高良姜素对哮喘小鼠气道炎症及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨高良姜素对哮喘小鼠气道炎症及肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。方法 40只小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、地塞米松组、高良姜素组。卵白蛋白致敏并激发建立小鼠哮喘模型,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞,观察支气管肺组织病理的改变,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清TNF-α的水平,Western印迹法检测肺组织TNF-α蛋白的表达。结果高良姜素组BALF中嗜酸粒细胞计数及肺内炎症细胞评分明显低于哮喘组(P<0.01);哮喘组血清TNF-α含量、肺组织TNF-α蛋白表达均显著高于正常对照组,高良姜素组上述指标均低于哮喘组(P<0.01)。结论高良姜素可降低哮喘小鼠TNF-α的表达,减轻哮喘小鼠气道炎症。     

布地奈德上调支气管哮喘小鼠肺组织IDO、抑制气道炎症和气道高反应性的研究

目的 研究布地奈德对急性支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠肺组织吲哚胺-2,3双加氧酶(IDO)表达、气道炎症和气道高反应性的干预作用.方法 18只SPF级BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德组.卵白蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘模型.末次激发24 h后,测定气道对乙酰胆碱的反应性,HE染色观察气道炎症细胞浸润,ELISA法检测血清总IgE、OVA特异性IgE(OVA-sIgE)以及支气管肺泡灌洗液(BALF) Th2细胞因子(IL-4和IL-13).Western blot检测肺组织IDO蛋白表达.结果 正常组小鼠气道阻力随乙酰胆碱浓度增加仅轻度增加,哮喘组气道阻力较正常组显著增高,布地奈德组气道阻力较哮喘组显著下降(P＜0.05);哮喘组血清总IgE和OVA-sIgE、BALF炎症细胞总数和嗜酸粒细胞分类计数、Th2细胞因子水平较正常组显著增高,布地奈德组炎症指标较哮喘组显著降低(P＜0.05);哮喘组肺组织IDO)较正常组显著下降,布地奈德组肺组织IDO较哮喘组显著增高(P＜0.05).结论 布地奈德抑制急性哮喘模型气道炎症和气道高反应性,可能与上调肺组织IDO有关.     

Significance of serum eosinophil cationic protein and interleukin-4 and their significance in bronchial asthma

目的 探讨支气管哮喘患者血清嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)和白细胞介素(IL)-4的变化及其临床意义.方法 收集哮喘患者54例,并将其分为哮喘缓解组(26例)和哮喘发作组(28例),血清嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和IL-4水平的检测应用酶联免疫吸附法(ELISA).结果 与对照组相比较,哮喘急性发作期嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、IL-4含量明显升高,FEV1显著下降(P＜0.05);治疗后嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、IL-4水平均明显降低,FEV1、FEV1/FVC均升高.哮喘缓解期患者嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、IL-4水平明显高于对照组.直线相关分析显示,嗜酸性粒细胞阳离子蛋白与IL-4呈正相关,与FEV1和FEV1/FVC呈负相关.结论 嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和IL-4可作为评价哮喘患者气道炎症程度和指导抗炎治疗的指标.     

布地奈德上调支气管哮喘小鼠肺组织IDO、抑制气道炎症和气道高反应性的研究

目的研究布地奈德对急性支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠肺组织吲哚胺-2,3双加氧酶(IDO)表达、气道炎症和气道高反应性的干预作用。方法 18只SPF级BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德组。卵白蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘模型。末次激发24h后,测定气道对乙酰胆碱的反应性,HE染色观察气道炎症细胞浸润,ELISA法检测血清总IgE、OVA特异性IgE(OVA-sIgE)以及支气管肺泡灌洗液(BALF)Th2细胞因子(IL-4和IL-13)。Western blot检测肺组织IDO蛋白表达。结果正常组小鼠气道阻力随乙酰胆碱浓度增加仅轻度增加,哮喘组气道阻力较正常组显著增高,布地奈德组气道阻力较哮喘组显著下降(P0.05);哮喘组血清总IgE和OVA-sIgE、BALF炎症细胞总数和嗜酸粒细胞分类计数、Th2细胞因子水平较正常组显著增高,布地奈德组炎症指标较哮喘组显著降低(P0.05);哮喘组肺组织IDO较正常组显著下降,布地奈德组肺组织IDO较哮喘组显著增高(P0.05)。结论布地奈德抑制急性哮喘模型气道炎症和气道高反应性,可能与上调肺组织IDO有关。     

