Aβ1-40诱导PC12细胞神经突触改变的ERK信号转导机制的初步实验研究

目的 探讨ERK信号转导通路在β淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）诱导神经突触损伤中的可能作用机制.方法 星形胶质细胞诱导PC12细胞分化为神经元样细胞,然后随机分为两组：对照组和Aβ1-40组,分别作用不同时间段.应用扫描电镜观察突触数目,透射电镜观察神经突触超微结构,免疫荧光技术检测突触素、生长相关蛋白-43（GAP-43）表达,Western blot检测ERK蛋白表达.结果 Aβ1-40作用PC12细胞4 h时,突触囊泡数目明显减少,突触间隙模糊,突触数目明显减少,突触素和GAP-43表达也明显减少,磷酸化ERK（p-ERK）明显减少,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 Aβ1-40可以诱导PC12细胞神经突触毒性损伤,而且ERK信号转导通路的激活受到抑制,因而推测Aβ1-40诱导PC12细胞神经突触毒性损伤机制与ERK信号转导通路活化受到抑制有关,这可能是AD早期神经突触损伤机制之一.     

尼莫地平对胎鼠神经元烟碱型胆碱能受体缺损的干预及意义

采用β-淀粉样多肽(Aβ1-40)诱导神经元烟碱型胆碱能受体(nAChR)缺损模型,观察尼莫地平干预后模型α4、α7nAChR亚单位蛋白水平及神经元细胞变化。结果,尼莫地平干预后胎鼠皮质细胞、胎鼠海马细胞、PC12细胞的细胞活性分别升高至0.464±0.052、0.329±0.032及0.369±0.029(P<0.01、<0.01、<0.05);α4、α7nAChR亚单位蛋白灰度植分别为0.478±0.04,0.455±0.048(P均<0.05)。提示尼莫地平可显著抑制Aβ诱导的nAChR缺损,其机理为阻断钙离子内流,抑制Aβ的神经毒性作用,上调nAChR。     

Aβ寡聚体预处理的BV2细胞对PC12细胞损伤的影响及其机制

目的 研究Aβ寡聚体预处理的BV2细胞对PC12细胞损伤的影响及机制,为阿尔茨海默病(AD)的抗炎治疗提供体外实验依据.方法 分别用不同浓度Aβ1-42寡聚体(0、10 μmol/L)作用于PC12细胞作为对照组(Aβ+PC12);用相应浓度的Aβ1-42寡聚体预处理BV2细胞24 h后与PC12细胞共育作为实验组1(Aβ+BV2+PC12);不同浓度IL-1β处理PC12细胞24 h作为实验组2(IL-1β+PC12);预先用IL-1ra(50 ng/ml)孵育PC12细胞1 h后,进行实验组1的细胞培养作为实验组3[(Aβ+ BV2)+(PC12+IL-1ra)].用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β水平/浓度,用Western印迹法检测tau(pS396)、tau蛋白表达情况.结果 Aβ寡聚体预处理的BV2细胞培养液中可检测出IL-1β,Aβ寡聚体浓度的增加与IL-1β含量增加呈现一定的量效关系.PC12细胞与Aβ寡聚体预处理24 h的BV2细胞共育后(实验组1),可见PC12细胞tau(pS396)蛋白表达较对照组进一步增多(P＜0.05),此作用可被IL-1ra部分抑制(P＜0.05).结论 BV2细胞可加重Aβ寡聚体对PC12细胞损伤过程;Aβ寡聚体可诱导BV2细胞产生IL-1β,IL-1β通过tau异常磷酸化通路参与的胶质炎症反应可能是PC12细胞损伤的机制之一.     

地黄饮子对Aβ诱导的PC12细胞SODmRNA表达影响的研究

目的研究地黄饮子对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞SODmRNA表达的影响。方法通过实时荧光定量PCR法检测各组PC12细胞SODmRNA的表达。结果与空白组比较,模型组相对定量基因表达升高(P<0.01),地黄饮子含药脑脊液可升高AD模型细胞SODmRNA的表达(P<0.05或P<0.01),中药低、中剂量组与安理申组比较差异无统计学意义,中药高剂量组与安理申组比较有统计学意义(P<0.05)。结论地黄饮子能提高Aβ诱导的PC12细胞SODmRNA的表达,提高对自由基的清除能力。     

绞股蓝皂甙对Aβ诱导AD细胞模型的影响

目的探讨绞股蓝皂甙对Aβ诱导AD细胞模型的影响。方法原代培养胎鼠基底前脑胆碱能神经元,实验细胞分为6组:空白对照组、BDNF组、SLs组、β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)组、Aβ1-40+BDNF组和Aβ1-40+SLs组。应用MTT比色试验检测SLs对细胞活性的影响,免疫细胞化学染色检测胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达;采用Aβ1-40诱导AD细胞模型,运用免疫细胞化学染色和流式细胞仪分别检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达和凋亡。结果空白对照组、BMDF组、SLs组、Aβ1-40组、Aβ1-40+BNDF组、Aβ1-40+SLS组实验细胞MTT检测细胞积分吸光度(IA)值分别为0.61±0.04、0.91±0.07、0.92±0.07、0.36±0.02、0.56±0.04、0.55±0.04,ChAT免疫阳性细胞数分别为43.00±2.73、64.00±4.57、61.00±4.62、21.00±1.92、41.00±2.69、40.00±2.54,iNOS免疫阳性细胞数分别为41.00±2.92、40.00±2.89、40.00±2.96、67.00±5.26、46.00±2.78、45.00±2.97,细胞凋亡数分别为30.00±2.31、29.00±2.12、28.00±2.49、57.00±3.83、33.00±1.75、34.00±3.46。Aβ1-40+SLs组细胞活性与ChAT阳性细胞数均高于Aβ1-40组(P<0.05),Aβ1-40+SLs组iNOS阳性细胞数与细胞凋亡数均低于Aβ1-40组(P<0.05)。结论 SLs可促进体外培养的胆碱能神经元及其突起生长,可提高神经元的活性和ChAT表达,并可有效抑制Aβ1-40诱导的神经元iNOS表达和细胞凋亡。绞股蓝皂甙对Aβ诱导的AD细胞模型具有保护作用。     

