GDF-5在大鼠肢体早期发育中的表达规律与作用

目的 研究生长分化因子-5（GDF-5）在大鼠肢体早期发育过程中的表达规律，探讨GDF-5调控肢体发育的相关机制。方法 采用半定量RT-PCR和Westernblotting分别检测GDF-5在大鼠胚胎早期发育过程中肢芽组织mRNA和蛋白表达的变化。结果 大鼠胚胎肢体发育的早期阶段GDF-5mRNA呈持续表达，其中在胚胎13、14d（E13、E14）呈高表达，继而表达减弱，GDF-5蛋白表达规律与mRNA变化趋势一致。结论 GDF-5在大鼠胚胎早期肢体发育中对调控软骨发育和关节形成有很重要的作用。     

促排卵周期卵泡发育与胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体mRNA关系的研究

目的：探讨促排卵周期卵泡发育和体内胰岛样生长因子Ⅰ（IGF－Ⅰ)及IGF－Ⅰ受体（IGF－ⅠR）mRNA的关系。方法：用ELISA法检测促排卵周期血清及卵泡液IGF－Ⅰ水平，并分析血清或卵泡液IGF－Ⅰ浓度与卵泡发育数关系。用RT－PCR法检测颗粒细胞IGF－ⅠmRNA表达量。结果：促排卵前，后血清及卵泡液IGF－Ⅰ浓度差异无显著性；低反应组（卵泡数≤3个）颗粒细胞IGF－ⅠmRNA明显低于中，高反应组（卵泡数分别为4－13个和≥14个）。结论：血清IGF－Ⅰ水平不能反映卵泡发育数，颗粒细胞IGF－Ⅰ mRNA的量可能影响促排卵周期卵巢对促排卵药物的反应。     

成年雌鼠生殖器官中Attractin mRNA的表达及意义

应用原位杂交法检测Attractin（Atrn）mRNA在成熟雌性大鼠卵巢、子宫和输卵管中的表达。结果：Atrn mRNA特异性表达于卵巢各级卵泡壁细胞,部分间质细胞,血管、淋巴管及皮髓质交界部;输卵管上皮基膜;子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞、基底膜、平滑肌细胞和散在的间质细胞中。具有明显的周期特异性（P〈0．05）。认为Atrn mRNA在成熟雌性大鼠卵巢、子宫和输卵管中有较强的表达,该基因可能具有调控卵巢周期的作用。     

全氟烷基类化合物对卵巢的毒性作用及其机制研究进展

全氟烷基类化合物（PFASs）是一种环境内分泌干扰物。卵巢是女性的性腺器官，可维持女性的生殖和内分泌功能。PFASs对卵巢的毒性作用主要有延迟月经初潮时间、导致月经周期紊乱、抑制卵巢类固醇激素合成、导致卵巢衰老、多囊卵巢综合征及子宫内膜异位症的发生等。PFASs可能从卵子发生、卵泡发育及卵巢类固醇激素合成过程等方面发挥卵巢毒性作用：PFASs可能通过激活过氧化物酶体增殖物受体信号通路、中断卵母细胞和颗粒细胞胞间通讯以及诱导产生氧化应激等干扰卵子的发生；全氟辛烷磺酸酯可通过抑制类固醇生成急性调节蛋白mRNA表达、抑制KiSS1转移抑制因子（Kiss1）和KISS1受体（Kiss1r）表达，影响卵泡的发育；PFASs可通过调控负责胆固醇转运和卵巢类固醇生成蛋白质的表达，影响卵巢类固醇激素的合成。     

卵巢上皮性癌组织中EGFR、STAT3 mRNA的表达及意义

目的观察卵巢上皮性癌（卵巢癌）组织中表皮生长因子受体（EGFR）与信号转导和转录激活因子3（STAT3）mRNA的表达,并探讨其意义。方法用RT-PCR技术检测13例正常卵巢、11例卵巢良性肿瘤及43例卵巢癌组织中的EGFR mRNA和STAT3 mRNA。结果卵巢上皮性癌组织中EGFR、STAT3 mRNA阳性表达率显著高于正常卵巢及卵巢良性肿瘤组织（P均〈0.05）。卵巢上皮性癌组织中EGFR、STAT3 mRNA表达均与卵巢癌病理分期有关,与患者年龄、肿瘤分化程度、组织学类型及有无淋巴结转移等临床病理参数无关（P均〉0.05）;卵巢癌组织中EGFR和STAT3 mRNA表达有显著相关性（r=0.42,P〈0.01）。结论卵巢癌组织中EGFR、STAT3表达上调。二者在卵巢癌的发生发展中起重要作用。     