母牛分枝杆菌菌苗对哮喘豚鼠肺组织Eotaxin mRNA表达的影响

目的研究母牛分枝杆菌菌苗对哮喘豚鼠肺组织Eotaxin mRNA表达的影响。方法30只豚鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及母牛分枝杆菌菌苗组，每组lO只。应用卵白蛋白（OVA）建立哮喘模型，母牛分枝杆菌菌苗组每只豚鼠在OVA致敏前10d肌注22．5峭母牛分枝杆菌菌苗。最后一次激发后，计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞，观察肺组织病理学改变，应用原位杂交方法检测肺组织Eotaxin mRNA的表达。结果母牛分枝杆菌菌苗组豚鼠BALF中嗜酸粒细胞数量显著低于哮喘组（P〈0．01），肺组织哮喘炎症反应明显轻于哮喘组，肺组织Eotaxin mRNA表达（OD值）显著低于哮喘组（P〈0．01）。结论母牛分技杆菌菌苗能减少哮喘豚鼠BALF及肺组织嗜酸粒细胞数量，与其抑制Eotaxin mRNA在哮喘豚鼠肺组织的表达有关。     

DP_2拮抗剂抑制哮喘模型小鼠气道炎症的作用机制及与激素的比较

目的探讨DP2拮抗剂抑制哮喘模型小鼠气道炎症的作用机制,并比较其同吸入激素的差异。方法 SPF级BALB/c小鼠24只,随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、吸入激素干预组(C组)和DP2拮抗剂干预组(D组),每组6只,用卵白蛋白(OVA)雾化诱喘。应用Pro Cyte DxTM全自动血细胞分析仪进行支气管肺泡灌洗液细胞分类计数,Western blot方法检测肺组织DP1和DP2蛋白的表达。结果与B组相比,C、D两组的嗜酸性粒细胞计数、DP1和DP2蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。D组的DP2蛋白水平较A组显著下降(P0.01),C组的DP2蛋白水平较A组亦有下降(P0.05),C、D两组之间比较有统计学异常(P0.05)。DP1的蛋白表达水平在A、C、D组之间无统计学差异。结论 DP2拮抗剂能通过抑制其蛋白表达水平从而减少气道的嗜酸性粒细胞浸润,达到抑制哮喘模型小鼠气道炎症的作用。DP2拮抗剂对DP2蛋白表达的抑制作用强于吸入激素,或可作为新的药物用于支气管哮喘的治疗。     

咪喹莫特对哮喘小鼠Toll样受体7及IL-12、IL-13水平的影响

目的 研究雾化吸入一定浓度的咪喹莫特( imiquimod)对哮喘小鼠模型Toll样受体7(TLR7)的表达及Th细胞因子ID12、IL-13水平的影响.方法 30只小鼠随机分为三组,正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、咪喹莫特组(C组),每组10只.建立哮喘模型,干预组在吸入鸡卵白蛋白(OVA)前1h雾化吸入1.5 g/L咪喹莫特混悬液30 min,持续7天.OVA雾化结束后24h,收集肺泡灌洗液进行细胞计数和分类,并采用酶联免疫吸附法测定IL-12和IL-13的水平;HE染色观察肺组织炎症变化;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测肺组织TLR7 mRNA的表达水平.结果 ①哮喘组小鼠HE染色可见其小气道管壁增厚,分泌物增多,上皮细胞脱落,排列紊乱,黏膜下有大量的炎症细胞浸润,主要以淋巴细胞为主.咪喹莫特组炎症程度较哮喘组减轻.②哮喘组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及各种炎症细胞较正常组明显增加,咪喹莫特治疗组的单核细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞比哮喘组显著减少(P＜0.05).③哮喘组小鼠BALF中的IL-12水平较正常组降低,咪喹莫特组较哮喘组升高(P＜0.05);而哮喘组小鼠BALF中的IL-13水平较正常组增加,咪喹莫特治疗组较哮喘组降低,较正常组增加(P＜0.05).④哮喘组小鼠肺组织TLR7 mRNA的表达较正常组减少,咪喹莫特组较哮喘组明显增加(P＜0.05).结论 雾化吸入咪喹莫特能上调TLR7 mRNA的表达,使IL-1水平升高、IL-13水平降低,从而达到防治哮喘的效果.     

