在20L气升式生物反应器中用西藏红豆杉细胞悬浮液生产紫杉醇和巴可亭Ⅲ

作者采用20 L 气升式生物反应器对西藏红豆杉 Taxus wallichiana 的细胞培养进行了放大研究,并与摇瓶培养进行了比较。培养条件为:培养物100 g/L,培养基为 Gam-borg B5,每批培养期28天,工作容积为18L,温度25 C,通气量为2.5 L/min。结果显示,在培养初始阶段,细胞悬浮液未出现迟滞     

气升环流式反应器大规模培养紫草细胞

本文采用自行设计研制的１０Ｌ气升环流式生物反应器培养紫草细胞，紫草细胞生长良好，能均匀悬浮培养液中，在紫草细胞生长周期中，紫草细胞量增长到原细胞接入量的１２．８倍。紫草色素产量为摇瓶培养的２／３，每升培养液可产生０．６克紫草色素，在反应器中，培养液ｐＨ值变化与细胞生长呈正相关，与紫草色素形成呈负相关，培养液ｐＨ值变化规律可用于监测紫草细胞在生物反应器中生长和色素形成，结果表明，气升环流式反应器是优     

茯苓摇瓶补料液体发酵和发酵罐补料液体发酵

在茯苓摇瓶液体发酵条件研究的基础上，进一步探讨了茯苓摇瓶补料液体发酵和发酵罐补料液体发酵的发酵工艺，为其产业化打下基础。通过每升发酵液中茯苓菌丝体干重的测定，确定最佳的液体发酵补料工艺。发酵罐液体补料发酵较摇瓶补料液体发酵大大缩短了发酵时间，使发酵时间从168h缩短为120h；发酵罐液体补料发酵还较摇瓶补料液体发酵提高了茯苓的生物量，使菌丝干重从10．74g／L增长到11.95g／L。     

搅拌式生物反应器悬浮培养水母雪莲细胞的研究(摘要)

应用 2L通气搅拌式生物反应器一步批式培养水母雪莲细胞。实验采用大直径 4片倾斜式搅拌浆和低搅拌速率70rpm及 0 4～ 0 6vvm的通气量 ,培养结束细胞干重达 1 3 8gDW/L ,黄酮产量 4 1 6mg/L ,黄酮含量占细胞干重的 2 9%。水母雪莲细胞生长及黄酮合成的进程表明 ,黄酮积累与细胞生长是正相关 ,结果还表明反应器内的接种量在 4 0～5 0DW/L之间可以达到较高的产量。对细胞聚集体随时间分布的研究发现 ,反应结束后 0 5～ 1mm的聚集体含量显著增加。流变压力使细胞聚集体分裂 ,在一定程度上使反应器中细胞生长受到影响 ,黄酮产量较摇瓶中降低。     

茯苓紫外线诱变育种

为了探讨紫外线诱变育种在茯苓优良菌种选育中的应用,将茯苓孢子悬液经紫外线照射后,通过茯苓优良菌种筛选模型筛选得到茯苓优良菌株P6.菌株P6摇瓶液体发酵后每升发酵液中菌丝体干重达11.92 g/L,较出发菌株P0菌丝体干重提高了7.58%.菌株P6传代培养后,用摇瓶液体发酵验证其遗传稳定性,实验结果表明其遗传稳定性良好.     

Microtetraspora sp转化美伐他汀至普伐他汀发酵条件的研究

小四孢菌(Microtetraspora sp)在不同的转化培养基和培养条件下，转化美伐他汀(Mevastatin)为普伐他汀(Pravastatin)。在转化培养基A，初始底物浓度为500mg／L时，摇瓶发酵7d，转化率为50．14％，Pravastatin产量达260mg／L；在3L发酵罐中间歇补加底物和1～4g／L葡萄糖，培养11d，Pravastatin产量达375mg／L，转化率为45.2％。     

