氧化低密度脂蛋白与血管内皮细胞损伤

<正>动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)以血管内皮细胞(Vascular endothelia cell,VEC)受损、功能障碍为起始,继而血浆脂质侵入内皮下,引起单核/巨噬细胞浸润及血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMC)迁移至内膜下增     

氧化低密度脂蛋白对体外血管内皮细胞损伤的剂量反应关系

目的:研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)造成的损伤效应。方法:分别用不同浓度的ox-LDL作用于对数生长期的HUVEC细胞24 h,进行细胞形态学观察比较,采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力,计算细胞生长抑制率,并测定细胞中丙二醛(MDA)含量。结果:随着ox-LDL浓度的增加,细胞形态发生明显变化,变得结构松散,ox-LDL高浓度时甚至出现细胞破碎、死亡。MTT实验的吸光度值(OD)在ox-LDL浓度为50、100、200μg/m L时,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。不同浓度干预24 h后细胞中MDA含量与MTT实验结果一致。当ox-LDL浓度为50、100、200μg/m L时,细胞抑制率分别达到23.2%、45.2%、62.0%。结论:当HUVEC细胞暴露于ox-LDL 24 h后,干预浓度越大细胞活力越低,细胞生长抑制率越大,细胞中MDA含量增加。ox-LDL浓度为200μg/m L以内时,ox-LDL对HUVEC细胞可造成较明显的氧化损伤且呈现剂量效应关系。     

体外血管内皮细胞氧化损伤模型的建立

目的：建立体外血管内皮细胞氧化损伤模型。方法：用Cu^2 引发脂质过氧化过程，制备氧化低密度脂蛋白（ox-LDL)，应用含不同浓度丙二醛（MDA）的ox-LDL，分别作用于对数生长期的内皮细胞，采用四唑盐（MTT）比色法测定细胞活力，并测定内皮细胞MDA含量。结果：当内皮细胞暴露于含MDA浓度分别为0.2,0.5,0.8,1.0,1.2,1.5nmol/ml的ox-LDL24h后，含MDA1.0,1.2,1.5nmol/ml浓度组与空白对照组比较，MTT降低，差别有显著性（P＜0．01），MDA含量增加，差别有统计学意义（P＜0．01）。结论：通过细胞活力，MDA的检测以及形态学观察，认为ox-LDL的MDA浓度为1.0nmol/ml时为最适宜氧化损伤浓度。     

氧化修饰型低密度脂蛋白与高糖对血管内皮细胞TGF—β1生成的影响及意义探讨

目的：通过用不同浓度的葡萄糖及氧化修饰型低密度脂蛋白（ox-LDL)刺激血管内皮细胞,测定其TGF－β的含量,探讨在高糖,高脂诱导下动脉粥样硬化形成中TGF－β1的分泌变化及其意义,方法：用酶消化法体外养血管内皮细胞,分别用LDL50ug/ml,100ug/ml,200ug/ml和D－葡萄糖5mmol/L,25mmol/L,50mmol/L刺激内此细胞,24小时后收集培养上清,ELISA法测定培养上清内TGF－β1的含量,结果：ox-LDL能明显促进内皮细胞分泌TGF－β1（P＜0．01）,且有剂量效应,D－葡萄糖在5mmol/L的浓度下,与对照组比无明显差异（P＞0．05）,在25mmol/L的浓度下内皮细胞的分泌明显增加（P＜0．01）,在50mmol/L时,TGF－β1含量无明显增加（P＞0．05）,结论：ox-LDL和高糖能明显诱导内皮细胞分泌TGF－β1,提示其在动脉粥样硬化的病理过程中起着重要作用。     

