肝硬化患者外周血单核细胞内毒素受体表达与慢性炎症反应关系的临床意义

背景:内毒素受体在内毒素、细胞因子等介导的炎性信号转导过程中具有重要作用。目的:了解肝硬化患者外周血单核细胞(PBMC)内毒素受体的表达变化与慢性炎症反应关系的临床意义。方法:应用荧光素标记的抗人Toll样受体(TLR)4/抗人CD14单抗,以流式细胞术检测40例肝硬化患者和15名健康志愿者PBMC内毒素受体TLR4和CD14蛋白的表达;以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内毒素受体TLR4 mRNA、CD14 mRNA和信号转导分子MyD88 mRNA的表达;以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;以偶氮基质显色法测定血浆内毒素水平。结果:肝硬化患者PBMC内毒素受体TLR4和CD14蛋白的表达水平显著高于对照组(P<0.05),但不同Child-Pugh分级组间差异无统计学意义;与对照组相比,PBMC内毒素受体TLR4 mRNA、CD14 mRNA和信号转导分子MyD88 mRNA的表达水平也有增高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);肝硬化患者血清细胞因子IL-1β、IL-10和TNF-α水平,以及血浆内毒素水平均较对照组显著升高(P<0.05),且高内毒素水平患者内毒素受体的表达显著高于低内毒素水平患者(P<0.05),细胞因子水平也较低内毒素水平者增高。结论:肝硬化患者PBMC内毒素受体的表达明显上调,与患者的慢性炎症反应状态一致。     

TLR4与NLRP3的交叉调控信号在高尿酸血症炎症反应中的作用

目的研究Toll样受体(TLR) 4和NOD样受体蛋白(NLRP) 3调控的信号通路在原发性高尿酸血症(HUA)炎症反应中的作用。方法 HUA患者75例为HUA组,健康对照45例为HC组,提取两组外周血单个核细胞,利用Western印迹检测两组TLR4、NLRP3、核因子(NF)-κB、白细胞介素(IL)-1β的蛋白表达情况,酶联免疫吸附(ELISA)实验检测两组血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平。结果 HUA组TLR4、NLRP3、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平明显高于HC组,血浆IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性细胞因子表达显著高于HC组(均P<0. 05)。结论原发性HUA患者外周血单个核细胞中TLR4、NLRP3调控的关键信号蛋白表达上调,血浆炎性细胞因子明显增多,TLR4、NLRP3可能通过调节炎症反应参与原发性HUA疾病进程。     

TLR4激动上调内皮细胞氧化低密度脂蛋白受体LOX-1表达

目的近年研究表明介导先天免疫反应的受体Toll样受体4(TLR4)参与了动脉硬化的发生发展.业已证明氧化低密度脂蛋白受体LOX-1介导内皮细胞活化和功能失调,激发炎症过程,在动脉粥样硬化的发生和发展中起着极为重要作用.本研究观察TLR4激动是否调节内皮细胞LOX-1表达.方法应用脂多糖(LPS)刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24 h.采用RT-PCR和流式细胞术分别检测TLR4、LOX-1 mRNA和蛋白表达水平.为了观察转录因子NF-κB在调节LOX-1表达中的作用,应用NF-κB特异性抑制剂咖啡酸苯乙酯(CAPE)预处理细胞,然后以LPS刺激,检测LOX-1 mRNA和蛋白变化.结果LPS(10～1 000 ng/mL)上调HUVECs TLR4和LOX-1 mRNA表达,LPS(1 000ng/mL)上调TLR4和LOX-1蛋白表达,CAPE(20μg/mL)可抑制LPS介导的LOX-1表达上调.结论TLR4/NF-κB信号途径可能通过上调内皮细胞LOX-1表达参与动脉粥样硬化的发生及发展.     