工程菌LacU V5par8egf产hEGF发酵方法的比较

目的：明确培养条件对工程菌LacUV5par8egf表达水平和质粒稳定性的影响,方法：采用优化MBL培养基,利用摇瓶发酵研究工程菌LacUV5par8egf的最优培养条件,并与2L发酵罐上的发酵进行比较,结果：摇瓶发酵的最优培养条件为：温度32度,接种量10％,种子液OD5501．0－3．0,装液量10％,摇床转速220rpm;摇瓶发酵的最优诱导条件是在对数生长中后期诱导,IPTG最适浓度为0．2mM,2L发酵罐发酵与摇瓶发酵相比,发酵周期缩短了约三分之一,hEGF表达水平接近摇瓶中发酵水平,达到27．7mg/L,结论：利用摇瓶最优培养条件,较好实现了重组hEGF从摇瓶到发酵罐的放大。     

冬虫夏草菌丝体与天然冬虫夏草蛋白成分的分析比较

利用液体培养基对冬虫夏草菌丝体进行培养，在18～20℃ 160r/min摇瓶中培养72h，可得到266g/L的湿菌体，并对天然冬虫夏草和冬虫夏草菌丝体的蛋白粗提液进行了蛋白含量，SDS-PAGE和HPLC分析。结果表明天然冬虫夏草与冬虫夏草菌丝体中水溶性蛋白含量分别占其干重的2．00％和7．24％；在12％SDS-PAGE中低分子蛋白标准的回归方程为Y=5．01847-1．11588X，其相关系数r=-0．99131，由此推算出天然冬虫夏草与冬虫夏草菌丝体含有4种相同的蛋白质亚基，其相对分子质量分别为46971，51087，86681和95685；天然冬虫夏草中特有的蛋白质亚基的相对分子质量为l7142及小于12372的多肽，其余的蛋白质亚基稍有差异，在天然冬虫夏草中蛋白质亚基的相对分子质量为28942，37237和58091，而在冬虫夏草菌丝体中为28658，34920和55018。水溶性蛋白经HPLC分析，可以分离出不同的蛋白峰，冬虫夏草菌丝体所含蛋白质较天然冬虫夏草简单且分离效果好。     

白花蛇舌草悬浮细胞摇瓶补料对多糖量的研究

通过摇瓶实验,研究补料方式对白花蛇舌草细胞悬浮培养细胞生长及多糖产量的影响.以细胞干重、多糖量为指标,对白花蛇舌草悬浮细胞进行了补糖(蔗糖)、补氮(氨水)和补碱(氢氧化钠)的摇瓶补料分批发酵实验.结果表明,4次补氮时白花蛇舌草悬浮细胞干重及多糖分别达到3.50 g/L和64.59 g/L;4次补碱时白花蛇舌草悬浮细胞干重及多糖产量分别达到3.27 g/L和58.87 g/L.补碱和补氮无论是对细胞干重还是多糖的产量等都有着明显的提高,说明它们对白花蛇舌草细胞悬浮培养细胞生长影响较大.     

气升环流式生物反应器（ALR）的特性与应用

分析气升环流式生物反应器的结构、运行特点及技术特性，简要介绍了这种反应器的应用情况。     

海洋真菌YS4108抗肿瘤多糖YCP发酵条件的优化

目的寻找优化的摇瓶发酵条件,以提高菌株YS4108抗肿瘤多糖YCP的得率,为工业化发酵生产铺垫。方法采用单因数和正交设计的方法,以YS4108菌丝体得率、粗多糖含量或YCP收获率为指标,优化培养条件和碳源、氮源及无机盐配方。结果该菌最佳摇瓶发酵培养条件为:28℃,初始pH 6.0,120r/min,7 d,1 L摇瓶装液量400 mL;最佳发酵配方为:蔗糖2.5%,玉米粉1%,NaNO30.2%,酵母膏0.2%,KH2PO40.05%,MgSO4.7H2O0.05%,KCl 0.05%,FeSO40.000 1%,人工海水100%。结论该发酵工艺YCP收获率为0.227 2 g/L,为优化前工艺的3.6倍,具有良好的应用前景。     