冠心康对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨中药复方冠心康对氧化低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoprotei,ox-LDL)损伤的血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)的保护作用。方法:以ox-LDL损伤的人脐静脉内皮细胞作为动脉粥样硬化内皮细胞病理模型,采用冠心康药物血清干预,并与空白血清形成对照。采用MTT法检测VECs存活率,Hoechst染色、FITC/PI双染及流式细胞术检测细胞凋亡,Ki67荧光抗体标记及流式细胞术检测细胞增殖,PI染色及流式细胞术检测细胞周期。结果:与正常VECs比较,ox-LDL损伤后血管内皮细胞存活率、增殖能力及处于S期、G2/M期细胞数均明显下降(P0.05),细胞凋亡率明显升高(P0.05);经冠心康血清干预后,VECs存活率、增殖能力及处于S期、G2/M期细胞数较空白血清组、模型组升高(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05)。结论:中药复方冠心康能抑制ox-LDL损伤的VECs凋亡,促进细胞增殖、分裂,对ox-LDL损伤的VECs具有一定的保护作用。     

当归对氧化低密度脂蛋白所致血管内皮细胞损伤的保护作用

通过培养人脐静脉内皮细胞,观察当归对氧化低密度脂蛋白损伤的内皮细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的漏出量及扫描电镜下ＥＣ形态结构的影响,并观察当归在体外对Ｃｕ＾２＋诱导的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化修饰的作用。结果显示;在作用２４ｈ后,ｏｘ－ＬＤＬ组ＬＤＨ漏出明显增加,超微结构明显受损。当归＋ｏｘ－ＬＤＬ组ＬＤＨ漏出显著减少,超微结构基本正常。     

大豆异黄酮对氧化损伤血管内皮细胞抗氧化作用的研究

目的：探讨大豆异黄酮（SI）对氧化损伤血管内皮细胞的抗氧作用。方法：体外培养血管内皮细胞，将细胞分为5组，即空白对照组（control)，氧化损伤对照组（ox-LDL)，氧化损伤加入维生素E对照组(VC ox-LDL)，氧化损伤加入大豆异黄酮低，中，高浓度组（SI－L＋ox-LDL,SI-M ox-LDL,SI-H ox-LDL)。将氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）作用于预先加入VE及不同浓度SI孵育24h的内皮细胞，继续培养24h，测定细胞外及细胞内丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－PX）活性，乳酸脱氢酶（LDH）释放情况及一氧化氮（NO)生成量。结果：ox-LDL组MDA含量，LDH释放百分比高于control组及VE＋ox-LDL组，（SI－L，M，H）＋ox-LDL组，差异有显著性（P＜0．01）；而ox-LDL组SOD，GSH－PX活性及NO浓度均低于control组和VE ox-LDL组，（SI－L，M，H）＋ox-LDL组，差异有显著性（P＜0．01）；另外，SI－M＋ox-LDL组与VE＋ox-LDL组比较，各指标均无显著性差异（P＞0．05）。结论：SI可减轻ox-LDL对血管内皮细胞的氧化损伤，起到一定的抗氧化保护作用。     

bcl-2在氧化低密度脂蛋白诱导人血管内皮细胞凋亡中的作用

目的 观察氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)对人血管内皮细胞株EA.hy926凋亡的影响,并探讨bcl-2在其中的作用.方法 MTT法检测不同浓度的oxLDL(50、100、150、200 oe/m1)对细胞增殖能力的影响;流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测不同浓度的oxLDL对细胞凋亡的影响;RT-PCR、Western blot和免疫荧光细胞化学法分别检测不同浓度的oxLDL对bcl-2 mRNA、蛋白表达及在细胞内表达的影响.结果 oxLDL对EA.hy926细胞形态有明显影响,并能明显抑制EA.hy926细胞增殖能力,抑制作用随处理浓度增加而增大,半数抑制浓度(IC50)约为100ug/ml;不同浓度的oxLDL处理细胞24 h后,与对照组比较,早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡细胞百分比均显著增加(P<0.05);oxLDL能够明显抑制细胞内bel-2 mRNA、蛋白表达及在细胞内的表达水平.结论 6cl-2基因在oxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡中发挥重要作用,oxLDL可能通过下调bcl-2的表达促进血管内皮细胞凋亡.     

