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1.
利用不同DNA源进行基因多态性研究的可行性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
探讨不同DNA源作基因多态性分析的优缺点,及以血凝块裂解液直接进行PCR扩增的可行性 和可靠性。方法:从口腔粘膜细胞、组织切片提取DNA,并将临床生化分析遗弃的血凝块制备成裂解液和纯化 DNA,取各自样本分别进行PCR扩增,并进一步对血凝块纯化DNA和血凝块裂解液所作的PCR扩增作对照研究。 结果:本研究使用的不同DNA源所作的PCR扩增均获得满意结果,以血凝块裂解液进行的GSTM1,GSTT1和 CYP2E1基因多态性分析均获得成功,其结果与纯化DNA进行分析观察到的结果完全一致。结论:同组织细胞纯 化的DNA一样,血凝块是理想的DNA源,用血凝块裂解液直接进行基因多态性分析,方法简明,结果可靠。 相似文献
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百日咳杆菌毒素S1亚单位与谷胱甘肽S—转移酶融合基因在大肠杆菌 … 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了百日咳杆菌毒素S1亚单位与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白(GST-S1)在大肠杆菌中的表达。并一步纯化了重组GST-S1,首先用聚合酶链反应(PCR)扩增出长度为560bp的编码百日咳毒素S1亚单位的DNA片段。 相似文献
3.
目的:寻找适合于临床PCR检测结核杆菌DNA简单、快速、有效、经济的细菌裂解方法。方法:采用11种细菌裂解剂对相同数量的结核分枝杆菌进行裂解,裂解上清液直接用于PCR扩增,结果:1%TritonX-100,1%NP40,1%Teween20、和1%OP四种裂解剂的裂解液可直接扩增出结核分枝杆菌DNA;SDS,NaOH,十二烷基肌酸钠等裂解剂的裂解液直接用于PCR扩增均为阴性。结论:1%的Tritonx-100,NP40、Teween20和乳化剂OP裂解细菌效果好,又不抑制PCR反应,适合于作为临床PCR检测结核杆菌的裂解剂。 相似文献
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寻找适合于临床PCR检测结核杆菌DNA简单,快速,有效,经济的细菌裂解方法。方法采用11种细菌裂解剂对相同数量的结核分枝杆菌进行裂解,裂解上清液直接用于PCR扩增,结果1%TritonX-100,1%NP40,1%Teween20、和1%OP四种裂解剂的裂解液可直接扩增出结核分枝杆菌DNA;SDS,NaOH 相似文献
5.
直接用煮沸的细菌裂解液中的DNA作PCR模板,扩增效果与用酚/氯仿抽提纯化的质粒DNA作模板的结果一致,缩短了实验时间。利用简单材料回收酶切片段,省去了有机溶剂反复抽提和沉淀的步骤,回收率达到90%,效果很好。 相似文献
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改进的PCR模板制备及DNA回收方法 总被引:1,自引:0,他引:1
直接用煮沸的细菌裂解液中的DNA作为PCR模板,扩增效果与用酚/氯仿抽提纯化的质粒DNA作模板的结果一致,缩短了实验时间,利用简单材料因收酶切片段,省去了有机溶剂反复抽提和沉淀的步骤,回收率达了90%,效果很好。 相似文献
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目的探讨工程菌表达的耐热DNA聚合酶的纯化方法。②方法收集IPTG诱导带有耐热DNA聚合酶(TD聚合酶)基因表达质粒的工程菌株DH-TD4,用溶菌酶裂解,60℃处理后,上清液用硫酸铵沉淀,根据溶解度差异进行粗分级,然后进行离子交换层析细分级,并经聚合酶链式反应(PCR扩增)鉴定其活性。③结果纯化的TD聚合酶具有良好的聚合活性。④结论溶解度差异与离子交换层析是工程菌表达的耐热DNA聚合酶纯化的主要步骤。基因工程制备的DNA聚合酶可用于PCR检测 相似文献
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目的 分析我国肝病患者和健康人群TTV基因型。方法 用巢式PCR扩增我国不同地区不明病因的急性肝炎,慢性肝炎,肝癌和自然健康人群TTV DNA片段,并对PCR产物进行克隆,测序分析和同源性比较。结果 武汉WH1,WH2,WH3个病人血清中TTV DNA序列与N22同源性分别为97%、97%和98%;广州GZ1,GZ2,GZ3例病人血清中TTV DNA序列与N22同源性分别为98%,95%和95%, 相似文献
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本研究以结核杆菌染色体中重复出现的长度为123个碱基对(bp)的DNA片段作为作为聚合酶链反应(PCR)扩增的模板,合成一对寡核苷酸引物。痰液标本先经三羟甲基氨基甲烷(Tris),乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)和三硝基甲苯(Triton x-100)加热、震荡处理,裂解结核杆菌,再作PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳。同时,与痰液直接涂片、抗酸染色镜检抗酸染色阳性杆菌作比较。用该PCR扩增和琼脂糖凝 相似文献
10.