重组鼠IL-5可溶性受体α蛋白对哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞凋亡及Bax蛋白表达的影响

目的探讨应用IL-5可溶性受体仅对哮喘小鼠气道炎症、嗜酸性粒细胞凋亡以及Bax蛋白表达的干预。方法36只雌性BALB／c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、sIL-5Rα治疗组。哮喘组和slL-5Rα治疗组分别给予卵蛋白（OVA）致敏和激发。其中,sIL-5Rα治疗组于激发前30min腹腔注射sIL-5Rα100μg进行干预,每日一次,连续7d;正常对照组和哮喘组给予生理盐水代替。末次激发后收集支气管肺泡灌洗液（BALF）计数白细胞和嗜酸性粒细胞（EOS）比例;HE染色观察肺组织病理变化;ELISA法测定各组BALF中IL-5、嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）水平变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP切口末端标记（TUNEL）法检测肺组织EOS凋亡情况;免疫组化法检测肺组织Bax蛋白的表达。结果与正常对照组比较,哮喘组EOS比例、IL-5、Eotaxin水平显著升高（P〈0．01）,EOS凋亡率及Bax蛋白表达量显著下降（P〈0．01）;与哮喘组比较,sIL-SR治疗组EOS比例、Eotaxin水平明显下降（P〈0．01）,EOS凋亡率及Bax蛋白表达量明显增高（P〈0．01）。结论IL-5可溶性受体α可明显降低哮喘小鼠IL-5、Eotaxin水平,上调肺组织Bax蛋白表达,减少肺部EOS的浸润和增加其凋亡,可以明显缓解哮喘气道炎症。     

灵芝孢子对支气管哮喘豚鼠引喘潜伏期及类胰蛋白酶释放的影响

目的 研究灵芝孢子对支气管哮喘(简称哮喘)豚鼠引喘潜伏期及肥大细胞类胰蛋白释放的影响.方法 10%卵蛋白腹腔注射致敏,雾化吸入1%卵蛋白方式诱导复制哮喘动物模型.30只健康豚鼠随机分为对照组(A)、哮喘组(B)、灵芝组(C)3组,每组10只,分别用生理盐水,灵芝孢子灌胃15 d.测定哮喘豚鼠的引喘潜伏期及呼气相气道阻力(Re),计数支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数及分类,肺组织HE染色和免疫组织化学观察肺组织病理变化及肥大细胞类胰蛋白酶分布情况.结果 ①灵芝组的引喘潜伏期明显较哮喘模型组延长,Re显著降低(P＜0.05).②哮喘BALF白细胞总数及嗜酸粒细胞比例较生理盐水组增高(P＜0.05),肺组织炎性病变明显;灵芝组BALF细胞总数、嗜酸粒细胞比例及肺组织炎性病变明显较哮喘组降低或减轻(P＜0.05).③哮喘组类胰蛋白酶染色阳性的肥大细胞计数明显较生理盐水组增多(P＜0.05),主要分布在气道黏膜下,肺泡间隔及血管周围;灵芝组类胰蛋白酶染色阳性的肥大细胞计数较哮喘组显著减少.结论 灵芝孢子有延长哮喘豚鼠引喘潜伏期,降低气道阻力,减轻肺组织炎性病变,抑制肥大细胞释放类胰蛋白酶的作用.     