TLR4激动上调内皮细胞氧化低密度脂蛋白受体LOX-1表达

目的近年研究表明介导先天免疫反应的受体Toll样受体4(TLR4)参与了动脉硬化的发生发展。业已证明氧化低密度脂蛋白受体LOX-1介导内皮细胞活化和功能失调，激发炎症过程，在动脉粥样硬化的发生和发展中起着极为重要作用。本研究观察TLR4激动是否调节内皮细胞LOX-1表达。方法应用脂多糖(LPS)刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24h。采用RT—PCR和流式细胞术分别检测TLR4、LOX-1 mRNA和蛋白表达水平。为了观察转录因子NF—kB在调节LOX-1表达中的作用，应用NF-kB特异性抑制剂咖啡酸苯乙酯(CAPE)预处理细胞，然后以LPS刺激，检测LOX-1 mRNA和蛋白变化。结果LPS(10～1000ng／mL)上调HUVECs TLR4和LOX-1 mRNA表达，LPS(1000ng／mL)上调TLR4和LOX-1蛋白表达，CAPE(20μg／mL)可抑制LPS介导的LOX-1表达上调。结论TLR4／NF-kB信号途径可能通过上调内皮细胞LOX-1表达参与动脉粥样硬化的发生及发展。     

血小板因子4促进人脐静脉内皮细胞Toll样受体2的表达

目的 探讨血小板因子4对人脐静脉内皮细胞Toll样受体2表达的影响.方法 采用人重组细胞因子血小板因子4刺激人脐静脉内皮细胞株ECV304,通过RT-PCR和Western Blotting分别检测ECV304中Toll样受体2 mRNA和蛋白表达.细胞免疫组织化学法检测血小板因子4刺激后ECV304中Toll样受体2的表达量.结果 血小板因子4刺激人脐静脉内皮细胞株后能促进Toll样受体2 mRNA和蛋白表达.与空白组相比,100μg/L血小板因子4处理人脐静脉内皮细胞株能在基因及蛋白水平促进其Toll样受体2表达并呈现一定的时间依赖性(n=5,P<0.05),且肝素不能抑制血小板因子4的这种作用.细胞免疫组织化学法也显示与空白组(0.001 385±0.000 953)相比,血小板因子4处理后人脐静脉内皮细胞Toll样受体2表达显著增多(0.060 399±0.020 998,P<0.05).结论 血小板因子4促进人脐静脉内皮细胞株表达Toll样受体2,此效应可能与血小板在动脉粥样硬化中的作用有关.     

PTEN对ox-LDL诱导的巨噬细胞炎性因子的影响及机制研究

目的:分析第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞炎症因子影响及其作用机制。方法:将构建pc DNA3.1(+)-PTEN(r PTEN)重组表达载体及PTEN siRNA转染小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,用制备的50 mg/L的ox-LDL孵育24 h,RT-PCR及Western blot分析PTEN的mRNA及蛋白表达水平;ELISA检测炎性因子TNF-α和IL-6的水平;同时Western blot分析对Toll样受体4(TLR4)及转录因子-κB(NF-κB)的影响及其作用机制。结果:PTEN过表达增高了ox-LDL诱导的TNF-α和IL-6的水平;PTEN沉默抑制了ox-LDL诱导的TNF-α和IL-6炎性因子水平。进一步分析表明,PTEN过表达加强了巨噬细胞中ox-LDL诱导的TLR4及其下游NF-κB通路的活化,而抑制其表达后,TLR4-NF-κB通路明显受到抑制;用TLR4特异性抗体预处理后,PTEN过表达诱导的TNF-α和IL-6的水平明显下降。进一步机制分析证实,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)抑制剂LY294002(1μmol/L)预处理后,PTEN沉默抑制的TLR4-NF-κB通路的活性明显增加,且伴随有TNF-α和IL-6水平的上调。结论:PTEN有可能通过负向调节PI3K/AKT抗炎通路来影响TLR4-NF-κB炎性通路,进而参与巨噬细胞介导的炎症进程。因此,本研究将为心脑血管疾病的防治提供新的靶标。     

制大黄-川芎药对通过TLR4/Myd88/NF-κB信号对造影剂诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡及肾组织炎症因子IL-6、IL-1β的影响