卵巢肿瘤组织中EGFR、CK20表达及意义

目的探讨细胞角质蛋白20（CK20）和表皮生长因子受体（EGFR）mRNA在卵巢上皮性肿瘤发生中的作用。方法应用RT-PCR法检测12份正常卵巢（对照组）、18份卵巢良性肿瘤（良性组）、33份卵巢恶性肿瘤（恶性组）和14份胃肠道转移性卵巢肿瘤（转移组）组织中CK20、EGFR mRNA的表达。结果恶性组中CK20、EGFR mRNA阳性率显著高于对照组及良性组（P〈0.05）,与转移组比较无明显差异;恶性组CK20 mRNA表达与手术病理分期、淋巴结转移有关（P〈0.05）,EGFR mRNA表达与手术病理分期有关（P〈0.05）。结论CK20、EG-FR高表达可促进卵巢恶性肿瘤的发生、转移;其检测对判断预后有一定价值。     

多囊卵巢综合征患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物1、2表达及其酪氨酸磷酸化

目的检测多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物（IRS）-1、IRS-2蛋白表达及其酪氨酸磷酸化水平，探讨卵巢局部胰岛素抵抗的分子机制。方法收集行体外受精-胚胎移植治疗的11例PCOS患者（PCOS组）和15例排卵正常的输卵管性不孕患者（对照组）促排卵后卵巢黄素化颗粒细胞，采用放射免疫法检测血清LH、FSH、睾酮及空腹胰岛素（FINS）水平；采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖（FPG）水平；利用稳态模型（HOMA）计算胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）；采用RT—PCR、Western印迹及免疫沉淀法分别检测两组卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2 mRNA、蛋白的表达及其酪氨酸磷酸化程度。结果（1）PCOS患者血清LH、LH／FSH、睾酮、FINS及HOMA—IR均明显高于对照组（均P〈0．05）；（2）与对照组比较，PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA、蛋白的表达显著增加（均P〈0．05），IRS-2 mRNA、蛋白的表达显著降低（均P〈0．05）；（3）PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2酪氨酸磷酸化程度均较对照组明显降低（均P〈0．05）。结论PCOS患者卵巢局部存在胰岛素抵抗，其原因可能与IRS-1和IRS-2蛋白表达及其酪氨酸磷酸化异常有关。     

三叶因子3与生长分化因子-15在甲状腺滤泡性肿瘤中的表达及意义

目的探讨三叶因子3(TFF3)及生长分化因子-15(GDF-15)在甲状腺滤泡性肿瘤中的表达及意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测甲状腺滤泡状癌(FTC)、甲状腺滤泡性腺瘤(FA)及正常甲状腺(NT)组织中(各30例)TFF3 mRNA及GDF-15 mRNA的表达。结果正常甲状腺组织中TFF3 mRNA的表达量明显高于甲状腺滤泡状癌及FA(P0.01),而FA中的TFF3 mRNA的表达量明显高于甲状腺滤泡状癌(P0.05)。甲状腺滤泡状癌及FA中GDF-15 mRNA的表达量明显高于正常甲状腺组织(P0.01),而甲状腺滤泡状癌中的GDF-15 mRNA的表达量明显高于FA(P0.01)。结论 TFF3 mRNA的低表达和GDF-15 mRNA高表达可能与甲状腺滤泡性肿瘤发生发展相关,对进一步区分甲状腺滤泡性肿瘤良恶性,提高诊断准确率有重要意义。     

