APP/PS1小鼠海马结构星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白表达及亚甲蓝对其改变的影响

目的 观察APP/PS1转基因小鼠胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在海马结构3个亚区星形胶质细胞内的表达变化,同时对比观察亚甲蓝对其表达改变的影响.方法 20只3月龄APP/PS1小鼠,随机分2组,每组10只,对照组:自由饮水;治疗组:根据小鼠饮水量将亚甲蓝加入日常饮水中(25 mg·kg-1 ·d-1)连用4个月至7个月龄.结果 免疫组织化学结果表明治疗组APP/PS1转基因小鼠海马结构3个亚区星形胶质细胞GFAP的表达与对照组相比下调(P＜0.05).Western印迹检测结果显示,治疗组小鼠海马结构3个亚区星形胶质细胞GFAP表达明显弱于对照组(P＜0.05).结论 亚甲蓝可以下调APP/PS1转基因小鼠海马结构3个亚区星形胶质细胞GFAP的表达.     

姜黄素对APP／PS1双转基因小鼠脑葡萄糖转运子表达的影响

目的采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆和记忆保持能力,评价姜黄素对APP／PS1双转基因小鼠认知功能的影响,并观察姜黄素对APP／PS1双转基因小鼠以及海马葡萄糖转运子1（GLUTl）和GLUT3表达的影响,从脑能量代谢的角度探讨姜黄素神经保护作用的机制。方法将3月龄APP／PS1双转基因小鼠随机分为模型（APP／PS1＋VEH）组,罗格列酮（APP／PS1＋RSG）组,姜黄素大（APP／PS1＋curcumin-H）、中（APP／PS1＋curcumin-M）、小剂量（APP／PS1＋curcumin-L）组。灌胃3个月后,应用免疫组织化学和Western blot方法进行检测。结果Morris水迷宫撤台实验中,与正常对照（Nc）组比较,APP／PS1＋VEH组穿越平台次数减少,且目标象限停留时间缩短（P〈0．01）;与APP／PS1＋VEH组相比,APP／PS1＋curcuminM组穿越平台次数增加（P〈0．01）。免疫组织化学染色,与APP／PS1＋VEH组相比,APP／PS1＋curcumin-H、APP／PS1＋curcumin-M组海马CA1区GLUT1阳性细胞增加（P〈0．05）;APP／PS1＋curcumin-M组GLUT3阳性细胞计数明显增加（P〈0．01）,APP／PS1＋curcumin-H组GLUT3阳性细胞增加（P〈0．05）。Westernblot结果与免疫组织化学结果基本一致。结论姜黄素可改善APP／PS1双转基因小鼠的空间学习记忆和记忆保持能力,影响脑葡萄糖代谢有关的GLUT1和GLUT3蛋白的表达而发挥神经保护作用。     

胰岛素样生长因子-1对APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ_(1-40)沉积的影响

目的以SPF级APP/PS1双转基因小鼠(22周)为阿尔茨海默病(AD)动物模型,皮下注射胰岛素样生长因子-1(IGF-1),观察其对AD模型小鼠脑内淀粉样蛋白(Aβ1-40)表达的影响。方法将APP/PS1双转基因小鼠及隐性基因小鼠分为4组,设立隐性基因组、隐性基因治疗组、转基因组及转基因治疗组。隐性基因治疗组、转基因治疗组分别皮下注射IGF-1[50μg/(kg·d)],共8周。随后,各组行免疫组化方法观察小鼠脑内Aβ1-40的表达。结果转基因组及转基因治疗组可见神经元缺失。同转基因组比较,无论是皮质区还是海马区,转基因治疗组脑内Aβ1-40的表达均明显减少(P0.05)。结论 IGF-1有降低APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ1-40表达的作用,具有阻断和延缓AD模型脑内老年斑形成的作用,尤其是对皮质区的Aβ1-40表达的阻断更为明显。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠脑葡萄糖转运子表达的影响