日本血吸虫26ku谷胱甘肽硫—转移酶基因的克隆及分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 扩增日本血吸虫26ku谷胱甘肽硫-转移酶(Sj26GST)基因片段,构建其重组原核载体,以研制SjGST重组克隆。方法 根据已知基因序列设计一对引物,运用RT-PCR技术扩增Sj26GST目的基因cDNA片段,将其克隆到pBluescript(KS)质粒中,并经酶切、PCR和测序鉴定。结果 获得GST-pBluescript(KS)重组克隆。结论 本实验获得Sj26GST重组克隆,为进一步研 相似文献
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利用融源表达、平板裂解法和PCR扩增三种不同方法分别对日本血吸虫抗原cDNA基因进行鉴定和分析,8个免疫筛选阳性克隆均能在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达,表达蛋白分子量为140-150kDa,抗原cDNA基因经限制性内切酶EcoRI酶解后,琼脂糖凝胶电泳显示其大小为700-900bp,PCR能扩增出特异性条带,结果表明,上述三种方法能从蛋白质和核酸水平有铲地鉴定血吸虫抗原cDNA基因。 相似文献
12.
目的 采用PCR微板核酸杂交ELISA分析脲嘧啶DN糖苷酶(UNG/UDG)防止PCR产物污染及其对PCR扩增效率的影响。探讨在不同A/T含量的微生物中含尿嘧啶的PCR产物对核酸杂交的影响。方法 以3组dUTP含量不同的PCR产物作模板,抗污染组用UNG处理,直接进行再次扩增。用微板核酸杂交ELISA检测第二次PCR扩增的结果。结果 抗污染组中含dUTP的PCR产物作模板,结果为阴性,而以不含dU 相似文献
13.
目的:构建人41BB胞膜外区hIgG1Fc融合蛋白真核表达载体。方法:PCR扩增人41BB胞膜外区和hIgG1Fc基因片段,用HindⅢ、PstI酶切41BB胞膜外区,PstI 、EcoR I 酶切hIgG1Fc ,HindⅢ、EcoRI 酶切pCDNA3,纯化后的酶切产物经T4DNA连接酶连接,转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选阳性克隆,PCR及测序鉴定。结果:连接反应产物转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选出多个阳性克隆;分别以针对41BB胞膜外区和hIgG1Fc的引物进行PCR扩增,电泳后观察到一558bp、708bp的特异性条带,与41BB胞膜外区和hIgG1Fc相符,提示构建成功。进一步测序分析证明克隆在pCDNA3 质粒中的41BB和hIgG1Fc序列和读码框架正确,无基因突变。结论:成功构建人41BB胞膜外区hIgG1Fc融合蛋白真核表达载体,为表达41BB融合蛋白奠定基础。 相似文献
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研究了百日咳杆菌毒素S1亚单位与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白(GST-S1)在大肠杆菌(E.coli)中的表达,并一步纯化了重组GST-S1。首先用聚合酶链反应(PCR)扩增出长度为560bp的编码百日咳毒素S1亚单位的DNA片段。该片段比原编码S1蛋白的DNA片段在其3′端缺失了138个碱基,将其按正确的阅读框克隆入质粒pGEX中GST基因的3′端,构成GST-S1融合基因表达载体pGEX-S1。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),可见所表达的GST-S1融合蛋白存在于细菌上清,为可溶性蛋白。分子量为49ku处有明显的蛋白表达带。用谷胱甘肽(GSH)亲和层析系统,一步纯化出GST-S1融合蛋白。最后经凝血酶的消化,得到23ku的重组百日咳杆菌毒素S1亚单位蛋白。为百日咳疫苗的发展提供了依据 相似文献