深低温保存小鼠卵巢的移植和原始卵泡体外培养

将新生小鼠的新鲜和深低温保存的卵巢移植到切除卵巢的受体鼠肾被膜下，14d后从移植的卵巢中分离生长中的囊前卵泡，进行体外培养，12d后加入人绒毛膜促性腺激素（hCG）诱导卵子成熟。同日龄小鼠卵巢作为对照。结果显示，移植的新鲜卵巢和深低温保存卵巢中获得囊前卵泡数量较对照组低．卵泡的存活率、发育率和卵子直径等也有差异（P均〈0．01）；经hCG体外诱导成熟后，新鲜移植、深低温保存后和对照组极体突出卵子的百分率分别为42％、39．8％和61．5％，移植卵巢显著低于对照组（P〈0．01）。表明小鼠原始卵泡的成熟可以通过体内移植和体外培养结合的方法实现，深低温保存后卵巢卵泡存活率较高，发育成熟能力良好；但与新鲜卵巢和同龄小鼠卵巢卵泡相比，深低温保存组原始卵泡的数量少、发育能力有一定程度降低。     

血管紧张素Ⅱ在高糖诱导大鼠系膜细胞MMP-9和TIMP-1 mRNA表达中的作用

高糖刺激大鼠系膜细胞血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）的产生，高糖组和ATⅡ组系膜细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA表达降低，基质金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP-1）mRNA表达增加，MMP-9／TIMP-1 mRNA比值下降，ATⅡ受体阻断剂Saralasin能逆转上述改变。     

血清AMH水平与PCOS患者内分泌功能变化的研究进展

多囊卵巢综合征（PCOS）是以内分泌紊乱、月经稀发、肥胖、卵巢小卵泡增多为临床表现的妇科常见疾病。抗苗勒管激素（AMH）作为转化生长因子β超家族的一员，是近年临床上最常用的评估卵巢储备功能的检验指标，可更加客观地反映卵巢窦卵泡数，评估PCOS患者卵巢多囊样改变的严重程度，AMH与PCOS患者内分泌改变息息相关。     

上皮性卵巢癌组织中DPP Ⅳ mRNA的表达及意义

目的探讨上皮性卵巢癌组织中二肽基肽酶（DPP）ⅣmRNA的表达及临床意义。方法设计5’端含有T7 RNA聚合酶启动子序列的PCR引物，以质粒peD26His的eDNA为模板扩增得到DNA片段，并在T7RNA聚合酶作用下，采用体外转录方法合成FITC标记的DPPⅣRNA探针，对86例卵巢上皮性癌石蜡包埋组织进行原位杂交，检测其DPPⅣmRNA的表达，12例正常卵巢组织作对照。结果86例卵巢癌组织中的DPPⅣmRNA0、1、2、3级表达者分别为2、18、40和26例，阳性表达率为97．67％（84／86），显著高于对照组的16．66％（2／12），P〈0．01；其表达与卵巢癌组织学分级和临床分期有关。结论DPPⅣmRNA在卵巢癌组织中的表达增高，在卵巢癌的发生发展中起一定作用。     

生长分化因子-11促进小鼠诱导性多能干细胞向心肌细胞定向分化的研究

目的 明确生长分化因子（GDF）-11对小鼠诱导多能干细胞（miPSCs）向心肌细胞定向分化的促进作用,为心肌再生的细胞生物学治疗提供种子细胞和实验依据。方法 常规培养小鼠miPSCs,分为对照组和GDF-11组。GDF-11组在普通分化培养基中加用10 ng/ml的GDF-11。悬滴法诱导培养形成拟胚体（EBs）,每日观察搏动拟胚体数目。采用实时荧光定量PCR检测多能干细胞标志物Oct-4、心脏中胚层标志物Flk-1、心脏祖细胞标志物Nkx2.5、和心肌特异性标志物cTnT的表达变化。用免疫荧光染色观察心肌结构蛋白cTnI的表达水平。结果 GDF-11组的Oct-4表达水平在诱导分化的第3、7天分别为同期对照组的（0.55±0.31）倍（P<0.01）和（0.41±0.57）倍（P<0.05）;诱导分化的第10天,GDF-11组的Flk-1和Nkx2.5表达相分别为对照组的（2.09±0.8）倍（P<0.05）和（2.47±0.22）倍（P<0.01）;cTnT的表达在分化后第10天和第14天分别为对照组的（1.81±0.19）倍（P<0.01）和（1.61±0.20）倍（P<0.01）;两组均出现了心肌样搏动细胞团,GDF-11组搏动EBs百分比要显著高于对照组（P<0.01）。免疫荧光染色显示,GDF-11组的cTnI阳性率要显著高于对照组（P<0.01）。结论 GDF-1能够显著促进miPSCs的心肌定向分化。     