目的采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆和记忆保持能力,评价姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠认知功能的影响,并观察姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠以及海马葡萄糖转运子1(GLUT1)和GLUT3表达的影响,从脑能量代谢的角度探讨姜黄素神经保护作用的机制。方法将3月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型(APP/PS1+VEH)组,罗格列酮(APP/PS1+RSG)组,姜黄素大(APP/PS1+curcumin-H)、中(APP/PS1+curcumin-M)、小剂量(APP/PS1+curcumin-L)组。灌胃3个月后,应用免疫组织化学和Western blot方法进行检测。结果 Morris水迷宫撤台实验中,与正常对照(NC)组比较,APP/PS1+VEH组穿越平台次数减少,且目标象限停留时间缩短(P0.01);与APP/PS1+VEH组相比,APP/PS1+curcumin-M组穿越平台次数增加(P0.01)。免疫组织化学染色,与APP/PS1+VEH组相比,APP/PS1+curcumin-H、APP/PS1+curcumin-M组海马CA1区GLUT1阳性细胞增加(P0.05);APP/PS1+curcumin-M组GLUT3阳性细胞计数明显增加(P0.01),APP/PS1+curcumin-H组GLUT3阳性细胞增加(P0.05)。Western blot结果与免疫组织化学结果基本一致。结论姜黄素可改善APP/PS1双转基因小鼠的空间学习记忆和记忆保持能力,影响脑葡萄糖代谢有关的GLUT1和GLUT3蛋白的表达而发挥神经保护作用。     

橄榄苦苷对APP/PS1双转基因小鼠淀粉样斑块沉积、神经炎症和记忆损伤的保护作用

目的 探讨橄榄苦苷(OP)对淀粉样前体蛋白(APP)/PS1双转基因小鼠淀粉样斑块沉积、胶质细胞反应性增生炎症反应和记忆损伤的作用。方法 采用OP治疗APP/PS1双转基因小鼠,并以野生型C57BL/6J小鼠为对照。通过水迷宫实验研究APP/PS1双转基因小鼠记忆受损情况及OP在其中的改善作用。通过免疫荧光和硫黄素-S染色观察OP对APP/PS1双转基因小鼠皮层中淀粉样斑块沉积的影响。Western印迹检测OP对APP/PS1双转基因小鼠皮层中β淀粉样蛋白(Aβ)代谢相关蛋白表达的影响。通过免疫荧光和酶联免疫吸附试验(ELISA)研究OP对APP/PS1双转基因小鼠胶质细胞增生反应性炎症的影响。结果 OP可缩短APP/PS1双转基因小鼠逃避潜伏期及找到平台前的游泳距离,增加穿越隐藏平台次数(均P<0.05)。OP可减少APP/PS1双转基因小鼠皮层中淀粉样斑块沉积,降低Aβ代谢相关蛋白糖基化末端终产物受体(RAGE)、β分泌酶(BACE)1和APP的表达(均P<0.05)。OP可减少APP/PS1双转基因小鼠皮层和海马中星形胶质细胞和小胶质细胞数量,降低炎症因子肿瘤坏死因子...     

丙戊酸钠对APP/PS1转基因小鼠脑内海马区老年斑形成的影响

目的研究丙戊酸钠(VPA)对APP/PS1转基因小鼠脑内海马区老年斑(SP)形成的影响。方法 APP/PS1转基因小鼠随机分为对照组和VPA治疗组,VPA治疗后应用免疫组化技术检测APP/PS1转基因小鼠脑内海马区SP的数量及大小。ELISA测定脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)的含量变化。结果 VPA治疗组小鼠海马区域出现的阳性SP数目与对照组相比分别显著减少65%,斑块沉积也分别由0.65%降到0.22%(P0.01)。ELISA结果显示,VPA治疗组小鼠脑内可溶性Aβ的水平(75 pg/mg)较对照组明显下降(92 pg/ml,P0.05)。结论 VPA可以减少APP/PS1转基因小鼠脑内SP的形成,抑制Aβ的生成。     

链脲佐菌素诱导的胰岛素缺乏对APP/PS1转基因小鼠脑内tau蛋白磷酸化的影响

目的观察链脲佐菌素(STZ)诱导的胰岛素缺乏对APP/PS1转基因小鼠脑内tau蛋白磷酸化的影响。方法采用3月龄APP/PS1转基因小鼠,腹腔内注射STZ,诱导产生胰岛素缺乏的阿尔茨海默病(AD)小鼠动物模型。应用免疫组织化学和Western印迹技术检测AD小鼠脑内tau蛋白的磷酸化。结果 Western印迹结果显示,STZ诱导的胰岛素缺乏使AD小鼠脑内Thr231和Ser396位点上的tau蛋白磷酸化表达水平增高;免疫组化染色显示,胰岛素缺乏的AD小鼠大脑皮层神经元内Thr489位点上的tau蛋白磷酸化表达明显高于对照组。结论 STZ诱导的胰岛素缺乏可加剧APP/PS1转基因小鼠脑内tau蛋白异常磷酸化。     