大豆异黄酮对体外血管内皮细胞氧化损伤保护作用的形态学观察

目的：从形态学角度观察大豆异黄酮（SI）对氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL)诱导的血管内皮细胞（ECV）损伤的保护作用。方法：体外培养人脐静脉血管内皮细胞（ECV），将细胞分为5组，即氧化损伤对照组（ox-LDL），氧化损伤加入维生素E对照组（VE＋ox-LDL），氧化损伤加入大豆异黄酮低，中，高浓度组（SL－L＋ox-LDL，SI－M＋ox-LDL，SI－H＋ox-LDL。用ox-LDL作用于加入VE及不同浓度SI孵育24h的内皮细胞，继续培养24h，测定各组细胞活力（MTT），观察各组细胞一般形态和超微结构的变化。结果：加入VE及SI各浓度组细胞MTT（OD值）明显高于ox-LDL组，差异有显著性（P＜0．01）；而VE ox-LDL组与（SL－L，M，H）＋ox-LDL组间，MTT（OD值）无显著性差异（P＞0．05）。光镜观察结果显示ox-LDL组细胞收缩，变圆，细胞间隙增宽，而加入VE及SI可使细胞形态有不同程度的恢复，细胞间隙减小。扫描电镜观察显示ox-LDL组细胞膜有破损，细胞表面绒毛减少甚至消失，加入VE及SI可使细胞恢复近似正常状态，铺片良好，胞膜完整，细胞间有突起互相连接。结论：SI对血管内皮细胞氧化损伤具有一定的保护作用，而且SI与VE之间无显著性差别。     

甘糖酯对急性脑梗死病人中性粒细胞与内皮细胞黏附的影响

①目的　观察甘糖酯 (PGMS)对急性脑梗死病人中性粒细胞 (PMN)与内皮细胞黏附的影响。②方法　选择急性脑梗死病人和健康人各 2 0例 ,采血制备PMN悬液 ,将VEC 30 4内皮细胞株培养后 ,观察脑梗死组与对照组PMN与内皮细胞的黏附率 ;并将PGMS(5 0、1 0 0mg/L)与内皮细胞培养后 ,观察内皮细胞与脑梗死病人PMN的黏附率。③结果　脑梗死组与对照组相比PMN与内皮细胞的黏附率明显增高 (t =6 .377,P <0 .0 5 ) ;PGMS 1 0 0mg/L组与PGMS 5 0mg/L组和脑梗死组相比PMN与内皮细胞的黏附率降低 (F =1 3.4 9,q =1 2 .5 7、8.5 2 ,P <0 .0 5 )。④结论　急性脑梗死后PMN与内皮细胞的黏附性明显增高 ,甘糖酯可以减少内皮细胞与PMN的黏附     

去铁胺对过氧化氢所致牛肺动脉内皮细胞损伤的影响

观察铁离子螯合剂－去铁胺对过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）所致牛肺动脉内皮细胞损伤的影响。发现经去铁胺处理的内皮细胞对Ｈ２Ｏ２毒性作用的敏感性降低，Ｈ２Ｏ２对这种内皮细胞的损伤明显减轻：细胞乳酸脱氢酶释放减少、硫代巴比妥酸反应产生减少；细胞中过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的活性受到保护。结果说明细胞内铁离子在Ｈ２Ｏ２所致内皮细胞损伤中起重要作用。     

人血小板低密度脂蛋白受体的探讨

用~(125)Ⅰ标记(Iodogen法)低密度脂蛋白(~(125)Ⅰ-LDL),其比放射性为(1.94-1.0)×10~4Bq/μg,标记率为98.44±0.9％。~(125)Ⅰ-LDL与洗涤法分离的血小板结合,37°C下孵育60 min,结合达到平衡,不需二价阳离子存在。未标记的LDL可抑制~(125)Ⅰ-LDL与血小板的结合,而纤维蛋白原,白蛋白等无此作用。每个血小板约可结合3504±735个LDL分子,具有饱和性,解离常数Kd值为(4 5±2.1)×10~(-9) mol/L。高密度脂蛋白能抑制结合。结果提示血小板有LDL特异性受体,LDL有可能通过受体介导影响血小板功能。     