目的探讨制大黄-川芎药对对造影剂肾病(CIN)大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响及潜在作用机制,并检测其对肾组织炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β分泌的影响。方法 24只SD大鼠随机分为正常组(Control组)、模型组(CIN组)和制大黄-川芎药对组(Drug pair组),造模后处死,测量各组血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及肾脏指数,原位末端标记(TUNEL)染色法测各组肾小管上皮细胞凋亡变化,Western印迹检测各组肾组织凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Toll样受体(TLR4)/髓样分化因子(Myd88)/核转录因子(NF)-κB通路蛋白表达变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组肾组织中炎性细胞因子IL-6、IL-1β分泌。结果与Con-trol组相比,CIN组Scr、BUN含量和肾指数均显著上高,肾小管上皮细胞凋亡率显著增加,Bcl-2表达显著降低,Bax表达显著升高,TLR4/Myd88/NF-κB通路活性和炎性细胞因子IL-6、IL-1β分泌显著增加(均P0. 05); Drug pair组较CIN组Scr、BUN含量和肾指数均明显回落,肾小管上皮细胞凋亡率显著降低,Bcl-2表达显著增加,Bax表达显著降低,TLR4/Myd88/NF-κB通路活性和炎性细胞因子IL-6、IL-1β分泌显著降低。结论制大黄-川芎药对可能通过TLR4/Myd88/NF-κB信号通路减少造影剂诱导的炎性细胞因子IL-6、IL-1β分泌,进而抑制了CIN大鼠肾小管上皮细胞凋亡,发挥保护作用。     

白藜芦醇对单核细胞表达CC类趋化因子受体2基因和内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白1的影响

目的 探讨白藜芦醇对活化的人脐静脉内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白1及对人单核细胞株THP-1细胞表面CC类趋化因子受体2基因表达的影响.方法 半定量逆转录聚合酶链反应法检测THP-1细胞CC类趋化因子受体2 mRNA的表达;以肿瘤坏死因子α激活人脐静脉内皮细胞,酶联免疫吸附法测定活化的人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的分泌.结果 10 μmol/L和50 μmol/L白藜芦醇可以抑制THP-1细胞CC类趋化因子受体2 mRNA的表达(0.19±0.02和0.06±0.02比0.73±0.15,P<0.01),且随着白藜芦醇剂量的升高(1、10、50 μmol/L),基因表达抑制也逐渐加强(P<0.01);10 μmol/L和50μmol/L白藜芦醇可减少活化的人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的分泌(9 663.33±927.38 ng/L和2 822.17±472.47 ng/L比16 595.67 ±1 667.39 ng/L,P<0.01),随着白藜芦醇剂量升高,单核细胞趋化蛋白1分泌逐渐减少(P<0.01).结论 白藜芦醇能剂量依赖性地抑制单核细胞CC类趋化因子受体2基因的表达,并减少活化的内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的分泌,从而有效抑制单核细胞的趋化,发挥抗动脉粥样硬化的作用.     

丹皮酚对高血压患者血管内皮细胞Toll样受体4、核因子-κB表达的影响

目的 观察丹皮酚对Toll样受体(TLR)、核因子(NF) -κB信号转导通路的影响,探讨其对高血压患者血管内皮细胞的保护机制.方法 10％高血压患者及健康人血清干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)24 h,实时荧光定量(PCR)法检测TLR4 mRNA表达.不同浓度的丹皮酚干预脂多糖(LPS)诱导的HUVEC-C TLR4表达(24 h)及NF-κB活化(2 h),PCR法测TLR4 mRNA及NF-κB mRNA的表达,免疫印迹技术测TLR4蛋白及NF-κB蛋白的表达.结果 血清作用24 h后,高血压病组TLR4 mRNA的表达较健康组增高(P＜0.01).丹皮酚可呈剂量依赖性减少LPS诱导的TLR4 mRNA高表达,抑制LPS诱导的TLR4蛋白高表达和IκBα蛋白的降解(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 TLR-NF-κB信号途径介导的炎症反应和免疫紊乱是高血压病血管内皮损伤的机制之一,丹皮酚可通过抑制其表达保护血管内皮细胞损伤.     