大鼠海马内注射β淀粉样蛋白对脑内小胶质细胞活化和神经元凋亡的影响

目的观察脑内β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积早期对脑内胶质活化和细胞凋亡的影响。方法通过立体定位技术将Aβ_(1-42)注射至大鼠双侧海马,对照组注射反序列Aβ_(42-1)或PBS。分别于注射后3、7、14 d,用免疫组织化学和免疫荧光法检测CD11b、MHCⅡ及活化caspase-3的表达。结果海马内注射Aβ_(1-42)后3 d,大鼠脑内CD11b和MHCⅡ阳性小胶质细胞数量[分别为(345.22±75.86)和(200.22±42.88)],较PBS组[分别为(98.61±20.79)和(35.43±12.46)]和Aβ_(42-1)组[分别为(103.44±22.13)和(43.41±15.63)]明显升高(P<0.01),7 d达到高峰[分别为(486.22±81.51)和(223.62±66.99)],表现为明显的激活状态。注射后3 d,大脑皮质、海马的活化caspase-3阳性细胞数量(132.42±31.80)比PBS组(4.41±3.13)和Aβ_(42-1)组(4.85±3.70)明显升高(P<0.01),7 d后更明显(165.24±33.95),以海马更为显著。结论海马内注射A?可以诱导小胶质活化和神经细胞凋亡,有可能作为研究阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病早期的动物模型。     

NAPP/PS1双转基因小鼠行为学表现及远志皂苷对其调控作用

目的观察APP/PS1双转基因小鼠记忆功能障碍的行为学表现和远志皂苷对其学习记忆能力的保护作用。方法将3月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、TEN低、中、高剂量组(18.5、37、74 mg·kg-1·d-1),选同月龄C57BL/6小鼠为对照组。采用Morris水迷宫法和新物体识别试验检测小鼠的学习记忆能力,采用实时定量PCR及Western印迹方法检测海马神经元Bcl-2、Bax和Caspase-3表达水平。结果与模型组相比,TEN各剂量组小鼠学习记忆能力明显改善(P<0.05);与模型组相比,TEN各剂量组Bax和Caspase-3表达水平明显下降(P<0.05),而Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05)。结论 TEN可改善小鼠的学习记忆功能,其途径可能是通过上调Bcl-2表达,下调Bax表达,调节Bcl-2/Bax的平衡比值,降低Caspase-3表达来实现。     

小鼠脑缺血后星形胶质细胞和小胶质细胞的活化规律比较

目的比较小鼠脑缺血后星形胶质细胞和小胶质细胞的活化规律。方法采用改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞再灌注局灶性脑缺血损伤模型。昆明小鼠48只,随机分为假手术组24只和脑缺血组24只。脑缺血组缺血3h后再分为再灌注1、3、7和14d,每个时间点6只。再灌注结束后,取脑作HE染色观察脑组织病理改变,免疫组织化学染色法检测星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和小胶质细胞离子钙接头蛋白1(Iba1)的表达。结果与缺血再灌注1d比较,脑缺血组缺血再灌注3、7、14d皮质缺血周边区的GFAP阳性产物显著增加[(699.22±160.82)μm2/HP,(1817.97±290.88)μm2/HP,(2831.64±481.38)μm2/HP vs(33.13±7.45)μm2/HP,P0.01]。脑缺血组缺血再灌注1d皮质缺血周边区出现以"分支状"为主的Iba1阳性小胶质细胞,3、7d活化的小胶质细胞显著增多并表现为"灌木样"细胞,14d后活化小胶质细胞呈现"阿米巴样"细胞。结论脑缺血再灌注损伤时,小胶质细胞和星形胶质细胞均出现活化,但小胶质细胞活化出现得更早;星形胶质细胞活化只出现在缺血周边区,而活化的小胶质细胞可从缺血周边区向缺血中央区迁移。     

大鼠脑缺血/再灌流中钙与神经元凋亡关系的研究

目的：观察钙超载与神经元凋亡的关系。方法：采用大鼠全脑缺血模型,观察脑缺血／再灌流后突触体游离钙、神经元凋亡的变化。结果脑缺血／再灌流可以导致突触体游离钙增加及神经元的凋亡,脑缺血／再灌流神经元内游离钙浓度的变化与神经元凋亡的变化是一致的。结论脑缺血／再灌流诱导钙超载参与了神经元凋亡。     