肝再生增强因子在β-淀粉样肽(25-35)诱导PC12细胞中的表达

目的观察肝再生增强因子(ALR)在β-淀粉样肽(25-35)(Aβ25-35)诱导PC12细胞阿尔茨海默病(AD)体外模型中的表达。方法体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,分为实验组和空白对照组,实验组用终浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞建立AD细胞模型,MTT法测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,应用RT-PCR检测ALR mRNA表达变化、Western印迹法检测ALR蛋白表达变化。结果 Aβ25-35组中PC12细胞的存活率较对照组明显降低(P<0.05),细胞凋亡率也明显增高(P<0.05),ALR mRNA在Aβ25-35组中表达较对照组明显降低(P<0.05),W estern印迹法检测其蛋白表达也较对照组下降(P<0.05)。结论 ALR在Aβ25-35诱导PC12细胞致AD模型中表达减少,可能与AD的发生发展有关。     

α7尼古丁受体mRNA表达抑制对SH-SY5Y细胞氧化应激水平的影响

目的探讨通过RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达后细胞氧化应激水平的变化,以了解该受体的神经保护作用。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小分子干扰RNA,Real-time PCR法检测转染细胞中α7 nAChR mRNA水平蛋白质印迹方法检测蛋白表达水平;并用Aβ1～42处理培养细胞,比色法测定细胞脂质过氧化产物水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果转染siRNA后,α7 nAChR mRNA水平和蛋白表达水平分别降低了81.7%和76.9%;细胞脂质过氧化水平升高38.4%;SOD和GSH-PX活性分别降低30.3%和21.1%。用Aβ1～42处理细胞后氧化应激水平升高,且转染siRNA后能增强Aβ的神经毒性作用。结论α7 nAChR基因表达抑制后能增强细胞氧化应激水平,同时增强Aβ的神经毒性作用。     

阿尔茨海默病患者脑脊液α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L水平变化及意义

目的 观察阿尔茨海默病(AD)患者α-突触核蛋白、β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、总牛磺酸(T-tau)、磷酸化牛磺酸(P-tau)、轻链蛋白(NF-L)水平变化,并探讨其临床意义.方法 AD患者43例(AD组),血管性痴呆(VD)患者51例(VD组),健康体检者30例(对照组),检测各组脑脊液α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L,应用多因素分析联合5个指标区分AD和VD的灵敏度、特异度.结果 与对照组比较,AD组脑脊液α-突触核蛋白、T-tau、P-tau、T-tau/P-tau、NF-L水平升高,Aβ1-42水平降低(P均＜0.05);与对照组比较,VD组脑脊液α-突触核蛋白、T-tau、P-tau、T-tau/P-tau、NF-L水平升高(P均＜0.05);与VD组比较,AD组脑脊液Aβ1-42、T-tau、T-tau/P-tau 水平升高(P均＜0.05).联合5个指标区分AD和VD的灵敏度为93％、特异度为88％.结论 α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L在AD中表达升高或降低,联合检测五种指标有可能早期诊断AD及鉴别VD.     

琐琐葡萄多糖对β淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨琐琐葡萄多糖(VTP)对β淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导PC12细胞凋亡的影响及作用机制。方法 Aβ25~35诱导PC12细胞建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,VTP(20、40、80 mg/L)作用于细胞模型,CCK-8法检测各组细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Real-time PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达。结果 VTP可提高PC12细胞活性,降低细胞凋亡率,增强Bcl-2 mRNA表达,抑制Bax mRNA表达。结论VTP对Aβ25~35诱导的PC12细胞凋亡具有明显的保护作用,其机制可能是通过增强Bcl-2 mRNA表达、降低Bax mRNA表达,抑制细胞凋亡。     

Carnosine对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的神经保护作用

目的　研究 Carnosine对 β淀粉样蛋白片段 (Aβ2 5- 3 5)诱发 PC1 2细胞损伤的神经保护作用。方法　将培养的 PC1 2细胞分为三组 :正常对照组、损伤组和保护组。损伤组用 Aβ2 5- 3 5处理细胞 ,保护组在用 Aβ2 5- 3 5处理前 30 min加入 Carnosine。使用细胞形态学方法、LDH法、MTT法观察 Carnosine的神经保护作用。结果　通过形态学方法 ,保护组细胞数显著比损伤组多 ,受损变圆的细胞数较少。保护组 LDH活性显著少于损伤组(P<0 .0 1 ) ;MTT显著高于损伤组 (P<0 .0 1 )。结论　 Carnosine对 Aβ2 5- 3 5诱发 PC1 2细胞损伤有显著的保护作用。