NO在外源性自由基损伤内皮细胞中的作用

目的：探讨ＮＯ在外源性自由基损伤内皮细胞（ＥＣ）中的作用。方法：培养的家兔主动脉ＥＣ随机分为四组：１．对照组（Ｃ,ｎ＝６）：２ｍｌＰＢＳ;２．自由基损伤组（Ｘ／ＸＯ,ｎ＝６）：２ｍｌＰＢＳ中加入终浓度为１μｍｏｌ／ｍｌＸ,０．１ＩＵ／ｍｌ的ＸＯ;３．Ｌ－Ａｒｇ组：含终浓度为１０＾－３Ｍ的Ｌ－Ａｒｇ,余同２;４．ＳＮＰ组：含终浓度为１０＾－５Ｍ的ＳＮＰ,余同２。在观察Ｌ－ＮＡＭＥ对自由基损伤的作用时     

牡蛎糖胺聚糖对H2O2所致血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的了解牡蛎糖胺聚糖（O-GAG）对过氧化氢所致血管内皮细胞（VECs）氧化损伤的保护作用及其机制。方法采用人脐静脉内皮细胞株ECV304体外培养的方法,建立H2O2诱导的血管内皮细胞损伤模型,实验分为正常对照组、损伤模型组（过氧化氢50 mg/L）、肝素组（肝素200 mg/L,过氧化氢50 mg/L）、O-GAG保护组（O-GAG 10、50、100、200、400、800 mg/L,过氧化氢50 mg/L）、O-GAG对照组（O-GAG 100、200、400 mg/L）。采用噻唑蓝（MTT）比色法观察O-GAG对血管内皮细胞增殖活性的影响,黄嘌呤氧化酶法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果与正常对照组相比,损伤模型组细胞的增殖活性和SOD的活活性均明显降低（F=137.23、135.40,q=5.26、5.34,P〈0.01）,而O-GAG对照组（100、200 mg/L）的细胞增殖活性明显增高（q=3.40、3.81,P〈0.05）。与损伤模型组相比,O-GAG各保护组（50-800 mg/L）细胞增殖活性明显增加（q=3.40-5.23,P〈0.05、0.01）,SOD活性明显升高（q=4.46-5.07,P〈0.01）。结论O-GAG对过氧化氢所致血管内皮细胞的氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与增加细胞内SOD活性有关。     

高尿酸血症对血管内皮细胞功能障碍的影响

①目的　观察高尿酸血症病人血浆纤溶酶原激活物抑制剂 1 (PAI 1 )与内皮素 (ET)水平变化 ,探讨高尿酸血症对血管内皮细胞功能的影响。②方法　选择年龄 >35岁的男性高尿酸血症病人 1 38例为高尿酸血症组 (HUA组 ) ,其中单纯高尿酸血症病人 4 2例为HUA 1组 ,高尿酸并高脂血症或糖耐量异常病人 96例为HUA 2组 ,选择年龄、地域相匹配的健康体检者 4 0例为正常对照组。测定各组血浆PAI 1与ET水平及血清尿酸 (UA)、总胆固醇 (TC)、三酰甘油 (TG)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)、空腹血糖 (FPG)及餐后 2h血糖 (2hPG)、空腹胰岛素 (FINS)、尿素氮 (BUN)及肌酐 (Cr)含量。③结果　HUA、HUA 1、HUA 2组血浆PAI 1与ET水平明显高于正常对照组 (t =1 4 .71～ 33.85 ,P <0 .0 1 ) ,HUA 2组的PAI 1、ET水平明显高于HUA 1组 (t =2 .4 1、2 .1 7,P <0 .0 5 )。在以UA为因变量的多元逐步回归分析中 ,TG、LDL C、BUN、Cr、PAI 1、ET进入方程 (R2 =0 .4 3,P <0 .0 0 1 )。④结论　高尿酸血症与血管内皮细胞损伤关系密切 ,并发糖脂代谢紊乱时会加重血管内皮细胞损害     