竹黄多糖发酵工艺的优化研究

目的:优化竹黄多糖的发酵工艺。方法:培养竹黄菌菌丝体液,以菌丝干重和多糖得率为指标,分析竹黄多糖发酵过程中碳源、氮源、pH值对多糖积累的影响。结果:蔗糖、玉米粉、酵母膏均有利于菌丝的生长和多糖的形成。通过正交试验确定了竹黄多糖最佳发酵培养基:蔗糖3%、玉米粉3%、酵母膏0.5%、麸皮2%、(NH4)2SO40.2%、MgSO4.7H2O0.05%、KH2PO40.1%;在10L发酵罐上竹黄多糖含量最高达10g.L-1。结论:该工艺稳定,可为工业生产提供理论依据。     

重组复合干扰素摇瓶发酵条件的研究

目的对表达重组复合干扰素(con-IFN)的工程菌E.coli DH5α的摇瓶发酵条件进行研究。方法利用单因素比较实验及正交试验等方法考查工程菌摇瓶发酵条件,探讨发酵条件对工程菌的生长和con-IFN表达的影响。结果优化后条件为培养基含玉米粉6%、牛肉膏5.5%、谷氨酸钠0.5%,发酵液初始pH 7.2,30℃培养7 h后升温至42℃诱导表达6 h,转速220r/min,装样量10%,接种量2%。结论优化后平均蛋白质表达量达到36.39%,和LB培养基相比,目的蛋白质表达量提高了4.8%,为工程菌的大规模发酵提供参考。     

达托霉素高产菌株选育及发酵条件优化

目的 通过对达托霉素产生菌进行诱变选育,并对其发酵条件优化,以提高其达托霉素发酵水平,降低生产成本。方法 以玫瑰孢链霉菌(DT-9#F2)为出发菌株,分别采用紫外诱变、微波诱变、LiCl诱变及复合诱变并结合链霉素抗性筛选进行菌株选育,同时,对其发酵培养基中氮源、碳源及生长因子进行优化,以进一步提高其发酵产量。结果 得到一株达托霉素高产突变株DT-37,其摇瓶发酵产量达到12.2mg/L,较出发菌株提高20.79%;优化后的发酵培养基为：酵母粉(YP300)1.65%、FeSO4 0.043%、葡萄糖1.50%、玉米淀粉7.20%、糖蜜0.72%,VB12 1.50μg/mL、硫辛酸5.00μg/mL。其摇瓶发酵产量达到30.56mg/L,较初始培养基提高了297.92%。经100L发酵罐上放大验证,达托霉素的产量达到了2872mg/L,较优化前提高了14.88%。结论 紫外、微波及LiCl复合诱变后经抗生素抗性筛选,结合发酵培养基优化,可有效提高菌株的达托霉素发酵产量。     

达托霉素高产菌株选育及发酵条件优化

目的 通过对达托霉素产生菌进行诱变选育,并对其发酵条件优化,以提高其达托霉素发酵水平,降低生产成本。方法 以玫瑰孢链霉菌(DT-9#F2)为出发菌株,分别采用紫外诱变、微波诱变、LiCl诱变及复合诱变并结合链霉素抗性筛选进行菌株选育,同时,对其发酵培养基中氮源、碳源及生长因子进行优化,以进一步提高其发酵产量。结果 得到一株达托霉素高产突变株DT-37,其摇瓶发酵产量达到12.2mg/L,较出发菌株提高20.79%;优化后的发酵培养基为：酵母粉(YP300)1.65%、FeSO4 0.043%、葡萄糖1.50%、玉米淀粉7.20%、糖蜜0.72%,VB12 1.50μg/mL、硫辛酸5.00μg/mL。其摇瓶发酵产量达到30.56mg/L,较初始培养基提高了297.92%。经100L发酵罐上放大验证,达托霉素的产量达到了2872mg/L,较优化前提高了14.88%。结论     

