存人早期胚胎较为理想的方法.     

不同受精时间对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的探讨受精时间的长短对卵子受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率、妊娠率和流产率的影响.方法以82个体外受精-胚胎移植（IVF—ET）周期为研究对象，要求每个周期获卵数最少为3枚，按精-卵共培养时间分为3组：1h受精组，共266枚卵，2h受精组，共335枚卵，16—20h受精组，共257枚卵。比较3组的受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率、妊娠率（生化妊娠率和临床妊娠率）和流产率。结果2h受精组受精率最高为87．46％，与另外2组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。3组种植率、妊娠率和流产率与比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论短时受精可以提高卵子的受精率，并能提高种植率和妊娠率，降低流产率。     

利用 IVF 结局评估胚胎培养系统的稳定性

目的：分析不同批次卵裂期胚胎培养液所获得的体外受精（IVF）结局,以进一步评估不同批次培养液的稳定性。方法：病例资料为本中心2011年8月-2012年9月患者年龄〈35岁、卵巢储备功能正常、采用常规长方案促排卵并且获卵数〉5枚的移植周期,根据卵裂期培养液的批次不同收集了18组,随机抽取6组,分析各组患者一般情况及IVF结局。结果：6组患者年龄、既往IVF次数、基础卵泡刺激素（FSH）水平、体质量指数（BMI）和人绒毛膜促性腺激素（hCG）日子宫内膜厚度比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。各组平均获卵数、卵子成熟率、受精率和卵裂率差异无统计学意义（均P〉0．05）,优质胚胎率差异有统计学意义（P〈0．05）。各组问平均移植胚胎数、妊娠率、种植率和流产率差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论：本中心IVF实验室整体质控系统稳定,不同批次培养液的IVF结局稳定。     

高龄不孕患者不同辅助生殖技术的胚胎发育情况及妊娠结局分析

目的探讨年龄因素对高龄不孕患者接受辅助生殖技术（ART）后胚胎发育情况及妊娠结局的影响。方法选择2013年7月至2014年1月于内蒙古医科大学附属医院生殖中心行体外受精一胚胎移植（1VpET）及卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）的不孕患者155例为研究对象,共计184个周期。按照年龄,将纳入患者分为3组：Ⅰ组（n=67,周期数为63,35岁≤年龄〈37岁）,Ⅱ组（n=60,周期数为55,37岁≤年龄〈40岁）,Ⅲ组（n=57,周期数为37,年龄≥40岁）。各组患者身高、体质指数、不孕年限及受孕史等比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。本研究遵循的程序符合内蒙古医科大学附属医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象知情同意,并与之签署临床研究知情同意书。结果①Ⅲ组接受IVF—ET和ICSI者的新鲜胚胎妊娠率较I组显著降低,且差异有统计学意义（P〈0．05）,但与Ⅱ组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。3组间接受IVF-ET和ICSI者的冷冻胚胎妊娠率及胚胎冷冻率比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。②Ⅲ组妊娠率与胚胎种植率均较I组及Ⅱ组显著降低,且差异均有统计学意义（P〈0．05）;Ⅱ组妊娠率较Ⅰ组显著降低,且差异有统计学意义（P〈0．05）,但其胚胎种植率与Ⅰ组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;3组间受精率、卵裂率、优质胚胎率、优质胚胎移植率、自然流产率及活婴出生率比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。③相同ART下,3组间受精率、卵裂率及优质胚胎率比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论年龄因素可影响高龄不孕患者胚胎着床及妊娠成功。