丙丁酚对氧化型低密度脂蛋白和氧自由基促血管平滑肌细胞增殖的影响

用细胞计数和ＭＴＴ快速比色计量法观察到体外培训的牛主动脉平滑肌细胞分别与氧化型低密度脂蛋白和黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶共同培养后，前者明显增殖（Ｐ＜０．０１）。抗氧化剂丙丁酚（１００μｍｏｌ·Ｌ－１）能抑制氧化型低密度脂蛋白和黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶促平滑肌细胞增殖作用；一氧化氮合成酶抑制剂ＮＧ－硝基－Ｌ－精氨酸对两者促平滑肌细胞增殖的作用无影响，同时也不能阻断丙丁酚的抑制两者促细胞增殖作用。这一结果提示，丙丁酚能抑制氧化型低密度脂蛋白和外源性氧自由基促平滑肌细胞增殖，这一作用可能与血管平滑肌细胞中一氧化氮的合成及释放无关。     

子痫前期血清诱发血管内皮细胞凋亡机制的实验研究

目的：探讨子痫前期患者血清对体外生长血管内皮细胞凋亡情况的影响及发生机制.方法：对血管内皮细胞进行体外培养,分别加入正常孕妇血清和重度子痫前期患者血清,采用流式细胞术检测血管内皮细胞凋亡率、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）活性,并在培养体系中加入阳离子染料JC-1后检测血管内皮细胞线粒体跨膜电位变化.结果：①子痫前期血清组诱导血管内皮细胞早期凋亡阳性率与晚期细胞凋亡阳性率分别为（10.8±3.2）％与（6.8±1.8）％,明显高于正常孕妇血清组的早期凋亡阳性率与晚期细胞凋亡阳性率（4.2±1.7）％与（3.3±1.1）％（P＜0.05）;②子痫前期血清组诱导血管内皮细胞Caspase-3阳性率为（8.3±1.2）％,明显高于正常孕妇血清组诱导血管内皮细胞Caspase-3阳性率（3.6±1.1）％（P＜0.05）：③子痫前期血清组诱导血管内皮细胞其线粒体损伤率为（8.9±2.1）％,明显高于正常孕妇血清组诱导血管内皮细胞的线粒体损伤率（3.0±0.8）％（P＜0.05）.结论：子痫前期患者血清可促进体外生长血管内皮细胞的凋亡,Caspase-3和线粒体凋亡在子痫前期患者血清促血管内皮细胞凋亡中可能起重要作用.     

钩端螺旋体糖脂蛋白对培养血管内皮细胞的粘附导致细胞内吞与病损

作者提取不同群、型和毒力的构端螺旋体糖脂蛋白,以Rhodamine B荧光素和胶体金标记制备成探针,与体外培养的牛主动脉内皮细胞作用,以荧光显微镜和扫描电镜观察记录其过程,并以内皮细胞LDH、AcP漏出率和蛋白含量及细胞形态学作为细胞毒指标。结果表明,钧端螺旋体糖脂蛋白通过对培养血管内皮细胞的粘附,导致细胞内吞与病损。该过程可能属于一种特殊的受体介导内吞过程。     

过氧化氢对牛脑微血管内皮细胞损伤及药物的保护作用

应用牛脑微血管内皮细胞（ＢＣＭＥＣ）培养技术,研究氧自由基过氧化氢（ＨＰ）对ＢＣＭＥＣ损伤的作用。３０％ＨＰ（３μｍｏｌ／ｍｌ）与ＢＣＭＥＣ共同孵育３０ｍｉｎ,可明显损伤ＢＣＭＥＣ;甘糖酯（０．４、０．８、１．６ｍｇ／ｍｌ）可显著保护ＨＰ引起的ＢＣＭＥＣ损伤,乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放减少,提示甘糖脂对脑血管内皮细胞的保护作用与其抗氧自由基有关