青岛地区支气管哮喘患者TNF-α基因rs1800629位点多态性与表达及TNF-α、内皮素水平相关研究

目的 探讨青岛地区支气管哮喘(简称哮喘)患者肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因启动子区域rs1800629(-308)位点G/A单核苷酸多态性与表达及血浆TNF-α、内皮素1(ET-1)的水平.方法 应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测65例哮喘患者与50例健康者TNF-α基因rs1800629位点G/A单核苷酸多态性,荧光定量PCR检测外周血单个核细胞TNF-α mRNA表达,ELISA测定其TNF-α、ET-1水平.结果 哮喘组和对照组TNF-α基因rs1800629位点基因型及等位基因频率差异有统计学意义(P=0.048;P=0.023).哮喘组与对照组相比,TNF-α mRNA表达、TNF-α及ET-1浓度差异有统计学意义(P=0.001,P＜0.01,P=0.044).哮喘组GA+AA组与GG组相比,TNF-α mRNA表达、TNF-α及ET-1浓度差异有统计学意义(P=0.012,P＜0.01,P=0.041).哮喘组ET-1与TNF-α mRNA表达及浓度分别呈正相关(r=0.607,P＜0.05;r=0.658,P＜0.01).结论 TNF-α基因启动子区rs1800629位点G/A多态性与哮喘的易感性有相关性,A等位基因为哮喘易感基因,并且可以增加TNF-α表达及TNF-α、ET-1含量.TNF-α、ET-1可能参与哮喘患者气道炎症反应,且在哮喘发病时具有相互作用.     

青岛地区支气管哮喘患者TNF-α基因rs1800629位点多态性与表达及TNF-α、内皮素水平相关研究

目的 探讨青岛地区支气管哮喘(简称哮喘)患者肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因启动子区域rs1800629(-308)位点G/A单核苷酸多态性与表达及血浆TNF-α、内皮素1(ET-1)的水平.方法 应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测65例哮喘患者与50例健康者TNF-α基因rs1800629位点G/A单核苷酸多态性,荧光定量PCR检测外周血单个核细胞TNF-α mRNA表达,ELISA测定其TNF-α、ET-1水平.结果 哮喘组和对照组TNF-α基因rs1800629位点基因型及等位基因频率差异有统计学意义(P=0.048;P=0.023).哮喘组与对照组相比,TNF-α mRNA表达、TNF-α及ET-1浓度差异有统计学意义(P=0.001,P＜0.01,P=0.044).哮喘组GA+ AA组与GG组相比,TNF-α mRNA表达、TNF-α及ET-1浓度差异有统计学意义(P=0.012,P＜0.01,P=0.041).哮喘组ET-1与TNF-α mRNA表达及浓度分别呈正相关(r=0.607,P＜0.05;r=0.658,P＜0.01).结论 TNF-α基因启动子区rs1800629位点G/A多态性与哮喘的易感性有相关性,A等位基因为哮喘易感基因,并且可以增加TNF-α表达及TNF-α、ET-1含量.TNF-α、ET-1可能参与哮喘患者气道炎症反应,且在哮喘发病时具有相互作用.     

雷公藤甲素对支气管哮喘小鼠STAT-1与ICAM-1表达的影响

目的 研究雷公藤甲素对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠肺组织中信号转导和转录激活因子-1（STAT-1）与细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响,探讨其治疗哮喘的机制.方法 40只雄性昆明小鼠随机分成4组：正常对照组、哮喘组、地塞米松治疗组及雷公藤甲素治疗组,以卵清蛋白致敏和激发方法建立哮喘小鼠动物模型并给予相应治疗.24 d后处死小鼠,检测BALF中白细胞总数及嗜酸粒细胞（EOS）计数;采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测肺组织中STAT-1、ICAM-1 mRNA表达水平;采用免疫组织化学法检测肺组织中STAT-1、ICAM-1蛋白表达水平.结果 哮喘组STAT-1、ICAM-1 mRNA及蛋白表达明显高于正常对照组（P＜0.01）,雷公藤甲素治疗组及地塞米松组明显低于哮喘组（P＜0.01）.肺组织STAT-1蛋白的表达与BALF中白细胞数、EOS计数及肺组织ICAM-1蛋白表达呈正相关（r分别为0.665,0.735,0.677,P＜0.01）.肺组织ICAM-1蛋白表达与白细胞总数、EOS计数呈正相关（r分别为0.792,0.776,P＜0.01）.结论 雷公藤甲素抑制哮喘气道炎症的机制可能与其抑制STAT-1与ICAM-1的表达活性有关.     