前咽缺陷蛋白-1在APP/PS1转基因阿尔茨海默病小鼠模型中枢神经系统的分布及表达

目的 研究y-分泌酶组件蛋白APH-1(anterior pharynx defective 1,APH-1)在成年APP/PS1双转基因痴呆小鼠中枢神经系统(central nervous system,CNS)中的分布及表达,以及在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型鼠和野生型小鼠脑中的表达差异,以进一步明确APH-1与AD的关系.方法 对APP/PS1双转基因AD模型种鼠交配后产下的子代进行基因分型,用免疫组化方法检测APH-1在成年APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠CNS内的分布及表达,以及比较APH-1在出生后1d、7d、21 d、120 d的痴呆小鼠及同窝野生型小鼠脑内的表达和分布情况.结果 APH-1广泛分布于成年痴呆小鼠CNS的各区域,包括大脑皮质、海马、嗅脑、丘脑、纹状体、尾状核、中缝大核、小脑、脑干和脊髓等;出生1 dAD模型鼠与同窝野生型小鼠大脑皮质内APH-1均有高水平表达,而出生7d、21d表达水平较低,且成年小鼠脑中其表达量有所回升;各时间点痴呆小鼠脑内APH-1免疫阳性反应都比同窝野生型小鼠显著增强(P＜0.05).结论 APH-1在痴呆小鼠的CNS中广泛分布,但不同脑区分布和表达存在差异;且痴呆小鼠和正常野生型小鼠脑内APH-1分布和表达有区别,这些差异可能与AD的发生相关.     

糖尿病大鼠脑缺血再灌注后细胞外信号调节激酶1/2表达与海马CA4区神经元凋亡

目的 探讨糖尿病大鼠脑缺血再灌注后神经元细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulated kinase,ERK)1/2表达及其意义.方法 72只健康成年SD大鼠随机分假手术组、正常血糖脑缺血组和糖尿病腑缺血组,每组根据缺血再灌注不同时点分为缺血 15 min再灌注1 h、3 h,6 h亚组,每个亚组6只.采用链脲佐菌素诱导糖尿病,双血管闭塞联合放血法建立糖尿病大鼠全脑缺血模型.应用TUNEL和免疫组化方法观察海马CA4区神经元凋亡和磷酸化ERK1/2表达.结果 糖尿病脑缺血组在缺血 15 min、冉灌注1 h,3 h,6 h各时间点海马CA4区神经元凋亡发生率均明显高于正常血糖脑缺血组(P<0.05);糖尿病脑缺血组在各时间点磷酸化ERK1/2均有较高表达,在再灌注1 h和3 11时均明显高于正常血糖组(P<0.01).结论 ERK1/2可能参与了糖尿病加重脑缺血冉灌注后神经元损伤的机制.     

脑缺血对阿尔茨海默病大鼠海马内病理特征及炎性反应的影响

目的观察脑缺血后阿尔茨海默病(AD)大鼠海马内的病理特征、炎性细胞及细胞因子表达的变化,探讨脑缺血在AD病程进展中的作用及机制。方法经Morris水迷宫筛选SD大鼠30只.随机分为AD组、AD+脑缺血组、对照组,每组10只。大鼠海马注射凝聚态淀粉β样蛋白_(1-10)成功建立AD模型后.海马注射内皮素-1建立脑缺血条件,观察脑缺血后AD大鼠海马内淀粉β样蛋白(Aβ)的沉积及神经元丢失的变化,采用免疫组织化学、原位杂交和RT-PCR检测脑缺血后AD大鼠海马内星形胶质细胞的数量和白细胞介素1β(IL-1β)、TNF-α表达的变化。结果与对照组比较,AD组和AD+脑缺血组大鼠海马星形胶质细胞数量、IL-1β和TNF-α表达均显著增多(P<0.01)。结论脑缺血促进了AD大鼠海马内Aβ的沉积和神经元的丢失,提示脑缺血可促进AD的病程进展,星形胶质细胞、IL-1β和TNF-α参与了这一过程。     