姜黄素对衰老小鼠卵巢功能的影响

目的探讨姜黄素对D-半乳糖(gal)所致雌性衰老小鼠卵巢功能的影响。方法 60只雌性SPF级C57BL/6小鼠随机分为D-gal组、姜黄素组和空白对照组,每组20只。D-gal组颈部皮下注射D-gal(250 mg·kg~(-1)·d~(-1));姜黄素组在D-gal注射造模的同时腹腔注射姜黄素(100 mg·kg~(-1)·d~(-1));空白对照组颈部皮下注射相同体积生理盐水;1次/d。6 w后检测血清雌激素(E2)、孕激素(P)水平及卵巢组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;使用HE染色方法观察各组卵巢组织始基卵泡计数;应用RT-PCR的方法检测卵巢组织抗苗勒管激素(AMH)、SOD2和过氧化氢酶(CAT)mRNA的表达;Western印迹法检测P16衰老蛋白的表达。结果 D-gal组较空白对照组血清E2、P和卵巢组织SOD水平明显下降(P0.01),卵巢组织MDA则明显上升(P0.01);与D-gal组比较,姜黄素组血清E2、P及卵巢组织SOD水平显著上升(P0.05),卵巢组织MDA则显著下降(P0.01)。与对照组比较,D-gal组卵巢始基卵泡计数显著减少(P0.01);而姜黄素组始基卵泡计数较D-gal组显著增多(P0.05)。与对照组比较,D-gal组AMH mRNA表达显著下降,而CAT mRNA和SOD2 mRNA表达显著升高(P0.01);与D-gal组比较,姜黄素组卵巢AMH mRNA表达升高(P0.05),而CAT mRNA和SOD2 mRNA表达明显下降(P0.05和P0.01)。衰老蛋白P16在空白对照组表达较低,在D-gal组表达最高;与姜黄素组相比,D-gal组P16的表达明显降低(P0.05)。结论姜黄素可明显改善D-gal致衰老雌性小鼠的卵巢功能,可能有益于延长卵巢的生殖寿命。     

基质金属蛋白酶在心房颤动犬心房结构重构中的作用

目的 探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和组织型基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）在快速起搏心房颤动（房颤）动物模型心房结构重构中的作用和Ca^2＋超载对MMP-9激活的影响。方法 14只犬随机分为房颤组（n=8）和对照组（n=6），右心房快速起搏（350～450次／min）8周建立房颤动物模型。取左心房组织，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学法检测MMP-9和TIMP-1 mRNA和蛋白质表达，采用Masson染色测定心房肌组织胶原含量，采用超声心动图测量左心房内径，同时还测定心房肌组织Ca^2＋浓度。结果 与对照组比较，房颤组心房肌胶原含量、Ca^2＋浓度和左心房内径增加（P〈0．05）；房颤组左心房心肌组织MMP-9 mRNA表达升高45％（P〈0．01），蛋白质水平表达增加19．5％（P〈0．001）；TIMP-1 mRNA表达增加46．67％（P〈0．01），TIMP-1蛋白质水平表达下调8．33％（P〈0．01）；MMP-9 mRNA表达与左心房内径、Ca^2＋浓度和心肌胶原含量正相关（P〈0．05）；TIMP-1 mRNA表达与左心房内径、心肌胶原含量和MMP-9 mRNA表达正相关（P〈0．05）。结论 MMP-9／TIMP-1平衡失调可能是慢性房颤心房肌细胞外基质重构和心房扩大的重要分子机制，细胞内Ca^2＋超载可能是MMPs的重要激活途径。     