法舒地尔对支气管哮喘小鼠肺组织Rho激酶-1表达及气道炎症的影响

目的 观察Rho激酶-1抑制剂法舒地尔对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织Rho激酶-1表达及气道炎症的影响,探讨Rho激酶-1在哮喘气道炎症中的作用机制.方法 将24只BalB/c小鼠采用随机数字表法分为对照组、哮喘组和干预组,每组8只.哮喘组、干预组小鼠分别给予卵清白蛋白(OVA)致敏和激发.每次雾化前1 h,干预组给予法舒地尔(10 mg/kg)腹腔注射.末次激发后收集BalF,离心后计数细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)数量.ELISA法测定BalF上清液中嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)、白细胞介素(IL)-5和IL-13水平.肺组织HE染色.采用逆转录PCR和免疫组织化学测定各组小鼠肺组织中Rho激酶-1 mRNA和蛋白的表达水平.结果 (1)哮喘组BalF中细胞总数及EOS数量分别为(1.45±0.12)× 10~9/L和(0.52 ±0.06)× 10~9/L,明显高于对照组[分别为(0.58±0.06)×10~9/L和(0.01±0.01)×10~9/L](q值分别为25.909和35.002,均P＜0.01)和干预组[分别为(0.89 ±0.09)×10~9/L和(0.20±0.04)×10~9/L](q值分别为16.676和21.537,均P＜0.01).(2)哮喘组Eotaxin、IL-5及IL-13水平分别为(45±8)ng/L、(157 ±23)ng/L和(429±46)ng/L,明显高于对照组[分别为(10 ±3)ng/L、(26±6)ng/L和(126 ±20)ng/L](q值分别为18.246、23.009、25.826,均P＜0.01);干预组分别为(20±5)ng/L、(57 ±14)ng/L和(254±28)ng/L,明显低于哮喘组(q值分别为13.119、17.503、8.449,均P＜0.01).(3)对照组小鼠气道周围无炎症细胞浸润,哮喘组小鼠气道黏膜水肿,气道壁及管周有大量以EOS为主的炎症细胞浸润,干预组气道炎症反应较哮喘组减轻.(4)哮喘组肺组织Rho激酶-1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于对照组(q值分别为25.614和8.156,均P＜0.01),干预组Rho激酶-1 mRNA和蛋白表达水平低于哮喘组(q值分别为20.379和4.135,均P＜0.01).(5)Rho激酶-1 mRNA表达量与BalF中EOS数量、Eotaxin、IL-5和IL-13水平呈正相关(r值分别为0.709、0.600、0.613、0.650,均P＜0.01).结论 Rho激酶-1参与过敏原诱导的哮喘小鼠气道炎症的发生,应用法舒地尔抑制其表达和活性可能改善哮喘气道炎症.     