基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶条件的优化

目的 优化苷磷酸化酶（包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶）基因工程菌的发酵表达条件。方法通过工程菌摇瓶培养,测定吸光度D值,考马斯亮蓝（Bradford）法测定蛋白,SDS—PAGE电泳和凝胶成像扫描分析表达量,优化表达条件;通过正交试验优化50L发酵罐发酵条件。结果摇瓶培养起始pH为7．0～7．2,于30℃培养4h,加入终浓度为0．4mmol／L的异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导8h后收获菌体,可得到较高的生物量和重组酶蛋白表达量。50L发酵罐的最佳条件为起始pH为7．0～7．2,于32oC培养4h,加入终浓度为0．4mm01／L的IPTG诱导9h后收获菌体,每升发酵液可得2g以上的酶蛋白。结论基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶产量较高,可工业化生产．为酶法合成核苷酸类似物的研究奠定了基础。     

产利普斯他汀菌株Streptomyces toxytricini FIM-17-16发酵条件的优化

目的 Streptomyces toxytricini FIM-17-16菌株生物合成利普斯他汀发酵条件的优化。方法 采用单因素试验和正交设计实验相结合的方法,优化Streptomyces toxytricini FIM-17-16发酵培养基和发酵参数。结果 确定了适宜发酵培养基配方和发酵参数：葵花籽油7%,甘油2%,黄豆粉3.25%,麸皮1%,卵磷脂1%,硫酸锌0.01%,碳酸钙0.08%,初始pH自然,装料系数80mL/500mL,种龄20h,接种量15%,摇床转速230r/min,发酵温度28℃,发酵时间168h,产利普斯他汀的水平达到了9667μg/mL,提高了20.6%,发酵周期缩短24h。结论 经过优化发酵条件,S. toxytricini FIM-17-16生物合成利普斯他汀能力大幅提高,为该菌株的工业化生产奠定了基础。     

β-甘露聚糖酶产生菌DY-14的发酵优化及分离纯化

利用单因素实验和正交分析方法得到枯草芽孢杆菌DY-14发酵产酶的最佳培养基组分及条件：以魔芋粉为碳源（3%）,蛋白胨为氮源（1.5%）,初始pH 8.0,摇瓶装液量10 mL/100mL,接种量1%,37℃培养24h,最终产生的β-甘露聚糖酶活力可达3216 U/mL。DY-14发酵液经（NH4）2SO4盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤,得到了电泳纯的β-甘露聚糖酶。     

L-缬氨酸高产菌选育及营养需求研究

以黄色短杆菌 (Brevibacteriumflavum)L 缬氨酸产生菌ZQ -2为出发菌株 ,经硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍 (NTG)诱变处理 ,氨基酸结构类似物定向筛选 ,获得一株L 缬氨酸高产菌XQ -6 (LeulAHVrα ABhr2 TAhr)。在以 1 4 %葡萄糖为碳源、5 %硫酸铵为氮源的培养基中直接发酵72h,产酸达 5 8～ 6 2g/L。同时添加Fe2 + 和Mn2 + 比单独添加Fe2 + 更有效。还进行了氨基酸、核酸、维生素和其它营养对L 缬氨酸发酵影响的试验。     

顶空-气相色谱法测定蛋黄卵磷脂的溶剂残留量

目的建立顶空毛细管气相色谱法同时测定蛋黄卵磷脂中乙醇、丙酮残留量的分析方法。方法采用顶空进样毛细管气相色谱法,以正丙醇为内标,键合聚乙二醇（Phenomenex ZB-FFAP）石英毛细管色谱柱;柱升温程序,初始35℃,保持10 min,以25℃/min升至180℃,保持5 min;进样口温度220℃;检测器温度250℃;氮气为载气,流速：1 m L/min;分流进样,分流比5∶1;顶空温度80℃,平衡时间45 min。结果丙酮在25.104-2 510.4μg/m L浓度范围线性关系良好,r^2=0.999 7,最低检测限为20 ng,加样回收率为94.0%-97.7%;乙醇在23.7-2 370μg/m L浓度范围线性关系良好,r^2=0.999 3,最低检测限为0.001 6μg,加样回收率为97.3%-102.9%。结论该方法简便、快速、结果准确,适用于测定蛋黄卵磷脂中丙酮、乙醇残留量。