卵巢子宫内膜异位症组织中PTEN基因的表达及临床意义

PTEN基因共有9个外显子，是具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因。其在卵巢子宫内膜异位症(内异症)中的研究很少，目前有关PTEN基因mRNA(PTEN mRNA)在卵巢内异症中表达的研究尚未见报道。本研究采用半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)技术，对29例卵巢内异症和15例正常卵巢组织中PTEN mRNA的表达进行了检测，以探讨PTEN基因在卵巢内异症恶变过程中的作用及其临床意义。     

卵巢癌中γ-synuclein、MMP-9、MVD的表达及意义

采用免疫组化sP法对50例卵巢癌组织、15例卵巢良性肿瘤组织和5例正常卵巢组织中的γ-synuclein（SNCG）、基质金属蛋白酶（MMP）及微血管密度（MVD）进行检测。认为SNCG、MMP-9及MVD在卵巢癌中阳性表达率增高，有淋巴系统转移者和晚期癌，阳性表达率增高（P均〈0．05）。MVD与MMP-9表达呈正相关。SNCG、MMP-9与MVD将有可能作为卵巢癌早期诊断指标之一。     

心肌纤维化因子sST2、GDF-15、GAL-3表达与急性心肌梗死的相关性

目的：探索血浆中表达心肌纤维化因子sST2、GDF-15、GAL-3与急性心肌梗死的相关性。方法：纳入同期住院的急性冠脉综合征患者,以UA（N=75）为对照,检测AMI患者(N=78)血浆中sST2、GDF-15、GAL-3的表达变化,分析其与急性冠脉综合征类型的相关性及三者间的相互关系。结果：与UA组相比,AMI组患者血浆sST2水平更高,且与心梗后CK峰值呈正相关,而两组患者血浆GDF-15、GAL-3水平无明显差异;血浆GDF-15与sST2表达水平呈弱相关（r=0.348）,GAL-3与之不相关（r=0.146）,GDF-15与GAL-3水平呈显著相关（r=0.518,P＜0.001）。结论：心肌纤维化因子sST2表达与急性心肌梗死密切相关。     

2型糖尿病大鼠心肌组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达与胶原代谢的关系

目的 了解2型糖尿病（T2DM）大鼠模型心肌组织基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及其组织抑制物1（TIMP-1）的mRNA表达变化、蛋白水平及组织定位，探讨MMPs／TIMPs在T2DM心肌病变发生发展中的作用。方法 Masson染色观察心肌胶原含量变化；RT-PCR方法观察心肌MMP-、MMP-9和TIMP-1mRNA表达；免疫组化方法测定MMP-2、MMP-9、TIMP-1的蛋白表达和组织定位。结果 T2DM大鼠心肌胶原纤维明显增多；MMP-2mRNA表达明显下调，蛋白水平下降；MMP-9、TIMP-1的mRNA表达均增加，MMP-9、TIMP-1的蛋白水平也升高，但MMP-9／TIMP-1的比值下降。结论 T2DM大鼠心肌组织胶原聚集，心肌纤维化。MMPs／TIMP-1比例失衡可能与T2DM心肌病变的发生有关。     

人类端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白在嗜铬细胞瘤中的表达及其意义

目的研究人类端粒酶逆转录酶（hTERT）在嗜铬细胞瘤中的表达及其作为预测生物学行为标志物的价值。方法采用原位杂交方法测定hTERT mRNA在45例嗜铬细胞瘤和副神经节瘤和9例正常肾上腺髓质中的表达；免疫组织化学方法检测hTERT蛋白的表达水平。结果hTERT mRNA在5例恶性（5／7）和5例可疑恶性（5／7）肿瘤中表达，表达均高于良性肿瘤（3／31），差异有统计学意义（P〈0．01）；hTERT蛋白的表达在良性（3／31）和可疑恶性（6／7）以及恶性（5／7）差异有统计学意义（P〈0．01）；9例正常肾上腺髓质细胞中未发现hTERT mRNA和蛋白的表达；肿瘤组织hTERT蛋白和mRNA的表达存在正相关性（r=0．951，P〈0．01）；hTERT蛋白和mRNA的表达与临床因素，如性别、肿瘤大小和血压无关联。结论hTERT mRNA和蛋白检测对良、恶性嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的鉴别诊断有重要临床意义。