基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4在支气管哮喘大鼠气道炎症及气道重塑中的作用

目的 探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、CXC趋化因子受体4(CXCR4)在支气管哮喘(哮喘)大鼠气道炎症及气道重塑中的作用.方法 将18只SPF级SD雌性大鼠按随机数字表法随机分为对照组、哮喘4周组和哮喘8周组,每组6只.卵清白蛋白(OVA)致敏后,雾化吸人OVA制作哮喘模型.哮喘模型成功后,测定气道压力;通过HE染色、Image-Pro Plus图像分析软件分析大鼠气道平滑肌的嗜酸粒细胞浸润情况,测定支气管管腔的内周长、管壁面积、支气管平滑肌面积以及平滑肌细胞核数;RT-PCR、Western blot方法检测各组大鼠肺组织SDF-1、CXCR4的表达变化;免疫组织化学法检测各组大鼠气道壁SDF-1表达的变化;统计数据并分析SDF-1、CXCR4与哮喘气道重塑及气道炎症的关系.结果 哮喘4周组、哮喘8周组大鼠的气道反应性、气道壁嗜酸粒细胞计数、支气管管壁面积、支气管平滑肌面积、平滑肌细胞核数目均明显高于对照组,哮喘两组间上述指标差异均有统计学意义(均P＜0.01);RT-PCR检测结果显示,哮喘4周组、哮喘8周组大鼠肺组织SDF-1(分别为0.583±0.004和0.724±0.008)、CXCR4(分别为0.467±0.003和0.655±0.002)的表达明显高于对照组(SDF-1为0.146 ±0.003、CXCR4为0.281±0.002),哮喘8周组的SDF-1及CXCR4的表达亦明显高于哮喘4周组,差异均有统计学意义Western blot检测结果显示,(均P＜0.01).Western blot检测结果显示,哮喘4周组、哮喘8周组大鼠气道壁SDF-1的表达(分别为0.270 ±0.006和0.350±0.009)明显高于对照组(0.180±0.009),哮喘8周组的SDF-1的表达量亦高于哮喘4周组,差异均有统计学意义(均P＜0.01);各组大鼠肺组织、气道壁SDF-1、CXCR4mRNA及蛋白的表达与气道反应性、嗜酸粒细胞浸润数、支气管壁面积、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数均呈正相关(均P＜0.01).结论 SDF-1/CXCR4信号轴可能在哮喘气道炎症及气道重塑病理过程中起重要作用.     

粉防己碱抑制支气管哮喘小鼠肺组织核因子-κB和诱导型一氧化氮合酶的研究

目的：探讨粉防己碱对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达、气道炎症和气道高反应性的影响。方法将32只 SPF 级 BALB/c 小鼠随机分为正常组、哮喘组、地塞米松组(激素组)和粉防己碱组(Tet 组)。卵白蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型。末次激发24 h 后,肺功能仪测定小鼠气道阻力;HE 染色观察气道炎症细胞浸润;ELISA 检测血清总 IgE、OVA 特异性 IgE(OVA-sIgE)及 BALF 中 Th2细胞因子 IL-4和 IL-13水平;显微镜下计BALF 中细胞总数,瑞氏染色计嗜酸粒细胞分类计数;Western blot 检测肺组织 NF-κB 和 iNOS 蛋白表达水平。结果与正常组比较,哮喘组气道阻力、气道炎症浸润、BALF 炎症细胞总数和嗜酸粒细胞分类计数、血清总 IgE 和 OVA-sIgE、BALF 中 IL-4和 IL-13以及 NF-κB 和 iNOS 蛋白表达水平均显著增高(P <0.05);与哮喘组比较,激素和 Tet 干预组上述各项指标均显著降低(P <0.05)。结论粉防己碱可下调哮喘小鼠肺组织 NF-κB 和 iNOS 表达并抑制气道炎症和气道高反应性。     