老年大鼠海马炎性衰老相关基因表达及淫羊藿苷对其影响

目的 探讨炎性衰老的炎性细胞因子网络机制，及淫羊藿苷（Icariin，Ica）干预的效果与机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠30只，随机等分为4月龄（4m）、24月龄（24m）和24月龄加Ica干预（24m＋Ica）三组。自21月龄满开始，24m＋Ica组予Ica灌胃，24m组给予等量蒸馏水灌胃，均连续90d。取各组大鼠海马组织，应用炎症细胞因子与受体基因芯片进行基因表达检测，绘制基因表达谱，筛选有表达差异的基因。海马组织匀浆，离心取上清液，运用酶联免疫吸附法检测上清液中炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-10蛋白表达。结果在海马组织中，与4m组相比，24m组表达卜调的促炎性反应细胞因子与受体基因有9个，表达下调的抗炎细胞因子与受体基因有6个。与24m组比较，24m＋Ica组中表达上调的抗炎细胞凶子与受体基因有6个，下调的促炎细胞因子与受体基因有9个。24m组海马组织中TNF-α和IL-6蛋白水平都显著高于4m组（P〈0，01）；与24m组比较，24m＋Ica组中TNF-α和IL-6蛋白水平都明显降低，IL-1蛋白水平显著升高（P〈0．01）。与4m组相比，24m组海马组织上清液中TNF-α／IL-10和IL-6／IL-10比值均显著升高（P〈0．01）；24m＋Ica组TNF-α／IL-10和IL-6／IL-10比值均比24m组显著降低（P〈0．01）。结论 老年大鼠海马存在促炎性细胞因子基闪表达上调，导致促航炎性细胞因子网络和促-抗炎反应体系平衡失调，这可能是炎性衰老中出现高促炎性反应状态的原因和炎性衰老发生的新机制；Ica可能通过下调促炎性细胞因子基因表达和上调抗炎性细胞因子基因表达，重塑促-抗炎性细胞因子网络和促-抗炎性反应体系新的平衡来干预炎性衰老。     

溃疡性结肠炎患者肠道菌群变化与细胞因子、TLRs分子表达的相关性研究

目的探讨溃疡性结肠炎患者肠道菌群变化与细胞因子、TOLL样受体(Toll-like receptors,TLRs)分子表达的相关性。方法将2015年6月—2016年12月在山东省医学科学院第三附属医院确诊并接受治疗的溃疡性结肠炎患者78例作为试验组,同时选择未患溃疡性结肠炎的80例健康者作为对照组。分别对试验组和对照组进行肠道菌群检测,肠黏膜TLR2、TLR4、TLR5、TLR9分子表达检测和外周血IL-4、IL-6、IL-17、IL-23、TNF-α等炎性细胞因子表达检测,分析炎性细胞因子和TLRs表达与肠道菌群变化的关系。结果试验组双歧杆菌、乳杆菌含量明显低于对照组(P均0.05),拟杆菌、肠杆菌、肠球菌、梭杆菌含量明显高于对照组(P均0.05);试验组肠黏膜组织中TLR2、TLR4、TLR5、TLR9表达明显高于对照组(P均0.05);试验组外周血IL-4表达低于对照组,IL-6、IL-17、IL-23、TNF-α等炎性细胞因子表达高于对照组(P均0.05)。Pearson相关性分析显示,TLR2、TLR4、TLR5、TLR9表达与拟杆菌、肠杆菌、肠球菌含量呈正相关,与双歧杆菌、乳杆菌含量呈负相关;与IL-6、IL-17、IL-23、TNF-α表达呈正相关,与IL-4表达呈负相关。结论溃疡性结肠炎患者正常肠道菌群平衡被打破,促炎因子表达增加,抑炎因子表达减少,TLRs分子表达增加。肠道菌群紊乱可能通过增强TLRs分子表达来促进促炎因子的分泌,介导肠黏膜炎性反应。     

层流切应力刺激对人脐静脉血管内皮细胞Toll样受体mRNA表达的影响

目的用RT-PCR和Northern杂交技术,评价层流低切应力刺激对人脐静脉血管内皮细胞Toll样受体(TLR)表达的影响。方法将0.42 Pa切应力为低切应力组处理内皮细胞1 h,未作任何刺激的内皮细胞为对照组,从两组血管内皮细胞提取总RNA,采用RT-PCR和Northern杂交技术明确对照和切应力刺激1 h人脐静脉血管内皮细胞TLR-2和TLR-4 mRNA的表达情况。结果RT-PCR和Northern杂交均显示,层流低切应力刺激1 h后血管内皮细胞TLR-4表达增强、TLR-2几乎无变化。结论层流低切应力可引起人脐静脉内皮细胞TLR-4 mRNA表达增加,提示炎性信号受体TLR-4可能介导层流切应力诱导血管内皮细胞某些效应基因的表达。     