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GSTM1基因多态性与食管癌遗传易感性的关系 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:探讨GSTM1基因多态性与食管癌遗传易感性的可能关系。方法:采用PCR法对正常人和食管癌患者基因组DNA进行GSTM1基因分型:结果108例食管癌患者中68例为GSTM1型;112例正常对照组标本中55例为GSTM1型的。2组人群GSTM1基因缺失率有显著性差异。结论:GSTM1基因多态性与食管癌易感性相关,GSTM1基因型个体食管癌易感性增高。 相似文献
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目的:克隆人CCR5 5′侧翼调控序列及其基序分析。方法:设计单引物,利用单向多循环PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化人CCR5 5′侧翼调控序列基因组DNA,PCR产物作为序列分析模板。结果:得到长为1.5kb的人CCR5 5′侧翼调控序列基因组DNA序列,并对该区域的基序进行了分析。结论:该方法适合于基因组DNA,特别是逆向扩增一些读框区5′侧翼调控序列。 相似文献
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人卵巢颗粒细胞雌激素β型受体cDNA的克隆和序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 测定和分析人卵巢颗粒细胞中雌激素β型受体(ERβ)cDNA的核苷酸序列结构。方法 采用DMEM培养基、以PERCOLL方法从人体外受精卵泡液中制备颗粒细胞。根据TRlzol Reagent试剂盒方法抽提RNA,并在Dispocolumn柱中用寡聚(dT)纯化mRNA。用SuperScrip^TMⅡRT试剂盒反转录PCR合成cDNA。扩增产物与pGEM-T载体连接,并转化大肠杆菌XL1-Blu 相似文献
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日本血吸虫谷胱甘肽转移酶基因在真核表达载体中的亚克隆 总被引:3,自引:2,他引:3
目的 将日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)基因片段克隆到真核表达载体PBKCMVK ,以便以进行酸疫苗的研究。方法 特定核苷酸引物的设计和合成,TRIZOL试剂以日本血吸虫成虫RNA〈RT-PCR法扩增GST基因编码序列,将扩增产物连接PGEM-T克降体,再亚克隆到真核表达载体PBKCMV中。结果 RT-PCR法特异性扩增出SjGST编码基因片段。其大小约为670bp,经双酶切、PCR鉴定表明所构 相似文献
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目的:分离并克隆大鼠吗啡依赖相关基因。方法:SD大鼠用递增剂量的吗啡作皮下注射,形成吗啡依赖的动物模型。分离鼠脑的中脑导水管周围灰质、伏核、纹状体等核团,提取总RNA,用mRNA差异显示(diferentialdisplayPCR,DDPCR)的方法,筛选吗啡依赖大鼠特异表达产物的cDNA片段。用3组锚定引物(T12MN,M=A,G,T或C,N=A,C或G)和6组随机引物(AP1~AP6)作不同组合进行PCR扩增。结果:获得了80余个差异表达产物的cDNA片段,经斑点杂交初步筛选,克隆了10个阳性片段,选取4个克隆进行序列分析,获得了4个cDNA片段。结论:通过BLAST数据库序列比较,现已确认获得了4个吗啡依赖表达的新基因片段。 相似文献
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结核分枝杆菌耐药基因检测 总被引:8,自引:0,他引:8
目的:研究结核分枝杆菌耐药的分子机制,建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。方法:通过聚合酶链反应、PCR-单链构象多态性、PCR-限制性片段长度多态性分析MT临床分离株的rpoB、rpsL、KatG基因和inhA调节序列。结果:PCR分析耐药基因的敏感性为1-10pgDNA;除rpoB经物PCR扩增为属特异性外,余耐药基因引物PCR扩增都具有较高的种特异性。与传统药敏试验方法相比,PCR与P 相似文献