转化生长因子β1Ⅰ型受体拮抗剂对支气管哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)Ⅰ型受体拮抗剂SB 431542对慢性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠模型气道炎症及气道重塑的影响,为哮喘的治疗提供新思路.方法 将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德组及SB 431542组,每组10只;卵清蛋白(OVA)致敏、激发建立慢性哮喘小鼠模型;布地奈德组和SB 431542组分别给予布地奈德雾化吸入和SB 431542滴鼻,每周3次.HE和Masson染色观察各组小鼠气道炎症及胶原沉积情况;AB-PAS染色观察杯状细胞增生情况;免疫组织化学半定量法测定气道壁α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测BALF中IL-4、IL-5、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1水平及血清总IgE水平;免疫印迹法(Western blot)测定各组小鼠肺组织中Smad3、p-Smad3及Smad7蛋白表达.结果 哮喘组与正常组相比,嗜酸粒细胞浸润增多,气道管腔狭窄,平滑肌层增厚,胶原纤维增生;布地奈德组上述改变均较哮喘组轻;SB 431542组嗜酸粒细胞浸润较哮喘组减轻,但仍高于正常组及布地奈德组,平滑肌层增厚、胶原纤维增生较哮喘组明显减轻(P＜0.05),与布地奈德组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与正常组比较,哮喘组小鼠支气管AB-PAS及α-SMA 阳性染色面积/支气管基底膜周径显著增加(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组小鼠支气管AB-PAS及α-SMA 阳性染色面积/支气管基底膜周径低于哮喘组(P＜0.05).哮喘组气道炎症指标(血清总IgE、IL-4、IL-5及TGF-β1)显著高于正常组(P＜0.05),布地奈德组上述指标低于哮喘组(P＜0.05),SB 431542组与哮喘组比较差异无统计学意义(P＞0.05).MMP-9、TIMP-1在哮喘组的表达明显高于正常组(P＜0.05),在布地奈德组及SB 43542组的表达低于哮喘组(P＜0.05),两治疗组之间差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot检测显示,各组小鼠肺组织Smad3的表达差异无统计学意义(P＞0.05);哮喘组p-Smad3表达明显高于正常组(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组p-Smad3表达低于哮喘组(P＜0.05);与正常组比较,哮喘组Smad7表达降低(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组Smad7表达高于哮喘组(P＜0.05),且这两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SB 431542能显著减轻哮喘小鼠细胞外基质沉积及平滑肌增厚,延缓哮喘小鼠气道重塑进程,该作用可能部分与其调节MMP-9、TIMP-1的表达有关.SB 431542对哮喘小鼠气道炎症浸润无明显改善,说明哮喘气道炎症可能不依赖于TGF-β1/Smads通路.     

转化生长因子β1Ⅰ型受体拮抗剂对支气管哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)Ⅰ型受体拮抗剂SB 431542对慢性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠模型气道炎症及气道重塑的影响,为哮喘的治疗提供新思路.方法 将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德组及SB 431542组,每组10只;卵清蛋白(OVA)致敏、激发建立慢性哮喘小鼠模型;布地奈德组和SB 431542组分别给予布地奈德雾化吸入和SB 431542滴鼻,每周3次.HE和Masson染色观察各组小鼠气道炎症及胶原沉积情况;AB-PAS染色观察杯状细胞增生情况;免疫组织化学半定量法测定气道壁α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测BALF中IL-4、IL-5、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1水平及血清总IgE水平;免疫印迹法(Western blot)测定各组小鼠肺组织中Smad3、p-Smad3及Smad7蛋白表达.结果 哮喘组与正常组相比,嗜酸粒细胞浸润增多,气道管腔狭窄,平滑肌层增厚,胶原纤维增生;布地奈德组上述改变均较哮喘组轻;SB 431542组嗜酸粒细胞浸润较哮喘组减轻,但仍高于正常组及布地奈德组,平滑肌层增厚、胶原纤维增生较哮喘组明显减轻(P ＜0.05),与布地奈德组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与正常组比较,哮喘组小鼠支气管AB-PAS及a-SMA阳性染色面积/支气管基底膜周径显著增加(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组小鼠支气管AB-PAS及α-SMA阳性染色面积/支气管基底膜周径低于哮喘组(P＜0.05).哮喘组气道炎症指标(血清总IgE、IL-4、IL-5及TGF-β1)显著高于正常组(P＜0.05),布地奈德组上述指标低于哮喘组(P ＜0.05),SB 431542组与哮喘组比较差异无统计学意义(P＞0.05).MMP-9、TIMP-1在哮喘组的表达明显高于正常组(P＜0.05),在布地奈德组及SB 43542组的表达低于哮喘组(P＜0.05),两治疗组之间差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot检测显示,各组小鼠肺组织Smad3的表达差异无统计学意义(P＞0.05);哮喘组p-Smad3表达明显高于正常组(P＜0.05),布地奈德组及SB431542组p-Smad3表达低于哮喘组(P＜0.05);与正常组比较,哮喘组Smad7表达降低(P＜0.05),布地奈德组及SB 431542组Smad7表达高于哮喘组(P＜0.05),且这两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SB 431542能显著减轻哮喘小鼠细胞外基质沉积及平滑肌增厚,延缓哮喘小鼠气道重塑进程,该作用可能部分与其调节MMP-9、TIMP-1的表达有关.SB 431542对哮喘小鼠气道炎症浸润无明显改善,说明哮喘气道炎症可能不依赖于TGF-β1/Smads通路.     