炎性衰老机制与干预的实验研究

目的 运用基因芯片筛选与炎性衰老相关的炎性细胞因子与受体特征基因,探讨其炎性细胞因子网络调控机制;观察淫羊藿总黄酮(EF)和淫羊藿苷(Ica)对该网络的干预效果与机制.方法 SD大鼠分为4月龄(4 m)、24 m、24 m+EF和24 m+Ica组,每组10只.分别取各组大鼠海马和肺组织,用炎症细胞因子与受体基因芯片对各组组织分别进行基因表达检测.结果 (1)海马组织:24 m组与4 m组比较,促炎症细胞因子表达上调;同时抗炎症细胞因子下调.24 m+EF组、24 m+Ica组与24 m组比较,可见大量抗炎症细胞因子上调而促炎症细胞因子下调.(2)肺组织:24 m组与4 m组比较,促炎症细胞因子上调,同时抗炎症细胞因子下调.24 m+EF组、24 m+Ica组与24 m组比较,发现大量抗炎症细胞因子上调而促炎症细胞因子下调.结论 老年大鼠存在促炎性细胞因子基因表达上调和抗炎性因子表达下调,导致促-抗炎性细胞因子网络平衡失调;EF和Ica可能通过下调促炎性细胞因子基因表达和上调抗炎性细胞因子基因表达,重塑促-抗炎性细胞因子网络平衡而干预炎性衰老.     

丹参化学成分对脂多糖激活Kupffer细胞作用的影响

目的 探讨丹参化学成分对脂多糖激活Kupffer细胞(KCs)作用的影响及机制.方法 60 ng/ml脂多糖(LPS)作用原代培养的KCs 12 h后,加入丹参提取物及分离纯化的丹参化学成分——丹参新醌乙、丹参新酮、丹参醇A、丹参酮Ⅰ、异丹参酮Ⅰ、丹参新醌甲、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、丹参酚酸B各100 μg/ml.培养12 h后,以MTT法检测KCs的增殖情况,ELISA检测培养上清中TNFα、IL-6和IL-8的含量,Western Blot检测KCs内CD14 、TLR2和TLR4蛋白的表达.结果 除丹参新醌乙外,其余受试的丹参化学成份和丹参提取物均能不同程度地抑制LPS刺激后的KCs增殖,但以丹参酮(1)、丹参新醌甲和丹参新酮的抑制率最高.LPS刺激后,KCs分泌TNFα、IL-6、IL-8的能力显著升高;丹参新醌乙和丹参酚酸B对三种细胞因子的分泌无明显抑制作用,丹参酮Ⅱ A对IL-8的分泌无影响,其余受试成分对KCs的分泌能力有不同程度的抑制作用.Western Blot结果表明,LPS刺激KCs后CD14、TLR2、TLR4的蛋白表达量显著增加,加入受试的各丹参成分后,丹参新醌乙、丹参酚酸B对CD14表达无影响,丹参新醌乙和丹参新酮对TLR2表达无影响,丹参新醌乙、丹参酮ⅡA和丹参酚酸B对TLR4蛋白表达无影响,其余受试成份分别对该三种蛋白的表达有下调作用.结论 除丹参新醌乙外,其他丹参化学成份可不同程度抑制LPS对KCs的激活作用,降低KCs的增殖程度及分泌炎性细胞因子的能力.该抑制效应与丹参下调LPS受体CD14和Toll样受体TLR2、TLR4的蛋白表达有关.     