ERK-1/2对N/OFQ调节大鼠皮层神经元延迟整流钾电流激活动力学的影响

目的研究ERK-1/2对N/OFQ调节大鼠皮层神经元延迟整流钾电流(IK)激活动力学的影响,初步探讨N/OFQ调节大鼠皮层神经元IK的ERK-1/2途径。方法研究采用全细胞膜片钳技术,观察ERK-1/2特异性抑制剂U0126对N/OFQ调节大鼠皮层神经元IK激活动力学的影响。结果在ERK-1/2抑制剂U0126存在情况下,IK激活曲线的V1/2由给药前的(-42±3.7)mV向超极化方向移动为(-39.9±5.9)mV(P<0.01)。IK激活曲线的κ由给药前的(21.6±8.1)mV变为给药后的(22.9±3.8)mV(P<0.05)。结论 U0126可以显著抑制N/OFQ对IK激活曲线的影响。     

金葡菌对U937细胞XIAP和cIAP1/2表达的影响

目的探讨X 相关凋亡抑制蛋白（XIAP）和cIAP1/2在金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡中的作用。方法采用Western 印迹分析检测金葡菌感染不同时间后XIAP和cIAP1/2的表达水平;预先用不同浓度的Embelin（XIAP抑制剂）处理U937细胞60 min,观察金葡菌感染30 min后U937细胞的凋亡情况。结果随着感染时间的延长,XIAP和cIAP1/2的表达逐渐下降。加入XIAP的抑制剂Embelin后,U937细胞的凋亡率随着Embelin的浓度增加而逐渐升高。结论XIAP和cIAP1/2参与了金葡菌诱导的U937细胞凋亡过程。Embelin通过特异性地抑制XIAP表达增加金葡菌诱导的U937细胞凋亡率。     

lncRNA NEAT1调控miR-206对缺氧复氧大鼠心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1调控miR-206对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响和机制。方法 体外培养H9c2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧模型。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺氧复氧诱导后lncRNA NEAT1和miR-206的表达水平。将lncRNA NEAT1小干扰RNA(si-lncRNA NEAT1)、miR-206模拟物(miR-206 mimics)分别转染H9c2细胞,缺氧复氧诱导后,检测细胞中丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量以及细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)和cleaved Caspase-9蛋白表达。利用荧光素酶报告基因实验以及RT-qPCR验证lncRNA NEAT1和miR-206的靶向结合关系。结果 缺氧复氧诱导后H9c2细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,miR-206的表达显著降低(P＜0.05)。转染si-lncRNA NEAT1或miR-206 mimics处理缺氧复氧H9c2细胞,细胞存活率显著升高,MDA、ROS含量以及LDH活性显著降低,cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9蛋白的表达显著降低,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05)。lncRNA NEAT1靶向miR-206并负调控miR-206表达。抑制miR-206部分逆转沉默lncRNA NEAT1对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化损伤和凋亡的影响(P＜0.05)。结论 沉默lncRNA NEAT1通过上调miR-206可减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,进而发挥心肌保护作用。     

Regulation and Role of the Presynaptic and Myocardial Na+/H+ Exchanger NHE1: Effects on the Sympathetic Nervous System in Heart Failure

In acute myocardial ischemia and in chronic heart failure, sympathetic activation with excessive norepinephrine (NE) release from and reduced NE reuptake into sympathetic nerve endings is a prominent cause of arrhythmias and cardiac dysfunction. The Na⁺/H⁺ exchanger NHE1 is the predominant isoform in the heart. It contributes to cellular acid–base balance, and electrolyte, and volume homeostasis, and is activated in response to intracellular acidosis and/or activation of guanine nucleotide binding (G) protein‐coupled receptors. NHE1 mediates its signaling via protein kinases A (PKA) or C (PKC). In cardiomyocytes, NHE1 is restricted to specialized membrane domains, where it regulates the activity of pH‐sensitive proteins and modulates the driving force of the Na⁺/Ca²⁺ exchanger. During acute ischemia/reperfusion and in heart failure the activity/amount of NHE1 is increased, leading to intracellular Ca²⁺ overload and promoting structural (apoptosis, hypertrophy) and functional (arrhythmias, hypercontraction) myocardial damage. In sympathetic nerve endings, increased NHE1 activity results in the accumulation of axoplasmic Na⁺ that diminishes the inward and/or favors the outward transport of NE via the neuronal norepinephrine transporter (NET). The increased NE levels within the nerve–muscle junction facilitate the sustained stimulation of myocardial α‐ and β‐adrenoceptors (ARs), which in turn aggravate the increases in myocardial NHE1 activity and the associated deleterious effects. Furthermore, the responsiveness of the β‐AR declines overtime, which results in further release of NE, initiating a vicious cycle. Accordingly, NHE1 is a potential candidate for targeted intervention to suppress this feedback loop.