钙调神经磷酸酶在支气管哮喘大鼠气道重塑中的作用

目的 通过测定支气管哮喘(简称哮喘)大鼠肺组织中钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)蛋白、Mrna的表达及CaN的活性,探讨CaN在哮喘大鼠气道重塑中的作用.方法 将20只Wistar大鼠随机分为哮喘组和对照组,每组10只.鸡卵清白蛋白溶液致敏及激发复制大鼠哮喘模型.HE染色观察气道炎症情况;图像分析观察支气管管壁厚度;实时定量(Real-time)PCR测定肺组织中CaN Mrna水平;免疫组织化学法检测肺组织中CaN蛋白的相对表达量;生物化学法检测大鼠肺组织CaN活性;流式细胞仪测定外周血单个核细胞细胞周期时相分布;ELISA法测定血浆中白介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果 ①哮喘组大鼠支气管管壁厚度较对照组明显增加(P＜0.01);②哮喘组大鼠肺组织中CaNmRNA水平的相对表达量、CaN蛋白的相对表达量及CaN的活性均较对照组高(分别P＜0.05、P＜0.01和P＜0.01);③哮喘组大鼠血浆中IL-4和TNF-α含量较对照组明显增加(分别P＜0.01,P＜0.05);④与对照组相比,哮喘组大鼠外周血单个核细胞处于G0/G1期的百分率降低,处于S期、S+G2/M期百分率增加(P值均＜0.01);⑤大鼠肺组织CaN活性分别与大鼠支气管管壁厚度呈正相关(P＜0.01),与处于S期、S+G2/M期的外周血单个核细胞百分率呈正相关(P值均＜0.05),与血浆中IL-4的含量呈正相关(P＜0.05);血浆中IL-4含量与TNF-α含量及大鼠支气管管壁厚度亦呈正相关(P值均＜0.05).结论 哮喘大鼠肺组织CaN的活性增加,其可能通过促进外周血单个核细胞的分裂、增殖及活化产生IL-4和TNF-α而参与哮喘气道重塑的形成.     

骨髓CD34＋祖细胞IL-5Rα、CCR3表达与哮喘气道原位造血的相关性及地塞米松对其的干预

目的探讨抗原激发后骨髓祖细胞造血因子受体IL-5Rα、CCR3表达及与哮喘气道原位造血的关系。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组及地塞米松组各20只,后两组以卵白蛋白（OVA）致敏和激发建立哮喘模型,地塞米松组于抗原激发前经腹腔注射地塞米松。于最后一次抗原激发后48 h测气道反应性,检测骨髓CD3＋4祖细胞IL-5Rα mRNA、CCR3表达;观察造血因子受体对祖细胞净迁移率及嗜酸性粒细胞（Eos）克隆形成的影响。结果与对照组比较,模型组IL-5Rα mRNA和CCR3表达显著上调,CD3＋4祖细胞净迁移率及Eos细胞克隆数明显增加（P均〈0.05）。与模型组比较,地塞米松组IL-5Rα mRNA、CCR3表达明显下调,CD3＋4祖细胞净迁移率及Eos细胞克隆数明显减少（P均〈0.05）,气道反应性及气道Eos浸润相应明显减轻（P均〈0.05）。结论哮喘小鼠IL-5Rα mRNA、CCR3表达与哮喘气道原位造血关系密切;地塞米松干预可抑制IL-5Rα mRNA和CCR3表达,抑制气道原位造血,减轻气道Eos炎症和气道高反应性。