基于基因表达谱研究淫羊藿总黄酮干预老年大鼠海马炎性衰老的效果与机制

目的探讨炎性衰老的炎性细胞因子网络机制,及淫羊藿总黄酮（epimedium total flavonoids,EF）干预的效果与机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠分为3组：4月龄（4 m）组、24月龄（24 m）组和24月龄加EF干预（24 m＋EF）组,每组10只。自满21月龄当天开始,24 m＋EF组予EF灌胃,24 m组给予等量蒸馏水灌胃,均连续90 d。取各组大鼠海马组织,应用炎症细胞因子与受体基因芯片对海马组织分别进行基因表达检测,绘制基因表达谱,筛选有表达差异的基因。海马组织匀浆,离心取上清液,运用酶联免疫吸附法检测上清液中炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）和IL-10蛋白表达。结果在海马组织中,与4 m组相比,24 m组表达上调的促炎性反应细胞因子与受体基因有9个,表达下调的抗炎性细胞因子与受体基因有6个。与24 m组比较,24 m＋EF组中表达上调的抗炎性细胞因子与受体基因有8个,表达下调的促炎性细胞因子与受体基因有11个。24 m组海马组织中TNF-α和IL-6水平都显著高于4 m组（P〈0.01）; 与24 m组比较,24 m＋EF组中TNF-α和IL-6水平都明显降低,IL-10水平显著升高（P〈0.01）。与4 m组相比,24 m组海马组织上清液中TNF-α/IL-10和IL-6/IL-10比值均显著升高（P〈0.01）; 24 m＋EF组TNF-α/IL-10和IL-6/IL-10比值均比24 m组显著降低（P〈0.01）。结论老年大鼠海马存在促炎性细胞因子表达上调,导致促-抗炎性细胞因子网络和促-抗炎反应体系平衡失调,这可能是炎性衰老中出现高促炎性反应状态的原因和炎性衰老发生的新机制; EF可能通过下调促炎性细胞因子表达和上调抗炎性细胞因子表达,重塑促-抗炎性细胞因子网络和促-抗炎性反应体系新的平衡,达到干预炎性衰老的目的。     

脂联素对人脐静脉内皮细胞CD55和CD59表达的影响

目的 观察脂联素对人脐静脉内皮细胞补体调节蛋白CD55和CD59表达的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞;分为空白对照组、C-反应蛋白(CRP)组和脂联素组,人脐静脉内皮细胞分别与50 μg/ml的CRP和25 μg/ml的脂联素共同孵育48 h,流式细胞仪检测CD55和CD59的表达.结果 CRP刺激后CD55平均荧光强度、CD59平均荧光强度和CD55阳性百分率较空白对照组升高(3.84±0.21比2.81±0.06,P<0.001;69.72±4.48比51.15±7.86,P<0.01;98.30±1.13比93.57±1.18,P<0.001);脂联素刺激后CD59平均荧光强度和CD55阳性百分率较空白对照组升高(63.02±4.90比51.15±7.86,P<0.05;96.55±0.66比93.57±1.18,P<0.01).结论 脂联素是人脐静脉内皮细胞CD55和CD59表达的上调因素,并可能通过上调内皮细胞CD55和CD59的表达发挥抗炎、抗动脉粥样硬化作用.     

急性时相血清淀粉样蛋白A和辛伐他汀对内皮细胞IL-6、8基因表达的影响

目的探讨急性时相血清淀粉样蛋白A（A-SAA）和辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞（HU-VECs）促炎性细胞因子白细胞介素（IL）-6和8基因表达的影响。方法用不同浓度的A-sAA（Zmg／L、10mg／L）、辛伐他汀（5μmol／L、10μmol／L）处理HUVEC8h、24h后抽提RNA，用半定量逆转录聚合酶链反应技术检测细胞因子IL-6、IL-8rnRNA的表达。结果A-SAA能显著促进HUVECIL-6、IL-8rnRNA的表达，并呈剂量和时间依赖性（P〈0．01）。辛伐他汀可降低A-SAA对HUVEC IL-6和IL-8mRNA表达的促进作用。结论A-SAA可通过促进内皮细胞IL-6、IL-8的表达和分泌，参与动脉粥样硬化（AS）的形成；辛伐他汀可减低A-SAA对内皮细胞IL-6和8的促分泌作用而发挥其抗炎、抗AS的作用。     

烟草提取物对人脐静脉内皮细胞影响的研究

目的:观察香烟提取物(CES)对人脐静脉内皮细胞的影响,并初步探讨吸烟导致动脉粥样硬化的可能机制。方法:采用浓度分别为2.5%、5%、10%、20%和40%的CSE以相同的时间24h处理人脐静脉内皮细胞,另用同一浓度10%CSE分别处理人脐静脉内皮细胞6,12,24和48 h,用MT方法分析浓度及时间梯度CES处理后细胞的抑制率。采用未加CES处理的人脐静脉内皮细胞作为对照组,ELISA方法检测VCAM-1、ICAM-1、TNF-α及IL-6等细胞因子的水平;Western blot方法检测人脐静脉内皮细胞自噬基因蛋白的表达水平。结果:MTT检测显示CSE以浓度梯度和时间梯度的方式降低HUVEC的细胞活性;ELISA检测结果表明CES增加VCAM-1、ICAM-1、TNFα及IL-6等黏附因子和炎症因子水平;Western blot结果表明10%CSE处理人脐静脉内皮细胞会降低抑制凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平,增加促凋亡基因Bax及促进细胞自噬的基因Beclin1的蛋白表达水平。结论:研究结果显示CES可能通过提高细胞黏附因子和炎症因子水平,促进HUVEC的凋亡和自噬,从而对内皮细胞及血管内皮产生影响。     

肠系膜淋巴结Th1、Th17细胞在小鼠结肠炎模型发病中作用的研究

背景:大量研究表明细胞因子网络在溃疡性结肠炎(UC)的发病和疾病进程中起关键作用,但相关研究主要集中于肠黏膜免疫细胞方面。目的:探讨肠系膜淋巴结Th1、Th17细胞在模拟人类UC的小鼠DSS结肠炎模型发病中的作用。方法:C57BL/6小鼠饮用5%DSS溶液7 d诱导实验性结肠炎,实验过程中每天评估疾病活动指数(DAI)。于第8 d处死小鼠,ELISA法测定结肠组织IL-1β含量;分离肠系膜淋巴结细胞,以CD3/CD28单抗诱导淋巴细胞活化并以ELISA法测定细胞培养上清液中的Th1、Th17细胞因子含量,流式细胞术检测肠系膜淋巴结F4/80+CD11b+巨噬细胞和CD4+T细胞内Th1、Th17细胞因子表达。结果:结肠炎模型组DAI随实验进程而逐渐增加,于第7 d达峰值。与正常对照组相比,模型组结肠组织IL-1β蛋白表达显著上调(P<0.05),肠系膜淋巴结巨噬细胞浸润增加(P<0.001),淋巴细胞IL-17A分泌水平显著增高(P<0.05),IFN-γ分泌水平亦呈增高趋势(P>0.05),CD4+T细胞内IL-17A、IFN-γ表达显著上调(P<0.05)。结论:肠系膜淋巴结Th1、Th17细胞过度激活可能通过释放效应细胞因子诱导巨噬细胞等浸润、活化,参与介导小鼠DSS结肠炎模型的肠黏膜炎症反应和病理损伤。     

锌指蛋白A20抑制Toll样受体4介导的人单核细胞炎症反应的实验研究

目的:观察锌指蛋白A20过度表达对人单核细胞膜Toll样受体(TLR4),下游促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素(IL)-12,以及抗炎因子IL-10表达的影响,探讨锌指蛋白A20对单核细胞炎症反应的抑制作用及可能的调节机制。方法:Ficoll细胞分离液分离人外周血单核细胞,随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、A20转染组与LPS+A20转染组。荧光显微镜检测GFP报告基因,免疫组织化学检测A20蛋白的表达,RT-PCR检测A20及TLR4的mRNA表达,流式细胞检测技术检测TLR4的蛋白表达,ELISA方法检测上清液TNF-α、IL-12及IL-10表达水平。结果:LPS刺激后,单核细胞TLR4和内源性A20的mRNA和蛋白、TNF-α、IL-12和IL-10表达较对照组均明显升高(均P<0.01);TNF-α/IL-10和IL-12/IL-10均明显高于对照组(均P<0.01);转染A20基因的单核细胞,在无LPS刺激的条件下,上述指标与对照组相比均差异无统计学意义;转染A20基因的单核细胞在LPS刺激后,TLR4mRNA和蛋白、TNF-α、IL-12的表达以及TNF-α/IL-10和IL-12/IL-10均显著低于LPS组,而IL-10的表达明显高于对照组和LPS组(均P<0.01)。结论:TLR4激活介导单核细胞的炎症反应,且正反馈调节其自身受体TLR4和内源性A20的表达;A20参与单核细胞TLR4激活所介导的炎症反应,其表达增加与TLR4表达的增加有关;单纯提高A20表达对未被激活的单核细胞TLR4及其信号通路影响不大;A20过表达可抑制TLR4激活所介导的单核细胞的炎症反应。